Wnt/β-catenin通路异常在卵巢癌中的研究进展

如何早期诊断早期治疗成为当今卵巢癌研究的重要课题。β-catenin作为Wnt信号通路的细胞粘附和信号转导分子,被认为在卵巢癌发生过程中起到了关键作用,被认为在卵巢癌发生过程中是早期事件。预示着β-catenin有可能成为临床发现与治疗卵巢癌的分子靶标。     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化;RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达。结论 淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

甘草多糖对H22荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的：建立H22荷瘤小鼠模型,观察甘草多糖对模型小鼠脾脏调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）及脾淋巴细胞转化率的影响,探讨甘草多糖的免疫调节机制。方法：50只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、甘草多糖组和甘草多糖加环磷酰胺组。除正常组外,其余各组建立H22荷瘤小鼠模型。造模第2天各组开始给药,正常组和模型组腹腔注射生理盐水,环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺1周,甘草多糖组颈后皮下注射甘草多糖,连续14 d。取脾制备脾单细胞悬液,用流式细胞仪检测脾调节性T细胞,四甲基偶氮唑盐比色法检测脾淋巴细胞转化率。结果：模型组小鼠Treg细胞比例明显高于正常组,甘草多糖组Treg细胞比例低于模型组（P〈0.01）,甘草多糖组脾淋巴细胞转化率明显高于环磷酰胺组。甘草多糖与环磷酰胺无交互作用。结论：甘草多糖可能通过降低荷瘤小鼠Treg细胞的比例及提高脾淋巴细胞转化率而发挥抗肿瘤免疫调节作用。     

Wnt/β-catenin通路在鼻咽癌分化中的作用

[目的]探讨Wnt/β-catenin通路的枢纽分子β-catenin和β-catenin/Tcf复合体在不同分化程度鼻咽癌中的表达,进而阐明Wnt/β-catenin通路对鼻咽癌分化的作用.[方法]采用免疫组化方法检测13例鼻咽粘膜慢性炎症和74例不同分化类型的鼻咽癌组织中β-catenin的表达;转染野生型和突变型Tcf荧光素酶报告质粒,检测β-catenin/Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量.[结果]β-catenin在鼻咽癌中的异常表达主要出现在细胞浆内过表达.在角化性鳞癌、分化型非角化性癌中β-catenin胞浆内的过表达相对少,而在未分化癌中胞浆内累积明显增多.未分化癌与角化性癌、未分化癌与分化型非角化性癌相比较,β-catenin的表达有统计学差异,P值分别为0.0195和0.0003.通过检测转染后荧光素酶活性发现β-catenin/Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株(CNE-2和HONE-1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)的80～123.6倍.[结论]低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的胞浆内β-catenin和核内β-catenin/Tcf的表达,说明前者的Wnt/β-catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中,提示Wnt/β-catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用.     

理冲汤对子宫肌瘤模型小鼠Th1/Th2 平衡漂移的调控作用研究

目的 研究理冲汤对子宫肌瘤模型小鼠Th1/Th2平衡漂移的调控作用。方法 将24只CB-17 Scid雌性小鼠随机分为4组,正常组、模型组、理冲汤组和阳性药物组,采用异种移植法制备小鼠子宫肌瘤模型,药物干预28天后,采用HE染色来观察各组小鼠子宫平滑肌结构,采用MSD 超敏多因子电化学发光法检测小鼠血清中Th1细胞分泌的IL-2、IFN-γ和Th2细胞分泌的IL-4、IL-5、IL-10的含量水平。结果 HE染色结果显示模型组小鼠子宫平滑肌组织及腺体较之于正常组有明显增生,细胞排列紊乱,而理冲汤组和阳性药物组小鼠子宫平滑肌组织基本正常。MSD检测结果显示与正常组比较,模型组小鼠血清中的IL-2、IFN-γ的浓度显著降低(P＜0.01),而IL-4、IL-5、IL-10的浓度显著升高(P＜0.05,P＜0.01);阳性药物组的IL-4、IL-5、IL-10的浓度也显著升高(P＜0.05,P＜0.01),理冲汤组仅IL-5的浓度较之于正常组显著升高(P＜0.01)。与模型组比较,理冲汤组小鼠血清中的IL-2、IFN-γ均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),IL-4、IL-5、IL-10的浓度均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);而阳性药物组中的IL-2、IFN-γ均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),但IL-4、IL-5、IL-10的浓度变化比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 理冲汤通过调控Th1、Th2细胞分泌因子的含量水平,影响免疫逃逸,进而发挥抑制子宫肌瘤的作用。     

