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1.
目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。 相似文献
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目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)calpain活性的影响。方法用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,用不同浓度的TOCP(0、0.25、0.5、1.0mM)染毒未分化或分化的SH-SY5Y细胞不同时间(12、24、48h),用20μM盐酸维拉帕米(verapamil)和100μM二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-APB)预处理细胞15min后染毒TOCP 1.0mM 48h,采用荧光分光光度法测calpain活性。结果随着染毒浓度和时间的增加,TOCP活化未分化与分化的SH-SY5Y细胞calpain活性(P0.05),钙通道抑制剂verapamil和2-APB预处理细胞能抑制TOCP引起的calpain活性升高(P0.05)。结论 TOCP通过SH-SY5Y细胞内钙紊乱而活化calpain活性。 相似文献
3.
《卫生研究》2017,(3)
目的探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(Na F)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-II与自噬降解相关蛋白P62的表达水平。结果透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少最为明显;Western blotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-II的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平。 相似文献
4.
锰化合物对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y脂质过氧化的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的 ]通过锰染毒神经母细胞瘤细胞 (SH SY5Y) ,观察脂质过氧化及其相关酶水平的改变 ,探讨锰对SH SY5Y的脂质过氧化及相关酶活性的影响 ,为进一步研究锰神经毒作用的机制提供科学依据。 [方法 ]采用浓度为 0 .2 5、0 .5 0、0 .75mmol/L的二价锰和三价锰 ,分别对体外培养的SH -SY5Y细胞染毒 2 4h ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和过氧化氢酶 (CAT)的活性。 [结果 ]二价锰和三价锰均可引起SOD、MDA、GSH、GSH Px和CAT活性的改变 ,其中SOD、GSH、GSH Px和CAT活性与对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,且存在剂量 效应关系。而MDA含量则较对照组升高 (P <0 .0 1) ,且随染毒浓度增高而上升。 [结论 ]一定浓度的锰化合物可使SH SY5Y细胞脂质过氧化反应增强 ,引起相关酶活性的改变。提示这种变化很可能是锰对神经细胞发挥毒作用的重要途径之一。 相似文献
5.
目的探讨不同浓度的骨化三醇(calcitriol,CAT)对AlCl3染毒的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法 11mmol/L AlCl3染毒SH-SY5Y细胞构建AD细胞模型,设立对照组、AlCl3组(11mmol/L)、CAT低、中、高剂量干预组(1.0×10-10、1.0×10-9、1.0×10-8mol/L CAT+11mmol/L AlCl3)。吉姆萨染色法观察CAT对AlCl3染毒的SH-SY5Y细胞的形态学改变;荧光染料Hoechst33258、AO/EB染色后于荧光显微镜下观察各组细胞核的变化。结果吉姆萨染色结果显示,AlCl3组细胞不规则,染色质皱缩,部分细胞核裂解;Hoechst33258染色结果表明,AlCl3组细胞染色质凝集,体积缩小;AO/EB染色结果可见,AlCl3组细胞染色质固缩并呈橘红色。与AlCl3 相似文献
6.
目的 建立母鸡迟发性神经病(OPIDN)模型,观察其病理改变及微管相关蛋白2(MAP2)的改变.方法 选取12月龄的产卵母鸡48只,随机分为对照组和3个三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)染毒组,每组12只.TOCP染毒组的动物经口一次性灌胃染毒,剂量分别为250、500、750 mg/kg,观察中毒症状,染毒后第21天处死动物,其中6只动物取脑、脊髓和坐骨神经,进行HE染色和髓鞘染色;另6只动物的脑组织匀浆后用免疫印迹(Western blot)法测定MAP2的蛋白表达.结果 500和750mg/kg剂量组动物出现不同程度共济失调症状,脊髓、坐骨神经出现神经胶质增生、髓鞘脱失及轴突变性.500和750 mg/kg剂量组MAP2蛋白表达明显升高,分别较对照组升高了25%和23%,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 TOCP引起各剂量组动物出现不同程度的OPIDN病理改变;TOCP可引起鸡神经组织中的MAP2含量发生改变,这种改变可能与TOCP引起的迟发性神经毒性有关. 相似文献
7.
目的观察氟对人脑神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y细胞)体外培养细胞活性氧水平和线粒体融合的影响。方法在SH-SY5Y细胞中加入0.4、4 mmol/L NaF,孵育6、12、24和48 h;利用MitoTracker和ROS荧光染色试剂盒对线粒体和氧自由基进行染色。结果NaF作用6、12、24、48 h时,与对照组比较,0.4、4 mmol/L氟处理组SH-SY5Y细胞内ROS染色强阳性细胞计数[分别为(15.1±1.4)、(12.8±2.5)、(22.6±2.4)、(30±3.1)和(32.5±1.9)、(38.1±2.2)、(69.3±3.1)、(84.3±3.5)个/100细胞]和Ⅱ型线粒体细胞计数[分别为(13±1.4)、(15±1.7)、(22.9±1.9)、(23.7±1.6)和(15.2±2.3)、(23.8±1.8)、(29.1±4)、(47.7±3.3)个/100细胞]明显升高(P<0.05)。结论摄入过量的氟导致SH-SY5Y细胞氧自由基水平升高,线粒体呈分裂状,呈时间和剂量效应关系。 相似文献
8.
