左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响

目的?探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响及其作用机制。方法?将巨噬细胞J774A.1随机分为正常组、模型组、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组5个复孔。除正常组外其余各组以ox-LDL（100?mg/L）处理构建巨噬细胞泡沫化模型。正常组和模型组正常培养,其余各组分别用10%相应含药血浆培养24?h。CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞抑制率;油红O染色检测细胞内脂质蓄积水平;Western blot检测双链RNA样内质网激酶（PEPK）、活化转录因子4（ATF4）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）及半胱氨酸蛋白酶蛋白-12（Caspase-12）的表达水平。结果?与正常组比较,模型组细胞抑制率增高,在ox-LDL浓度为100?mg/L时细胞抑制率为（50.06±0.09）%,有明显的脂质颗粒蓄积（P<0.01）。与模型组比较,各药物干预组细胞抑制率降低,可有效阻断ox-LDL的摄入及脂质堆积,其中左归降糖舒心方含药血浆组优于西药联合含药血浆组,与TUDCA组作用效应相当。ox-LDL可诱导细胞内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP与Caspase-12表达上调。左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制100?mg/L ox-LDL所致的p-PERK、p-eIF2α、ATF4的上调,降低内质网相关凋亡蛋白CHOP与Caspase-12的表达（P<0.01）,和TUDCA组作用相当(P＞0.05),其效果较西药联合含药血浆组明显（P<0.01）。结论?左归降糖舒心方含药血浆能有效改善ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化、细胞凋亡及内质网应激状态,其作用机制可能与调控内质网应激信号通路PERK/eIF2α/ATF4通路,降低细胞内CHOP与Caspase-12表达有关。      

脑泰方含药血清对缺氧缺糖/复氧PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨脑泰方含药血清通过内质网应激相关通路调控缺氧缺糖/复氧PC12细胞凋亡,从而阐明脑泰方对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 将PC12细胞分为正常组（常规培养）、模型组（OGD/R）、抑制剂（4-PBA）组及脑泰方低浓度（10%）、中浓度（15%）、高浓度（20%）组。CCK8法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）试剂盒检测LDH活性;Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化;Tunel染色检测细胞凋亡率;免疫荧光法和Western blot检测细胞Beclin-1、LC3、GRP78、CHOP、PERK蛋白表达情况。结果 模型组LDH活性增加,细胞凋亡率增加,细胞存活率下降（P<0.01）,GRP78、PERK、CHOP、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达明显增加,LC3Ⅰ蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,抑制剂（4-PBA）组、脑泰方中浓度组、脑泰方高浓度组LDH活性降低,细胞凋亡率减少,细胞存活率明显增加（P<0.05,P<0.01）,GRP78、PERK、C...     

加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞表达VEGF的影响

目的 探讨加减驻景方含药血清对AKT基因转染后人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）细胞表达VEGF的影响。方法 制备SD大鼠加减驻景方含药血清及空白血清,建立AKT基因转染ARPE-19细胞模型,体外培养,分为5个组,正常组为ARPE-19细胞常规培养,转染模型组（模型细胞,常规条件培养）,含药血清组（模型细胞,给予含药血清干预培养）、空白血清组（模型细胞,给予空白血清干预培养）和阳性对照组（模型细胞,给予康柏西普干预培养）。设立不同时间和不同浓度,通过CCK-8法检测各组血清及阳性组药物对细胞毒性、增殖的影响;通过ELISA检测各组细胞上清液中VEGF的表达。结果 蛋白质印迹法（Western blot）显示,转染模型组与正常组比较,AKT蛋白的表达量明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。CCK-8示,细胞培养24、48h后,AKT基因转染可促进ARPE-19细胞增殖（P<0.05）,培养72h后,对细胞增殖影响不大（P > 0.05）。10、20μg/ml康柏西普及5%、10%的含药血清对模型细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,各浓度空白血清组对模型细胞组的增殖影响不大（P > 0.05）。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测显示：转染模型组细胞上清液中VEGF表达量高于正常组（P<0.05）,康柏西普组与含药血清组均显著低于模型组（P<0.05）,其中康柏西普组低于含药血清组,差异有统计学意义（P<0.05）。空白血清组与模型组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 AKT基因转染后可诱导ARPE-19细胞的增殖,促进VEGF的表达。加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞的增殖及VEGF的表达有抑制作用。加减驻景方可能通过抑制VEGF的过度表达发挥干预CNV生成的作用。     