Wnt5a对成熟树突状细胞诱导初始性T细胞向记忆性T细胞分化的作用

目的:利用负载供者抗原的未成熟或成熟树突状细胞(imDCs或mDCs)体外诱导受者初始性T细胞(TNs)的活化、增殖和分化,并研究Wnt5a基因在这一过程中的可能的作用及其机制。方法:构建高表达Wnt5a基因的重组腺病毒,转染imDCs。建立同种异体小鼠皮肤移植模型,分选培养受体小鼠的imDCs,mDCs和T_Ns。在96孔板中用负载供者抗原的imDCs、转染腺病毒Ad/CMV/Wnt5a的imDCs、转染腺病毒Ad/CMV/LacZ的imDCs,和正常mDCs与记忆性T细胞(TMs)进行混合淋巴细胞反应。流式细胞术检测T_Ns向T_Ms分化的情况。ELISA检测共培养上清中IL-2,IL-10,IFN-γ细胞因子的浓度。RT-PCR检测T细胞中Wnt/β-catenin通路相关的基因表达情况。双荧光素酶报告基因检测混合淋巴细胞反应中T_Ns的β-catenin/TCF信号通路转录活性。结果:RT-PCR和免疫荧光检测发现mDCs中的Wnt5a的表达水平显著高于imDCs(P<0.05)。与负载供者抗原的mDCs相比,imDCs组可显著诱导T_Ns向T_Ms的分化,上调IL-2和IFN-γ细胞因子的分泌(P<0.05)。双荧光素酶报告系统检测显示mDCs共培养TNs可显著增强β-catenin/TCF信号通路转录活性(P<0.05)。此外,imDCs通过转染高表达Wnt5a基因的重组腺病毒,也显著提高了其诱导TNs向T_Ms的分化的能力,同时也显著活化了Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05)。结论 :在负载供者抗原的DCs与受者T_Ns混合淋巴细胞反应过程中,可诱导T_Ms分化形成,其中DCs的Wnt5a基因介导的T_Ns内β-catenin/TCF信号通路转录激活可能是其中一条重要的途径。     

TGF-β在肿瘤免疫微环境中的作用及研究进展

肿瘤免疫微环境被视为肿瘤"第七大标记性特征",肿瘤免疫逃逸与肿瘤发生和转移密切相关。作为肿瘤免疫逃逸的主要调控因子,TGF-β可抑制多种免疫细胞在肿瘤组织中增殖分化,表现为诱导肿瘤相关巨噬细胞和TAN极化,阻断树突状细胞的成熟,促进调节性T细胞的产生,还可以募集髓系抑制性细胞,加强TGF-β信号在肿瘤微环境中的促癌作用。因此抑制TGF-β的功能,重建抗肿瘤免疫环境将成为治疗肿瘤的一个重要策略。本文对TGF-β在肿瘤免疫微环境中的相关作用及研究进展进行综述。     

下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能

目的 探讨下调肌动蛋白相关蛋白复合体2(ARPC2)对卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能的影响和机制。方法 qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞和正常卵巢IOSE386细胞中ARPC2表达变化。在卵巢癌OVCA429细胞中转染ARPC2 siRNA,MTT测定细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,用Western blot方法检测细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达变化。用Wnt/β-catenin激活剂LiCl处理转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、迁移、侵袭变化。结果 卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞中ARPC2表达水平明显高于正常卵巢IOSE386细胞。卵巢癌OVCA429细胞中ARPC2表达水平最高。转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞增殖能力下降,细胞迁移和侵袭能力也下降,细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均降低。Wnt/β-catenin激活剂LiCl可以逆转ARPC2 siRNA对卵巢癌OVCA429细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能。     

