不同白血病细胞N-乙酰氨基半乳糖转移酶Ⅰ-ⅦmRNA的表达

目的从mRNA水平观察不同白血病细胞中ppGalNAcT1-T7的表达情况.方法采用RT-PCR技术,检测ppGalNAcT1-T7在NB4和K562细胞株中mRNA水平的表达.结果 K562细胞中ppGalNAcT2、T4、T5、57和NB4细胞中ppGalNAcT1、T2、T3、T4、T7有不同程度表达.结论不同白血病细胞中ppGaINAcT1-T7的表达情况不一样,两者之间的相关性有待进一步的研究.     

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族低密度表达谱芯片建立

目的初步创建多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族低密度基因芯片,并对人两种肿瘤细胞中的N-乙酰氨基半乳糖转移酶进行表达谱分析.方法主要为PCR和分子杂交技术.结果制成N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族低密度表达谱基因芯片,通过此芯片采用化学发光法能够检测到人肿瘤细胞中的N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族不同程度的阳性信号.结论在不同肿瘤细胞中,N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族表达谱有差异,但它们之间具体的联系还需进一步的研究.     

关于N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA扩增的初步研究

目的通过实验方法扩增N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA.方法主要通过PCR技术,用各种N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA的特异性引物进行扩增并结合电泳技术,用不同的限制性内切酶进行酶切鉴定.结果通过电泳图谱和酶切图谱初步证实了这一家族的不同成员均已得到有效的扩增.结论成功扩增了N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA,并为其文库的建立打下良好的基础.     

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-Acetylgalactosaminyltransferases,pp-GalNAc-T2, E.C.2.4.1.41)的mRNA表达谱研究

多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2是O-糖链合成第一步的糖基转移酶,而O-糖基化与血管内皮细胞的功能密切相关.随着近年来人类基因组计划的迅速发展,人们对糖基转移酶的功能也开始有了新的认识.本文采用RT-PCR法观察了六种不同组织中PP-GalNAC-T2的表达水平,发现PP-GalNAc-T2在胃肠道粘膜等呈高表达,在脑组织中也有一定的表达,提示它在不同组织中的分布与组织功能存在相关性,值得进一步研究.     

肿瘤病人血清N-乙酰氨基半乳糖苷酶检测的意义

参考Ｙａｍ ａｍ ｏｔｏ 的Ｎ－乙酰－α－Ｄ－氨基半乳糖苷酶（ＮＡＧａｌ）检测方法, 检测了肿瘤病人在手术前后血清ＮＡＧａｌ的水平,并与正常人对照。结果发现术前增高, 与正常人比较：Ｐ＜ ０．００５ 有显著性差异; 手术后： ０．０５＜ Ｐ＜ ０．１, 酶水平呈下降趋势。而诊断肾小管损伤的Ｎ－乙酰氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧｌｕ） 水平无显著差异（ Ｐ＞ ０．５）。因此ＮＡＧａｌ是肿瘤病人放疗、化疗、手术治疗效果以及预后判断的一个指标。     

小鼠多肽：N一乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研穷

目的探讨小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律。为多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族各成员间结构相似但功能不同的特征提供一定的依据。方法采用生物信息学软件和网上数据库对核酸、蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制。结果小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族,结构相似,但其进化方式属于趋异性进化。     

多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2与共刺激分子B7-H3相互作用的结构信息学初步探讨

目的 研究多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2（ppGalNAc-T2）与共刺激分子B7-H3的相互关系.方法 通过同源模拟,得到共刺激分子B7-H3两种不同剪接体（2IgB7-H3,4IgB7-H3）的分子结构,寻找PDB数据库中的ppGalNAc-T2的蛋白质晶体结构,利用软件GRAMM（http：//vakser.bioinformatics.ku.edu/main/resources_gramm.php）,与同源模拟得到的两种不同剪接体的B7-H3分子结构相结合,寻找两者之间是否存在直接结合的可能.结果 成功地模拟了共刺激分子B7-H3两种剪接体的分子结构,发现ppGalNA-T2与共刺激分子B7-H3有相互结合的可能性.结论 结构生物信息学的研究发现ppGalNAc-T2分子与B7-H3具有潜在相互作用位点,ppGalNAc-T2可能参与B7-H3蛋白质的O-糖链合成反应,并且很有可能是通过直接接触来催化控制B7-H3分子的O-糖链合成.     