独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞PERK/Bip通路关键调控蛋白的影响

目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测退变软骨细胞中PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达变化。结果随着干预时间的延长,空白血清组和含药血清组PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达均逐渐降低,含药血清组降低更明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,抑制软骨细胞凋亡,从而起到治疗膝骨关节炎的作用。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

益气通络方含药血清通过减弱氧化应激反应和激活PI3K/AKT信号通路对PC12细胞氧化应激损伤模型的保护作用

目的 研究益气通络方含药血清对过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法 (1)选取SPF级健康SD雌性大鼠20只,随机分为空白组及益气通络方组。分别使用生理盐水及益气通络方灌胃7 d,后腹主动脉取血离心制备空白血清及含药血清。(2)体外培养PC12细胞,随机分为正常组、模型组、空白血清组、益气通络方含药血清组、PI3K抑制剂组、益气通络方含药血清+PI3K抑制剂组。除正常组外,H2O2体外诱导构建PC12细胞氧化应激损伤模型。试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p-PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 选择600μmol/L H2O2刺激4 h作为氧化损伤造模条件。(1)与正常组相比,模型组LDH、MDA含量增高（P<0.01）,SOD活力降低（P<0.01）,ROS细胞内分布增加。与模型组相比,益气通络方含药血清组LDH、MDA含量降低（P<0.05）,SOD活力增高（P<0.01）,R...     

肝宁方对衣霉素诱导肝细胞内质网应激生存信号分子的影响

目的 研究肝宁方对衣霉素诱导的人肝细胞内质网应激条件下的生存信号分子的影响。方法 将肝细胞分正常组、模型组、治疗组：正常组给予正常大鼠血清培养基培养48h,模型组在正常组基础上给予衣霉素诱导48h,治疗组在模型组基础上给予肝宁方继续培养24h。Western blot法检测各组蛋白ATF6、IRE1α、PERK、GRP78的表达量,分析蛋白表达差异。结果 肝宁方治疗组与衣霉素诱导模型组比较,治疗组内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显减少（P<0.05）;模型组与对照组比较,模型组GRP78、内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显增多（P<0.05）。结论 衣霉素诱导正常肝细胞后可激活ATF6、IRE1α、PERK及GRP78蛋白的表达,肝宁方对衣霉素诱导内质网应激生存信号分子蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达及内质网应激标记蛋白均有抑制作用,从而达到阻止未折叠蛋白的错误激活、抑制肝细胞凋亡,对肝细胞具有保护作用。     

涤痰活血舒痹汤上调microRNA-148a表达减轻心肌缺血再灌注损伤的分子机制研究

目的 探究涤痰活血舒痹汤（DHS）与microRNA-148a(miR-148a)的调控关系以及其在心肌缺血再灌注损伤中的分子作用机制。方法 将H9c2细胞培养后分为对照组、缺氧/复氧（H/R）组、H/R+空白血清组、H/R+DHS含药血清组、H/R+DHS含药血清+miR-148a拮抗剂组、H/R+DHS含药血清+OE-NC组和H/R+DHS含药血清+硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）过表达质粒组。采用CCK-8检测H9c2细胞增殖,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡,Western blot检测H9c2细胞凋亡和自噬相关蛋白及靶蛋白TXNIP的表达,qRT-PCR检测miR-148a的表达。结果 与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力下降[（69.72±8.80）%比（97.75±5.58）%,P<0.01]、细胞凋亡和自噬水平上升。与H/R+空白血清组比较,H/R+DHS含药血清组miR-148a表达上调[（2.45±0.39）比（1.04±0.25）,P<0.01],H9c2细胞活力增加[（135.98±10.45）%比（97.75±7.94）%,P<0.01]...     