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡的作用。方法将25、50、100nmol/L不同浓度的LBH589处理SH-SY5Y细胞24h后,通过WesternBlot法检测组蛋白H4乙酰化水平,进一步用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞增殖能力;用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡。结果 LBH589处理SH-SY5Y细胞后,组蛋白H4的乙酰化水平增强;LBH589呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,增加AnnexinV阳性细胞百分数。结论 LBH589可增强组蛋白H4乙酰化水平,对SH-SY5Y细胞具有抑制增殖、G1期阻滞以及促凋亡作用,对人神经母细胞瘤有潜在治疗价值。 相似文献
9.
目的 探讨铜、铁、锌、铝金属对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的氧化应激及β淀粉样蛋白(Aβ)沉积影响,为预防老年性痴呆提供依据。方法 采用不同剂量的铜、铁、锌、铝分别作用于SH-SY5Y细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长活性,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,硫代巴比妥酸法检测脂质过氧化产物丙二醛含量,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫(ELISA)试剂盒法测定细胞内Aβ1-42蛋白含量。结果 铜、铁、锌、铝呈剂量依赖性地抑制细胞活性,50、200、400 μmol/L CuSO4组SH-SY5Y细胞存活率分别为90.47%、74.81%、64.97%,1、2、4 mmol/L FeSO4、AlCl3组SH-SY5Y细胞存活率分别为93.08%、78.28%、56.10%和92.21%、85.30%、62.72%,50、100、200 μmol/L ZnSO4组SH-SY5Y细胞存活率分别为91.76%、76.51%、61.27%;与对照组比较,各剂量金属组SH-SY5Y细胞存活率均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,各剂量铜、铁、锌、铝组SH-SY5Y细胞抗氧化酶SOD、GSH-Px活性明显下降,ROS水平和丙二醛、Aβ1-42含量明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 铜、铁、锌、铝可致神经细胞毒性作用和Aβ蛋白沉积,其机制可能与金属诱导细胞内ROS产生并导致氧化损伤有关。 相似文献
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[目的] 探讨不同价态锰对SH-SY5Y细胞凋亡的作用.[方法] 采用流式细胞技术和透射电镜技术,选用多巴胺能神经细胞SH-SY5Y细胞作为体外测试体系,观察Mn2+和Mn3+(0.5~2 mmol/L)对细胞凋亡的诱导作用及对多巴胺(DA)含量的影响.[结果] Mn2+与细胞作用48和72 h后,可见明显的凋亡峰;而Mn3+作用24 h后,便可出现明显的凋亡峰.电镜下可观察到细胞质空泡化,胞浆内质网扩张;Mn3+对细胞结构的破坏程度较Mn2+的大.Mn3+,Mn2+均可降低SH-SY5Y细胞的DA含量,Mn3+组降低的程度更为明显.[结论] Mn3+对SH-SY5Y细胞的毒性高于Mn2+. 相似文献
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质粒介导的RNAi对神经母细胞瘤细胞Survivin基因表达的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建Survivin的短发夹RNA表达质粒并通过由其介导的RNA干扰来下调神经母细胞瘤细胞株SH—SY5Y细胞中Survivin的表达。方法针对人Survivin的mRNA序列设计合成两对寡核苷酸序列,退火后将其连入pBSHH1.对重组质粒pBSHH1—S1和pBSHH1-S2进行酶切和测序鉴定,然后将质粒转染SH-SY5Y细胞,运用RT—PCR和Western印迹检测Survivin基因的表达。结果酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pBSHH1,pBSHH1-S1和pBSHH1—S2转染SH—SYSY细胞后,Survivin基因的mRNA以及蛋白水平的表达量均受到明显抑制结论成功构建了人Survivin基因的短发夹RNA表达质粒,并在SH—SYSY细胞中验证了它们对Survivin基因的表达抑制作用,为神经母细胞瘤等肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。 相似文献
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Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。 相似文献
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目的 研究磷酸三邻甲苯酯(tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对母鸡神经组织线粒体膜通透性的影响,探讨有机磷诱导迟发性神经毒性的机制.方法 成年罗曼母鸡随机分为4组,每组24只,TOCP溶解于玉米油中,染毒组分别按185、375、750 mg/kg经灌胃一次性染毒,灌胃量为0.65 ml/kg,对照组给予等体积玉米油.分别于染毒后第1、5、15、21天处死动物,迅速剥离母鸡大脑、小脑、脊髓组织,分离其线粒体,测定线粒体膜通透性和跨膜电位的改变.结果 染毒组与对照组相比,大脑中线粒体膜通透性改变不明显;小脑375、750 mg/kg组在染毒第1、5天时通透性有明显增加(P<0.05);染毒第1天时3个染毒组脊髓中线粒体膜通透性均明显增加(P<0.05),染毒第5、15天时375、750mg/kg组膜通透性明显增加(P<0.05).各剂量组间及各时间点之间跨膜电位均未观察到明显改变.结论 TOCP能明显增加母鸡小脑及脊髓中线粒体膜通透性. 相似文献
