双氯酚酸钠抑制VEGF对角膜新生血管调控作用的研究

目的探讨双氯酚酸钠抑制血管内皮生长因子(VEGF)对调控角膜新生血管的作用。方法建立化学伤后大鼠角膜新生血管动物模型,随机分为双氯酚酸钠组和生理盐水组。计算两组各个阶段新生血管面积,免疫组织化学染色方法检测VEGF蛋白在角膜各层中的分布,测定积分光密度确定表达的蛋白量。结果正常SD大鼠角膜中表达极低的VEGF蛋白;各个时段实验组的血管生长速度和面积均小于对照组(P<0.05);各个时段实验组VEGF表达少于对照组(P<0.01),均具有显著差异;各组内VEGF表达和角膜新生血管生成具有显著正相关(P<0.05)。结论双氯酚酸钠可以抑制碱烧伤后角膜VEGF的表达,从而可以调控角膜修复和炎症性新生血管生成过程。     

贝伐单抗抑制角膜新生血管形成的实验研究

目的观察贝伐单抗在抑制角膜新生血管形成中的作用,并探讨其机制。方法将64只新西兰大白兔分为实验组(32只)及对照组(32只),采用碱烧伤法进行角膜新生血管形成(CNV)造模,实验组给予角膜下注射贝伐单抗,对照组给予生理盐水角膜下注射,观察角膜水肿程度、CNV面积及长度,Western印迹法检测VEGF、IL-8及PIGF在角膜中的表达水平。结果角膜水肿程度:在造模24 h后,实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);造模21 d后,实验组轻于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。造模3、7、14及21 d时,实验组CNV面积、平均长度均明显小于对照组(P<0.05或P<0.01)。Western blot显示,VEGF在角膜中蛋白水平表达,对照组高于实验组(t=11.516,P<0.01);对照组与实验组PIGF比较差异无统计学意义(t=1.29,P>0.05);IL-8在对照组中表达高于实验组(t=4.49,P<0.05)。结论贝伐单抗可通过降低角膜中VEGF及IL-8表达有效抑制角膜水肿及新生血管形成。     

草乌甲素对碱烧伤引起的角膜新生血管的抑制作用

目的：探讨草乌甲素对碱烧伤引起的角膜新生血管的抑制作用。方法：采用碱烧伤法制备角膜新生血管模型,将36只健康的SD大鼠随机分为两组,实验组予以腹腔注射草乌甲素溶液,2次/d,至建立模型后2周;对照组以等体积的生理盐水腹腔注射;观察两组建立模型后d14新生血管长度和新生血管面积。结果：新生血管长度实验组为（1.68±0.13）mm,对照组为（2.76±0.13）mm;新生血管的面积实验组为（17.9±2.24）mm2,对照组为（26.9±2.55）mm2;两组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：草乌甲素可以抑制碱烧伤引起的角膜新生血管的生成。     

子宫内膜癌组织中COX-2的表达与细胞增殖的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中COX-2表达的上调与肿瘤细胞增殖的关系。方法分析60例子宫内膜癌患者,应用蛋白印迹法分别测定子宫内膜癌组织中COX-2、VEGF的蛋白表达水平,应用流式细胞技术分析肿瘤细胞凋亡、增殖情况。其中无肌层浸润组中30例子宫内膜癌病例均为早期无肌层侵袭和淋巴转移者;肌层浸润组中30例子宫内膜癌病例均有深肌层侵袭和(或)伴有淋巴转移者。对照组入选病例均无子宫内膜病变。结果①研究组1和2中COX-2、VEGF蛋白表达水平均高于对照组,且有统计学意义(P<0.05);②研究组1和2之间COX-2、VEGF的蛋白表达水平,且有显著统计学意义(P<0.05);③研究组1和2中肿瘤组织PI指数均高于对照组,且有统计学意义。结论子宫内膜癌组织中COX-2的上调促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,促进新生血管和淋巴管生成,从而影响子宫内膜癌肌层浸润和淋巴转移。     