多肽：N—乙酰氨基半乳糖转移酶2（Polypeptide：N—Acetylgalactosaminyltransterases，pp—GalNAc—T2,E.C.2.4.1.41）的mRNA表达谱研究

多肽：N—乙酰氨基半乳糖转移酶2是O-糖链合成第一步的糖基转移酶，而O糖基化与血管内皮细胞的功能密切相关。随着近年来人类基因组计划的迅速发展，人们对糖基转移酶的功能也开始有了新的认识。本文采用RT—PCR法观察了六种不同组织中PP—GalNAC—T2的表达水平，发现PP—GalNAc—T2在胃肠道粘膜等呈高表达，在脑组织中也有——定的表达，提示它在不同组织中的分布与组织功能存在相关性，值得进一步研究。     

白血病细胞株K562和SHI-1糖基转移酶表达的差异

目的 探讨白血病细胞株K562与SHI-1糖基转移酶表达的差异。方法应用RT-PCR法研究白血病细胞株K562与Sill-1糖基转移酶mRNA表达的差异。结果K562和SHI-1细胞株均表达0GnT、βGnT1、β3GnT5、βGalT2，但表达量不同。K562细胞株主要表达ppGalNacT2、T4、T5、T7，但表达量有差异，而SHI-1细胞株ppGalNacT1、T2、T3、T4均有表达但表达量亦有不同。     

RNAi沉默GALNT7基因对宫颈癌细胞恶性行为的影响

目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶7（polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 7．GALNT7）基因对宫颈癌细胞生长、侵袭及迁移能力的影响。方法利用RNA干扰技术沉默GALNT7（siR—GALNT7）,以非特异性序列（pSilencer2．1）转染细胞作为阴性对照,转染宫颈癌细胞Heh和C33A细胞,采用MTT实验、集落形成实验、Transwell侵袭实验以及细胞划痕实验来检测干扰GAL-NT7基因后宫颈癌细胞生长、侵袭以及转移能力的变化。结果Western Blot检测结果显示,转染siR—GALNT7质粒的实验组中两种宫颈癌细胞中GALNT7的蛋白表达水平明显降低,与转染siR—Ctrl的对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0．05）;siR—GALNT7使HeLa和C33A细胞生长活性分别下降了19％和22％,与对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0．05）;siR—GALNT7使HeLa和C33A细胞的集落形成能力分别下降了56％和52％,与对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0．05）;siR—GALNT7使HeLa和C33A细胞侵袭能力分别下降了48％和54％,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;siR—GALNT7使HeLa细胞迁移能力下降了约30％,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论RNA干扰在体外明显降低了宫颈癌细胞中GALNT7基因的表达,同时抑制了宫颈癌细胞的生长侵袭以及迁移能力．GALNT7基因有可能成为宫颈癌基因治疗的重要靶点。     

红细胞生成素诱导白血病K562细胞分化时WT1 mRNA表达的变化

近年来的研究表明 ,在白血病及某些实体瘤细胞中存在野生型WT1基因 (Wilms’tumorgene)的过度表达 ,提示WT1可能具有癌基因功能[1,2 ] ,而且WT1在白血病细胞增殖与分化中的作用仍有争议。我们应用红细胞生成素 (Epo)促进白血病K5 6 2细胞增殖及诱导分化时 ,WT1mRNA表达被上调 ,而没有随着细胞分化降低 ,提示WT1可能参与白血病细胞的增殖 ,Epo诱导K5 6 2细胞向红系分化时不需要WT1mRNA的下调。材料和方法1　细胞培养　K5 6 2细胞由日本大阪大学Sugiyama教授提供 ,生长于含有 10 %热灭活胎牛血清、12U/ml庆大霉素的RPMI 16 40培养…     