强骨抗萎膏通过调控MFN2及抑制内质网应激改善失重状态下大鼠骨丢失

目的 观察强骨抗萎膏对尾吊大鼠骨细胞凋亡和内质网应激的影响,探讨强骨抗萎膏防治模拟失重状态下骨丢失的机制。方法 60只SD大鼠分为对照组、模拟失重组、强骨抗萎膏组、阿仑膦酸钠组,骨疏康颗粒组,每组12只。采用尾部悬吊模拟失重状态,尾吊28 d;对照组和模拟失重组给予每日等体积生理盐水灌胃,其它3组复制模型,分别每日给予中药强骨抗萎膏2.4 g/kg,阿仑膦酸钠0.007 g/kg,骨疏康颗粒0.26 g/kg灌胃。持续给药4周后处死大鼠,TUNEL法检测骨细胞凋亡情况;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和线粒体融合蛋白2(MFN2)表达,RT-PCR和Western blot检测骨组织中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的基因和蛋白表达。结果 TUNEL结果显示模拟失重组骨细胞凋亡较对照组增加,强骨抗萎膏可抑制骨细胞凋亡。与对照组大鼠比较,模拟失重组PERK基因表达量明显增高(P<0.05),强骨抗萎膏组较模拟失重组PERK基因表达量下降(P<0.05);与对照组比较,模拟失重组的GRP78、PERK、CHOP和ATF6蛋白含量明显增高(P<0.05),MFN2蛋白表达降低(P<0.05),强骨抗萎膏组较模拟失重组GRP78、PERK、CHOP和ATF6蛋白含量均明显降低(P<0.05),MFN2表达量升高。结论 强骨抗萎膏可以改善模拟失重大鼠骨细胞凋亡,通过抑制骨组织内质网应激相关因子GRP78、PERK、ATF6 和CHOP,上调MFN2表达,从而改善失重条件下的骨丢失。     

内质网应激诱导慢性间歇低氧幼鼠认知相关的脑损害

目的 探讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠脑损害的机制。方法 取SPF级健康雄性SD幼鼠32只,随机分为4组：间歇低氧（IH）2、4周组（2IH,4IH组）,对照2、4周组（2C,4C组）,每组8只。采用八臂迷宫测试各组幼鼠工作记忆错误（WME）、参考记忆错误（RME）、总错误数（TE）,观察海马神经元凋亡变化,测定免疫球蛋白结合蛋白（BiP）、转录激活因子4（ATF4）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和磷酸化RNA激活蛋白激酶的内质网类似激酶（p-PERK）的表达水平。结果 慢性间歇低氧导致幼鼠学习记忆能力下降,与2周组比较,4周组明显（WME：3.38±0.52 vs 2.12±0.84;RME：4.25±0.71 vs 3.00±0.93;TE：7.62±0.74 vs 5.12±0.64,P均<0.01）;IH组海马神经元发生凋亡,4周组最明显（20.78%±2.63% vs 14.94%±1.59%,P<0.01）。IH组幼鼠海马BiP、ATF4和CHOP mRNA表达均增加,4IH组ATF4、CHOP mRNA表达显著升高（ATF4：3.50±0.24 vs 1.92±0.13,P<0.01;CHOP：3.09±0.22 vs 1.95±0.18,P<0.01）。2IH、4IH组p-PERK、CHOP蛋白表达上调,4IH组表达明显升高（p-PERK 3.72±0.21 vs 1.85±0.07,P<0.01;CHOP：4.29±0.27 vs 2.69±0.11,P<0.01）。结论 慢性间歇低氧可上调记忆相关脑区BiP、CHOP、ATF4 mRNA和p-PERK、CHOP蛋白的表达,表明内质网应激诱导慢性间歇低氧幼鼠认知相关的脑损害;PERK/ATF4/CHOP信号通路可能是内质网应激的分子机制。     

绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞中p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达的抑制作用

目的：观察绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白和Jun基因（c-Jun ）mRNA表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷含药血清抗皮肤光老化的作用机制。方法：采用中波紫外线(UVB)照射建立光老化HaCaT细胞模型,加低、中、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清于光老化HaCaT细胞模型培养液中培养,并设空白对照组、空白血清组和UVB模型组。采用Western blotting和RT-PCR方法检测各组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA的表达水平。结果：与空白对照组比较,UVB模型组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与UVB模型组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与空白血清组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达下降(P<0.01)。结论：绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达抑制皮肤光老化。     

中药更年春含药血清对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的：研究大鼠更年春含药血清对β淀粉样蛋白25-35（amyloid beta protein 25-35,Aβ_（25-35））导致的大鼠肾嗜铬细胞瘤细胞（pheochromocytoma cell,PC12）损伤的抗凋亡作用。方法：通过对去势雌性大鼠灌服中药更年春制备含药血清,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同浓度含药血清对PC12细胞存活率的影响;不同浓度Aβ_（25-35）作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病细胞模型,CCK-8法检测含药血清对损伤细胞的保护作用,流式细胞术检测PC12细胞在Aβ_（25-35）和含药血清共同培养下的细胞凋亡率;蛋白印迹法检测各组细胞Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达情况。结果：与空白血清相比,20%含药血清培养PC12细胞24 h或48 h后可促进其增殖（P〈0.05）。Aβ_（25-35）对PC12细胞有细胞毒性,并呈剂量依赖性地降低细胞存活率（P〈0.05）,导致细胞凋亡。CCK-8法和流式细胞术检测均显示,20%更年春含药血清对Aβ_（25-35）诱导的PC12细胞损伤有保护作用（P〈0.05）,其作用效果类似于阳性对照药神经生长因子。蛋白印迹法检测显示,与模型组比较,含药血清组Bax和Bcl-2蛋白表达的比值和caspase-3蛋白表达均降低。结论：更年春含药血清可提高Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率,并减少PC12细胞凋亡。其机制可能与调控Bcl-2家族蛋白的表达而实现抗凋亡作用有关。     

护肝清脂片药物血清对非酒精性脂肪肝细胞模型内质网应激的影响

目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激（ER stress）的影响及其 可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸（FFA）混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变 性,建立NAFLD体外模型,将HepG2细胞分为对照组（CON）、FFA组、护肝清脂片低剂量组（HG-L）、护肝清脂片中剂量组（HGM） 、护肝清脂片高剂量组（HG-H）及非诺贝特阳性对照组（FF）,在加入1 mmol/L FFA前分别加入各组对应的药物血清作用 24 h,CON组及FFA组则加入大鼠空白血清作为对照。油红O染色观察细胞内脂滴分布;试剂盒检测细胞内甘油三酯（TG）含 量及培养上清液谷草转氨酶（AST/GOT）、谷丙转氨酶（ALT/GPT）的水平;透射电镜观察细胞内质网形态结构的改变;Western blot、qRT-PCR技术检测ERS相关信号分子GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、ATF4、XBP-1、CASPASE-12、CHOP、PKC-δ、p-PKC-δ 蛋白及（或）mRNA的表达情况。利用siRNA 瞬时转染技术沉默PKC-δ在HepG2细胞中的表达后观察GRP78、PERK、p-PERK、 CASPASE-12和CHOP蛋白表达变化。结果与CON组相比,FF组HepG2细胞油红染色可见红色脂滴密布细胞质,TG、AST、 ALT含量升高（P<0.001）;与FF组相比,HG-L、HG-M、HG-H及FF均在不同程度上降低TG、AST、ALT含量,减少细胞内脂滴堆 积,差异有统计学意义（P<0.05）,并能够在蛋白及mRNA水平上有效地下调ERS相关信号分子GRP78、p-PERK、ATF6、ATF4、 CHOP、CASPASE-12、XBP-1、PKC-δ、p-PKC-δ的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。在1 mmol/L FFA共同作用下,PKC-δ siRNA转染组GRP78、p-PERK、CHOP、CASPASE-12蛋白表达均较对照组明显下调,差异具有统计学意义（P<0.001）。然而,与 PKC-δ siRNA +FFA组相比,PKC-δ siRNA+HG-H组GRP78 和P-PERK表达下调更显著（P<0.001,0.01）,CHOP和CASPASE- 12则无统计学差异（P>0.05）。结论护肝清脂片药物血清可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性,改善 HepG2功能状态,有效地缓解1 mmol/L游离脂肪酸所致的内质网应激,其作用机制在一定程度上与下调PKC-δ表达有关。     

