阿司匹林增加人肝癌细胞对三氧化二砷敏感性的实验研究及机制探讨

目的 研究阿司匹林能否增加肝癌细胞对三氧化二砷（As2O3）的敏感性,并从氧化应激角度探索其增敏的机制。方法 采用10 μmol/L As2O3和不同浓度的阿司匹林联合处理人肝癌细胞HepG2 24 h后,采用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧（ROS）水平,Western blot检测总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）和核蛋白中核转录因子Nrf2的表达水平。结果 与空白对照相比,10 μmol/L As2O3可引起肝癌细胞存活率降低,凋亡率、ROS水平、HO-1和Nrf2表达升高;不同浓度（0.1、1.0、2.5、5.0 mmol/L）的阿司匹林与10 μmol/L As2O3联合处理时,HepG2细胞存活率、总蛋白HO-1以及核内Nrf2的表达均随着阿司匹林浓度的增加呈现先升高后降低的趋势,而细胞凋亡率和细胞内ROS水平则表现为先降低后升高。结论 阿司匹林对As2O3的增敏作用有限,只有在较高浓度（5 mmol/L）时表现出一定的增敏作用,其增敏机制可能是通过抑制Nrf2-HO-1途径从而导致ROS蓄积,增强As2O3对HepG2的凋亡诱导能力,进而增加HepG2对As2O3的敏感性。     

亚砷酸钠对NE-4C细胞Nrf2 及Hippo信号通路的影响

目的 探讨亚砷酸钠对NE-4C细胞的核因子-类胡萝卜素2相关因子(nf-e2-related factor 2,Nrf2)通路及河马(Hippo)信号通路的影响。方法 以不同浓度亚砷酸钠干预细胞48h,采用CCK-8法检测细胞活力;分别采用Western blot法检测亚砷酸钠对NE-4C细胞Nrf2通路相关蛋白的影响,qRT-PCR检测亚砷酸钠对NE-4C细胞Hippo信号通路相关分子mRNA表达的影响。结果 亚砷酸钠干预NE-4C细胞48h后,除0.2、0.4μmol/L组外,各干预组细胞活力随亚砷酸钠浓度的增加而降低;亚砷酸钠干预后抗氧化蛋白指标Nrf2、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达升高,Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)蛋白表达降低,呈剂量依赖性,提示亚砷酸钠可诱导NE-4C细胞产生氧化应激进而激活抗氧化系统;Hippo信号通路核心分子哺乳动物STE20激酶(mammalian STE20-like protein kinase 1,MST1)、Salvador同系物1(salvador homolog 1,SAV1)、Mps结合激酶激活物1(Mps once binder kinase activator like 1,MOB1)、大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor homolog 1,LATS1)、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP) mRNA的表达水平随亚砷酸钠浓度的增加而升高。结论 亚砷酸钠可抑制NE-4C细胞增殖,诱导细胞产生氧化应激并激活Hippo信号通路。     

染料木黄酮对人血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 观察染料木黄酮(genistein, Gen)对人血管内皮细胞株EA hy.926氧化应激损伤保护效应并探讨其机制.方法 用H2O2建立氧化应激损伤模型,CCK-8法检测Gen对细胞活力的影响;流式细胞仪和TUNEL法检测Gen对氧化应激诱导细胞凋亡的影响;Western blot检测Gen对Bcl-2、Nrf2、HO-1表达的影响.结果 H2O2明显影响细胞活力和诱导凋亡(IC50为650 μmol/L),Gen(100～500 nmol/L)处理能显著抑制细胞活力下降,且细胞凋亡率由16.54%下降为6.18%;Gen对Bcl-2有上调作用;Gen能激活Nrf2/HO-1抗氧化途径.结论 Gen抑制血管内皮细胞的氧化应激损伤与对Bcl-2的调节和Nrf2/HO-1抗氧化途径的激活有关.     

