治疗用皮卡乙型肝炎疫苗（CHO细胞）及其组分的小鼠急性毒性实验研究

目的比较治疗用皮卡乙型肝炎疫苗（CliO细胞）及疫苗组分（重组乙型肝炎疫苗（CliO细胞）、皮卡佐剂）对小鼠的急性毒性反应。方法ICR小鼠按体重随机分为溶媒对照组,皮卡佐剂高剂量组（原液）和低剂量组（2倍稀释液）,重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）组（原液）,治疗用皮卡乙型肝炎疫苗（CliO细胞）高剂量组（原液）和低剂量组（2倍稀释液）,每组小鼠后肢im0．2mL受试物,给药后连续14天观察其状态及毒性反应。结果各组小鼠全部存活,摄食和体重指标正常,注射部位肌肉、外观体征、行为活动、呼吸、排泄、各组织脏器肉眼观察及组织病理学检查均未见异常。结论在本实验条件下,治疗用皮卡乙型肝炎疫苗（CliO细胞）及疫苗组份对小鼠无明显毒性反应。     

重组四价人乳头瘤病毒16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗制剂工艺的优化

目的 考察不同制剂工艺流程下制备的重组四价人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗的抗原吸附效果、稳定性及免疫原性,根据实验结果筛选出最合适的制剂配方及工艺。方法  通过改变重组四价HPV疫苗的缓冲体系,以及氢氧化铝佐剂的含量、混合工艺、吸附方式与吸附条件,配制不同的实验疫苗,观察其外观,并分别进行蛋白质稳定性、抗原吸附率和小鼠体内半数有效剂量的检测。 结果 重组四价HPV疫苗原液与450 μg/ml氢氧化铝佐剂在pH6.5的组氨酸缓冲体系下混合后的实验疫苗,外观均一性良好,抗原蛋白稳定性最高,Tm=87.4 ℃,小鼠体内免疫原性较好;搅动吸附条件下的4型别HPV抗原吸附率明显高于静止吸附;铝佐剂和抗原蛋白的吸附与混合先后顺序,不同吸附比例、温度和时间对疫苗外观无显著影响,抗原吸附率均大于99.00%。结论 确定了重组四价HPV16/18/52/58型病毒样颗粒疫苗合适的制剂工艺条件。     

效力增强型流感疫苗在老年人中的免疫原性优于常规疫苗

在一项IV期临床试验NCT03330132中,1861名65-82岁的香港居民随机接种了3种为老年人设计的新型流感疫苗:大剂量三价疫苗、含MF59佐剂的三价疫苗、大剂量四价重组血凝素疫苗,以及作为对照的常规四价疫苗。     

OK432优化的内皮细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用研究

目的探讨OK432优化的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)疫苗对小鼠EAC乳腺癌的生长抑制作用。方法体外培养HUVECs,与佐剂OK432混合,制备HUVECs-OK432疫苗,以小鼠EAC乳腺癌皮下移植瘤模型考查HUVECsOK432疫苗的抗肿瘤效应,并通过ELISA、脾细胞增殖及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验检测疫苗免疫后体液及细胞免疫应答水平。结果在预防性免疫中,HUVECsOK432疫苗可以明显抑制EAC乳腺癌生长;HUVECs-OK432疫苗诱导小鼠产生了高滴度的特异性HUVEC抗体;HUVECs-OK432疫苗能有效刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖;HUVECs-OK432组小鼠脾细胞诱导产生了明显的靶向HUVEC细胞的CTL杀伤作用。结论 HUVECs-OK432疫苗可以有效诱导机体产生靶向HUVEC的特异性体液及细胞免疫应答,从而有效抑制了小鼠EAC乳腺癌的生长。     

用细胞培养法制备甲型肝炎灭活疫苗

作者将从FRhK6细胞培养中分离出的甲型肝炎病毒(HAV)CR326株,在LLC-MK2细胞中用转瓶连续培养21天,细胞收集于PBS中,低速离心取其沉淀物。再经溶解、超声破碎和SDS凝胶电泳等一系列纯化过程得到高纯度的HAV。经福尔马林37℃72小时灭活,氢氧化铝吸附,制成高纯度氢氧化铝吸附的HAV灭活疫苗。将此疫苗经不同程度稀释后,给5周龄的ICR雌性小鼠作腹腔接种,每个稀释度接种10只小鼠,并对10只小鼠注射氢氧化铝稀释液作为对照。接种后4周采血,用标准的HAVAB法及改良的HAVAB法(HAVAB-M)     

