糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）,计算稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）;qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平。结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR（ P <0.01）,除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI（ P <0.01）,3组FINS水平无显著性差异（ P >0.05）。与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少（ P <0.01）,中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少（ P <0.01）。结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达。      

4-PBA抑制内质网应激降低间质性膀胱炎大鼠膀胱兴奋性

目的 探讨内质网应激在大鼠间质性膀胱炎发病过程中的作用,以及4-PBA的治疗价值.方法 45只雌性SD大鼠按随机数字表法分为3组:对照(C)组、炎症(IC)组和炎症+4-PBA(IC+4-PBA)组,每组15只.C组用生理盐水处理;IC组用鱼精蛋白联合LPS诱导;IC+ 4-PBA组由炎症模型建立时予以内质网应激抑制剂4-PBA处理.5d后应用Western blot分别测定内质网应激标记物(GRP78)、自噬流标记物(P62)、自噬标记物(LC3A/B、Beclin1)的表达量;免疫荧光检测膀胱LC3A/B的表达;HE染色检测膀胱组织病理学变化;尿动力学检测膀胱功能改变.结果 IC组GRP78、P62、LC3A/B、Beclin1表达显著高于C组(P＜0.05);4-PBA+IC组GRP78、P62、LC3A/B、Beclin1表达显著低于IC组;免疫荧光结果显示IC+ 4-PBA组LC3A/B表达显著低于IC组且高于C组(P＜0.05);HE染色结果显示IC+ 4-PBA组膀胱上皮组织完整性,炎细胞浸润和组织水肿程度都较IC组明显改善;在膀胱功能学上,IC+ 4-PBA组大鼠较IC组排尿频率显著降低,排尿间隔显著延长.结论 在鱼精蛋白联合LPS诱导的大鼠间质性膀胱炎模型中,使用4-PBA抑制膀胱内质网应激恢复自噬流有可能降低膀胱兴奋性,改善膀胱功能.     

参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激因子GRP78、PERK及CHOP表达的影响

目的观察参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激标志性因子GRP78、PERK 及CHOP 表达的影响。方法将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（Sham 组）、模型组（DN 组）和参芍口服液组（SS 组）。DN组和SS 组予以高脂饲料加链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病肾病模型。SS 组每日1 次给予参芍口服液（250 mg/kg）灌胃,Sham 组和DN 组每日1 次给予等剂量的蒸馏水灌胃。12 周后检测各组血糖、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及24 h尿蛋白定量（PRO）;HE染色光镜下观察大鼠肾组织病理形态学改变;Western blot检测大鼠肾组织GRP78、PERK 及CHOP 蛋白表达情况;TUNEL 染色检测大鼠肾组织细胞凋亡情况。结果DN组血糖、BUN、Scr及PRO与Sham组相比均增高,SS组血糖、BUN、Scr及PRO 与DN组相比均降低（P <0.05）。HE发现Sham 组大鼠肾组织形态结构清楚,未见异常;DN 组可见肾小球体积增大,可见大量炎症细胞浸润,肾小球系膜基质区增生,肾小管基底膜增厚,部分肾小球、肾小管出现纤维化;SS 组肾组织病理形态变化轻于DN组。Western blot发现DN组肾脏组织GRP78、PERK 及CHOP 蛋白表达高于Sham 组,SS 组肾组织GRP78、PERK 及CHOP 蛋白表达均低于DN 组（P <0.05）。TUNEL发现DN组较Sham 组肾脏组织存在更多细胞凋亡;SS 组凋亡细胞少于DN组。结论参芍口服液可减轻糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害,延缓肾功能减退,具有肾保护作用,其机制可能与降低内质网应激相关因子GRP78、PERK 及CHOP的表达及减少肾组织细胞凋亡有关。     

