三七总皂苷抑制肝细胞钙超载的机制

目的通过测定大鼠肝细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,观察三七总皂苷（ＰＮＧＳ）对肝细胞Ｃａ２＋浓度的影响,探讨其抑制肝细胞钙超载的机制。方法胶原酶分离大鼠肝细胞,Ｆｕｒａ ２／ＡＭ技术测定［Ｃａ２＋］ｉ,研究ＰＮＧＳ对静息和被激动状态下肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ的影响。结果１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１血管加压素及１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１血管紧张素分别使肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ增加２００％和９４％,ｖｅｒａｐａｍｉｌ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ和ＰＮＧＳ均能不同程度地抑制血管加压素、血管紧张素激动引起的肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高,ＰＮＧＳ的抑制作用显著强于ｖｅｒａｐａｍｉｌ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ且呈明显的剂量依赖性。ＰＮＧＳ还能轻度降低静息状态下肝细胞［Ｃａ２＋］ｉ,而ｖｅｒａｐａｍｉｌ、ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ无此作用。结论ＰＮＧＳ能特异性阻断肝细胞膜上受体依赖性钙通道（ＲＯＣ）,抑制肝细胞的钙内流,阻断肝细胞内源性ＩＰ３途径,防止肝细胞内钙超载。ＰＮＧＳ抑制钙超载机制还可能与其本身轻度结合钙离子有关。     

小檗碱抑制谷氨酸引起的新生大鼠脑细胞 c-fos 表达及游离钙的升高

目的：研究小檗碱（Ｂｅｒ）对谷氨酸（Ｇｌｕ）引起的新生大鼠脑细胞ｃ－ｆｏｓ表达及游离钙（〔Ｃａ２＋〕ｉ）变化的影响。方法：斑点杂交及Ｆｕｒａ－２技术。结果：Ｇｌｕ能诱导分离的脑细胞ｃ－ｆｏｓ的一过性高表达及〔Ｃａ２＋〕ｉ的显著升高。Ｂｅｒ１０μｍｏｌ·Ｌ－１显著抑制Ｇｌｕ诱导的脑细胞ｃ－ｆｏｓ的高表达，而尼莫地平则没有明显作用。Ｂｅｒ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１能剂量依赖地抑制Ｇｌｕ引起的〔Ｃａ２＋〕ｉ升高。结论：Ｂｅｒ的这种降低脑细胞ｃ－ｆｏｓ基因表达及〔Ｃａ２＋〕ｉ水平的作用可能是其治疗脑缺血性疾病的机制之一。     

谷氨酸单钠对成年小鼠的神经毒性作用

［３Ｈ］谷氨酸（Ｃｌｕ）ｓｃ后的不同时程，柱层析分离血清中［３Ｈ］Ｇｌｕ，液闪测定，发现随代谢时程的延长［３Ｈ］Ｇｌｕ的量明显降低。外周组织中［３Ｈ］Ｇｌｕ含量的变化与血清中的类似，而神经组织则不同。非标记谷氨酸单钠ｓｃ以剂量依赖方式损伤成年小鼠的分辨学习能力。引起特征性神经元退变，降低下丘脑和脊髓的线粒体膜结合钙水平。结果表明，４．０ｍｇ·ｇ－１谷氨酸单钠可以透过血脑屏障对成年动物产生神经毒性作用。其作用机理可能与细胞内Ｃａ２＋超载，线粒体封存或排空Ｃａ２＋的能力失常。最终导致神经元损伤甚至死亡有关。     