小柴胡汤对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

目的:探讨小柴胡汤对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.方法:BALB/c小鼠肌肉注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,同时给予小柴胡汤,连续7日,并设免疫抑制模型及正常对照组.检测各组脾脏T淋巴细胞增殖能力及Till型(IL-2、IFN-r)和TH2(IL-4、IL-10)型细胞因子产生水平.结果:与正常对照小鼠比较,免疫抑制小鼠T细胞增殖能力明显下降,T淋巴细胞增殖能力及TH1和TH2型细胞因子产生均明显降低(P<0.01).给予小柴胡汤的正常小鼠T淋巴细胞增殖能力提高,TH1和TH2型细胞因子产生也有所增加,但与正常组比较没有显著差异(P>0.05).与免疫抑制小鼠相比较,给予小柴胡汤的免疫抑制小鼠的T淋巴细胞增殖能力及TH1和TH2型细胞因子的产生均明显增加,(P<0.01).结论:小柴胡汤可以有效地增强免疫抑制小鼠免疫功能.     

利用生物信息学鉴定影响卵巢癌预后的TGF-β信号通路相关基因

目的 探讨转化生长因子(TGF-β)信号通路相关基因在卵巢癌中的预后价值。方法 下载癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达集锦(GEO)数据库中的卵巢癌患者转录组测序数据,利用TGF-β信号通路相关基因的表达将卵巢癌患者分组。通过差异表达分析和单因素Cox回归分析鉴定影响卵巢癌预后的TGF-β信号通路相关基因。计算预后基因评分,比较高、低评分组中卵巢癌患者的生存情况,利用多因素Cox回归分析卵巢癌的独立预后因素。结果 一致性聚类分析结果表明,根据TGF-β信号通路相关基因可将卵巢癌患者分为两组,两组患者的免疫微环境有差异。差异表达分析和单因素Cox回归分析结果表明GMPR、PIEZO1、EMP1、CXCL13、GADD45B、SORCS2、FOSL2、PODN、LYNX1和SLC38A5是卵巢癌的预后基因,且预后评分是卵巢癌的独立预后因素。结论 TGF-β信号通路相关基因可将卵巢癌患者划分为不同的免疫亚型,并可作为卵巢癌的预后标志物。     

参山颗粒对CT26.WT荷瘤小鼠的免疫调节及抗肿瘤作用

目的 探讨参山颗粒对CT26.WT结肠癌荷瘤小鼠的免疫调节及抗肿瘤作用,为其功能定位、临床运用与市场推广提供理论依据及实验支撑。方法 采用腋下注射CT26.WT细胞制备结肠癌小鼠模型,分为空白对照组（Control组）、模型组（Model组）、参山颗粒组（SSG组）、5氟尿嘧啶阳性药组（5-FU组）,每组6只,连续给药14 d。计算肿瘤体积、肿瘤抑制率。血清中细胞因子中IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达水平、脾脏中T淋巴细胞亚群的占比、肿瘤组的病理变化及肿瘤中Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达情况,分别用ELISA检测法、流式细胞术、HE染色、RT-PCR法和免疫组化测定。结果 与Model组对比,5-FU组和SSG组肿瘤体积显著减小、肿瘤质量显著降低、抑瘤率显著增加（P<0.01）,5-FU组、血清中细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ水平、脾细胞悬液中CD4+T/CD8+T的比值及肿瘤组织中Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著增加（P<0.01）;SSG组血清中...     

黄芪扶正汤对免疫抑制小鼠的免疫调节功能

目的：探讨黄芪扶正汤对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法：以氢化可的松造成免疫低下小鼠模型,用黄芪扶正汤和玉屏风散水煮液进行灌胃,检测小鼠血清溶血素的生成、IL-2和INF-γ的含量以及外周血淋巴细胞CD3+,CD4+和CD8+的表达。结果：黄芪扶正汤能明显提高免疫抑制小鼠的血清溶血素、IL-2和INF-γ的水平,提高CD4+和CD8+的比值,效果比玉屏风散更显著。结论：黄芪扶正汤对免疫抑制小鼠的免疫功能有正调节作用。     

扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫微环境的影响

目的 研究扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫微环境的影响.方法 将50只清洁级C57BL/6小鼠建立肺癌荷瘤小鼠模型,50只小鼠造模成功48只,其中模型组9只,顺铂组9只,扶正抑瘤汤高、中、低剂量组均10只.扶正抑瘤汤高、中、低剂量组小鼠分别灌胃24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg扶正抑瘤汤;顺铂组腹腔注射...     