腺病毒载体介导血管抑素防治兔高危角膜移植术后新生血管化的实验研究

目的探讨腺病毒载体介导血管抑素靶向基因治疗兔高危角膜移植术后新生血管化的作用及其可能机制。方法 建立30只兔高危角膜新生血管移植受体模型,同时进行含有血管抑素基因的腺病毒载体的构建,行双眼角膜移植术,术中采用角膜原位转染法用微量进样器行角膜基质注射,右眼为实验眼注入病毒液,左眼为对照眼注入生理盐水。术后不同时间比较角膜植片透明度、水肿和新生血管程度,HE染色观察新生血管生长情况和炎症反应情况;免疫组化检测AS、VEGF在角膜植片中的表达;透射电镜观察超微结构。结果⑴实验组角膜新生血管术后较对照组显著减少(P<0.05)。⑵实验组比对照组炎症浸润程度轻。⑶.术后实验组AS的表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。⑷术后实验组VEGF的表达水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论腺病毒载体介导血管抑素可有效防治兔高危角膜移植术后新生血管化。     

Combretastatin A4磷酸酯二钠抑制血管生成作用的研究

目的 探讨Combretastatin A4磷酸酯二钠(CA4P)对血管生成的影响.方法 建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型及兔角膜新生血管(CNV)模型,评价CA4P对两种模型中血管生成的影响.结果 与对照组相比,CA4P高、中剂量具有明显的抑制CAM血管生成的作用(P<0.01或P<0.05);CA4P各剂量对CNV也显示了不同程度的抑制作用(P<0.01或P<0.05).结论 CA4P具有抑制血管生成的作用.     

封闭血管内皮生长因子C对角膜淋巴管的抑制和对同种移植物存活的促进作用研究

目的:研究封闭血管内皮生长因子C对角膜淋巴管的抑制效果和同种移植物存活的影响。方法:将100只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、移植对照组、血管内皮生长因子C抑制组,每组20只。正常对照组不作特殊处理,移植对照组、血管内皮生长因子C抑制组制作小鼠角膜移植模型,术后分别通过腹腔注射,正常组和移植组注射等剂量的生理盐水,血管内皮生长因子C抑制组使用单克隆抗VEGF-C抗体阻断VEGF-C,在术后第3,7,10,14d分别取材,角膜淋巴管显像特征性使用全组织包埋免疫荧光法,移植物的免疫排斥反应通过裂隙灯检查并进行排斥反应评分(RI),另外VEGF-C的表达通过免疫组化和即时PCR来检测。结果:正常对照组角膜无新生淋巴管;其余两组小鼠移植后有新生淋巴管从角膜缘发出,淋巴管计数(LVC)在第14d达峰值,移植组的淋巴管计数高于血管内皮生长因子C抑制组。RT-PCR和Western blotting检测结果显示,正常对照组有少量VEGF-C表达,移植对照组VEGF-C表达较正常对照组显著增多且在第14d达峰值(P<0.05);与移植对照组比较,血管内皮生长因子C抑制组VEGF-C表达降低(P<0.05),而血管内皮生长因子C抑制组VEGF-C表达高于正常对照组(P<0.05)。通过裂隙灯观察角膜通透性,分别计数不同组的小鼠移植存活量来评价封闭血管内皮生长因子C对同种移植物存活的影响。结论:封闭血管内皮生长因子C对角膜淋巴管有明显的抑制作用,能够显著增强同种移植物存活数量。     

环氧合酶-2血管内皮生长因子对食管鳞癌的影响研究

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VECF)在食管癌发生过程中的作用和病理学意义及其与肿瘤组织中血管新生的关系.方法 采用免疫组化方法检测正常食管黏膜轻、中、重度不典型增生组织及食管鳞癌组织中COX-2和VEGF的蛋白表达和食管鳞癌组织中MVD的测定,并分析COX-2和VEGF的表达与食管癌临床病理因素的关系以及对血管生成的影响.结果 41例食管鳞癌中COX-2和VEGF的表达明显增高,表达率分别为53.7%和58.5%,两者在正常组织中均不表达.COX-2在重度不典型增生组织中表达增高,表达率为50.0%.COX-2和VEGF的表达与肿瘤的大小、分化程度、浸润深度无显著相关,而与淋巴结转移有关.COX-2和VEGF阳性组MVD值均大于阴性组(P＜0.05),两者共同阳性组的MVD值大于单一阴性组,更大于共同阴性组(P＜0.05).结论 COX-2不仅参与了食管鳞癌发生的早期过程,还和VEGF一起参与了食管鳞癌的组织生成和淋巴结转移.COX-2可能与VEGF协同参与肿瘤组织中新生血管的形成.     