三七总皂甙对大鼠肝细胞钙内流的阻断作用

目的：通过检测三七总皂甙（ＰＮＧＳ）对大鼠单离肝细胞Ｃａ２＋内流的影响，探讨其对肝缺血再灌注损伤保护作用的可能性。方法：采用胶原酶灌注法单离大鼠肝细胞，用４５Ｃａ示踪技术测定三七总皂甙对新鲜分离大鼠肝细胞Ｃａ２＋内流的影响。结果：肝细胞孵育在含４５Ｃａ生理液中，其细胞内４５Ｃａ浓度随孵育时间延长逐渐增高，１５ｍｉｎ时达高峰；２０ｎｍｏｌ·Ｌ－１垂体加压素使４５Ｃａ浓度增高３９％。Ｖｅｒａｐａｍｉｌ、Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ和ＰＮＧＳ均能不同程度地阻断静息状态和垂体加压素激动下的肝细胞４５Ｃａ内流，ＰＮＧＳ阻断效果明显优于Ｖｅｒａｐａｍｉｌ和Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ，且呈剂量依赖性。结论：ＰＮＧＳ具有特异性阻断肝细胞受体依赖性钙通道（ＲＯＣ）的作用，是一种理想的肝细胞钙通道阻滞剂。     

LSCM观察三七总皂甙及其组分对游离钙离子影像变化的影响

用盖玻片或ＭａｔＴｅｋ培养皿培养猪主动脉内皮细胞（ａＥＣ）约１８ｈ后，以荧光探针（ｆｌｕｏ－３／ＡＭ终浓度１０μｍｏｌ·Ｌ－１）负载，当细胞内游离钙离子（Ｃａ２＋）与ｆｌｕｏ－３结合后，通过激光扫描共聚焦显微镜（ＩｎＳＩＧＨＴ－ｐｌｕｓＩＱ型）观察细胞的荧光影像变化。基于三七总皂甙（ｔ－ＰＮＳ）对ａＥＣ所产生的生物活性物质有明显的作用，本拟进一步探索上述药物对ａＥＣ中［Ｃａ２＋］；的影响。实验结果显示：在ＡＴＰ作用后，ｔ－ＰＮＳ可使ａＥＣ内的荧光强度在２０～８０ｓ内急剧升高至峰值。但其组分Ｒｂ１及Ｒｇ１使荧光强度有下降或无明显变化。提示ｔ－ＰＮＳ有使内皮细胞［Ｃａ２＋］；升高的作用。     

海马内钙离子水平对小鼠记忆巩固的影响

采用一次性被动回避反应模型，观察了海马（双侧）定位注射ＣａＣｌ２（２．９μｇ·只－１）和ＥＧＴＡ（１ｎｇ·只－１）对记忆巩固过程的影响。电击（０．３ｍＡ，５ｓ）后立即注射上述化合物，２４ｈ后检测，并运用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子的荧光探针，采用精密的ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统，检测了分离的单个神经细胞内游离钙及其变化。结果表明，与生理盐水对照组相比，海马内注射ＣａＣｌ２或ＥＧＴＡ都使小鼠的步入潜伏期缩短，说明记忆保持下降。以３Ｈ－亮氨酸为标记物进行的高体实验表明：ＣａＣｌ２或ＥＧＴＡ都使３Ｈ－亮氨酸参入海马突触体蛋白质的总量降低，但从ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳条带来看，受这两种化合物影响的突触体蛋白质分子量范围不完全一致。提示海马内游离Ｃａ２＋水平过高或过低都能损害记忆巩固过程，其作用机理与Ｃａ２＋影响突触体蛋白质合成有关。     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚（３０－３００μｍｏｌ·Ｌ－１）影响大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）与肌醇－１,４,５－三磷酸（ＩＰ３）合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理．结果表明,与丙泊酚共同培养７２ｈ,对ＰＡＳＭＣ［Ｃａ２＋］ｉ基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素（ＮＥ３μｍｏｌ·Ｌ－１）引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）时,丙泊酚抑制ＮＥ升高［Ｃａ２＋］ｉ作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制ＮＥ促进ＩＰ３合成作用．结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制ＩＰ３介导的细胞内钙释放密切相关．     

