甲基强的松龙联合嗅鞘细胞移植对急性脊髓损伤大鼠运动功能和诱发电位的影响

背景：嗅鞘细胞移植和甲基强的松龙是两种非常有前途的治疗脊髓损伤方法,关于二者联合治疗脊髓损伤的报道较少,结果也不尽相同。 目的：通过对大鼠行为学评分和诱发电位学检测了解嗅球嗅鞘细胞移植和甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤的修复作用以及二者之间有无协同作用。 方法：以NYU脊髓打击法建立大鼠急性T10脊髓损伤模型,术后分别注射嗅鞘细胞、甲基强的松龙、嗅鞘细胞+甲基强的松龙、无血清的DF12培养液、生理盐水。于术后8周进行后肢体感诱发电位、运动诱发电位检测,并通过BBB评分了解各组大鼠手术前、后运动功能的变化。 结果与结论：术后8周,嗅鞘细胞组、甲基强的松龙组、嗅鞘细胞+甲基强的松龙组与损伤组、DF12组比较,大鼠后肢BBB评分明显升高,体感诱发电位、运动诱发电位 N1波潜伏期缩短,波幅升高,差异有显著性意义(P < 0.05)。嗅鞘细胞+甲基强的松龙组与嗅鞘细胞组、甲基强的松龙组比较,大鼠后肢BBB评分明显升高,体感诱发电位、运动诱发电位N1波潜伏期缩短,波幅升高,差异有显著性意义(P < 0.05)。说明嗅鞘细胞移植和甲基强的松龙单独应用均可以显著促进急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复。二者联合促进急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复的效果更加显著。     

大鼠脊髓全横断损伤模型的建立

目的建立一种实用、可靠的大鼠脊髓全横断损伤模型。方法55只SD大鼠随机分为假手术组及脊髓全横断损伤组,横断组选择T12节段横断大鼠脊髓。分别于术后24h、7d及21d取L2节段制成20μm冰冻切片行HE染色,并记录其后肢运动功能评分(BBB评分)。结果脊髓全横断大鼠双下肢运动功能BBB评分在同一时间点之间相比明显低于假手术组,差别有统计学意义(P<0.01)。而且,脊髓横断以下节段出现大量空泡,神经元数量明显减少,胶质细胞明显增生,以腹角为甚;全横断组腹角神经元计数与假手术组在同一时间点比较有明显差异(P<0.01)。大鼠的30天存活率达72%。结论本方法为一种稳定可靠,操作简单的大鼠脊髓全横断模型制作法。     

骨髓间充质干细胞移植脊髓全横断模型大鼠运动和体感诱发电位的评价

背景：临床常用皮质运动诱发电位和皮质体感诱发电位来分别评价脊髓损伤后运动传导路和感觉传导路的损伤或修复情况。 目的：以脊髓诱导电位监测骨髓间充质干细胞移植后急性脊髓完全性损伤大鼠下肢神经功能的变化。 方法：选取健康Wistar大鼠50只，分成5组，即生理盐水组、骨髓间充质干细胞移植组、脑源性神经营养因子修饰组、神经营养素3+骨髓间充质干细胞移植组和假手术组。除假手术组外，其余各组均制作Allen’s脊髓完全性损伤动物模型，造模后各组均行相应治疗。治疗后4，8和12周行大鼠后肢运动功能评分，并于造模后24 h，3，7，14 d行运动和体感诱发电位检测。 结果与结论：运动诱发电位检测结果提示，各治疗组的运动功能均有不同程度的恢复，与生理盐水组间差异均有显著性意义(P < 0.05)，大鼠后肢BBB评分也证实了各治疗组后肢运动功能明显优于生理盐水组(P < 0.05)。提示经脑源性神经营养因子修饰的骨髓间充质干细胞可移植到脊髓损伤处，可改善大鼠的后肢运动，神经营养素3蛋白有可能提高骨髓间充质干细胞在体内的生存率，促进受损脊髓的轴突再生。     