干扰素在狂犬病疫苗中的佐剂效果研究

目的研究干扰素在狂犬病疫苗中的佐剂效果。方法将人用狂犬病疫苗与干扰素按一定比例混合,制成干扰素佐剂狂犬病疫苗。将干扰素佐剂狂犬病疫苗和无佐剂狂犬病疫苗分别免疫昆明小鼠,并于免疫前和免疫后4,7,14,30,60d时眶静脉采血,用快速免疫荧光灶抑制试验检测小鼠血清中和抗体;同时经腹腔免疫小鼠,第15天时取脾检测淋巴细胞转化率。结果干扰素佐剂狂犬病疫苗可促进免疫细胞增殖。与无佐剂狂犬病疫苗相比,干扰素佐剂狂犬病疫苗诱导产生中和抗体的时间早、滴度高。结论干扰素佐剂狂犬病疫苗具有良好的免疫学效果。     

重组痘苗病毒艾滋病疫苗细胞免疫评价方法的优化

目的  优化酶联免疫斑点试验（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）方法,提高其在重组天坛株痘苗病毒艾滋病疫苗细胞免疫评价中的灵敏度。方法  将疫苗或对照痘苗病毒皮内免疫BALB/c小鼠,50 μl/只,6周后无菌采集小鼠脾脏。用ELISPOT对分泌IFN-γ的脾淋巴细胞〔斑点形成细胞（spot-forming cell,SFC）〕进行检测。比较不同脾淋巴细胞密度（2×10⁵、1×10⁶、2×10⁶个/孔）和不同刺激肽质量浓度（2、4 μg/ml）对SFC的影响。分别采用单因素方差分析和t检验进行多组间和两组间数据比较。结果  3个细胞密度组（F=0.023,P>0.05）和2个刺激肽浓度组（t=-1.762~-0.110,P值均>0.05）间的SFC数差异均无统计学意义。当细胞密度为2×10⁵个/孔、刺激肽质量浓度为4 μg/ml时,疫苗组的SFC数达到（107.00±42.01）个/106细胞,高于原实验条件（细胞密度为1×10⁶个/孔、刺激肽质量浓度为2 μg/ml）的SFC数〔（76.55±64.45）个/10⁶细胞〕,但两者间的差异无统计学意义（t=1.252,P>0.05）。前者的SFC阳性率达到100%,而后者仅为50%。结论  通过优化ELISPOT方法中的细胞密度和刺激肽浓度,进一步提升了该法在重组痘苗病毒艾滋病疫苗细胞免疫评价中的灵敏度。     

乙肝核酸疫苗安全性的初步研究

目的:研究乙肝核酸疫苗对小鼠和豚鼠的长期毒性.方法:健康小鼠和豚鼠分别按体重随机分为低、中、高剂量组(小鼠剂量分别为0.5,1.5,4.5 mg·kg-1,豚鼠剂量分别为0.1,0.4,0.8 mg·kg-1)和溶媒对照组.2种动物均每周后肢肌内注射2次,共8周.末次给药后24 h和停药后30 d分别测血液学、血液生化、病理检查和小鼠的各项免疫指标(包括IgG 1和IgG 2a亚型血清水平、血清抗核抗体、血清抗体总水平、γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)血清水平、外周血中各淋巴细胞亚群的分布情况和染色体整合检测).结果:两种动物各剂量组的各项常规检测指标均未见有任何异常变化,与空白及溶媒对照组相比均无显著性差异.小鼠免疫指标未出现与治疗目的无关的改变.结论:受试疫苗在两种动物未观察到明显的生化、病理学、免疫学指标异常.小鼠和豚鼠肌内注射乙肝核酸疫苗的安全剂量分别为4.5和1.2 mg·kg-1.     