三氟拉嗪对大鼠脑突触体内Ca2＋水平和Ca2＋，Mg2＋─ATP酶活性的作用

用Ｑｕｉｎ２法测得大鼠脑突触体内静息游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）为８５±１３μｍｏｌ·ｇ－１ｐｒｏｔｅｉｎ．三氟拉嗪（ＴＦＰ）１，５和１０μｍｏｌ·Ｌ－１对静息突触体［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，但能以剂量依赖方式增高６５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ所致突触体［Ｃａ２＋］ｉ升高，从１９２±５８μｍｏｌ·ｇ－１ｐｒｏｔｅｉｎ分别达到２３３±６３，４３１±９９和６６１±１７３μｍｏｌ·ｇ－１ｐｒｏｔｅｉｎ．ＴＦＰ５，１０和５０μｍｏｌ·Ｌ－１分别使突触体Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性降低３１％，４１％和４５％；使Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性降低３０％，３６％和３９％，提示ＴＦＰ可能是通过抑制钙调素，进而抑制Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性，使突触体［Ｃａ２＋］ｉ升高，促进神经末梢释放递质     

(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

用细胞培养方法，在原代培养的大鼠皮质神经细胞上，观察了（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的神经元损伤的保护作用。以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为Ｃａ２＋的荧光指示剂，用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统观察（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸诱发大鼠脑皮质神经细胞内Ｃａ２＋升高的影响。结果表明（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱能剂量依赖性地抑制谷氨酸的神经毒作用，对谷氨酸诱发的神经细胞内游离Ｃａ２＋升高有明显的抑制作用。提示蝙蝠葛苏林碱对缺血性脑损伤有保护作用。     

维拉帕米对大鼠脑突触体内Ca^2＋和Ca^（2＋）Mg^（2＋）—ATP酶的影响

维拉帕米１０，５０和１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１能增加高Ｋ＾＋和去甲肾上腺素所致大鼠脑突触体内激离Ｃａ＾２＋的浓度，但使静息状态突触体内游离Ｃａ＾２＋浓度下降。Ｖｅｒ还抑制突触体Ｃａ＾（２＋）Ｍｇ＾（２＋）－ＡＴＰ酶活性。结果提示：与静息状态不同，在神经末梢受到刺激时，Ｖｅｒ可能是通过抑制ＣａＭ，进而抑制Ｃａ＾（２＋）Ｍｇ＾（２＋）－ＡＴＰ酶活性，使胞浆内游离Ｃａ＾（２＋）升高，引起递质释放量增加。     

异丙酚对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的　研究异丙酚对离体大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法　以原代培养的大鼠海马神经元作为研究对象 ,建立缺氧、H2 O2 和谷氨酸损伤模型 ,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测缺氧前后 ,单个海马神经元内Ca2 + 浓度和线粒体膜电位 (△Ψm)的变化。用电子自旋共振技术测定异丙酚对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。结果　 6～ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1) ,作用程度均呈剂量相关 (r =0 89,P <0 0 5 ) ;2 4～ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低H2 O2 损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1) ;12～ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低谷氨酸损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1)。 3～ 4 8mg·L-1异丙酚对缺氧诱发的细胞内钙离子超载有抑制作用(P <0 0 5 ) ;12、4 8mg·L-1异丙酚能减缓缺氧引起的△Ψm降低 (P <0 0 1)。 12、4 8mg·L-1异丙酚对羟基自由基的清除率分别为 17 1%和 2 1 1% ,但对超氧阴离子自由基无清除作用。结论　异丙酚对离体培养的大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用 ,其作用机制部分与异丙酚抑制缺氧引起的 [Ca2 + ]i 异常升高、抑制线粒体膜电位的下降和清除羟基自由基有关     

硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ-氨基丁酸释放的影响

目的　观察硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ 氨基丁酸 (GABA)Ca2 + 依赖性和Ca2 + 非依赖性释放的影响。方法　制备大鼠前额皮层粗突触体。用人工脑脊液(aCSF)孵育 ,分为 5组 :基础释放组 (Base)、硫喷妥钠 10μmol·L-1组 (THS10 )、硫喷妥钠 30 μmol·L-1组 (THS30 )、硫喷妥钠 10 0 μmol·L-1组 (THS10 0 )、硫喷妥钠 30 0 μmol·L-1组 (THS30 0 ) ,每组含 8份突触体。向每组各等份突触体反应液中加入不同浓度的硫喷妥钠 (Base组不加入 ) ,于 37℃条件下应用 30mmol·L-1KCl或 2 0 μmol·L-1veratridine诱发谷氨酸和GABA释放。应用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定各反应液中的谷氨酸和GABA浓度。观察谷氨酸和GABACa2 + 非依赖性释放时 ,aCSF中不含Ca2 + 。结果　硫喷妥钠 30、10 0、30 0 μmol·L-1可显著抑制KCl或vera tridine诱发的Ca2 + 依赖性谷氨酸释放 (P <0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 1) ,IC50 分别为 2 5 6 μmol·L-1和 2 6 3μmol·L-1;THS10与THS30组 ,THS30与THS10 0组之间差异有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 1)。硫喷妥钠各浓度组中 ,Ca2 + 依赖性GABA释放及Ca2 + 非依赖性谷氨酸和GABA释放水平与Base组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　硫喷妥钠可剂量依赖性地抑制大     

超低分子量肝素抑制神经细胞内钙释放保护谷氨酸损伤原代培养大鼠神经元

目的探讨超低分子量肝素(ultra low molecular weight heparin,ULMWH)对谷氨酸(Glu)诱导原代培养大鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养大鼠大脑皮层神经细胞,建立谷氨酸(Glu)诱导损伤模型,采用MTT法检测细胞活力、Hoechest33258染色法观察凋亡细胞形态改变和检测凋亡细胞数。同时,采用Fura-2/AM双波长荧光分光光度法测定神经细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)。结果提前应用ULMWH可提高Glu损伤神经细胞的生存能力,降低Glu诱导的凋亡细胞数。同时,ULM-WH不论是在含Ca2+测量介质还是在无Ca2+测量介质中均可降低神经细胞[Ca2+]i。结论ULMWH对Glu损伤神经细胞具有保护作用,该作用可能与其抑制神经细胞内Ca2+释放而降低胞内[Ca2+]i有关。     

总丹酚酸的抗脑缺血和抑制谷氨酸释放作用

采用体内,体外方法探讨总丹酚酸对脑缺血的影响及可能机理. 在大鼠大脑中动脉阻断模型上,阻断后2 h ip总丹酚酸12.5-25 mg·kg^-1可缩小阻断24 h后的脑梗死面积,减轻脑水肿. 离体研究发现,总丹酚酸0.01-1 μg·L^-1可抑制小鼠脑突触体谷氨酸释放,不影响大鼠脑皮层神经细胞内Ca²⁺浓度. 结果说明总丹酚酸有抗脑缺血作用,其机理可能与抑制谷氨酸的释放有关.     