自体肋间神经联合酸性成纤维细胞生长因子移植治疗高位脊髓损伤

背景：酸性成纤维细胞生长因子具有调节细胞增殖、移行、分化和生存的作用,也可以下调已知轴突再生的抑制因子如蛋白聚糖等,帮助轴突克服这些抑制因子,对神经纤维再生有重要作用。 目的：观察酸性成纤维细胞生长因子联合周围神经移植治疗大鼠高位脊髓损伤的可行性及效果。 方法：健康成年雌性SD大鼠108只随机抽签法分为自体神经组、自体神经联合生长因子组、高位脊髓横断组。咬除大鼠T8~10棘突、椎板,显露硬膜囊,水平切断高位脊髓并切除3 mm,显微镜下确认无神经纤维相连。自体神经组、自体神经联合生长因子组取双侧第8~10对肋间神经各2 cm,将肋间神经交叉移植入高位脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),分别以纤维蛋白凝胶、含有酸性成纤维细胞生长因子的纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,缝合硬膜。高位脊髓横断组断端间旷置。术后90 d,行体感诱发电位及运动诱发电位检测观察神经电生理恢复情况。术后76 d,生物素葡聚糖胺顺行神经示踪观察运动传导束恢复情况。术后60 d,后肢BBB运动功能评分观察肢体运动恢复情况。 结果与结论：高位脊髓横断组大鼠均未引出体感及运动诱发电位波形。自体神经组、自体神经联合生长因子组均可引出体感及运动诱发电位,自体神经联合生长因子组体感诱发电位及运动诱发电位的平均潜伏期和波幅、BBB评分均明显优自体神经组(P < 0.01)。自体神经组和自体神经联合生长因子组在损伤区有较多生物素葡聚糖胺标记阳性神经纤维通过,明显多于高位脊髓横断组(P < 0.01),自体神经联合生长因子组多于自体神经组(P < 0.01)。提示自体周围神经移植酸性成纤维细胞生长因子能更好地恢复高位脊髓损伤后大鼠肢体运动功能。     

周围神经联合生长因子移植治疗急性脊髓损伤

背景：目前促进神经再生与修复的策略也主要是通过促进神经内在的再生能力和改善再生的微环境两大途径,已有的研究表明联合应用一些治疗手段能更好地促进神经轴突的再生生长。 目的：探讨周围神经联合生长因子移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性及效果。 方法：健康成年雌性SD大鼠60只,随机数字表法分为4组：神经移植组、神经移植联合生长因子组、脊髓横断组、椎板切除组。以T9为中心纵行切开大鼠皮肤,显露硬膜囊,水平切断脊髓并切除3mm,神经移植组、神经移植联合生长因子组取双侧第8~10对肋间神经各2 cm,将自体肋间神经修剪成合适长度后交叉移植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),神经移植组用纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,神经移植联合生长因子组用含有2.1 mg/L 酸性成纤维细胞生长因子的纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,缝合硬膜。脊髓横断组断端间旷置,椎板切除组仅行椎板切除术。术后90 d进行体感及运动诱发电位检测,术后70 d进行Basso.Beattie.Bresnahan(BBB)后肢运动功能评分。 结果与结论：椎板切除组均引出了体感及运动诱发电位;脊髓横断组未引出体感及运动诱发电位波形;神经移植组3只引出双侧体感诱发电位,4只引出单侧体感诱发电位,4只引出双侧运动诱发电位,3只引出单侧运动诱发电位,神经移植联合生长因子组5只引出双侧体感诱发电位,2只引出单侧体感诱发电位,神经移植联合生长因子组5只引出双侧运动诱发电位,2只引出单侧运动诱发电位。神经移植组、神经移植联合生长因子组大鼠体感及运动诱发电位潜伏期及波幅明显优于脊髓横断组(P < 0.01),自体肋神经移植联合生长因子组优于神经移植组(P < 0.01)。椎板切除组大鼠麻醉清醒后运动恢复正常, 脊髓横断组在3个月的生存期内后肢持续伸展、旋转,神经移植组和神经移植联合生长因子组大鼠后肢功能术后3周开始明显恢复,并在整个观察期内逐渐恢复。神经移植组和神经移植联合生长因子组BBB后肢运动功能评分较脊髓横断组明显提高(P < 0.01),并且神经移植联合生长因子组较神经移植组高(P < 0.01)。提示单纯周围神经移植能部分恢复脊髓功能,联合生长因子则能更好地恢复脊髓功能。     