刺蒴麻水提液抗炎镇痛作用初探

目的 初步研究刺蒴麻的抗炎镇痛药效。方法 按完全随机数字表法将小鼠随机分为正常对照组、刺蒴麻水提液高、中、低剂量组,阳性对照组,采用化学刺激剂二甲苯均匀涂抹在小鼠耳郭两面诱发耳郭肿胀的急性炎症模型,探究刺蒴麻水提液的抗炎效应,采用热板刺激小鼠足爪致痛和腹腔注射醋酸刺激小鼠腹膜导致扭体致痛的疼痛模型探究刺蒴麻水提液的镇痛药效。结果 高、中、低各剂量组的刺蒴麻水提液,给药后对小鼠耳郭涂抹化学刺激剂二甲苯诱发的急性炎症表现耳郭肿胀抑制均明显,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P<0.01）;对热板刺激小鼠足爪致痛引发的痛阈值增加均明显,相较于正常对照组以及自身给药前,差异有统计学意义（P<0.01）;对腹腔注射醋酸刺激小鼠腹膜引发的扭体反应次数减少也均明显,相比于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 刺蒴麻水提液具有明显减轻化学刺激剂二甲苯诱发的小鼠耳郭肿胀,对热板刺激小鼠足爪的痛阈值增加明显,对小鼠腹腔注射醋酸刺激腹膜引发的扭体反应次数减少明显,具有良好的抗炎镇痛药效。     

免疫接种的安全性及不良事件

免疫接种是预防和控制传染病的重要手段之一,随着免疫接种覆盖率的提高,疑似免疫接种不良事件（AEFI）也日益增多。中国疾病预防控制中心将AEFI分为7类,包括疫苗本身的不良反应（一般反应和异常反应）、疫苗质量、实施差错、非疫苗引起的偶合反应、心因性反应和不明原因的反应。本文概述了乙型肝炎疫苗、卡介苗、口服脊髓灰质炎疫苗、麻疹/麻疹-腮腺炎-风疹疫苗、百白破疫苗、乙型脑炎疫苗、B型流感嗜血杆菌偶联疫苗、狂犬病疫苗和甲型H1N1流感疫苗等9种疫苗不良事件的发生情况,以及AEFI的监测和管理措施,旨在为增强免疫接种的安全性提供参考。     

Fascaplysin对ICR小鼠S180移植瘤的抑制作用及体内安全性的初步观察

目的：研究Fascaplysin对ICR小鼠移植性骨肉瘤S180瘤体的体内抑制作用。方法：急性毒性实验采用LD50数据处理程序1.01版计算LD50。皮下注射技术建立荷S180骨肉瘤的ICR小鼠动物模型,并随机分为空白对照组（注射生理盐水）、阳性对照组（CTX,30 mg.kg-1.d-1）、Fascaplysin高剂量组（20 mg.kg-1.d-1）和Fascaplysin低剂量组（5 mg.kg-1.d-1）共4组,观察相应处理10 d后各组小鼠移植瘤生长状况（抑瘤率）及瘤组织病理学形态变化。结果：阳性对照组、Fascaplysin高剂量组和Fascaplysin低剂量组的抑瘤率分别为（53±9）%、（52±10）%和（30±12）%;给药期间Fascaplysin对ICR小鼠肝、肾组织未产生明显的病理性影响,而对ICR小鼠体内S180移植瘤组织的病理性影响较为明显。结论：一定剂量的Fascaplysin对ICR小鼠S180移植性骨肉瘤生长具有较好的抑制作用,是一个有潜力的抗癌药物。     

注射卡介苗素对接种乙型肝炎疫苗无、弱应答婴儿血IL-10、IL-12的影响

目的：探讨注射卡介苗素对接种乙型肝炎疫苗后无、弱应答婴儿血清IL-12和IL-10表达的作用。方法：放免法定量检测按0、1、6方案（每次10μg）标准全程接种重组乙型肝炎疫苗后婴儿表面抗体（Anti—HBs）的几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）,筛选无或弱应答者（GMT〈100UL）60例,随机分为两组各30例进行疫苗复种,其中一组同时肌内注射卡介苗素。用ELISA法检测复种前后血清中IL-12、IL-10的浓度。结果：注射卡介苗素能诱导无、弱应答婴儿产生较高水平的IL-12、IL-10,并呈疗程依赖性,卡介苗注射组的抗体应答水平较对照组高,两者差异有统计学意义。结论：卡介苗素能有效诱导无、弱应答婴儿机体产生细胞因子IL-12、IL-10,为卡介苗素有望作为一种较好的乙肝疫苗佐剂提供了实验基础。     

