JNK通路在缺血预处理诱导海马神经元保护中的作用

目的探讨JNK通路在缺血预处理诱导海马神经元保护中的作用。方法♂蒙古沙土鼠,随机分为假手术组(SH)、缺血/再灌注组(I/R)、缺血预处理组(IP)、Anisomy-cin组(AN)、Curcumin组(CU)、Anisomycin复合IP组(AP)、Curcumin复合IP组(CP)及溶剂对照组(VE),每组据再灌注15min、2、4、6h、1、3、5及7d又分8个亚组。预定时间点行TUNEL海马CA1区凋亡细胞检测、免疫组化SP法检测p-JNK及Jun蛋白在海马CA1区的表达变化。结果IP、CU及CP可减少海马CA1区凋亡锥体细胞数(vsI/R,P<0.01),减弱CA1区再灌注各点p-JNK及Jun蛋白的表达水平(vsIR,P<0.01),该效应CP组>IP组>CU组。AN增加CA1区凋亡锥体细胞数(vsIR,P<0.01),增强CA1区再灌后1d内各点p-JNK及再灌后1～7d各点Jun蛋白表达水平(vsIR,P<0.01)。AP部分抵消IP保护效应。结论JNK通路激活参与沙土鼠海马CA1区缺血性神经元凋亡,缺血预处理可通过抑制CA1区JNK磷酸化、减少Jun蛋白表达而保护海马细胞和功能。抑制JNK通路激活可发挥缺血预处理相似的保护作用。     

沙土鼠15min前脑缺血再灌注后对慢性期学习记忆功能的评价

目的探讨沙土鼠15min前脑缺血再灌注后慢性期认知障碍及组织形态学改变。方法采用双侧颈总动脉结扎法制作15min前脑缺血再灌注模型,利用“Y”字穿梭箱观察缺血4周后的记忆能力（长期记忆）及再学习能力（短期记忆）,同时对脑组织进行组织学观察。结果15min前脑缺血沙土鼠,慢性期出现明显的学习记忆功能障碍,并观察到包括整个海马及躯体感觉皮层区域在内的神经细胞损伤。结论沙土鼠15min脑缺血可造成严重的组织学损害并导致慢性期学习记忆障碍。这种模型将有助于血管性痴呆症的研究。     

盐酸戊乙奎醚对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究盐酸戊乙奎醚(PHC)对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型,观察PHC对沙土鼠前脑缺血再灌注后卒中症状、病理形态的影响,并测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果:与模型组比较,PHC 0.08、0.24 mg.kg-1组与阿托品组均明显降低动物缺血再灌注6 h卒中指数,同时PHC可使大脑皮质及海马组织中SOD活性明显升高、MDA含量明显降低。PHC可以减轻再灌注3 d后海马神经元锥体细胞损伤程度。结论:PHC对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

维拉帕米改善实验性沙土鼠脑缺血后LCBF和脑水份含量

利用沙土鼠脑缺血再灌注模型,于缺血前或缺血后静脉注入钙通道阻滞剂维拉帕米0.5mg/kg,结果表明,维拉帕米显著地改善沙土鼠脑缺血后低灌注现象,增加缺血区脑血流量(P<0.01),同时减轻脑水份含量(P<0.01),对脑缺血后神经细胞将起保护作用,值得进一步研究及临床验证。     

3-硝基丙酸预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受与海马星形胶质细胞的激活

目的：探讨海马区星形胶质细胞的激活与3－硝基丙酸（3－NPA）预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法：阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型，通过HE染色和免疫组化观察海马锥体细胞死亡和星形胶质细胞的反应。结果：对照组海马CA1区已失去正常结构，锥体细胞大部分丧失，存活神经元计数显低于假手术组。3－NPA预处理组存活神经元减少，但高于对照组，假手术组海马CA1区仅见少量胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞，染色较弱，突起不明显，对照组海马CA1区GFAP阳性细胞增多，多为弱阳性。3－NPA预处理组海马CA1区GFAP阳性细胞数目明显增多，染色较深，突起增粗。结论：星形胶质细胞形态和机能的改变可能与3－硝基丙酸预处理诱导脑缺血耐受有关。     

氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的：研究氯胺酮对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡状态及相关基因bax、bcl—2表达的影响。方法：沙土鼠全脑缺血模型，缺血10min，再灌注24h。分为假手术组、缺血再灌注组和氯胺酮组。采用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞，采用SP法进行bax、bcl—2的免疫组织化学染色。结果：缺血再灌注组及氯胺酮组脑组织中TUNEL及bax阳性细胞数明显多于假手术组(P＜0．01)；氯胺酮组阳性细胞数目明显低于缺血再灌注组(P＜0．01)。bcl—2阳性细胞数3组间比较无明显差异。结论：氯胺酮减少沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞的凋亡，bax/bcl—2比值较再灌注组相对降低可能为此作用的机理之一。     