大蒜素对人脐静脉细胞抗氧化损伤保护作用

目的：研究大蒜素（Allicin）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护作用及其作用机理。方法建立H2O2诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型;采用MTT、RT-PCR、Western-blot等方法检测来探究大蒜素对其保护作用与可能作用机制。结果大蒜素能够减少H2O2诱导HUVEC的凋亡;使基因eNOS的表达显著增加;使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加,Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用,对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。     

黄芪甲苷通过调控Keap1-Nrf2-ARE信号通路减轻PM2.5诱导的肾小管上皮细胞氧化损伤

目的 探讨黄芪甲苷减轻细颗粒物2.5(particulate matter 2.5,PM2.5)所致肾小管上皮细胞氧化损伤的作用及分子机制。方法 将HK-2细胞分为5组：对照组（仅磷酸盐缓冲液处理）、模型组（200 μg/mL PM2.5处理24 h）、黄芪甲苷低剂量组（200 μg/mL PM2.5及10 nmol/L黄芪甲苷共同处理24 h）、黄芪甲苷中剂量组（200 μg/mL PM2.5及100 nmol/L黄芪甲苷共同处理24 h）、黄芪甲苷高剂量组（200 μg/mL PM2.5及200 nmol/L黄芪甲苷共同处理24 h）。采用流式细胞术和TUNEL检测不同方法处理的HK-2细胞凋亡情况,采用EdU实验和CCK8实验检测细胞增殖情况,采用Western blot检测不同方法处理的HK-2细胞中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1）-核因子红细胞相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)-抗氧化反应元件（antioxident response element, ARE）信号通路相关蛋白的表达水平。结果 流式细胞术和TUNEL染色结果显示,黄芪甲苷显著抑制PM2.5导致的肾小管上皮细胞凋亡,其抑制效果随黄芪甲苷浓度的增加而增加。CCK8检测结果和EdU细胞增殖检测结果显示,黄芪甲苷显著促进肾小管上皮细胞增殖,细胞活力随黄芪甲苷浓度的增加而增加。进一步检测显示,黄芪甲苷显著抑制PM2.5导致的肾小管上皮细胞活性氧和丙二醛水平升高,并显著促进超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平的升高。Western blot结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷处理显著提高总Nrf2、核Nrf2、血红素氧化酶-1以及NAD（P）H醌脱氢酶1（NQO1）水平（P＜0.05）。结论 黄芪甲苷通过调控Keap1-Nrf2-ARE信号通路减轻PM2.5导致的肾小管上皮细胞氧化损伤。     

Nrf2/NQO1信号通路在胃癌干细胞氧化应激反应中的作用机制

目的：观察核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)在胃癌干细胞和正常胃黏膜组织中的表达,探讨Nrf2/NQO1信号通路在胃癌干细胞氧化应激反应中的作用机制。方法：采用肿瘤球悬浮分选法从60例胃癌组织标本中分选胃癌干细胞,干细胞随机分为干细胞初分组和激活组。30例正常胃黏膜组织作为对照。采用Western blotting法检测各组Nrf2、NQO1蛋白表达水平和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。结果：与正常对照组比较,干细胞初分组和激活组Nrf2、NQO1的表达水平升高(P<0.05),SOD活性显著降低,MDA活性则显著升高(P<0.05);与干细胞初分组比较,激活组Nrf2、NQO1的表达水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著增强,MDA活性显著下降(P<0.05)。结论：激活Nrf2/NQO1通路可以调节胃黏膜组织中SOD和MDA的活性,增强细胞对氧化应激的耐受性,发挥保护细胞的作用。     

Nrf2通路在创伤性脑损伤中保护作用的研究进展

在氧化应激状态下,转录因子Nrf2从细胞质转移入细胞核,与抗氧化反应元件结合调节多种保护性细胞因子表达,从而增强细胞对氧化应激的抵抗能力。研究表明,Nrf2通路在创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后激活,抑制继发性脑损伤而发挥脑保护作用。而Nrf2基因敲除小鼠比野生型小鼠在TBI后炎性细胞因子表达增强,抗氧化和解毒酶活力下降,神经元钙超载、凋亡及脑水肿加重,神经功能缺失加重。以上研究提示,Nrf2通路在TBI中具有脑保护作用,另外,该通路还具有对TBI后继发性急性肺损伤、肠道屏障功能破坏的保护作用。Nrf2激活剂能减轻TBI后继发性脑损伤、维持血脑屏障功能、减轻脑水肿而发挥保护作用。     

