Survivin在腺样囊性癌细胞ACC-2以及ACC-M中的表达

目的：探讨Survivin在腺样囊性癌（ACC）细胞系中的表达情况及其表达与ACC远处转移的相关性。方法：培养人涎腺腺样囊性癌（ACC-2）和肺转移腺样囊性癌（ACC-M）细胞,观察其形态学特征,采用MTr法检测细胞的生长活性,并采用SP法检测细胞中Survivin的表达。结果：ACC-2和ACC-M细胞均表现有明显的上皮样和腺样细胞的特征。ACC-M细胞的生长活性高于ACC-2细胞,且Survivin在ACC-M细胞中的表达也强于ACC-2细胞。结论：Survivin与涎腺ACC肺部转移的发生具有高度相关性。     

NT-3对腺样囊性癌细胞系ACC—M体外侵袭能力的影响

目的:研究NT-3对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M体外侵袭能力的影响.方法:应用Transwell培养小室测定不同浓度NT-3对ACC-M细胞的体外侵袭能力的影响.结果: ACC-M细胞与2.5、5、10 ng/ml浓度的NT-3共培养20 h后侵袭细胞数均明显多于未加NT-3组;而与浓度为100 ng/ml的NT-3共培养20 h后侵袭细胞数却明显减少.结论:NT-3对ACC-M细胞系体外侵袭能力的影响存在浓度依赖性.一定浓度的NT-3能够增强ACC-M细胞系的体外侵袭能力.     

唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达

目的：探讨唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系。方法：甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC—M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH—1、MyoD1基因的甲基化：RT—PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测。结果：3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化：ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC—M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC—M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达。结论：ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MvoD1基因失活的主要机制．CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关．     

人工合成小干扰RNA抑制涎腺腺样囊性癌DNA甲基转移酶1的表达

目的通过筛选针对涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）DNA甲基转移酶1（DNA methyhransferase 1，DNMT-1）基因有效的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）序列和分析RNA干扰（RNA interference，RNAi）作用的时效、量效关系，为建立ACC稳定抑制DNMT-1的表达载体，深入了解DNMT在ACC抑癌基因甲基化过程中的作用。方法设计并人工合成4对siRNA，脂质体介导分别转染ACC细胞系ACC-2、ACC-3和ACC-M细胞，分别于转染后24、48和72h，采用PCR、RT-PCR和Western blot方法检测各细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达，筛选有效的siRNA干扰序列，同时设置siRNA不同浓度转染组，分析RNAi作用的量效关系。以Cy3标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶siRNA作为阳性对照组。结果2对siRNA对3株ACC细胞系细胞DNMT-1的mRNA表达产生了抑制作用，它们分别使ACC-2、ACC-3、ACC-M DNMT-1表达抑制67％、86％、92％和76％、76％、86％，抑制作用出现的时间为转染后24～48h，维持24～48h，与siRNA浓度成正比，Western blot检测符合mRNA的检测结果。结论得到了2对针对ACCDNMT-1基因有效的siRNA干扰序列。它们能显著抑制涎腺ACC细胞系DNMT-1的mRNA和蛋白表达，该抑制作用具有时间依赖性和浓度相关性。     

涎腺腺样囊性癌细胞系中DNA甲基化研究

目的探讨涎腺腺样囊性癌（adenoidcysticcarcinoma，ACC）细胞系中抑癌基因甲基化状况及其与mRNA、蛋白表达之间的关系。方法甲基化特异性PCR法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中E-钙黏着蛋白（E-cadherin，E-cad）、p16、RASSFlA、DAPK、MGMT基因启动子区的甲基化状况。应用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测E-cad、p16在mRNA和蛋白水平的表达。结果3个ACC细胞系中均检测到E-cad、p16基因的甲基化，而没有RASSFlA、DAPK、MGMT基因的甲基化；mRNA和蛋白水平均未检测到E-cad的表达，均检测到p16的表达。结论ACC细胞系中，E-cad、p16基因启动子区的甲基化是常见事件，甲基化可能是E-cad基因失活的主要机制之一。     

BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株抗失巢凋亡能力和转移的影响

目的：观察脑源性神经营养因子（BDNF）对唾液腺腺样囊性癌细胞系抗失巢凋亡能力和转移的影响，揭示BDNF与唾液腺腺样囊性癌高转移特性的关系。方法：以唾液腺腺样囊性癌（SACC）高、低转移细胞系ACC-2和ACC—M为研究对象，利用MTT、悬浮培养、流式细胞仪、软琼脂克隆形成实验观察BDNF对SACC细胞系体外培养过程中增殖和抗失巢凋亡的影响。以SPSS10．0软件对实验结果进行配对t检验。结果：ACC-2和ACC—M在体外培养过程中均具有一定的抗失巢凋亡能力，且ACC—M高于ACC-2（P〈0．01）。25、50、100ng/mlBDNF对ACC-2和ACC—M增值均无显著影响（P〉0．05）。50ng／ml BDNF可以显著提高ACC-2的抗失巢凋亡能力（P〈0．01）和克隆形成（P〈0．01）。结论：SACC的转移特性与抗失巢凋亡能力相关，适合浓度的BDNF可以提高SACC的抗失巢凋亡能力。     

神经营养素-3对腺样囊性癌细胞体外迁移能力的影响

目的研究神经营养素-3对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M体外迁移能力的影响.方法应用Transwell培养小室测定不同浓度NT-3对ACC-M细胞的体外迁移能力的影响.结果 ACC-M细胞与2.5,5,10 ng/ml的NT-3共培养10 h后迁移细胞数均明显多于未加NT-3组;而与浓度为100 ng/ml的NT-3共培养10 h后迁移细胞数却明显少于未加NT-3组.结论 NT-3对ACC-M细胞体外迁移能力的影响存在浓度依赖性.一定浓度的NT-3能够增强ACC-M细胞的体外迁移能力.     

力学刺激对人腺样囊性癌高低转移细胞株中E-cad/cat复合体的影响

目的观察周期性双轴力学应变对人腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M、低转移细胞株ACC- 2中E- cad和α、β、γ- cat的表达以及ACC细胞与细胞外基质（ECM）粘附的影响。方法采用成组设计,分别选取频率为每分钟3次的1 000、4 000 μ应变对ACC- 2、ACC-M细胞分别加载,每天定点加载1次,每组加载时间分别为每次1 h、3 h和6 h,共加载2次。第3天上午8点收获细胞;将未受力学刺激的细胞作为对照组,受力学刺激的细胞作为实验组。细胞在力学刺激后行E- cad和α、β、γ- cat及细胞核双重免疫荧光染色,用激光共聚焦显微镜和图像分析软件进行定量和定位观察。用MTT法测定ACC细胞和ECM的粘附率。结果对照组除ACC- 2细胞E- cad低于ACC-M细胞外,ACC- 2细胞α、β、γ- cat表达均高于ACC-M细胞;在力学刺激下,E- cad和α、β、γ- cat的表达随时间而变化。对照组ACC- 2细胞和ECM的粘附率高于ACC-M细胞,但在力学刺激后,与对照组比较,ACC细胞和ECM的粘附率随时间而变化。结论在力学刺激后,ACC- 2、ACC-M细胞出现E- cad/cat复合体表达的改变,同时其和ECM的粘附率也发生了改变,显示力学刺激后细胞粘附发生变化在肿瘤转移中发挥重要作用。     

力学刺激对人腺样囊性癌高低转移细胞系增殖的影响

目的:比较不同大小的力对腺样囊性癌高低转移细胞系增殖的影响。方法:通过体外培养腺样囊性癌高低转移细胞系ACC-2,ACC-M,建立双轴力学刺激细胞模型,用不同大小力刺激,用流式细胞仪检测ACC-2,ACC-M增殖变化。结果:不同大小的力及作用时间对ACC细胞增殖活性的影响具有统计学意义,并且这种影响还具有随时间延续而变化的特性。结论:力对细胞增殖有影响并与力大小和作用时间相关。     

PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭特性的影响。方法　用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照(M3SP2 -pBp细胞 ) ,分别用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、细胞迁移试验及细胞侵袭试验测定M3SP2 -PTEN细胞和M3SP2 -pBp细胞体外黏附、迁移和侵袭能力。结果　M3SP2 -PTEN细胞在Metrigel和Fn基质上黏附数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,黏附抑制率分别为 34 3%和 4 9 4 %。M3SP2 -PTEN细胞在Matrigel基质上迁移距离小 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,迁移抑制率为 2 6 0 %。M3SP2 -PTEN细胞体外侵袭细胞数量减少 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,侵袭抑制率为 31 4 %。结论　外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭具有抑制作用。     