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[目的]探讨环境毒素鱼藤酮对人多巴胺能神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位的影响以及线粒体ATP敏感性钾通道(MitochondrialATP-sensitivepotassiumchannel,mKATPchannel)在其中的作用。[方法]先用0、5、20、100nmol/L浓度的鱼藤酮单独处理SH-SY5Y细胞,观察鱼藤酮与线粒体膜电位下降的量效关系;然后在此4组中分别按加和不加mKATP通道抑制剂5-羟葵酸(5-Hydroxydecanoate,5-HD)0.5mmol/L和(或)激活剂二氮嗪(Diazoxide,DZX)1.0mmol/L与不同浓度鱼藤酮共同作用,观察细胞线粒体膜电位的变化。细胞线粒体膜电位的检测采用罗丹明绿色荧光负载、流式细胞仪测量荧光强度的方法。[结果]5、20和100nmol/L鱼藤酮作用24h分别导致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降至对照组的91.76%、71.21%和49.65%,膜电位下降程度与鱼藤酮剂量相关;DZX单独作用使线粒体膜电位下降了13.45%,DZX与5和20nmol/L鱼藤酮共同作用分别下降至对照组的75.32%和66.06%,比同浓度鱼藤酮单独作用更加明显;5-HD可抵消DZX的上述作用,5-HD与5nmol/L鱼藤酮共同作用时可减轻鱼藤酮引起的细胞膜电位下降。[结论]鱼藤酮可以引起SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降;小剂量鱼藤酮(5和20nmol/L)能开放mKATP通道,该作用可被5-HD逆转;与DZX相比,小剂量鱼藤酮只能激活某一类型的mKATP通道,这是它导致线粒体膜电位下降的机制之一。大剂量鱼藤酮降低线粒体膜电位的机制中mKATP通道的作用较小。 相似文献
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多溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响 总被引:6,自引:0,他引:6
目的观察2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株氧化应激和凋亡的影响及活性氧在细胞凋亡中的作用。方法实验共分4组,PDDE-47终浓度为0、2、4、8μg/ml,分别作为对照组,低、中、高剂量组。用2、4、8μg/ml PBDE-47对培养的SH-SY5Y细胞染毒,24 h后检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及凋亡率。结果与对照组比较,低剂量组细胞存活率略有上升,中、高剂量组细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P相似文献
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目的 研究氟化钠(NaF)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤及致凋亡作用,并初步探讨NaF致神经毒性的作用机制.方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞(1×107/ml),先加入0(对照)、20、40、80mg/L的NaF溶液对SH-SYSY细胞染毒24h;再选择40 mg/L的NaF溶液与380.40 mg/L的乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)溶液或38.23 mg/L的胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)溶液(提前30 min加入)联合染毒24h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和胞内钙离子([Ca2+]i)水平,并用激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)技术,从单个细胞水平检测NaF对胞内游离Ca2+瞬间动态变化的影响.结果 与对照组比较,40、80 mg/L NaF染毒组SH-SY5Y细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P<0.05);各NaF染毒组SH-SY5Y细胞的[Ca2+],水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).且随着NaF染毒浓度的升高,SH-SY5Y 细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率和[Ca2+]i水平均呈上升趋势.LSCM连续扫描显示,40和80 mg/L NaF染毒组SHSY5Y细胞[Ca2+]i的FI值达到峰值的时间分别为6 000~7 000 s和1 000-2 000 s,20 mg/L NaF染毒组未见明显的峰值;且NaF的浓度越高,[Ca2+]i达到峰值的时间越短.析因分析表明,胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高存在交互作用(F值分别为10.69、366.14,均P<0.05),BAPTA-AM可拮抗NaF对SH-SY5Y细胞的损伤作用;胞外钙离子螯合剂乙二醇双四乙酸(EGTA)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高无交互作用(F值分别为0.02、0.03,均P>0.05).结论 NaF对SH-SY5Y细胞的升钙作用可能参与了NaF的致细胞损伤和诱导凋亡作用,[Ca2+]i的升高可能与胞内钙库的释放有关. 相似文献