右美托咪定减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤的作用

目的 探索右美托咪定(Dex)后处理对脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤及转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和Dex组各10只.模型组和Dex组参照改良Longa法制备脑动脉缺血再灌注模型.Dex组于再灌注即刻腹腔注射100μg/kg的Dex(浓度为10 mg/L).再灌注24 h后,对各组大鼠进行神经功能缺失评分;TTC染色法检测大鼠脑梗死体积分数;ELISA法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的水平;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO-1)的表达水平;HE染色和TUNEL染色检测脑组织损伤.结果 与假手术组相比,模型组和Dex组大鼠神经功能缺失评分、细胞凋亡率、MDA和NO水平升高(P<0.05),脑组织SOD活性下降(P<0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1、cleaved caspase-3/Bcl-2、Bax/Bcl-2的表达上调(P<0.05);与模型组相比,Dex组大鼠神经功能缺失评分和脑梗死体积分数、细胞凋亡率、MDA和NO水平下降(P<0.05),脑组织SOD活性升高(P<0.05),Nrf2、HO-1、NQO-1的表达上调(P<0.05),cleaved caspase-3/Bcl-2、Bax/Bcl-2的表达下调(P<0.05),HE染色显示脑组织病理变化减轻.结论 Dex后处理可以减轻CIRI大鼠的氧化应激损伤,其作用机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路有关.     

新型干细胞iPSC-MSCs缓解ox-LDL诱导的HUVEC氧化应激损伤的研究

目的探讨诱导性多能干细胞源性间充质干细胞(iPSC-MSCs)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激损伤的缓解作用及其机制。方法建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的ox-LDL损伤模型,采取条件培养基预孵育和Transwell装置共培养2种方式发挥iPSC-MSCs的作用;细胞增殖-毒性检测(CCK8)法测定细胞活力,DCFH-ROS荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western Blot法测定细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶4型(NOX4)的蛋白表达,荧光定量PCR检测核因子相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA表达。结果与iPSC-MSCs条件培养基(CM)共孵育后,ox-LDL-HUVEC模型产生的ROS水平明显下降(P0.05),且下降幅度与iPSC-MSC-CM提取过程中的共孵育时间有关,在共孵育24 h CM(24 hcm)组达到最大(P0.05);与iPSC-MSCs进行Transwell共培养后,ox-LDL-HUVEC模型细胞活力显著提高(P0.05),NOX4蛋白表达显著下降(P0.05),Nrf2和HO-1 mRNA表达明显增加(P0.05);iPSC-MSCs-Transwell共培养对单HUVEC的NOX4表达无明显影响,但可显著上调其Nrf2和HO-1的mRNA表达水平(P0.05)。结论 iPSCMSCs可缓解ox-LDL引起的HUVEC细胞活力损害,该过程可能与抑制ROS水平增高,下调NOX4表达及促进Nrf2和HO-1转录增多有关,提示iPSC-MSCs在动脉粥样硬化及氧化应激性疾病方面具有应用前景。     

高压氧联合血红蛋白对高糖引起的血管内皮细胞损伤的作用

摘要:目的 探究高压氧(HBO)联合血红蛋白(Hb)对高糖诱导的血管内皮细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力的 影响及其调控机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),CCK-8法检测不同剂量血红蛋白(2、4、6、8、10 μmol/L)和高压氧(0.10、0.15、0.20、0.25Mpa)对 HUVECs细胞活力的影响。建立高糖诱导的 HUVECs细胞模型,分 为6组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖处理48h),甘露醇组(27.5mmol/L甘露醇处理48h),高糖组(33mmol/L葡萄糖 处理48h),高糖+0.25Mpa高压氧组,高糖+6μmol/L血红蛋白组,高糖+0.25Mpa高压氧+6μmol/L血红蛋白组。 通过 CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测 LDH 水平;TUNEL 染色观察细胞凋亡情况;免疫印迹 (Westernblot)法检测凋亡相关蛋白表达;划痕实验和 Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;小管形成实验检测 血管生成;最后通过 Westernblot检测核因子 E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达。结果 随着血 红蛋白或高压氧剂量的不断增加,HUVECs细胞活力未发生显著变化。与对照组相比,高糖组 HUVECs细胞活力、迁 移、侵袭和 小 管 形 成 能 力 下 降,LDH 水 平 升 高,凋 亡 率 增 加,且 Bcl-2、Nrf2 和 HO-1 蛋 白 表 达 减 少,Bax 和 cleaved Caspase-3蛋白表达增加。与高糖组相比,高糖+0.25Mpa高压氧组和高糖+6μmol/L血红蛋白组细胞活力、迁移、侵 袭和小管形成能力升高,LDH 水平降低,凋亡率下降,且 Bcl-2、Nrf2和 HO-1蛋白表达增加,Bax和cleavedCaspase-3蛋 白表达减少;而高压氧和血红蛋白两者联合作用时,影响更为显著。结论 高压氧联合血红蛋白促进高糖作用下 HUVECs的细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力并抑制细胞凋亡,其机制可能与激活 Nrf2/HO-1通路有关。     