Wnt/β-catenin和EGFR信号通路在非小细胞肺癌发生发展中的作用

Wnt/β-catenin信号通路和EGFR信号通路在胚胎的形成与发育以及肿瘤发生发展中起着重要的作用,相关研究证实,在乳腺癌中Wnt1和Wnt5a可激活EGFR信号通路,肺癌中EGFR的过表达也可以促使核内β-catenin的蓄积,提示两者之间存在交叉作用。本文主要就EGFR和Wnt两条信号通路在非小细胞肺癌发生发展中的作用及其相互联系进行综述。     

靶向沉默CCDC132表达对卵巢癌细胞SKOV3生长、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的研究shRNA靶向沉默CCDC132基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计CCDC132-siRNA及空转序列,转染卵巢癌SKOV3细胞,分别为shCCDC132组及对照组,利用qRT-PCR检测各组细胞CCDC132相对表达量,CCK8法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western Blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达情况。结果转染后,sh-CCDC132组细胞中CCDC132表达水平较对照组显著降低(P0.01);sh-CCDC132组细胞增殖率较对照组显著降低(P0.01),迁移率下降(P0.01)、侵袭细胞数显著降低(P0.01),caspase-3、Bax蛋白表达显著上调(P0.01),而β-catenin(P0.01)、Cyclin D1(P0.01)和c-myc(P0.05)蛋白表达水平显著降低。结论沉默CCDC132可抑制SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力,其具体机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

理冲生髓饮对卵巢癌细胞株SKOV3基因表达的影响

目的:研究理冲生髓饮对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3的抑制作用,并利用基因表达谱芯片探索其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备cDNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与基因表达谱芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因。结果:共筛选出显著表达差异基因136种,其中16种基因表达水平下调,120种基因表达上调。结论:理冲生髓饮对SKOV3生长有抑制作用,调节癌基因及其相关的信号传导、改变肿瘤细胞蛋白合成等可能是其作用机制。     

SOX21在胃癌中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用

【摘要】 目的 探讨性别决定区Y-BOX21(SOX21)在胃癌（GC）中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用。 方法 收集2016年4月~2017年5月于东莞市人民医院行胃癌根治术患者的癌组织及对应的癌旁组织各44例,以胃癌细胞株AGS和人胃粘膜上皮细胞株GES-1为进一步研究对象,将培养后的细胞分为空白对照组、NC组和SOX21组,甲基化特异性PCR检测SOX21甲基化状态;qRT-PCR、免疫组化（IHC）和Western blot检测SOX21和Wnt/β-catenin通路相关基因表达;CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。 结果 与癌旁组织相比,GC组织SOX21甲基化率明显升高（P＜0.001）,SOX21 IHC评分、mRNA表达和蛋白表达均明显降低（P＜0.05）。SOX21在GES-1细胞中呈去甲基化状态,而在AGS中呈完全甲基化状态。与GES 1细胞相比,AGS细胞中SOX21 mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.05）。与NC组相比,SOX21组中SOX21 mRNA表达、蛋白表达和细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数明显降低（P＜0.05）,β-catenin、c-myc、cyclinD1和MMP7蛋白表达明显降低（P＜0.05）。 结论 SOX21在胃癌组织中呈高 甲基化状态且表达降低,过表达SOX21可能通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。     

抗肿瘤药羟喜树碱对Wnt通路抑制剂FrpHE的表达作用

目的研究加入羟喜树碱后Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled relatd protein)在人肿瘤细胞株中的表达调控作用。方法选择人肝癌HepG2(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)和人大肠癌(Lovo,含野生型p53),人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变)细胞株为模型,观察抑制剂FrpHE以及反映Wnt通路功能变化的-βcatenin的表达。以RT-PCR技术检测Wnt通路抑制因子FrpHE表达的调节作用,以流式细胞术检测肿瘤细胞中Wnt通路的关键调节因子-βcatenin的表达。结果加入羟喜树碱24h后FrpHE mRNA表达水平在人肝癌细胞(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)中与对照组相比表达水平显著增加。在人大肠癌细胞(Lovo,含野生型p53)和人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变型)中,未见FrpHE mRNA表达。-βcatenin的阳性细胞百分比强度和平均荧光量强度与对照组相比,表达水平降低。结论羟喜树碱在人肝癌细胞中能明显诱导抑制剂FrpHE mRNA的表达。