病毒感染大鼠心室肌细胞钙通道基因表达及功能改变的研究

目的：研究大鼠心室肌细胞感染柯萨奇病毒B3（CVB3）后L型钙通道mRNA表达量及其电生理特性的变化。 方法: 用CVB3感染培养的SD大鼠心室肌细胞，采用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术，检测病毒感染心室肌细胞L型钙通道各亚单位mRNA表达量的变化；用全细胞膜片钳技术，观察病毒感染前后心室肌细胞L型钙电流（ICa-L）的变化。结果: 病毒感染组心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量显著高于正常对照组（4.00±0.07 vs 2.21±0.41, P<0.01; 2.06±0.06 vs 1.22±0.30, P<0.05），而α2/δ亚单位mRNA表达量的改变不明显（4.12±0.19 vs 4.13±0.27, P>0.05）；感染组细胞ICa-L的平均电流密度明显大于正常组细胞［（-8.66±0.99) pA/pF vs (-6.97±1.75) pA/pF, P<0.01］，且前者的电流-电压曲线下移，峰电流密度增加25.74%（P<0.05）。结论: CVB3感染心室肌细胞后，使其L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量增加，ICa-L增大，可能是病毒感染导致心肌出现异常电生理活动的细胞和分子机制之一。     

重组铜绿假单胞菌分泌蛋白PA3611诱导支气管上皮细胞-间充质转化的初步观察北大核心CSCD

目的 探讨重组蛋白PA3611能否在体外使大鼠支气管上皮细胞发生上皮-间充质转化（EMT）.方法 通过DNA合成、基因扩增、载体构建、诱导表达、纯化等过程制备重组蛋白PA3611;利用CCK-8法检测PA3611刺激对支气管上皮细胞增殖的影响;镜下观察经PA3611作用后支气管上皮细胞的形态学变化;运用Western blot法和qPCR法检测支气管上皮细胞细胞E-钙粘蛋白（E-CAD）与 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平.结果 DNA测序证实成功制备重组蛋白PA3611;重组蛋白PA3611刺激能抑制支气管上皮细胞的增殖（P〈0.05）,诱导其细胞形态学发生EMT变化,抑制E-CAD表达及促进α-SMA的表达（P〈0.05）.结论 重组铜绿假单胞菌分泌蛋白PA3611可以诱导大鼠支气管上皮细胞发生EMT,其具体机制值得进一步深入探讨.     

Duchenne肌营养不良的细胞表面异常患者和携带者皮肤成纤维细胞间的粘着性

Duchenne 肌营养不良症(DMD)发病机理假说最有价值的方面之一是提出一种细胞表面异常。有人报道过培养的DMD 肌细胞腺苷酸环化酶活性变化和与细胞表面有关的物质如fibronectin 合成的变化。Thomps-on 等人曾描述过DMD 肌细胞培养基中细胞     

p21 蛋白激活激酶4 在乳腺癌上皮间质转化中的作用研究

目的:探讨p21 蛋白激活激酶4(PAK4)在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用。方法:在乳腺癌MCF7 细胞中超表达PAK4,而在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中干扰PAK4 表达,通过迁移和侵袭实验检测其对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响,荧光定量法和免疫印迹分析检测PAK4、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin mRNA 和蛋白质表达量变化,免疫印迹法检测EMT 相关转录激活因子Snail、Slug 表达量变化。结果:MCF7 细胞超表达PAK4 后,细胞的迁移侵袭能力显著增加,并且上皮标志分子E-Cadherin 蛋白表达下调,而间质标志分子N-Cadherin 和Vimentin 蛋白则表达上调,EMT 相关转录激活因子Slug 表达量增加;MDA鄄MB鄄231 细胞中,抑制内源PAK4 表达能显著降低细胞的迁移侵袭能力,上调E-Cadherin 蛋白表达,下调N-Cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白的表达。结论:PAK4 通过上调Slug 促进乳腺癌发生上皮间质转化,可作为抑制乳腺癌转移的分子靶点。     