羟丁酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用研究

目的　研究缺血前后羟丁酸钠 (sodiumgamma hy droxybutyrate,γ OH)对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　采用沙土鼠双侧颈总动脉结扎法制作全脑缺血再灌注损伤模型 ,观察γ OH对脑缺血再灌注沙土鼠大脑皮层、海马和纹状体ATP酶活性、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛 (MDA)含量的影响。结果　缺血前给γ OH能保护脑缺血再灌注沙土鼠脑组织ATP酶和SOD的活性 ,降低MDA含量 ,缺血后给药仍有一定疗效。结论　γ OH对脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,其机制与保护脑组织ATP酶和SOD活性 ,清除氧自由基 ,减少脂质过氧化有关。     

全脑缺血诱导沙土鼠纹状体,海马和皮层氨基酸水平的改变(英文)

目的:研究全脑缺血时沙土鼠海马、纹状体和皮层谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酰胺、甘氨酸和牛磺酸含量的变化及氯胺酮对上述氨基酸含量的影响.方法:采用结扎双侧颈总动脉的方法制备沙土鼠全脑缺血模型,应用HPLC和荧光检测器联用测定氨基酸的含量.结果:全脑缺血显著增加沙土鼠海马,纹状体和皮层的谷氨酸,天冬氨酸,谷氨酰胺,GABA,甘氨酸和牛磺酸含量;氯胺酮(120 mg/kg,ip)预处理能完全逆转缺血诱导的谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸和谷氨酰胺释放的增加,但不能完全逆转缺血诱导的GABA和牛磺酸释放增加.结论:脑缺血诱发的神经元损伤可能与其增加谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺含量有关,而抑制性氨基酸GABA和牛磺酸释放增加则可能是机体一种重要的自身脑保护机制.氯胺酮逆转脑缺血诱导的兴奋性氨基酸释放增加可能是其抗兴奋性神经毒的生化基础.     

盐酸戊乙奎醚对沙土鼠短暂性脑缺血卒中指数的影响及其机制的研究

目的研究盐酸戊乙奎醚(PHC)对沙土鼠短暂性脑缺血卒中指数的影响,并初步阐明其机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型,分为假手术组、缺血再灌注(模型)组、PHC 0.026、0.24 mg.kg-1组、阿托品组,观察沙土鼠短暂脑缺血再灌注6 h内的神经症状并计算卒中指数;检测海马及皮质谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及Na+,K+-ATP酶的含量;应用流式细胞仪测定海马神经元细胞内游离钙离子的浓度,放射免疫法测定血液中TXB2、6-Keto-PGF1α的含量。结果 PHC能明显降低沙土鼠短暂脑缺血卒中指数,升高海马及皮质Na+,K+-ATP酶及GSH-Px含量,同时减少海马神经元细胞内游离钙离子浓度以及血液中TXB2与6-Keto-PGF1α的比值。结论 PHC可改善沙土鼠短暂脑缺血后卒中的症状,可能与其改善能量代谢、增强清除自由基的能力、减少细胞内游离钙的浓度、降低血液中TXB2/6-Keto-PGF1α的含量有关。     

羟丁酸钠对沙土鼠脑缺血损伤的保护作用

目的　探讨羟丁酸钠 (SO)对沙土鼠全脑缺血有无保护作用 ,为其新的临床应用提供理论依据。方法　采用双侧颈总动脉结扎法制作全脑缺血 ( 10min)再灌注损伤模型 ,观察SO( 5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·kg- 1,ip ,每日 1次 ,连续 7d)对脑缺血后神经功能和海马组织损伤的影响。缺血后d 3 ,d 7用开场行为测试法检测自发活动 ,d 4,d 5 ,d 6用T迷宫测试学习记忆能力 ,d 7进行海马CA1区神经元病理学检查。结果　SO能降低脑缺血沙土鼠的自发活动 ,提高其学习记忆能力 ,并且显著减轻海马CA1区锥体神经元的损伤 ,其作用呈剂量依赖性。结论　SO对脑缺血损伤有一定的保护作用。     

Induction of apoptosis by esculetin in human leukemia U937 cells through activation of JNK and ERK

Esculetin is a phenolic compound that is found in various natural plant products and induces apoptosis in several types of human cancer cells. However, the underlying mechanisms of its action are not completely understood. In the present study, we used human leukemia cells to gain further insight into the mechanism of esculetin-induced anti-proliferative action and apoptosis. It was found that esculetin inhibits cell viability by inducing apoptosis, as evidenced by the formation of apoptotic bodies, DNA fragmentation, and the accumulation of cells in the sub-G1 phase. Esculetin-induced apoptosis was correlated with mitochondrial dysfunction, leading to the release of cytochrome c from the mitochondria to the cytosol, as well as the proteolytic activation of caspases. The z-DEVD-fmk caspase-3 inhibitor and the ectopic expression of anti-apoptotic Bcl-2 significantly inhibited esculetin-induced apoptosis, demonstrating the important role of caspase-3 and mitochondrial proteins in the observed cytotoxic effect. Furthermore, esculetin selectively increased the phosphorylation of extracellular-regulated kinase (ERK) and c-Jun N-terminal kinase (JNK), but not that of other kinases such as Akt and p38 activation. In addition, an ERK-specific inhibitor, PD98059, and a JNK-specific inhibitor, SP600125, showed inhibited sub-G1 phase DNA content, DNA fragmentation, caspase activation, and mitochondrial dysfunction induced by esculetin treatment. These results indicated that the JNK and ERK pathways were key regulators of apoptosis in response to esculetin in human leukemia U937 cells.     