甘草酸对大鼠肝星状细胞氧化应激抑制作用的机制研究

目的 探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞(HSC)的氧化应激及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶(HO)-1信号通路的影响.方法 体外培养HSC细胞,将细胞分为5组:空白对照组、次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)处理组、Fe-NTA+5 μmol/L甘草酸组、Fe-NTA+10 μmol/L甘草酸组及Fe-NTA+20 μmol/L甘草酸组;给药24 h后收集细胞,采用相关试剂盒检测HSC细胞中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;RT-PCR和Western blot方法分别检测Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白表达水平.结果 Fe-NTA处理组中MDA、NO含量明显升高,而GSH水平显著降低,SOD酶活性也显著降低;而甘草酸处理的3组细胞中MDA、NO含量显著降低,GSH水平显著升高,SOD酶活性也显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).Fe-NTA处理组中Nrf2和HO-1mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比较显著降低,而甘草酸处理的3组细胞中Nrf2和HO-1mRNA及蛋白表达水平相对于Fe-NTA处理组显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 甘草酸有抗HSC细胞氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关.     

PM2.5对THP1巨噬细胞TLR4表达及氧化应激水平的影响

目的探讨大气细颗粒物（particulate matters,PM）2.5对THP1巨噬细胞TLR4表达及氧化应激水平的影响。方法THP1巨噬细胞分别给予来自中国北京、美国巴尔的摩地区的PM2.5刺激24 h,检测巨噬细胞TLR4、Nrf2表达水平,以及细胞内活性氧（ROS）产生水平。结果与对照组比较,低浓度（50 μg/mL）北京地区和巴尔的摩地区PM2.5刺激24 h后,细胞TLR4、Nrf2表达水平与细胞内ROS产生水平均升高（P < 0.05）。与对照组比较,高浓度（200 μg/mL）北京地区和巴尔的摩地区PM2.5刺激24 h后,细胞TLR4表达水平、Nrf2表达水平均降低（P < 0.05）,北京地区组细胞内ROS产生水平降低（P < 0.05）,巴尔的摩地区组细胞内ROS升高（P < 0.05）。结论低浓度PM2.5可促进巨噬细胞TLR4表达,升高氧化应激水平,高浓度PM2.5可降低巨噬细胞TLR4表达,降低氧化应激水平。     

miR-124基于PI3K/Akt通路对脓毒症大鼠肾组织炎症和氧化应激的影响

目的探讨微小RNA-124(miR-124)基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)通路对脓毒症大鼠肾组织炎症和氧化应激的影响。 方法将72只SD大鼠均分为假手术组(不做任何处理)、模型组(造模成功后不做任何处理)、miR-124-agomir组(miR-124高表达腺病毒载体处理)、agomir-NC组(阴性对照空载体处理)、LY294002组(PI3K/Akt抑制剂处理)、miR-124-agomir+LY294002组(miR-124高表达腺病毒载体和PI3K/Akt抑制剂处理)。除假手术组外,其余各组均采用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症肾损伤模型,并于造模成功后按各组相应给药处理。观察各组大鼠行为变化、肾组织炎症细胞浸润现象；检测各组大鼠肾功能指标、肾组织细胞凋亡、肾组织miR-124、PI3K/Akt通路蛋白表达水平、氧化应激相关蛋白、炎症因子及凋亡相关蛋白的表达。 结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织坏死及炎症细胞浸润现象严重,血清肌酐和血尿素氮水平、细胞凋亡率、磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、磷酸化核转录因子(p-NF)-κB p65/NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α、NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白、Caspase-3表达升高(P＜0.05),miR-124、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化氢酶蛋白表达降低(P＜0.05)。与模型组比较,miR-124-agomir组大鼠肾组织上述指标变化明显改善(P＜0.05)；LY294002组大鼠肾组织上述指标变化进一步加重(P＜0.05)。miR-124-agomir+LY294002组大鼠逆转miR-124-agomir组上述指标(P＜0.05)。 结论miR-124通过抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡来改善脓毒症大鼠肾损伤进程,其机制可能与激活PI3K/Akt通路,诱导Nrf2/HO-1途径活化有关。     