Rho GTP酶对肌动蛋白细胞骨架的作用

在所有真核细胞中 ,肌动蛋白细胞骨架介导了许多必需的生物学功能。除提供确定细胞形状和极性所必需的结构框架外 ,肌动蛋白细胞骨架尤其是其动力学变化还与细胞的运动、分裂、粘附以及吞噬等过程密切相关。RhoGTP酶家族是一类参与众多细胞信号转导通路的重要蛋白 ,其家组成员是联系膜表面受体与肌动蛋白细胞骨架的关键调节分子 ,起着分子开关的作用。反应于细胞外信号它们诱导肌动蛋白细胞骨架组织的相应改变 ,以引发大量生物学反应包括 :形态形成、趋化作用及轴突的定向。     

新生大鼠心肌细胞的体外培养和生物学观察

体外分离培养心肌细胞,为心肌组织工程提供种子细胞.采用胰酶连续消化法,分离新生大鼠心室肌细胞并在体外培养,倒置显微镜下观察细胞形态和搏动情况,并通过免疫组化染色法,检测心肌细胞的α肌节型肌动蛋白及连接蛋白Cx43.结果表明:培养2d后,心肌细胞开始自发搏动,在培养过程中心肌细胞的搏动频率逐渐加快,细胞聚集成团,随后成簇同步搏动,心肌细胞搏动可维持60d以上;α肌节型肌动蛋白及连接蛋白Cx43的表达量也逐渐增加.本研究体外培养出了状态良好的心肌细胞,在体外二维培养环境下,心肌细胞也有一定程度的生长发育,为心肌组织工程种子细胞来源的研究提供了实验依据.     

流场压力信号变化对内皮细胞形态和黏附功能的影响

人体血循环系统是一个有压的封闭系统,血管流场中,由于血管自然走行或病变导致其几何形状的改变,必然导致局部流场压力发生变化,进而可能引起血管内皮细胞发生一系列生理或病理变化.本研究拟考察流场内培养的内皮细胞(Endothelial cells, ECs)在不同压力信号作用下细胞浆内肌动蛋白纤维F-actin排列、表达强度以及血管内皮细胞黏附分子(Vascular cell adhesion molecule, VCAM)和整合素Integrin αVβ3等细胞黏附分子的表达强度,探讨分析其与流场内压力变化之间的关系.通过设置静态培养、单纯剪切力对照组,应用免疫荧光双重标记、激光共聚焦扫描显微镜和计算机图像分析等技术,观察了在平板流室内于不同压力加载下培养的内皮细胞表面VCAM和Integrin αVβ3 的表达强度及细胞骨架F-actin 的变化.研究结果初步表明,随着压力降值的变化,内皮细胞表面VCAM和Integrin αVβ3以及F-actin的表达强度呈现出明显的规律性改变现象.压力降信号的改变导致了内皮细胞骨架F-actin的变化,同时影响了以VCAM为代表的细胞黏附功能和以Integrin αVβ3为代表的压力信号跨膜传递通路的生理功能.     

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的 检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA (lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制.方法 采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-...     

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.     

肌动蛋白的形态分布与细胞黏附性之间的关系

细胞内肌动蛋白的形态和分布与细胞的黏附之间有关联。细胞中肌动蛋白纤维含量减少时,细胞易从基质上脱落。癌细胞与静态培养的细胞中肌动蛋白纤维均分布于细胞边缘,目的是伸出伪足黏附在基底上,又可以收回伪足,使细胞从基底上脱黏附。细胞在受到外力作用下,于基底上黏附/脱附时,其骨架肌动蛋白的形态与分布发生改变。不同程度的外力作用于细胞,其骨架肌动蛋白的适应性变化不同。显然细胞在基底上的黏附/脱附机制与其肌动蛋白的形态分布间的关系尚需进一步研究。     