CaMKⅡ活性抑制降低内质网应激诱导的大鼠心肌细胞死亡

目的探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（CaMK）Ⅱ与内质网应激诱导的大鼠心肌细胞死亡的相关性。方法以成年SD大鼠心肌细胞为研究对象,使用毒胡萝卜素、衣霉素和brefeldin A诱导心肌细胞内质网应激,用碘化丙啶染色评价心肌细胞存活率,观察心肌细胞死亡情况。Western blot检测葡萄糖调节蛋白（GRP）78和DNA核苷酸序列CCAAT增强子结合蛋白（C/EBP）同源蛋白（CHOP）的表达。通过GRP78和CHOP上调评价内质网应激反应。结果毒胡萝卜素、衣霉素和brefeldin A呈时间和剂量依赖方式诱导内质网应激反应和心肌细胞的死亡（P〈0.01）,使GRP78和CHOP蛋白表达上调（P〈0.05）,KN93和AIP阻断CaMKⅡ活性后,GRP78和CHOP蛋白表达与各自的未阻断对照组相比下调（P〈0.05）,内质网应激反应减弱,内质网应激诱导的细胞死亡减少（P〈0.05）。结论毒胡萝卜素、衣霉素和brefeldin A诱导的内质网应激可能是通过CaMKⅡ依赖途径介导大鼠心肌细胞死亡。CaMKⅡ可能是治疗心肌梗死或防治心衰的新靶点。     

姜黄素对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝损伤中内质网应激的影响

目的探讨姜黄素预给药对脂多糖/D-氨基半乳糖（D-GalN）诱导大鼠急性肝损伤中内质网应激（ERS）的影响。方法30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、肝损组、姜黄素组,每组10只。在造模前5d,姜黄素组按5ml/kg灌饲姜黄素溶液（姜黄素溶于0.5%羧甲基纤维素钠中）,正常对照组、肝损组按5ml/kg灌饲0.5%羧甲基纤维素钠溶液,1次/d,连续5d。肝损组、姜黄素组采取腹腔注射含脂多糖（8滋g/kg）+D-GalN（800mg/kg）的0.9%氯化钠注射液800滋l制作急性肝损伤动物模型,正常对照组大鼠腹腔注射800滋l0.9%氯化钠注射液;模型建立12h后处死大鼠并收集血清及肝组织,检测并比较3组大鼠血清肝功能指标、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,HE染色观察肝组织病理学变化,TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况,Westernblot法检测肝组织内ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）表达量。结果正常对照组大鼠肝组织未见明显病变;肝损组大鼠部分肝细胞坏死,坏死的肝细胞核碎裂、胞质深染,坏死区可见较多炎细胞浸润;姜黄素组大鼠肝组织内坏死细胞较肝损组明显减少。与正常对照组比较,肝损组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,GRP78、CHOP蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）,SOD水平明显降低（P＜0.05）;姜黄素组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,CHOP蛋白表达水平也明显升高（均P＜0.05）,SOD水平、GRP78蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与肝损组比较,姜黄素组大鼠血清ALT、AST、MDA水平,肝细胞凋亡指数,GRP78、CHOP蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.05）,SOD水平明显升高（P＜0.05）。结论姜黄素可能通过抑制ERS反应对脂多糖/D-GalN诱导大鼠的急性肝损伤起保护作用。     

GRP78和CHOP蛋白表达增加与脓毒性休克大鼠肺血管通透性改变的关系

目的研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法 42只成年SD大鼠,雌雄各半,体质量200～220 g,随机分为3组:①假手术组;②盲肠造瘘组,按照术后时间长短盲肠造瘘组又分为术后1、2、4、6、8 h等5个亚组;③盲肠造瘘+牛磺酸组(n=6)。用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白注入肺组织,在术后1、2、4、6、8 h时分别取各组相应大鼠肺脏,牛磺酸干预组于术后6 h取出,生理盐水进行肺灌洗,观察其荧光物质渗透率的变化测量肺毛细血管通透性;Western blot方法测量肺血管内皮细胞GRP78和CHOP蛋白的表达并对各组进行比较。结果①大鼠盲肠造瘘术后1、2、4、6、8 h后GRP78和CHOP蛋白表达均呈递增趋势[(P(GRP78)<0.05;P(CHOP)<0.05],肺血管荧光物质渗透率也随着时间的延长呈直线递增的趋势(P=0.006<0.05),盲肠造瘘组各组GRP78和CHOP蛋白的表达与肺血管荧光物质渗透率的改变呈正相关(R2=0.785,P<0.05;R2=0.881,P<0.05);②牛磺酸处理后,6 h点肺血管荧光物质渗透率显著低于单纯盲肠造瘘术后(P=0.007<0.05),GRP78和CHOP蛋白的表达也较盲肠造瘘组低(P=0.004<0.05)。结论脓毒性休克内质网应激参与了血管通透性增高的发生,GRP78和CHOP蛋白为重要的参与分子。     