VEGF-C、NF—κBp65和COX-2与胃癌淋巴结转移的关系

目的:探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、细胞核因子-κB p65(NF-κBp65)和环氧化酶-2(COX-2)导致肿瘤内新生淋巴管发生的协同作用.方法:采用免疫组织化学方法检测53例胃癌和48例非肿瘤胃组织中VEGF-C、NF-κBp65和COX-2的表达,探讨他们之间及其与临床病理学参数的关系.结果:胃癌组织中VEGF-C、NF-κBp65、COX-2阳性率分别为89%、87%和77%,明显高于对照组的52%、50%和56%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).NF-κBp65和COX-2在有淋巴结转移组阳性表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),并且在肠型胃癌中表达明显高于弥漫型胃癌(P<0.01).COX-2、VEGF-C和NF-κBp65之间均呈正相关.结论:NF-κBp65和COX-2可通过上调VEGF-C,促进胃癌组织中新生淋巴管生成.     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。     

尼美舒利对人舌鳞癌裸鼠移植瘤环氧化酶-2的影响

目的研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对人舌鳞癌裸鼠移植瘤的抑制作用,分析尼美舒利对COX-2基因及蛋白表达的影响,进一步探讨其抑癌机制。方法取人舌鳞癌Tca-8113细胞接种于16只裸鼠皮下,建立人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组和尼美舒利治疗组,计算尼美舒利的抑瘤率。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测裸鼠移植瘤组织COX-2mRNA表达。结果尼美舒利治疗组抑瘤率为47.2%。尼美舒利治疗组裸鼠移植瘤组织COX-2mRNA水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 COX-2抑制剂尼美舒利可下调COX-2基因表达,该作用可能是COX-2抑制剂抑制肿瘤血管生成从而抑制肿瘤生长的机制之一。     

曲伏前列素致高眼压模型大鼠结膜充血的不良反应机制研究

目的:研究曲伏前列素致高眼压模型大鼠结膜充血的不良反应机制。方法:将50只大鼠随机分为正常对照组、模型组和曲伏前列素低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg),每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠右眼建立高眼压模型,每天滴加相应药物1次,连续1周。末次给药后体外分离并培养各组大鼠右眼角膜周围血管内皮细胞,检测血管内皮细胞活力、细胞凋亡情况和增殖相关因子(Ki-76)、凋亡相关因子(Bad、Bax)、凋亡抑制相关因子(Bcl-2、Bcl-xl)蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血管内皮细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,Bad、Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2、Bcl-xl、Ki-76蛋白表达明显减弱,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,曲伏前列素低、中、高剂量组大鼠血管内皮细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达明显减弱,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);曲伏前列素中、高剂量组大鼠血管内皮细胞中Bad、Bax蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01),其余指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:曲伏前列素可能是通过促进高眼压模型大鼠角膜周围血管内皮细胞凋亡,从而降低其细胞活力,进而引发结膜充血这一不良反应。     

美洛昔康与双氯酚酸钠治疗骨关节炎疗效比较

目的:评价美洛昔康与双氯酚酸钠治疗骨关节炎(OA)患者的临床疗效和不良反应.方法:采用随机、平行对照研究.试验组(40例)给予口服美洛昔康7.5 mg,1次/d;对照组(41例)给予口服双氯酚酸钠0.1 g,1次/d,疗程均为4周.结果:总体疗效试验组为90.00%,对照组为90.24%,两组无显著性差异(P＞0.05);不良反应发生率试验组为10.00%,对照组为29.27%,两组有显著性差异(P＜0.05).结论:美洛昔康与双氯酚酸钠对OA都具有明显抗炎镇痛作用,但美洛昔康的不良反应较少.     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨环氧化酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelil growth factor,VEGF)在膀胱尿路上皮癌(uroepithelium carcinoma of bladder,BUC)中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化法检测65例BUC和20例正常膀胱黏膜组织中COX-2和VEGF的表达水平,并结合临床病理特征进行分析.结果 在BUC中,COX-2和VEGF蛋白阳性表达率分别为70.8%和64.6%,均显著高于正常膀胱黏膜组织(P<0.05);COX-2 和VEGF蛋白表达均与肿瘤病理分级、TNM临床分期、复发和转移相关(P<0.05);BUC中COX-2与VEGF表达呈正相关(r=0.64,P<0.05).结论 COX-2和VEGF可能参与了调控BUC的发生、发展过程,其高表达预示BUC预后不良.     