治疗性乙型肝炎疫苗长期毒性试验

目的：根据我国相关法规,开展治疗性乙肝疫苗的长期毒性试验.方法：将治疗性乙肝疫苗以高、中、低三个剂量经皮下注射食蟹猴,另以等体积生理盐水作为空白对照,每天给药1次,连续21 d,停药后继续观察4周.以血常规、尿常规、血生化、血清抗体和补体、病理学等为观察指标.结果：各组动物外观、行为活动未见异常,未见死亡;试验组动物对受试疫苗均产生免疫应答,血清中可检测到相应抗体;高剂量治疗性乙肝疫苗对食蟹猴肝、肾功能指标有一定影响,停药后可恢复;未见明显的迟发性毒性反应.结论：治疗性乙型肝炎疫苗安全性良好,对食蟹猴的最大无毒作用剂量为21μg·kg-1,约为人临床拟用剂量的21倍,以体表面积计,约为单次人临床拟用量的8倍.     

大黄蜇虫丸治疗慢性肝炎肝纤维化的临床疗效观察

目的:观察大黄蜇虫丸治疗慢性肝炎肝纤维化的临床疗效。方法:选择128例慢性肝炎肝纤维化患者,随机分为治疗组68例和对照组60例。2组患者均予以常规护肝治疗,治疗组加用大黄蜇虫丸(6g.d-1)。疗程均为6个月。观察2组治疗后症状、体征、肝功能及血清玻璃酸(HA)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、甘氨胆酸(CG)、Ⅳ型胶原(ⅣC)、B超影像等改变情况。结果:治疗组HA、PCⅢ、CG、ⅣC均有明显下降,2组比较有显著性差异(P<0.05)。治疗组临床症状明显改善,血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶等指标均显著降低。结论:大黄蜇虫丸能减轻患者症状、改善肝功能和肝纤维化,是治疗慢性肝炎肝纤维化的有效药物之一。     

老年人接种甲型H1N1流感疫苗不良反应的临床观察

目的：比较季节性流感疫苗与甲型H1N1流感疫苗预防接种后的不良反应。方法：选择我部在前后两个阶段分别接种过季节性流感疫苗与甲型H1N1流感疫苗的离退休老干部及家属106例为观察对象,对观察对象分别在接种时、接种后30min、1h、2h、24h、48h、1周、2周、1个月进行不良反应观察,并统计比较观察结果。结果：季节性流感疫苗组和甲型H1N1流感疫苗组的不良反应均较轻微,且差异无统计学意义（P〉0.05）;季节性流感疫苗组发生常见不良反应4例（3.8%）,甲型H1N1流感疫苗组发生常见不良反应5例（4.7%）,两组均无少见、罕见及极为罕见的不良反应发生。结论：季节性流感疫苗与甲型H1N1流感疫苗的不良反应差异无统计学意义（P〉0.05）,老年人接种甲型H1N1流感疫苗是安全的。     

甲型乙型肝炎联合疫苗的制剂安全性试验研究

目的评价甲型乙型肝炎联合疫苗是否具有肌肉刺激性、急性毒性和过敏性反应。方法家兔后肢股四头肌im 0.5mL甲型乙型肝炎联合疫苗,每天给药1次,连续给药2 d,停药2和21 d后对注射部位进行肉眼和病理组织学检查;小鼠后肢im 0.2 mL甲型乙型肝炎联合疫苗,给药1次后观察小鼠的不良反应情况;豚鼠后肢隔日im 0.5 mL甲型乙型肝炎联合疫苗,连续注射3次,分别于末次致敏后第14和21 d iv给予1.0 mL甲型乙型肝炎联合疫苗进行激发,观察豚鼠30 min内是否出现过敏反应。结果甲型乙型肝炎联合疫苗可导致注射部位肌肉局灶性炎细胞浸润,停药21 d后肌肉组织无异常;在本实验条件中,未见对小鼠有明显的毒性反应;豚鼠全身主动过敏反应阴性。结论甲型乙型肝炎联合疫苗无全身主动过敏性反应且毒性较低,对肌肉有轻度的刺激反应,但其刺激作用可恢复。     