青葙皂苷对过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究青葙皂苷（Celosins,CES）对H2O2诱导的H9c2凋亡的保护作用。方法 噻唑蓝检测各组细胞活力以确定CES的最佳作用浓度,以及对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。细胞分组为：空白对照组、H2O2处理组、低剂量青葙皂苷+H2O2处理组、中剂量青葙皂苷+H2O2处理组、高剂量青葙皂苷+H2O2处理组。利用流式细胞术检测心肌细胞凋亡比例、ROS的产生情况。蛋白印记法（WB）检测凋亡信号通路相关蛋白的表达和Nrf2 /ARE 信号通路相关蛋白表达。结果 （1）青葙皂苷可升高H2O2处理的H9c2细胞活力,差异具有统计学意义(P＜0.05)。（2）青葙皂苷可降低H2O2处理的H9c2细胞凋亡率(P＜0.05)。降低ROS的产生(P＜0.05)。（3）青葙皂苷可降低蛋白细胞质细胞色素C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、Bax的表达(P＜0.05),升高蛋白Bcl-2、Nrf2 核转位与HO-1的表达(P＜0.05)。结论 CES通过激活Nrf2 /ARE信号通路抑制H2O2诱导的H9c2细胞损伤。     

丙泊酚对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为及Nrf2/ARE通路的影响

目的研究丙泊酚对前列腺癌细胞(PC3)增殖、侵袭和凋亡及Nrf2/ARE通路的影响。方法将PC3细胞分为空白对照组、丙泊酚低、中、高(2、4、6 mg/L)剂量组和阳性对照组(75 nmol/L阿霉素)。CCK-8法检测细胞存活率；改良Matrigel Boyden室法测定细胞侵袭力；流式细胞术检测细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和抗氧化反应元件(ARE)蛋白表达。结果与空白对照组比较,丙泊酚组和阳性对照组PC3细胞存活率、侵袭力、Nrf2和ARE蛋白表达水平均显著降低,细胞凋亡率显著升高,且效应呈丙泊酚剂量依赖性(P＜0.05)。与阳性对照组比较,丙泊酚低剂量组和中剂量组PC3细胞存活率、侵袭力、Nrf2和ARE蛋白表达水平均显著升高,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),而丙泊酚高剂量组差异无显著性(P＞0.05)。结论丙泊酚可有效逆转前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为,其机制可能与抑制Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达有关。     

Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对胰岛细胞半胱天冬酶-3表达的影响

目的 探讨核因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相互作用对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响及其可能机制.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(NC组,n=20)、糖尿病模型组(DM组,n=20)和叔丁基对苯二酚干预组(tBHQ组,n=20),干预8周后处死所有大鼠,TUNEL检测胰岛细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胰腺组织中丙二醛(MDA)水平,Western blot检测AKT、p-AKT、总Nrf2、核Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、Caspase-3在胰岛细胞中蛋白表达水平.结果 与NC组比较,DM组胰岛细胞凋亡率显著增加(P=0.000),而tBHQ组胰岛细胞凋亡率明显低于DM组(P=0.000).DM组血清及胰腺组织中MDA水平较NC组明显升高(P=0.000),而tBHQ组血清及胰腺组织中MDA水平明显低于DM组(P=0.000).DM组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均较NC组显著降低(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平较NC组明显升高(P=0.000);与DM组比较,tBHQ组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均明显增加(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P=0.017);AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对抑制胰岛细胞Caspase-3的表达及延缓胰岛细胞凋亡进程产生重要的保护作用.     

异氟烷预处理激活Nrf2-ARE通路保护H9c2心肌细胞缺氧-复氧损伤

目的 研究异氟烷预处理对大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)缺氧-复氧损伤及Nrf2-ARE信号通路的影响.方法 用大鼠H9c2细胞低氧模拟缺血性损伤,并将细胞分为空白对照组、缺氧-复氧组、异氟烷预处理组、转染Nrf2 siRNA组、转染非特异性siRNA组(Scramble组)、异氟烷预处理的Scramble组和异氟烷预处理的siRNA组.采用MTT法检测H9c2细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,分别使用硫代巴比妥酸法(TBA)和分光光度法测定MDA和GSH水平,qRT-PCR及Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1基因的表达.结果 与空白对照组比较,缺氧-复氧组细胞活力降低,凋亡细胞数上升,MDA水平升高,GSH水平降低,同时H9c2细胞中Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(JP＜0.01).与缺氧-复氧组比较,异氟烷可提高H9c2细胞活力,降低凋亡细胞数,并降低MDA水平,升高GSH水平,上调Nrf2、HO-1和NQO1的表达(P＜0.05).siRNA转染组Nrf2的mRNA和蛋白表达与缺氧-复氧组和Scramble组相比均降低(P＜0.05),2％异氟烷对siRNA转染组Nrf2 mRNA和蛋白表达均无影响(P＞0.05);经2％异氟烷处理的siRNA转染组H9c2细胞存活率与空白对照组、2％异氟烷处理组和2％异氟烷处理的Scramble组相比降低,凋亡细胞数增多,MDA水平升高,GSH水平降低(P＜0.05).结论 异氟烷预处理对H9c2细胞缺氧-复氧损伤具有保护作用,这种保护作用与激活Nrf2-ARE信号通路有关.     