miR-138对脊髓全横断大鼠行为学的影响

目的探讨miR-138在脊髓全横断大鼠运动功能恢复过程中是否发挥调控作用。方法打开SD大鼠T9-T11椎板,脊髓内分别注射miR-138、DEPC处理水后制备脊髓全横断模型实验组与对照组。术后3d、65d取材,观察脊髓红肿范围、瘢痕长度;期间进行BBB运动功能评分;术后30d应用体感诱发电位(SEP)检测神经功能恢复情况。结果第5～9周miR-138组大鼠BBB评分明显低于对照组(P<0.05)。对照组后肢有运动的大鼠所占比例逐渐增多,而miR-138组该比例未见增加(27.03±16.2,6.5±11.72)(P<0.05)。SEP显示miR-138组大鼠左后肢均未测出潜伏期和波幅,右后肢潜伏期和波幅检出率均为16.7%,明显低于对照组(P<0.05)。术后3dmiR-138组脊髓横断处头端红肿长度较对照组增加(P<0.05)。术后65d脊髓横断处瘢痕明显,与周围软组织及椎骨粘连。miR-138组与对照组比较,瘢痕长度(1.07±0.21,1.03±0.12)cm及周长(1.00±0.17,1.05±0.09)cm均无显著性差异(P>0.05)。结论脊髓全横断大鼠局部应用miR-138后运动功能恢复较对照组...     

驽药针刺对大鼠脊髓损伤后运动功能及BDNF表达的影响

目的研究驽药针刺在大鼠脊髓损伤后运动功能变化以及BDNF表达的变化。方法采用脊髓半横断损伤模型。100只SD大鼠随机分为对照组、假手术组、脊髓损伤组、单纯针刺组、驽药针刺组,每组分为3天、7天、14天、21天共4个亚组,每组5只。BBB法评定大鼠后肢运动功能变化,免疫组化法检测大鼠脊髓中BDNF的表达变化。结果 BBB评分显示驽药针刺组的各时间点评分均高于脊髓损伤组(P0.05),驽药针刺组7、14、21d的BDNF表达均高于脊髓损伤组(P0.05),且与BBB评分呈正相关(r=0.717,P0.05)。结论驽药针刺可明显改善脊髓损伤大鼠的运动功能,并可明显促进大鼠脊髓损伤后BDNF的表达。     

重复经颅磁刺激对急性脊髓损伤大鼠运动功能的影响

目的 探讨重复经颅磁刺激对急性脊髓损伤大鼠运动功能的影响. 方法 24只SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、脊髓损伤对照组(对照组)、脊髓损伤高频磁刺激组(高频组)、脊髓损伤低频磁刺激组(低频组),每组6只.利用重物撞击法制作T10脊髓损伤模型.磁刺激组于手术后24 h开始给予刺激,高频组频率为10Hz,低频组频率为1 Hz,均为阈值刺激.500个脉冲,每天1次,连续4周,脊髓损伤对照组给予假刺激.各组大鼠分别于术后1 d、3d、7d、11 d、14d、21 d、28 d进行BBB行为学评分,于14、28 d时检测运动诱发电位(MEP),应用HE染色观察脊髓组织形态学变化,并应用免疫组织化学法检测神经丝蛋白(NF-200)表达变化. 结果 高频组、低频组大鼠BBB评分明显高于对照组,高频组BBB评分明显高于低频组,差异均有统计学意义(P<0.05).高频组、低频组运动诱发电位潜伏期较短,与对照组、正常组相比差异均有统计学意义(P<0.05);其中高频组较低频组短,差异有统计学意义(P<0.05).高频组、低频组NF-200表达较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);其中高频组较低频组高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 重复经颅磁刺激可以促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,其机制可能与促进轴突再生有关.高频组较低频组效果明显可能与调节大脑皮层兴奋性有关.     