黄芪精对血虚症、气虚症模型小鼠的药效学研究

目的观察黄芪精对血虚、气虚模型小鼠的影响。方法取ICR小鼠72只,随机分为正常组,模型组,阳性药组,黄芪精低、中、高剂量组,每组12只,除正常组外,其他各组眼眶放血造模,给药后检测小鼠红细胞（RBC）、白细胞（wBc）、血红蛋白（Hb）、血小板（Plt）;对化学性损伤小鼠血虚症的补血作用试验分组同上,除正常纽外,其他各组给予腹腔注射环磷酰胺造模,检测指标同上。取ICR小鼠60只,分组同上,每组10只,除正常组外,其他组用节制饮食方法造模,灌喂相应的药物,测定其游泳时间和脏器指数。结果黄芪精能显著增加失血性小鼠红细胞数量,模型组为（5．41±0．46）×10^12／L、黄芪精低剂量组为（6．00±0．54）×10^12／L、黄芪精中剂量组为（5．90±0．55）×10^12／L,黄芪精中、低剂量组与模型组相比,差异有显著性意义（P〈0．05）。黄芪精具有提升化学性损伤小鼠白细胞水平趋势。黄芪精可显著延长气虚小鼠游泳时间,高、低剂量组与模型组相比,差异有显著性意义（19〈0．05）;黄芪精具有对抗气虚小鼠脾脏和胸腺萎缩的趋势。结论黄芪精具有补气生血的作用。     

TLR4对MHV-3诱导的C3H／He小鼠病毒性肝炎转归的影响

目的探讨TLR4对3型鼠肝炎病毒（MHV-3）诱导的C3H／He小鼠肝炎转归的影响。方法观察C3H／HeJ及C3H／HeN小鼠感染MHV-3后的临床症状（皮毛异常、呼吸加快及身体颤抖）并进行评分。记录两亚系小鼠的存活情况并进行比较。所有小鼠观察至感染后40d。结果小鼠品系对临床症状评分不起作用（P=0．718）。临床评分有随时间变化的趋势（P〈0．001）,且时间因素的作用随小鼠品系而不同（P=0．004）。C3H／HeJ及C3H／HeN小鼠临床症状评分仅在感染后第5、6、13天出现差异：（13．071±1．184）和（10．933±4．608）（P〈0．001）,（8．321±5．048）和（11．304±3．901）（P〈0．001）,（13．091±1．578）和（10．846±3．671）（P=0．015）。C3H／HeJ及C3H／HeN小鼠存活率分别为26．7％和23．3％,平均存活时间分别为16．267d和16．433d,无显著差异（P=0．922）。结论MHV-3诱导的C3H／He小鼠病毒性肝炎转归不依赖于TLR4。     

四价流感病毒裂解疫苗的安全性研究

目的 对四价流感病毒裂解疫苗进行肌肉刺激性、急性毒性和过敏性评价,以考察其安全性.方法 对家兔后肢股四头肌肌肉注射0.5 ml四价流感病毒裂解疫苗,每天接种1次,连续接种2d,末次接种后48 h和16d对注射部位进行肉眼和病理组织学检查.对小鼠后肢肌肉注射0.2 ml疫苗后,连续4h和14d观察各种不良反应.豚鼠后肢隔天肌肉注射0.5 ml疫苗,共接种致敏3次,分别于末次接种后14和21 d静脉注射1.0 ml疫苗进行激发,观察豚鼠30 min内是否出现过敏反应.结果 家兔在末次接种后48 h和16 d,未观察到明显的局部刺激作用.小鼠接种后全部存活,摄食量和体重指标正常,注射部位肌肉、外观体征、行为活动、呼吸、排泄、各组织脏器肉眼观察均未见异常.豚鼠静脉注射疫苗后,活动正常,未出现1-20级过敏反应症状,全身主动过敏反应呈阴性.结论 四价流感病毒裂解疫苗无肌肉刺激性、急性毒性,不引发全身主动过敏性反应.