丙泊酚对大鼠海马突触体释放谷氨酸和γ-氨基丁酸的影响

目的观察丙泊酚对大鼠海马突触体谷氨酸和γ氨基丁酸(GABA)Ca2+依赖性释放和非Ca2+依赖性释放的影响。方法制备突触体后用人工脑脊液(aCSF)孵育,分为7组,应用丙泊酚(propofol)的浓度分别为3(Pro3组)、10(Pro10组)、30(Pro30组)、100(Pro100组)和300μmol·L-1(Pro300组),脂肪乳剂对照组加入脂肪乳(Intralipid组),空白对照组(Control组)不加入任何药物。在观察Ca2+依赖性释放时,加入二氢海人藻酸和哌啶酸;在观察非Ca2+依赖性释放的时候,去除aCSF中的Ca2+。在37℃的条件下,应用20μmol·L-1藜芦定或30mmol·L-1KCl诱发递质释放。应用反相高效液相色谱法测定aCSF中谷氨酸和GABA的浓度。结果①Ca2+依赖性递质释放:应用藜芦定时,Pro30、Pro100和Pro300组的谷氨酸和GABA释放量低于Intralipid组(P<0.01或P<0.05);应用KCl时,各组的谷氨酸和GABA释放量无差异(P>0.05)。②非Ca2+依赖性释放:各组应用藜芦定和KCl诱发的谷氨酸和GABA释放量无差异(P>0.05)。结论丙泊酚可以抑制Ca2+依赖性谷氨酸和GABA的释放,而对非Ca2+依赖性谷氨酸和GABA释放无影响。     

钙调素拮抗剂E6对大鼠神经细胞内钙的影响

目的　观察钙调素拮抗剂E6对神经细胞静息[Ca2 +]i、KCl (5 0mmol·L-1)和谷氨酸 (glutamicacid ,Glu ,0 1mmol·L-1)引起的神经细胞 [Ca2 +]i 升高的影响。方法　用Ca2 +敏感荧光指示剂Fura 2 /AM负载大鼠脑细胞 ,测定神经细胞内游离Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)。结果　E6可升高神经细胞静息 [Ca2 +]i,EC50 为 6 6 8μmol·L-1;无外Ca2 +条件下 ,也升高 [Ca2 +]i,EC50 为 1 30 μmol·L-1,说明E6主要是通过促进细胞内贮存Ca2 +释放引起内Ca2 +升高。E6抑制KCl升高细胞 [Ca2 +]i 的IC50 为 6 0 μmol·L-1;抑制Glu激发的细胞 [Ca2 +]i 升高的IC50 为 0 15 μmol·L-1。结论　E6可能是通过与细胞内钙调素 (Calmodulin ,CaM)结合后 ,影响兴奋性氨基酸受体的开放和电压依赖性钙通道的活性状态 ,表现出对由去极化或受体激动剂引起的内Ca2 +升高的抑制作用     

三七总皂苷和红花总黄酮配伍对急性血瘀大鼠血液流变学的改善作用

目的观察三七总皂苷(PNS)和红花总黄酮(ECT)配伍对急性血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响。方法大鼠按分组分别ig给予PNS 50 mg.kg-1、ECT 200 mg.kg-1、PNS+ECT及阿司匹林100mg.kg-1。每日早晚ig给药各1次,共7次。第5次给药后,sc给予肾上腺素加冰浴造成急性血瘀模型。锥板法测定全血黏度和血浆黏度;微量毛细管法测定血细胞比容(Hct);光电比浊法测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集;光电电磁法测定凝血参数。结果与正常对照组相比,模型组大鼠全血黏度和血浆黏度升高,红细胞聚集指数和血小板最大聚集率显著增加,Hct显著升高,纤维蛋白原(Fib)含量显著增加,凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间和凝血酶原时间(PT)均显著缩短(P<0.01)。与模型组相比,单独应用PNS和ECT均能显著降低全血黏度及血浆黏度,明显降低Hct、红细胞聚集指数和血小板最大聚集率,显著延长PT,其中PNS还能显著降低Fib含量,延长TT。与单独应用PNS或ECT相比,PNS+ECT配伍能进一步改善血液流变学指标,在降低Hct上优于单用PNS(P<0.05),对血小板最大聚集率的抑制作用则优于单用PNS或ECT(P<0.05)。与阳性对照阿司匹林相比,单用PNS或ECT抑制血小板聚集的作用不及阿司匹林,但PNS降低Fib的作用较好;PNS+ECT配伍对血液流变学的改善作用与阿司匹林相似,但在抑制红细胞聚集和血小板聚集,降低Fib含量,延长TT和PT等指标上无统计学差异,但有优于阿司匹林的趋势。结论 PNS和ECT单用能显著改善血瘀模型大鼠血液流变学的异常,且二者配伍后能增强对血瘀模型大鼠血液流变学的改善作用。     