奥拉西坦联合rTMS减轻脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧脑皮质神经元氧化应激损伤

目的分析奥拉西坦(Oxi)联合重复经颅磁刺激(rTMS)减轻脑缺血再灌注损伤(I/RI)大鼠缺血侧脑皮质神经元氧化应激损伤的机制。方法60只大鼠随机分为对照组、I/RI组、Oxi组、rTMS组和Oxi+rTMS组。比较各组大鼠神经体征缺失评分(NDS)、脑梗死体积和神经元细胞凋亡率,检测缺血侧脑皮质组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白表达。结果与对照组比较,I/RI组NDS评分和神经元细胞凋亡率升高,SOD和GSH-Px水平下降,MDA水平、Nrf2、HO-1、NQO-1、Cleaved Caspase-3/Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05)。与I/RI组比较,Oxi组、rTMS组和Oxi+rTMS组NDS评分、脑梗死体积和神经元细胞凋亡率下降,SOD和GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达升高,MDA水平、Cleaved Caspase-3/Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.05);与Oxi组和rTMS组比较,Oxi+rTMS组上述改变更为显著(P＜0.05)。结论Oxi联合rTMS可降低脑I/RI大鼠脑组织氧化应激水平,抑制缺血侧脑皮质神经元细胞凋亡,减轻脑组织氧化应激损伤。     

根皮素抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞氧化应激反应

目的 探讨根皮素(phloretin, PHL)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤的抑制作用及可能的分子机制。方法 利用LPS建立BV2小胶质细胞的氧化应激损伤模型,对该模型予以不同浓度的PHL 预处理。利用MTS方法检测细胞活力。ELISA法检测氧化应激相关产物一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。双荧光素酶活性检验方法检测抗氧化响应元件荧光素酶报告基因质粒(antioxidant reaction element luciferase reporter plasmid,ARE-LUC)报告基因转录活性。Western blotting法检测磷酸化核因子-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达。结果 与对照组相比,LPS处理后的BV2小胶质细胞活力显著降低,氧化应激产物NO和MDA水平明显升高,GSH含量和SOD活性明显下降,但Nrf2磷酸化水平、ARE-LUC报告基因转录活性和HO-1蛋白表达略有增高。与模型组比较,高剂量PHL(20 μmol/L)预处理明显改善了LPS导致的BV2小胶质细胞活力下降,降低NO和MDA的含量,增高GSH的含量和SOD的活性,且进一步增加了Nrf2的磷酸化水平,上调ARE-LUC的转录活性和HO-1蛋白的表达。结论 PHL可以显著抑制LPS导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤,Nrf2/ARE通路可能是根皮素发挥抑制BV2小胶质细胞氧化应激损伤作用的途径之一。     

立普妥对高糖诱导的HUVEC凋亡及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的探讨立普妥对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的凋亡及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮(e NOS)信号通路的影响。方法实验分为正常组,模型组(33.3 mol/L葡萄糖),立普妥组(33.3 mol/L葡萄糖+0.1,1,10μmol/L);MTT法检测各组HUVEC活力;倒置显微镜拍照检测各组HUVEC形态;Annexin V-FITC/PI流式双染法检测各组HUVEC凋亡;Gries法检测各组HUVEC上清NO含量;Western blot分析PI3K/AKT激活状况及e NOS的表达情况。结果与正常组比较,高糖组中HUVEC皱缩,变圆变亮,细胞活力降低,细胞早期凋亡和晚期凋亡率显著提高,NO含量及e NOS、PI3K表达量及AKT磷酸化程度降低,差异均具有显著性(P0.05);与模型组比较,1,10μmol/L立普妥组中HUVEC形态恢复,细胞活力上升,PI3K表达量提高,差异均具有显著性(P0.05);0.1,1,10μmol/L立普妥组HUVEC凋亡程度下降,NO含量、e NOS表达量提高,AKT磷酸化水平上升,差异均具有显著性(P0.05)。结论立普妥可抵抗高糖诱导的HUVEC凋亡,是通过激活PI3K/AKT/e NOS信号通路实现的。