加减驻景方含药血清对二氯化钴诱导的ARPE-19细胞增殖的影响

目的 探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴（CoCl2）诱导的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）增殖及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法 体外培养ARPE-19细胞,分为正常组、缺氧模型组、缺氧后药物干预组,并设立不同浓度及时间组.CCK-8法检测CoCl2组、缺氧后药物干预各组ARPE-19细胞增殖的影响.酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞中VEGF表达的影响.结果 1、CoCl2组（100、200μmol/L）可促进细胞的增值、400 μmol/L的CoCl2组细胞呈现抑制状态,均与正常组比较,差别具有统计学意义（P＜0.05）.2、缺氧模型组与正常组比较细胞的增值及VEGF的表达高于正常组,差别具有统计学意义（P＜0.05）;缺氧后药物干预组（除空白血清组、5％加减驻景方、5μg/mL康柏西普）与模型组比较,细胞的增值及VEGF的表达低于模型组,差别具有统计学意义（P＜0.05）.结论 1、缺氧损伤后ARPE-19细胞的增殖和VEGF的表达增强;2、加减驻景方含药血清、康柏西普可抑制缺氧损伤后ARPE-19细胞的增殖及VEGF的表达;3、加减驻景方可能是通过改善循环,改善缺血缺氧状态,抑制了细胞因子的分泌,达到治疗脉络膜新生血管的目的.     

G1对EA.hy926内皮细胞内质网应激的抑制作用

【摘要】目的：观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的eahy926内皮细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）的影响。方法：选用eahy926内皮细胞为研究对象,分为3组：正常对照组（Con,17.51mmol/L）、高糖组（HG,33.3mmol/L）、高糖 G1组（HG G1,HG 1umol/L G1）,利用流式细胞术检测三组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测BIP和CHOP的mRNA表达变化。结果：HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达上调（P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达下调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达上调（P<0.01）,HG G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达下调（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达上调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达下调（P<0.01）。结论：GPR30受体激动剂G1可抑制eahy926内皮细胞内质网应激。     

益气化痰散瘀方含药血清对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的观察益气化痰散瘀方含药血清对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的影响,并探讨其机制是否通过线粒体途径。方法制备益气化痰散瘀方含药血清和空白血清。组织贴块法培养大鼠PASMCs并进行a-SMA细胞免疫荧光鉴定。MTT法筛选最佳含药血清及最佳低氧时间:常氧对照组,低氧模型组,5%含药血清、10%含药血清、20%含药血清组(含药血清用空白血清稀释),分别作用12、24、48 h。正式实验根据MTT结果分为常氧对照组、低氧模型组、最佳含药血清组,含药血清作用最佳低氧时间后,TUNEL-FITC/DAPI法检测各组PASMCs凋亡情况,Western Blot法检测各组casepase-9、casepase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 MTT结果显示益气化痰散瘀方含药血清浓度为20%、低氧作用24 h时抑制作用最强,效果最佳。TUNEL-FITC/DAPI法显示与低氧模型组比较,益气化痰散瘀方含药血清可明显促进低氧条件下大鼠PASMCs的凋亡(P0.01);Western Blot法显示益气化痰散瘀方含药血清可升高低氧大鼠PASMCs的casepase-9、casepase-3和Bax蛋白表达(P0.05,P0.01),降低Bcl-2蛋白表达(P0.01)。结论益气化痰散瘀方含药血清可能通过线粒体途径诱导低氧大鼠PASMCs凋亡。     