聚乳酸-乙醇酸支架移植对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动能力和运动诱发电位的影响

目的 观察聚乳酸-乙醇酸（Poly-Lactic-co-glycolicacid,PLGA）支架对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的影响。方法 雌性成年Wistar大鼠随机分为正常组（n=15）、假手术组（n=15）、脊髓半横断（hemisectedspinal cord injury,hSCI）组（n=15）和脊髓半横断移植PLGA（PLGA）组（n=15）,术后进行行为学评分：BBB评分（Basso Beattie Bresnahan locomotor rating scale）和斜板（inclined plane,IP）试验,并观察皮层运动诱发电位（motor evoked ptentials,MEPs）的改变。结果 第4周时PLGA组BBB评分高于hSCI组（7.9±1.2 vs 7.1±1.3,P =0.042）;在第4、8周时PLGA组IP评分高于hSCI组（56.0±2.0 vs 54.7±2.3,P =0.030;64.7±2.4 vs 62.3±2.3,Ｐ＝0.038）;在第12周时PLGA组MEPs波幅高于hSCI组（29.9±11.0μV vs 21.4±10.4μV,P =0.039）。结论 PLGA支架移植能促进脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和电生理功能的恢复。     

接受嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠电生理及后肢功能变化

背景：研究证实嗅鞘细胞有利于神经元存活,并可促进轴突再生。 目的：探讨嗅鞘细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的效果。 方法：健康成年雌性SD大鼠40只,随机分为盐水对照组、细胞移植组,20只/组。另取10只SD大鼠用于嗅鞘细胞的分离培养。盐水对照组、细胞移植组大鼠均建立脊髓损伤模型,取双侧第8~10对肋间神经各2 cm,交叉植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),细胞移植组局部注射嗅鞘细胞2×106个,盐水对照组局部注射等量无菌生理盐水。通过体感诱发电位和运动诱发电位的检测,观察神经电生理恢复情况;BBB后肢运动功能评分结果;通过BDA顺行神经示踪,观察运动传导束恢复情况。 结果与结论：细胞移植组大鼠体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期、波幅明显优于盐水对照组(P < 0.01);细胞移植组大鼠BBB后肢运动功能评分较生理盐水组明显提高(P < 0.01);细胞移植组脊髓损伤区有较多BDA标记阳性神经纤维通过,其数量明显多于盐水对照组(P < 0.01)。证实局部注射嗅鞘细胞可以较好地恢复大鼠脊髓损伤后的神经电生理及后肢运动功能。     

大鼠实验性脊髓损伤后胶质瘢痕分布规律研究

目的观察慢性脊髓损伤胶质瘢痕形成的时间与空间分布特征。方法应用Allen′s法建立大鼠脊髓打击伤模型,通过神经功能评分、体感及运动诱发电位、组织病理学及免疫荧光双标记方法确定胶质瘢痕形成时间及分布。结果神经功能评分、诱发电位、组织病理学显示伤后4周进入相对稳定状态,伤后4周损伤区形成空洞,胶质瘢痕位于空洞壁。结论脊髓损伤后4周进入慢性期,研究伤后脊髓空洞及胶质瘢痕形态,为判断切除胶质瘢痕的界限提供形态学依据。     

运动诱发电位联合体感诱发电位监测在脊髓髓内肿瘤手术中的应用

目的 探讨全静脉麻醉下运动诱发电位(MEP)联合体感诱发电位(SEP)术中监测应用于脊髓髓内肿瘤手术的优越性、可靠性及临床应用价值.方法 对72例脊髓髓内肿瘤患者术中行SEP和MEP联合监测,参照McCormick评分标准对术前、术后脊髓功能的改变和诱发电位变化之间的关系进行统计分析.结果 14例脊髓神经功能改善,18例术后脊髓神经功能下降者与诱发电位监测结果具有一致性(P＜0.05).结论 对脊髓髓内肿瘤手术进行SEP与MEP监测有利于避免"假阴性/假阳性"结果及术后神经功能障碍的发生.     

Evoked potential versus behavior to detect minor insult to the spinal cord in a rat model

Reliable outcome measurement is needed for spinal cord injury research to critically evaluate the severity of injury and recovery thereafter. However, such measurements can sometimes be affected by minor, injury to the spinal cord during surgical procedures, including laminectomy. The open-field Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) behavior motor scores are subjective and prone to human error. We investigated somatosensory evoked potential (SEP) as an electrophysiological measure to assess the integrity of the spinal cord after injury. In our experiment, control rats with a minor unintentional spinal cord insult during laminectomy showed a decrease in SEP amplitude by 16% to 18%, which recovered in around 7 days. However, there was no change in the BBB scores for the same animals over the same period. This highlights the sensitivity of SEP to minor insult as compared to BBB. These differences may be beneficial in accurate evaluation of the severity and progression of spinal cord injury, and subsequent recovery.     