加味三棱丸含药血清对子宫内膜异位症内膜细胞芳香化酶及环氧合酶-2的影响

目的:观察子宫肌瘤与子宫内膜异位症(内异症)患者在位内膜芳香化酶(aromatase)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达上的差异,探讨加味三棱丸(SLW)含药血清对内异症在位内膜芳香化酶、COX-2表达的影响.方法:Westernblot和RT-PCR方法分别检测子宫肌瘤组、给予SLW含药血清前后内异症组芳香化酶、COX-2蛋白和mRNA的表达,发光免疫分析法及放射免疫分析法分别检测上述各组细胞上清中雌二醇及前列腺素E2的含量.结果:以未给药的内异症内膜组为对照,子宫肌瘤组芳香化酶、COX-2 mRNA蛋白的表达,分泌雌二醇及前列腺素E2水平均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05).SLW 5.0,2.5 g·kgll·d-1组芳香化酶、COX-2蛋白和mRNA的表达低于对照组,差异有显著性或极显著性(P<0.05或P<0.01).SLW 1.25 g·kg-1·d-1组芳香化酶mRNA和蛋白、COX-2蛋白的表达也明显低于对照组(P<0.01),但COX-2 mRNA的表达与对照组比较差异无显著性(P0.05).SLW 5.0,2.5,1.25 g·kg-1·d-1组分泌的雌二醇和前列腺素E2水平明显低于对照组(P<0.05).结论:SLW可抑制子宫内膜异位症在位内膜细胞芳香化酶和COX-2的表达,从而降低局部雌激素及前列腺素E2的水平.     

丹参酮ⅡA磺酸钠体内外促血管新生作用的研究

目的通过体外人脐静脉内皮细胞和海绵植入小鼠模型对丹参酮Ⅱ_A磺酸钠的促进血管新生作用进行研究。方法体外采用人脐静脉内皮细胞HUVEC-12诱导模型,利用细胞迁移及小管生成实验评价丹参酮Ⅱ_A磺酸钠促血管新生的作用影响;体内实验采用海绵植入小鼠模型,通过QPCR测定不同剂量丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对VEGF-A mRNA表达的影响,采用免疫荧光染色法观察不同剂量丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对微血管生成及VEGF蛋白释放的影响。结果丹参酮ⅡA磺酸钠40、80μg/m L剂量组的迁移率显著高于对照组(P0.05、0.01);丹参酮Ⅱ_A磺酸钠与形成的结节数目呈现一定剂量相关性,且丹参酮Ⅱ_A磺酸钠80μg/mL剂量组的小管生成节结数显著高于对照组(P0.05)。丹参酮ⅡA磺酸钠12、24mg剂量组VEGF-Am RNA相对表达值显著高于对照组(P0.01),而丹参酮Ⅱ_A磺酸钠12mg剂量组作用最强,优于阳性药丹参多酚酸盐。丹参酮ⅡA磺酸钠12、16、24mg剂量组的VEGF蛋白表达量明显优于对照组(P0.05、0.01),丹参酮Ⅱ_A磺酸钠12mg剂量组,VEGF蛋白表达量最高,荧光面积最大,优于阳性药丹参多酚酸盐。结论丹参酮Ⅱ_A磺酸钠具有促血管新生作用,其作用机制可能通过上调VEGF-A mRNA的表达来影响。     

双氯芬酸钠β-环糊精包合物的立体化学结构

目的研究双氯酚酸钠β-环糊精（β-CD）包合物的立体化学结构。方法用红外光谱法、X-射线衍射法、1H磁共振(1H-NMR)等方法，确认β-CD与双氯酚酸钠包合及其包合的可能形式。结果双氯酚酸钠β-CD包合物生成，双氯酚酸钠分子中部分质子的化学位移发生变化H3、H4、H5、H6、H3’、H4’、H5’向高场位移，且双氯酚酸钠与β CD形成包合物的摩尔数之比为1∶2。结论红外光谱法、X-射线衍射法、1H-NMR质子化学位移的变化可清晰地表达双氯酚酸钠与β-CD的立体结构。     