雄黄对NB4和HL—60细胞的形态，PML mRNA及蛋白的表达影响

本研究以NB4,HL-60细胞为研究对象,采用Wright‘s染色法及荧光染色法、免疫荧光技术及RT-PCR法,探讨雄黄对NB4,HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。结果发现：（1）经雄黄处理后,各组均出现细胞凋亡的形态学上改变。（2）雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白聚积于POD结构,随后降解;在HL-60细胞中PML蛋白发生相似改变。（3）雄黄处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论指出,在雄黄诱导下PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制,雄黄能诱导NB4,HL-60细胞凋亡,抑制白血病细胞生长。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组,培养基中不含2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）,且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845,P=0．034）。随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956,P=0．001）。随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01）,且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966,P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

DLL4基因对白血病细胞株K562细胞中YY1和c-Myc蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨Notch的配体DLL4基因在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响。实验分正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-DLL4)。转染后48小时,用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测外源性DLL4瞬时转染表达水平及YY1和c-Myc蛋白的表达水平;用细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞的增殖;转染后48小时用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布和凋亡。结果表明,在各组K562细胞中均检测到DLL4、YY1和c-Myc蛋白的表达,实验组的DLL4、YY1和c-Myc蛋白表达量比两个对照组显著增多(p<0.05);实验组K562细胞的生长速度明显低于对照组;实验组较对照组G0/G1期细胞增多(p<0.001),凋亡率增加(p<0.001)。结论:DLL4基因能增加细胞转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白的表达,诱导细胞生长速度减慢、细胞周期停滞于G0/G1期,并能增高凋亡率增加。     

γ射线对白血病细胞K562 ppGalNAcT2 Mrna表达的影响及中药多糖的防护作用

目的 探讨γ射线对白血病细胞株K562中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2,E.C2.4.1.41)基因mR-NA表达的影响,并探讨中药多糖对此种影响的防护作用。方法 以不同剂量的~(60)COγ射线照射K562细胞,并设加中药多糖实验组,观察不同剂量(5Gy、10Gy、15Gy)γ射线对K562细胞ppGalNAcT2 mRNA表达影响,及加入不同剂量中药(50mg/L,100mg/L,200mg/L)后对10Gy照射K562细胞组中T2 mRNA表达的防护作用。以RT-PCR法检测ppGalNAcT2 mRNA的表达差异变化。结果 γ射线照射K562细胞后ppGalNAcT2 mRNA表达明显减少,且与剂量呈负相关,而中药多糖则可对抗此种作用,使加中药多糖组细胞在照射后ppGalNAcT2 mRNA表达水平维持在正常细胞水平。结论 5～15Gyγ射线照射抑制白血病细胞ppGal-NAcT2 mPNA表达,可能与肿瘤细胞受照后分化抑制有关,而中药多糖明显对抗此种抑制作用。     

2型糖尿病患者尿N-乙酰-β—D一氨基糖苷酶和尿微量白蛋白联合检测在早期肾损伤诊断中的价值

目的探讨尿N-乙酰-β-D-氨基糖苷酶（尿NAG）、尿微量白蛋白（尿MAlb）对2型糖尿病早期肾损伤的诊断价值。方法2型糖尿病组60例,正常X,JN组30名,分别用速率法和免疫透射比浊法检测尿NAG、尿Malb。结果糖尿病组尿NAG20．14±13．3U／L、尿MAlb39．8±33．Img／L,对照组分别为5．34±1．2U／L、4．4±2．3mg／L,糖尿病高组于正常对照组3～9倍,,检验差别有高度统计意义（P〈0．01）;糖尿病组尿NAG阳性率88．3％、尿MA｜b81．6％,X^2检验差异无显著性（P〉0．05）;两两比较尿NAG、尿MAIb各自灵敏度100％、90．7％;特异性87．8％、100％;准确性均为94．4％。结论尿NAG、尿MAIb联合检测可提高糖尿病早期肾损伤诊断的敏感性与特异性。     