Evoked potential and behavioral outcomes for experimental autoimmune encephalomyelitis in Lewis rats

A reliable outcome measurement is needed to assess the effects of experimental lesions in the rat spinal cord as well as to assess the benefits of therapies designed to modulate them. The Basso, Beattie, and Bresnahan (BBB) behavioral scores can be indicative of the functionality in motor pathways. However, since lesions are often induced in the more accessible dorsal parts associated with the sensory pathways, the BBB scores may not be ideal measure of the disability. We propose somatosensory evoked potential (SEP) as a complementary measure to assess the integrity of sensory pathways. We used the focal experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, in which focal demyelinating lesions were induced by injecting cytokine-ethidium bromide into dorsal white matter after MOG-IFA immunization. Both the SEP and BBB measures reflected injury; however, the SEP was uniformly and consistently altered after the injury whereas the BBB varied widely. The results suggest that the SEP measures are more sensitive and reliable markers of focal spinal cord demyelination compared to the behavioral measures like the BBB score.     

脊髓半切动物模型的制作及SEP和MEP监测

目的:研究可靠的脊髓半切动物模型的制作方法和损伤后SEP和MEP的变化。方法:选用30只SD雄性大鼠.随机分成3 组,正常对照组、假手术组和脊髓半切组各10只。脊髓半切在手术显微镜下进行。脊髓半切分3步:定位中线、脊髓横旋切和确认半切。脊髓半切后2 h进行SEP和MEP检查,动物完全清醒后进行患侧后肢运动功能评价。结果:所有动物均成功进行脊髓半切, 脊髓半切侧的下肢完全瘫痪,对侧下肢受影响不明显。动物清醒后能自行排尿,无腹胀、血尿等。完全半切侧检验不到MEP和SEP;而未损伤侧的MEP波幅稍有下降,但与正常对照组和假手术组相比差异无统计学意义;未损伤侧与正常组、假手术组之间的MEP潜伏期以及SEP潜伏期和波幅的差异也无统计学意义。结论:脊髓半切的"三步法"准确而完全,是制作该动物模型简单有效的方法。MEP可能比SEP更敏感和可靠,更适合用于脊髓半切后半切是否完全和准确以及脊髓功能的客观判定指标之一。     

胎鼠神经干细胞局部注射移植大鼠高位脊髓损伤缺损处：体感及运动诱发电位与后肢运动功能评价

背景：如何促进脊髓损伤后的神经再生和功能恢复始终是医学界一大难题,胚胎神经干细胞有利于神经元的存活,并能促进轴突再生。 目的：观察胚胎鼠神经干细胞局部注射移植治疗高位脊髓损伤大鼠的可行性,以神经电生理及后肢运动功能评分评价其效果。 设计、时间及地点：细胞学体内实验,于2007-06/2008-06在哈尔滨医科大学动物实验中心完成。 材料：健康成年雌性SD大鼠40只,随机分为生理盐水组、细胞移植组,20只/组。另取孕14 d的SD大鼠5只用于制备胚胎神经干细胞。 方法：生理盐水组、细胞移植组大鼠均建立高位脊髓损伤模型,取双侧第8~10对肋间神经各2 cm,交叉植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),细胞移植组局部注射鼠胚胎神经干细胞2×106个,生理盐水组局部注射等量无菌生理盐水。 主要观察指标：通过体感诱发电位和运动诱发电位的检测,观察神经电生理恢复情况;通过BDA顺行神经示踪,观察运动传导束恢复情况;BBB后肢运动功能评分结果。 结果：细胞移植组大鼠体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期、波幅明显优于生理盐水组(P < 0.01);细胞移植组大鼠在损伤区有较多BDA标记阳性神经纤维通过,而生理盐水组未见BDA标记阳性神经纤维;细胞移植组大鼠BBB后肢运动功能评分较生理盐水组明显提高(P < 0.01)。 结论：胎鼠神经干细胞局部注射可以较好地恢复高位脊髓损伤后的神经电生理及后肢运动功能。