The expression of endoplasmic reticulum stress in recovery of CCl4 induced liver fibrosis in rat

目的 探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用.方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化.结果 与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05).与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05).结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系.     

PM诱导支气管上皮细胞炎症反应及内质网应激机制研究

目的探讨细颗粒物（PM）诱导气道炎症中支气管上皮细胞内质网应激（ERS）现象和氧化应激的调控机制。方法雄性C57BL/6小鼠用4mg/kgPM连续气道滴注2d,构建动物模型。获取空白组和PM组小鼠肺组织进行病理分级评分;采用Westernblot法检测肺组织葡萄糖调节蛋白前体78（GRP78）和CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）的相对表达量,采用免疫组化法检测GRP78和CHOP的累计光密度值,采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定肺组织中丙二醛（MDA）质量摩尔浓度。获取肺泡灌洗液,ELISA法检测IL-6、IL-8和前列腺素E2（PGE2）的分泌水平。用100、200、400mg/LPM和2.5mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC）、200mg/LPM与支气管上皮细胞BEAS-2B共培养,构建细胞模型。检测各组细胞活性氧（ROS）变化。Westernblot法检测NAC干预下的BEAS-2B中GRP78和CHOP表达变化,ELISA法检测炎症介质分泌水平。结果气道滴注PM诱导C57BL/6小鼠支气管病理形态学改变,肺组织GRP78、CHOP表达升高（P＜0.05）,肺组织MDA质量摩尔浓度升高（P＜0.05）,伴随肺泡灌洗液中IL-6、IL-8和PGE2分泌增多（P＜0.05）。细胞模型中,PM作用下各组细胞ROS表达水平均升高（均P＜0.05）。NAC干预后细胞ROS表达水平降低（P＜0.05）,CHOP/GRP78相对表达量降低（P＜0.05）,IL-6、IL-8和PGE2分泌水平降低（P＜0.05）。结论PM诱导的支气管上皮细胞炎症中存在内质网应激现象,其调控机制为氧化应激。     

宫颈癌细胞系中HPV 感染与GRP78、JNK 及 CHOP 表达的相关性分析

目的 探讨宫颈癌细胞系中HPV（HPV）感染状态与内质网应激相关蛋白表达之间的相关性。 方法 采用免疫组织化学法、Western blot、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测GRP78、JNK 及 CHOP 蛋白和mRNA 在HPV16（+）Siha、HPV18（+）Hela 及HPV（-）C33a 3 种宫颈癌细胞系中的表达 水平,并采用统计学分析其表达的差异性。结果 免疫组织化学法结果显示,GRP78 蛋白在高危型HPV16（+） Siha 和HPV18（+）Hela 的表达高于HPV（-）C33a（P <0.05）,内质网应激相关蛋白JNK、CHOP 在HPV16 （+）Siha 和HPV18（+）Hela 的表达高于HPV（-）C33a（P <0.05）。RT-PCR 及Western blot 结果显示, GRP78、JNK 及CHOP mRNA 及蛋白表达在HPV16（+）Siha 和HPV18（+）Hela 细胞株中高于HPV（-） C33a 细胞株（P <0.05）。结论 宫颈癌中GRP78 和内质网应激相关蛋白JNK、CHOP 的表达与HPV 亚型相关, 内质网应激相关蛋白可能参与了宫颈癌的发生与发展。     

大鼠肝纤维化进程中内质网应激相关蛋白的动态变化研究

目的探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05)。与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05)。结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系。