N-乙酰半胱氨酸拮抗6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用

背景：内源性6-羟基多巴胺能参与氧化应激,N-乙酰半胱氨酸能有效抗氧化和清除自由基。目的：探讨6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用及N-乙酰半胱氨酸对其的拮抗作用。方法：在体外培养SD大鼠骨髓基质细胞,取第3代骨髓基质细胞分别加入终浓度为0,0.05,0.1g/L的6-羟基多巴胺和终浓度为0,0.075,0.3,1.2,4.8g/L的N-乙酰半胱氨酸。结果与结论：MTT检测发现0.05和0.1g/L6-羟基多巴胺可以明显降低骨髓基质细胞的细胞活性,而加入6-羟基多巴胺的同时加入0.3g/LN-乙酰半胱氨酸可以显著抑制6-羟基多巴胺的毒性作用。提示抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以影响6-羟基多巴胺的作用。     

应用含标记基因K562细胞制备的小鼠白血病模型

背景:文献报道应用NOD/SCID及SCID小鼠可以建立移植性人白血病小鼠模型,但由于小鼠存在免疫缺陷,使得在自体干细胞移植及移植后相关过继免疫治疗方面的研究受到限制和影响.目的:探索用SPF级Balb/c小鼠和转染GFP及NeoR基因的K562细胞株制各自血病模型的方法.方法:实验分为5组,A、B组和C、D组分别经x射线照射2Gy和3Gy,24 h后取对数生长期的K562(GFP+/Neo+)细胞,A、C组尾静脉注射2×106个/只;B、D组尾静脉注射5×106个/只:E组为正常对照组.观察小鼠生存时间,进行骨髓细胞及外周血白细胞分类,采用流式细胞仪测定GFP阳性细胞及PCR方法测定Neo基因.结果与结论:实验各组在接种5-7 d时发病.分别于30,23,24,17 d内全部死亡;生存天均显著短于正常对照组(P<0.01).体质量均较正常对照组显著下降(P<0.05),小鼠的向血病发病率为100%,无自发缓解.随接种细胞数量的增加和照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中白血病细胞所占比例增加,流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP+细胞和NeoR基因在肝、脾中的存在.结果证实Balb/c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以制备抉得白血病小鼠模型.     

K562和K562/AO2细胞HLA Ⅰ类分子与MICA/B的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

本研究探讨K562亲本细胞株及多药耐药细胞株K562/AO2细胞表面HLA Ⅰ类分子和MHC Ⅰ类链相关分子(MICA/B)的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响.用流式细胞仪检测K562和K562/AO2细胞株HLAⅠ类分子和MICA/B的表达情况;LDH释放法测定3例健康人NK细胞在不同效靶比时对K562和K562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比101时,用抗HLA Ⅰ类分子单克隆抗体(W6/32)和抗MICA/B单克隆抗体(BAMO-1)分别封闭MHC Ⅰ类分子和MICA/B,观察NK细胞杀伤K562及K562/AO2细胞活性的变化.结果表明K562和K562/AO2细胞均不表达HLA Ⅰ类分子,K562细胞的MICA/B表达较K562/AO2显增高(P＜0.01).效靶比51、101、201、301时NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性分别为(29.32±0.12)%、(45.33±0.78)%、(58.37±0.87)%、(72.37±0.96)和(12.47±0.91)%、(24.36±1.11)%、(33.29±1.03)%、(53.87±1.27)%,各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较K562/AO2细胞明显增强(P=0.000);效靶比101时W6/32不抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性,BAMO-1能明显抑制NK细胞杀伤K562和K562/AO2细胞的活性.结论MICA/B在K562和K562/AO2细胞表达的差异与NK细胞的杀伤活性有关;NK细胞对K562/AO2细胞杀伤活性降低与HLA Ⅰ类分子无关;MICA/B在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降.     

血管内皮细胞生长因子对K562细胞Angiopoietin-2基因及MMP-9表达的影响

血管生成素（Angiopoietin，Ang）是新近克隆的与血管生成有关的一个家族。Ang-2是其家族的一个成员，Tie-2为其受体。有研究表明，血管内皮细胞生长因子（VEGF）在Ang-2诱导的肿瘤性血管生成中发挥重要作用。而瘤细胞侵袭转移能力与其诱导产生金属蛋白酶（metalloproteinase，MMP）降解细胞外基质（ECM）、基底膜的能力密切相关。