电针大脑中动脉闭塞模型大鼠血清减轻体外神经细胞的缺糖缺氧损伤

摘要：目的：观察电针血清对新生乳鼠皮质神经元糖氧剥夺（OGD/R）损伤的作用。方法：将成年SD大鼠随机分为对照组,模型组,电针组。采用电凝法建立大脑中动脉闭塞模型（MCAO）。7d后,各组大鼠进行腹主动脉取血,离心抽取上清。分离新生24h内SD大鼠乳鼠皮质神经元,随机分为对照组、模型组、电针血清组。对照组以含正常大鼠血清的培养基培养,模型组进行OGD2h后复糖复氧24h处理,电针血清组先以含电针血清的培养基培养24h,余操作同模型组。MTT检测各组神经元的存活率;TUNEL法检测各组神经元凋亡情况;乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测各组神经元培养液中乳酸脱氢酶的漏出水平;试剂盒检测各组神经元内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的水平。Western-Blot法检测各组神经元Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,模型组神经元存活率显著降低（P<0.01）,神经元凋亡显著增多（P<0.01）;与模型组比较,电针血清组神经元存活率显著升高（P<0.01）,神经元凋亡显著减少（P<0.01）。与对照组比较,模型组SOD活性显著降低（P<0.01）,MDA含量、LDH漏出量显著增多（P<0.01和P<0.05）;与模型组比较,电针血清组SOD活性显著增加（P<0.01）,MDA含量、LDH漏出量显著减少（均P<0.01）。Western-Blot结果示,模型组Wnt-1、GSK-3β、β-catenin、NeuN蛋白表达显著减少（均P<0.01）;电针血清组Wnt-1、β-catenin、NeuN蛋白表达显著增多（均P<0.01）,GSK-3β表达显著减少（P<0.01）。结论：电针血清可以减轻缺糖缺氧诱导的皮质神经元损伤,减少神经元的凋亡,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路相关。     

当归拈痛汤调控Fas/caspase-8通路促进类风湿关节炎滑膜成纤 维细胞凋亡

目的 探究当归拈痛汤（DGNTD）对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡及TNF受体超族成员6（Fas）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase-8）通路的影响。方法 收集临床RA患者的滑膜组织,无菌条件下采用酶解法分离并培养出FLS细胞。采用免疫荧光染色法对细胞进行鉴定。FLS细胞分为空白组（NC组）、DGNTD低剂量组、DGNTD中剂量组、DGNTD高剂量组、Fas抑制剂联合DGNTD组（KR-33493+DGNTD组）。NC组：10%空白血清干预FLS细胞;DGNTD低剂量组：10% DGNTD低剂量含药血清干预 FLS 细胞;DGNTD 中剂量组：10% DGNTD 中剂量含药血清干预 FLS 细胞;DGNTD 高剂量组：10% DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞;KR-33493+DGNTD组：20 μmol/mL KR-33493+10% DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞。通过MTT法检测不同剂量DGNTD对FLS细胞增殖的影响;Hoechst 33342法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术分别检测FLS细胞凋亡特性和凋亡率;qPCR和Western blot分别检测FLS细胞Fas、Fas相关蛋白（FADD）、caspase-8、caspase-3的mRNA和蛋白表达量。结果 免疫荧光实验证明本实验提取出的细胞为FLS细胞;MTT结果显示DGNTD含药血清随着剂量和干预时间的增加可显著抑制FLS的增殖（P<0.05）;Hoechst33342和流式细胞术结果显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著促进FLS细胞凋亡（P<0.05）;qPCR和Western blot均显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著提高Fas、FADD、caspase-8、caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平（P<0.05）;进一步发现,Fas蛋白抑制剂（KR-33493）可以逆转DGNTD对FLS细胞的上述作用（P<0.05）。结论 当归拈痛汤可能通过激活Fas/caspase-8通路来诱导FLS细胞凋亡。