加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶p300/血清环加氧酶-2通路调控核因子E2相关因子2在黄褐斑形成中的作用机制研究

目的探讨加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶p300(p300HAT)/血清环加氧酶-2(COX-2)通路调控核因子E2相关因子2(Nrf2)在黄褐斑形成中的作用机制。方法健康人表皮黑素细胞及30只雌性小鼠纳入研究,采用不同浓度加味当归芍药散处理健康人表皮黑素细胞,肌肉注射黄体酮及紫外线照射建立黄褐斑小鼠模型,将小鼠随机分为空白组、低剂量组及高剂量组各10只,分别给予常规剂量0.9%氯化钠注射液、低剂量及高剂量加味当归芍药散处理,检测不同浓度处理下细胞活力、细胞黑素含量及细胞中p300HAT、COX-2及Nrf2的RNA及蛋白表达量,同时检测治疗前后3组小鼠皮肤及肝脏的p300HAT、COX-2及Nrf2的RNA、蛋白质表达量。结果加味当归芍药散浓度为1.0mg/mL时健康人表皮黑素细胞活力较对照组明显低,差异有统计学意义(P<0.05);加味当归芍药散处理的健康人表皮黑素细胞p300HAT、COX-2的RNA及蛋白表达量和黑素相对含量较对照组明显低,Nrf2的RNA及蛋白表达量较对照组明显高,且随着加味当归芍药散浓度增加,健康人表皮黑素细胞p300HAT、COX-2、Nrf2的RNA及蛋白表达量降低、升高越明显,健康人表皮黑素细胞黑素相对含量降低越明显,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后仅低剂量、高剂量组p300HAT、COX-2的RNA、蛋白表达量较治疗前明显降低,Nrf2的RNA、蛋白表达量明显升高,且治疗后高剂量组各项指标变化较低剂量组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归芍药散治疗黄褐斑的机制可能与其抑制p300HAT/COX-2通路调控Nrf2表达有关。     

小牛血红细胞提取物眼用凝胶治疗兔角膜损伤的实验研究

目的研究小牛血红细胞提取物眼用凝胶对兔角膜损伤后创伤修复以及对角膜新生血管生成的影响。方法制作角膜板层切除模型,在兔右眼角膜中央,用直径8.5 mm环钻制作成直径8.5 mm、深度100μm的无菌性角膜损伤。新西兰大白兔40只随机分为4组(每组10只)。分别于角膜板层切除术后第1天起,各组分别用0.9%生理盐水(模型组)、重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶(阳性对照Ⅰ组)、50%小牛血去蛋白提取物眼用凝胶(阳性对照Ⅱ组)及20%小牛血红细胞提取物眼用凝胶(试验组)点眼每日4次。分别于治疗后7,14,21和28天,进行角膜荧光素钠染色,并观察各组角膜上皮修复情况和角膜新生血管生长情况。结果在角膜板层切除后,观察期末,20%小牛血红细胞提取物眼用凝胶组,对角膜上皮修复速度,与其他阳性对照组比较无明显差异(P>0.05);角膜新生血管生长,较其他阳性对照组明显减少(P<0.05)。结论小牛血红细胞提取物眼用凝胶明显能促进兔角膜损伤的组织修复,减少角膜新生血管形成。     

汉防己甲素抑制鼠角膜新生血管VEGF、TGF-β的实验研究

目的 探讨汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-13)表达的影响.方法 碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型,采用裂隙灯照相和免疫组化等方法,分别观察Tet组与其他对照组模型大鼠角膜新生血管每天的生长状况及榆测各组模型大鼠角膜中VEGF和TGF-β在各时期的表达情况.结果 Tet组模型大鼠角膜新生血管及VEGF和TGF-B的表达情况均较对照组有显著变化.结论 Tet能有效抑制碱烧伤诱发的大鼠角膜新生血管,同时降低新生血管中VEGF和TGF-B的表达.