室间隔缺损儿童心房肌细胞Cx43蛋白的表达

目的探讨室间隔缺损儿童心房肌细胞连接蛋白43(Cx43)表达的规律。方法应用SP免疫组织化学和图像分析方法,观测室间隔缺损儿童心房肌细胞Cx43的蛋白表达。结果1．正常儿童心房肌细胞Cx43表达：1～3岁组呈斑点状、带状或链状,主要排列于细胞侧面连接处,闰盘处极少。7～16岁组大量分布于细胞侧面连接处和闰盘处。2．室间隔缺损儿童的心房肌细胞Cx43表达：1～3岁组除了分布于细胞侧面连接处,还见于细胞闰盘处及细胞质中,少数无序排列;7～16岁组分布在细胞侧面连接处和细胞质中,闰盘处极少,且无序排列。3．室间隔缺损儿童心房肌细胞Cx43的蛋白表达量未发生显著变化。结论室间隔缺损儿童心房肌细胞Cx43的蛋白分布形式有改变,表达量无变化。提示,室间隔缺损仅对Cx43的分布形式产生影响。     

Rho家族小GTP酶在黑素细胞树突形成和黏附中的作用

黑素细胞通过其树突将合成的黑素转运至角质形成细胞,进而发挥生理功能。黑素细胞树突形成是黑素转运过程中的重要环节,黑素转运必须在黑素细胞和角质形成细胞紧密接触后才能实现。黑素细胞形态学改变包括胞体大小和树突变化等细胞骨架的改变,细胞骨架变化主要与肌动蛋白和微管结构的重排有关。Rho家族小GTP酶包括20种成员,其中RhoA,Rac1和Cdc42对黑素细胞细胞骨架的变化和细胞黏附的调节起重要作用。     

人清道夫受体SR-A I过表达对293T细胞摄脂和黏附功能的影响

目的:构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-SR-AI在293T细胞上获得高表达,并对A类I型清道夫受体(SR-AI)相应的功能进行鉴定.方法:依据人A类I型清道夫受体基因MSRI的cDNA设计引物,用PCR等分子克隆技术构建重组真核表达载体pEGFP-C1-SR-AI,测序证实后,用脂质体法转染293T细胞.用RT-PCR和Western blotting检测SR-Al受体的表达,脂质油红O化学染色法检测实验组细胞的脂质摄取虽的变化,通过细胞黏附性实验检测其黏附性的改变.结果:转染后实验组SR-AI mRNA表达及蛋白合成明显高于对照组和空载体组,同时发现泡沫细胞转化率由对照组和空载体组的10%显著增加到实验组的20%,且细胞黏附性也提高2倍以上.结论:成功构建了重组真核表达质粒,并在293T细胞获得了高表达,提高了293T细胞的摄脂能力和黏附性,为进-步研究此受体功能的改变对动脉粥样硬化病理发生过程的影响奠定基础.     

在估价RA患者免疫系统巨噬细胞环节状态时单核细胞表面组织相容性抗原表达的变化

HLA 分子在免疫系统细胞膜上的表达与其功能状态有密切关系,并受很多免疫调节因子的调节。已证实HLA-DR 分子在巨噬细胞表面上的表达水平取决于细胞提呈功能的有效性及其吞噬活性。许多与免疫功能障碍有关的疾病如某些先天性免疫缺陷状态、淋巴细胞白血病、SLE、RA 等,除免疫活性细胞的活性发生改变外,还出现HLA 抗原表达变化。本文目的是阐明在正常情况下和自身免疫性疾病患者单核吞噬细胞系统(MPS)细胞的功能活性与表面HLA 分子     

二苯乙烯苷通过PI3K/AKT通路抑制TGFβ诱导的结直肠癌上皮间质转换

目的:探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-Ο-β-D-glucoside,THSG)对TGFβ诱导的结直肠癌细胞上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及可能的分子机制.方法:通过转化生长因子(transforming growth factorβ,TGFβ)诱导HCT116细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞形态变化,Western印迹检测EMT相关分子标志物的表达;划痕实验、细胞迁移实验、倒置显微镜观察不同浓度THSG干预TGFβ刺激对HCT116细胞运动、迁移能力以及形态学的影响,Western印迹检测EMT相关标志物及PI3K/AKT通路的改变.结果:TGFβ刺激HCT116细胞后,细胞由圆形变为长梭形,E-cadherin表达降低,vimentin和N-cadherin表达增加;与对照组相比,THSG可增加E-cadherin和PTEN的表达,降低vimentin和N-cadherin和p-AKT表达,同时抑制细胞的迁移及运动(F=454.723,P<0.001;F=412.161,P<0.001).结论:THSG可通过PI3K/AKT通路抑制TGFβ诱导的HCT116细胞EMT,并降低其运动迁移能力.     

胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

目的： 模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响。结果: 原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nestin、PCNA为阳性,而K10不表达。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异。此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α+6CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α+6CD71+、α-6CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68. 34%及4.51%。RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱。结论: Ⅳ型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调。     

雌激素对人脐带来源间充质细胞骨架和超微结构的影响

目的研究在17β-雌二醇（E2）作用下人脐带间充质干细胞骨架、超微结构的形态学变化,并分析其骨架蛋白的表达情况及其可能的机制。方法用三酶法分离培养人脐带间充质干细胞,流式细胞仪检测所得细胞表型。E2处理48h后,用激光共聚焦显微镜观察肌动蛋白和纽蛋白的表达情况;用透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化。结果分离得到的人脐带间充质干细胞纯度达到95%以上;E2对肌动蛋白的形成和分布没有影响,但使纽蛋白的分布集中于核周;在E2作用下,人脐带间充质干细胞出现老化,自噬体增多,线粒体出现代偿性增加。结论 E2能改变人脐带间充质干细胞的细胞骨架和超微结构,从而可能影响其功能。     

hHCN2基因转染的脂肪组织来源的成体干细胞可分化为起搏样细胞

目的 大鼠脂肪来源的成体干细胞(ADSC)转染人超极化激活环核苷酸门控离子通道-2(hHCN2)基因,观察其作为起搏细胞的可行性.方法 取生长良好的ADSC转染hHCN2基因,通过RT-PCR、Western blot分析、免疫荧光技术检测hHCN2基因及蛋白的表达,用膜片钳技术检测细胞的电生理特征并记录其内向电流.将转染hHCN2基因的ADSC与心室肌细胞共培养,观察其对心室肌细胞自发性搏动的影响.结果 hHCN2基因修饰的大鼠ADSC能表达较强的hHCN2基因及蛋白,还能够产生超级化激活内向离子流.将其与心室肌细胞共培养,能使心室肌细胞的自发性搏动明显增快增强.结论 将hHCN2基因转染ADSC能够使其分化为具有起搏功能的起搏样细胞,为进一步优化生物起搏器的研究提供了材料.     

PCNA与肿瘤

增殖细胞核抗原(PCNA)又称为周期蛋白,是DNA多聚酶δ辅助蛋白,DNA合成必不可少的因子。它是一种核内蛋白质,在细胞核内阳性表达的高低与细胞增殖活性密切相关。在正常增殖和转化的细胞中,PCNA含量有明显的周期性变化。大部分G0～G1期细胞没有明显的PCNA表达。在G1晚期表达量大幅度增加,S期达到高峰,G2～M期下降,在M期和静止期达到最低水平,这和细胞内DNA复制时相变化一致,PCNA调节DNA前导链和后导链的合成,是一种细胞周期调节蛋白〔1〕。PCNA只在正常组织的增殖部位表达(如淋巴结的发生中心、鳞状上皮基底层等)、冯福才等〔…     

肝细胞生长因子和表皮生长因子联合体外诱导大鼠肝卵圆细胞分化的研究

目的探求卵圆细胞向成熟肝细胞分化的演变规律,并对其分化调控的分子机制作初步探讨。方法联合应用肝细胞生长因子和表皮生长因子体外培养大鼠肝脏卵圆细胞OC3,运用电镜、免疫细胞化学、半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）等技术,检测OC3在分化过程中形态及相关分子标记物的改变,并运用蛋白芯片技术观察细胞蛋白表达谱的变化。结果诱导10周后,卵圆细胞胞质变丰富,细胞器增多,表达谷胱甘肽-S-转移酶（GST—P）和丙酮酸激酶（M2-PK）减弱,而表达白蛋白（ALB）、CK18增强,同时诱导后期的细胞较之诱导前主要出现了8种表达差异蛋白。结论在肝细胞生长因子与表皮生长因子的共同作用下,体外培养的卵圆细胞可逐步分化为成熟肝细胞。8种主要的结构蛋白或功能蛋白可能参与了对该过程的调控。