c—jun氨基末端激酶与多药耐药相关蛋白1在结直肠癌组织中的表达

目的研究磷酸化c-jun氨基末端激酶（JNK）与多药耐药相关蛋白1（MRP1）在结直肠癌组织中的表达及JNK在结直肠癌耐药中的可能机制。方法通过免疫组织化学方法研究72例结直肠癌和4JD例正常大肠组织中JNK和MRP1蛋白表达及其关系。结果JNK和MRP1蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为47．22％和51．39％,均明显高于在正常大肠组织中的表达。JNK蛋白阳性表达与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位均无明显相关性（P〉0．05）,而与肿瘤分化、淋巴结转移、远处转移及Dukes分期显著相关（P〈0．05）。MRP1蛋白阳性表达与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位及肿瘤分化均无明显相关性（P〉0．05）,而与淋巴结转移、远处转移及Dukes分期显著相关（P〈0．05）。结论JNK高表达与结直肠癌的发生及其恶性生物学行为相关,其可能通过上调MRP1的表达参与大肠癌化疗耐药的形成。     

基于MAPK/ERK/JNK信号通路探究染料木黄酮对荨麻疹大鼠的保护作用

目的 从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)/c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)通路探究染料木黄酮对荨麻疹大鼠的保护机制.方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、染料木黄酮低、高剂量(150、300 mg/kg)组,MAPK激活剂(茴香霉素)组、染料木黄酮+茴香霉素组,每组12...     

Atropine and cerebral ischemic injury in the Mongolian gerbil

1. Cerebral ischemia of 5 min duration was induced in unanesthetized gerbils by bilateral occlusion of the carotid arteries.2. The extent of cerebral damage was assessed by the elevation of motor activity in comparison with control animals and by a histological assessment of the extent of neuronal degeneration in the CAl area of the hippocampus.3. Atropine, an antagonist of ACh, at either a low (1 mg/kg) or a high (10 mg/kg) dose administered 15 min prior to the ischemic episode, did not confer protection against cerebral ischemic damage.4. This finding suggests that ACh does not play a critical role in the generation of ischemia reperfusion injury.     

ERK1/2的激活参与七氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用

目的观察ERK1/2的激活在七氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤保护中的作用。方法采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(OPS);利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度。结果用4%七氟醚预处理海马脑片,可延迟OPS的消失时间,提高复氧后OPS的恢复程度和恢复率。以ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol.L-1)预处理海马脑片,可以取消七氟醚的作用。单独使用PD98059对OPS无明显影响。七氟醚预处理组组织损伤百分率明显低于其它各组。结论ERK1/2的激活参与了七氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用。     

ERK1/2介导H_2O_2预处理对抗氧化应激损伤的保护作用

目的探讨H2O2预处理能否激活ERK1/2及ERK1/2在H2O2预处理引起的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)测定ERK1/2蛋白的表达及procaspase-3的表达。结果100μmol.L-1H2O2预处理PC12细胞90min能明显地保护PC12细胞对抗300μmol.L-1H2O2引起的损伤,使细胞存活率增加,细胞凋亡率降低及procaspase-3增多。H2O2预处理对ERK1/2具有明显的激活作用:诱导胞质ERK1/2磷酸化及促进其核转移。在H2O2预处理前30min应用ERK1/2抑制剂UO126(10μmol.L-1)可明显地阻断H2O2预处理的抗细胞毒性及抗细胞凋亡作用。结论H2O2预处理能激活ERK1/2,ERK1/2介导H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK的表达变化。结果5μmol.L-1As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组。结论SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关。     

钙离子在心肌缺血预适应中的作用

目的 观察钙离子变化对心肌缺血预适应内源性保护机制的影响。方法将50只雄性SD大鼠随机分为五组，缺血对照（IC）组；缺血预适应（IP）组；缺血预适应＋维拉帕米（IP＋Vera）组；钙通道激动剂（Bay8644）组；L-型钙通道阻滞剂（维拉帕米，Verapamil）组。实验中观察缺血前及再灌后左心功能，检测乳酸脱氢酶（LDH）、三磷酸腺苷（ATP）等含量并辅以心肌超微结构观测。结果与IC组相比，IP组、Bay8644组各项指标均提示心功能恢复好转（P〈0．05），且IP组与Bay8644组相比较，各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）；在IP组中加入维拉帕米后，各项指标均提示心肌损伤明显加重（P〈0．05）。结论（1）心肌缺血预适应可诱导出心肌内源性保护作用。（2）钙通道拮抗剂可通过减少钙离子内流而阻断心肌缺血预适应的心肌保护作用。（3）增加钙离子内流可模拟IP的心肌保护作用。