不同烤瓷合金材料诱导细胞DNA损伤与细胞凋亡的研究

目的研究不同牙科烤瓷合金材料诱导细胞DNA损伤与细胞凋亡的情况,评价各种烤瓷合金材料的生物相容性。方法选择镍铬合金、钛合金、钴铬合金和金合金四种牙科烤瓷合金材料,制备四种合金材料的浸提液,用浸提液培养L929细胞24h。分别采用单细胞凝胶电泳(彗星试验)和流式细胞技术检测细胞DNA损伤与细胞凋亡的情况。结果镍铬合金、钛合金、钴铬合金可诱导不同程度的细胞DNA损伤和细胞凋亡(P<0.05),而金合金与对照组间无统计学差异(P>0.05)。结论不同烤瓷合金材料诱导细胞DNA损伤和细胞凋亡的情况存在差异性。金合金是种生物相容性优越的牙科烤瓷合金材料。     

3种齿科合金材料浸提液对L929细胞Bcl-2表达影响的研究

目的①在齿科合金浸提液中培养L929细胞检测细胞凋亡相关基因Bcl-2的表达情况;②利用免疫组化的方法从蛋白水平研究生物材料对机体的影响。方法分别提取无镍奥氏体不锈钢、317L不锈钢、金合金的浸提液为L929细胞接种培养,并分别检测在接种后48、72、96 h Bcl-2、Bax表达的程度。结果各实验组在上述时间点,各组细胞的凋亡情况差异有显著性(P<0.01)。Bcl-2的荧光表达程度由强到弱:阴性对照组>金合金组>BIOSSN4含氮无镍奥氏体不锈钢组>317L不锈钢组;Bax的表达强度由强到弱:317L不锈钢组>BIOSSN4含氮无镍奥氏体不锈钢组>金合金组>阴性对照组。结论不同齿科合金的浸提液引起的L929细胞的凋亡程度不同。金合金的生物相容性最好,BIOSSN4含氮无镍奥氏体不锈钢次之,317L不锈钢最差。     

壳核型n-HA／ZrO2支架材料对L929细胞增殖活性的影响

目的研究核壳型纳米羟基磷灰石包覆二氧化锆（壳核型n-HA／ZrO2）复合生物陶瓷支架材料对L929细胞增殖活性的影响及细胞毒性反应。方法将L929细胞接种于96孔板,随机分为3组进行培养,实验组用壳核型n-HA／ZrO2支架材料浸提液处理,阳性对照组用苯酚溶液,阴性对照组用聚乙烯浸提液,于24、48、72h后观察细胞生长形态,通过MTT比色法检测各组细胞的相对增殖率（relative growth rate,RGR）,按GB／T16175-1996标准评价材料的细胞毒性。结果实验组L929细胞24、48、72h后的RGR随时间延长而升高,分别为95.86％、98.29％和102.73％,与阴性对照组L929细胞在增殖活性方面的差异无统计学意义,两组受试材料细胞毒性评级为0-I级。结论核壳型n-HA／ZrO2支架材料不影响L929细胞的增殖活性,无细胞毒性。     

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目的 研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid,GAA）对体外培养的人腺样囊性癌ACC-M细胞增殖及E-cadherin基因mRNA表达的影响,初步探讨GAA的抗肿瘤作用机制。方法 本研究于2013年4—7月在昆明医科大学附属口腔医院（云南省高校口腔医学重点实验室）完成。（1）应用四唑盐比色（MTT）法观察GAA对ACC-M细胞生长的作用。（2）应用实时荧光定量（RFQ-PCR）法检测ACC-M细胞在GAA作用48、72 h后E-cadherin 基因mRNA的表达变化。结果 （1）MTT法检测显示：GAA作用ACC-M细胞24、48和72 h后,细胞的生长受到抑制。（2）RFQ-PCR法检测显示：分别以19、10 μmol/L的GAA作用ACC-M细胞48 、72 h 后,细胞中E-cadherin mRNA的表达水平高于对照组（P＜0.05）。结论 GAA能抑制ACC-M细胞生长,增强E-cadherin基因mRNA表达。     

金属蛋白酶及其组织抑制剂在涎腺腺样囊性癌细胞株表达的 …

为了研究金属蛋白酶（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＭＰ）及其组织抑制剂（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＴＩＭＰ）对涎腺腺样囊性癌细胞（ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＣＣ）转移的影响，本研究应用斑点印迹杂交的分子生物学方法检测ＡＣＣ－２细胞系及高转移细胞株ＡＣＣ－Ｍ中ＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９和ＴＩＭＰ－２的表达，结果显示，ＭＭＰ－２，Ｍ     

XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移中的作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原家族中XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌高转移细胞ACC—M中的高表达是否与其转移相关。方法：采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌低、高转移细胞ACC-2、ACC—M中XAGE—1b基因的表达，检测该基因表达改变对肿瘤细胞体外迁移能力以及裸鼠体内肿瘤细胞肺转移能力的影响。实验结果采用SPSS11．5软件包进行单因素方差分析。结果：XAGE—1b基因干扰质粒转染腺样囊性癌细胞后，RT—PCR验证干扰效率显示．XAGE—1b基因表达量显著下降；Boyden小室检测肿瘤细胞体外迁移能力明显下降；在裸鼠体内检测基因干扰后的肿瘤细胞肺转移能力与ACC—M相比也显著下降（P〈0．01）。结论：RNA干扰作用抑制了XAGE—1b基因的表达，体外实验和体内检测中显著影响了肿瘤细胞的迁移黏附以及肺转移能力，初步证实了XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移方面有重要作用。     

P物质、血管活性肠肽在OLP血清中的表达

目的：检测P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）在口腔扁平苔藓（OLP）血清中的表达,并探讨SP、VIP与OLP的关系。方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测40例OLP和正常人血清中SP、VIP的含量。结果：SP在OLP患者血清中的含量高于正常人血清中含量（P〈0．05）,VIP在OLP患者血清中的含量与正常人血清中的含量无差异（P〉0．05）。结论：SP在OLP的发生发展中可能参与了淋巴细胞的浸润及增殖,并参与了OLP慢性炎症机制。     

Livin、caspase-3在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：探讨凋亡蛋白抑制因子livin和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-3在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达和意义,并分析livin与caspase-3介导的细胞凋亡的关系。方法：利用免疫组织化学SP法检测livin与caspase-3在35例唾液腺腺样囊性癌组织和10例正常唾液腺组织中的表达情况。采用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统测定其平均光密度值。应用SPSS11.5软件包对结果进行统计学分析。结果：Livin在腺样囊性癌中的表达显著高于正常唾液腺组织,而caspase-3在正常唾液腺组织的表达显著高于腺样囊性癌（P〈0.01）;其表达与肿瘤的病理学类型、临床分期和转移显著相关（P〈0.05）,与患者的性别、发病年龄、肿瘤的部位和大小无关（P〈0.05）;Livin和caspase-3在腺样囊性癌中的表达呈显著负相关。结论：Livin和caspase-3的异常表达,可能在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展及转移中发挥重要作用。     

MicroRNA-320a调控唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨microRNA-320a（miR-320a）对唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移能力的调控作用。方法：以唾液腺腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M为实验样品,通过脂质体介导,将miR-320a的拟似物（miR-320a mimics）转染至ACC-M细胞,升高miR-320a的表达水平。采用荧光实时定量RT-PCR检测转染前、后ACC-M中miR-320a的表达变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变,并通过细胞计数试剂盒-8检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测miR-320a对细胞凋亡的影响,Western印迹检测miR-320a的靶基因整合素β3（integrinβ3,ITGB3）的表达变化。应用SPSS13.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。结果：转染miR-320amimics后的ACC-M中miR-320a的表达明显上调（P〈0.001）。ACC-M细胞的侵袭迁移能力显著降低（P〈0.001）,而细胞的增殖和凋亡无显著变化。Western印迹检测结果显示,Integrinβ3在低转移细胞株ACC-2表达阴性,在ACC-M中高表达;升高miR-320a在ACC-M中的表达,Integrinβ3表达明显降低。结论：低表达miR-320a有助于维持ACC的侵袭转移特性,调高其表达水平能有效抑制ACC-M的侵袭迁移能力。miR-320a可能通过调控其靶基因Integrinβ3的表达而发挥作用。     

TGF-β1在口腔颌面部恶性肿瘤中的表达

目的 探讨转化生长因子β1（TGF－β1）在人口腔颌面部恶性肿瘤细胞中的表达水平与其生物学行为的关系。方法 以ELISA法分别检测人口腔颌面部手术切除恶性肿瘤组织细胞，人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113，人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC－2和人高转移性涎腺腺样囊性癌细胞系ACC－M，及正常口腔黏膜与黏膜下组织细胞各样本的TGF－β1的表达水平。结果 口腔合面部恶性肿瘤组织TGF－β1的表达水平与正常对照组有非常显著差异（P＜0．01）。Tca8113,ACC-2细胞TGF－β1的表达水平增高正常对照组细胞（P＜0．05）；舌鳞癌系Tca8113与腺要囊性癌细胞系ACC－2的TGF－β1的表达水平无显著差异；高转移腺样囊性癌细胞系ACC－M的TGF－β1的表达水平与ACC－2相比，有非常显著的降低（P＜0．01）；高转移腺样囊性癌细胞系ACC－M无血清培养液中TGF－β1的分泌量亦低于任何其它细胞。结论 TGF－β1的表达水平可能与恶性肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移有密切关系。