Opposing facilitatory and inhibitory modulation of glutamate release elicited by cAMP production in cerebrocortical nerve terminals (synaptosomes)

Activation of cAMP-protein kinase A (PKA) is widely reported to facilitate synaptic transmission. Here, we examined the presynaptic loci of PKA action using isolated nerve terminals (synaptosoms). The adenylyl cyclase (AC) activator, forskolin, failed to have any effect on 4-aminopyridine (4-AP)-evoked glutamate release, when added alone. However, in the presence of the alkylxanthine, IBMX, forskolin strongly facilitated glutamate release. This potentiation of release was blocked by the PKA inhibitors Rp-cAMPS and H7. Given that IBMX has dual activity, antagonizing adenosine receptors as well as inhibiting cAMP phosphodiesterase, we examined the effect of a selective adenosine A(1) receptor antagonist, 8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX) and RO20-1724, a specific phosphodiesterase inhibitor. Both unmasked the forskolin-mediated modulation of glutamate release. Conversely, the adenosine analogue, N(6)-cyclohexyladenosine (CHA), reversed the facilitation induced by forskolin+RO20-1724. Adenosine A(1) receptor activation, therefore, appears to curtail cAMP/PKA-induced potentiation of glutamate release. Looking at the targets for cAMP/PKA-mediated potentiation of glutamate release, while synaptosomal excitability was only marginally increased, basal and 4-AP-evoked-increases in [Ca(2+)](c) were substantially enhanced by forskolin+IBMX. Moreover, glutamate release elicited by Ca(2+)-ionophore (ionomycin)-induced Ca(2+)-entry was facilitated by forskolin+IBMX. cAMP/PKA-mediated facilitation of glutamate release may therefore involve modulation of Ca(2+)-entry, as well as downstream events controlling synaptic vesicle recruitment and exocytosis.     

Cellular mechanisms of the acute increase of glutamate release induced by nerve growth factor in rat cerebral cortex

Nerve growth factor (NGF) was found to increase glutamate release in the developing visual cortex. We investigated the cellular mechanisms of this effect and its dependence on extracellular and intracellular Ca2+. The NGF-induced enhancement of glutamate release from superfused rat visual cortex synaptosomes required mild depolarization. Removal of external Ca2+ during depolarization with 15 mM K+ only halved the effect of NGF on glutamate release. NGF increased [Ca2+]i in K+-depolarized synaptosomes preloaded with fura-2AM both in the presence and in the absence of external Ca2+. The effects of NGF on glutamate release and [Ca2+]i elevation were prevented by an anti-TrkA receptor monoclonal antibody. NGF increased synaptosomal inositol (1,4,5)-triphosphate (InsP3) during depolarization and the InsP3 receptor antagonist heparin abolished the effect of NGF on evoked glutamate release both in the presence and in the absence of external Ca2+. The effect of NGF on the evoked glutamate release in Ca2+-free medium was abolished by dantrolene, a ryanodine receptor blocker, by CGP 37157, a blocker of the mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger and by pretreatment of synaptosomes with caffeine. NGF significantly increased the depolarization-induced activation of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II (CaMKII) and the subsequent phosphorylation of synapsin I in the absence of external Ca2+ and the NGF effect on evoked glutamate release was inhibited by the CaMKII inhibitors KN-93 and CaMKII 281-309 peptide but not by the MAP kinase inhibitor PD 98059. Thus, the effect of NGF on evoked glutamate release is linked to an increase in [Ca2+]i contributed by both Ca2+ entry and mobilization from InsP3-sensitive, ryanodine-sensitive and mitochondrial stores and to the subsequent activation of CaMKII.