蕨麻多糖通过调控miR-421表达对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨蕨麻多糖(PAP)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:采用LPS诱导大鼠心肌细胞H9C2建立细胞损伤模型,用浓度为0.05、0.1、0.2 mg/ml蕨麻多糖处理细胞,anti-miR-NC、antimiR-421分别转染至心肌细胞后用LPS处理细胞,miR-NC、miR-421 mimics分别转染至心肌细胞后用蕨麻多糖与LPS共同处理细胞;ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测miR-421的表达量。结果:蕨麻多糖呈浓度依赖性降低LPS诱导的心肌细胞培养液中TNF-α、IL-6的水平(P<0.05),并可降低细胞凋亡率(P<0.05),还可降低miR-421的表达量(P<0.05);转染anti-miR-421后LPS诱导的心肌细胞培养液中TNF-α、IL-6的水平降低(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);转染miR-421 mimics能够逆转蕨麻多糖对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的作用。结论:蕨麻多糖可通过抑制miR-421的表达抑制心肌细胞炎症反应及细胞凋亡,进而减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。     

miR-205对体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌的影响北大核心CSCD

目的:探讨miR-205对体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌的影响。方法:qRT-PCR方法分析脓毒症大鼠心肌组织中miR-205表达变化,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α、IL-6水平。心肌细胞分成Control组、LPS组(LPS诱导)、miR-NC+LPS组(转染mimics control,LPS诱导)、miR-205+LPS组(转染miR-205 mimics,LPS诱导),CCK-8方法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测C-Caspase-3、NF-κBp65蛋白表达,二硝基苯肼法检测LDH水平,硫代巴比妥酸法检测MDA水平,黄嘌呤法检测SOD水平,比色法检测GSH-Px水平,ELISA法检测TNF-α、IL-6水平。用NF-κB信号激活剂处理上调miR-205的心肌细胞,同样检测细胞增殖、凋亡、氧化损伤以及细胞炎症因子分泌水平。结果:脓毒症大鼠心肌组织中miR-205表达水平降低,心肌组织中细胞凋亡指数增加,TNF-α、IL-6水平升高。LPS组心肌细胞中miR-205水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达增多,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-6水平升高,细胞中MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,与Control组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-205+LPS组心肌细胞中miR-205水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3蛋白表达减少,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-6水平降低,细胞中MDA水平降低,SOD、GSH-Px水平升高,与miR-NC+LPS组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB信号激活剂逆转miR-205对LPS诱导的心肌细胞损伤作用。结论:miR-205抑制体外脓毒症心肌细胞模型细胞凋亡和炎症因子分泌,机制可能与下调NF-κB信号有关。     

miR-195缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应

目的探讨miR-195对脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞凋亡、氧化应激、炎症反应的影响。方法将H9C2心肌细胞随机分成空白对照组、脂多糖组(LPS)、LPS+miR-NC组、LPS+miR-195组;RT-PCR检测转染后miR-195表达量;ELISA检测心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI);流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核形的变化;Western blot检测氧化应激相关蛋白表达(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α);试剂盒检测氧化应激标记物SOD活性;ELISA检测炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)。结果与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组miR-195表达量、氧化应激标记物水平(p-Nrf2/Nrf2、PGC-1α)、抗氧化酶SOD活性均显著升高(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-195组心肌损伤标记物水平(CK-MB、Mb、cTnI)、细胞凋亡率、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、iNOS)均显著降低(P<0.05);与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-...     

栀子多糖调控miR-141-3p对LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨栀子多糖对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应、凋亡的影响及分子机制。方法:100 ng/ml LPS处理H9C2细胞作为LPS组,正常培养的细胞作为对照组,采用终浓度为2.5、5、10μmol/L的栀子多糖和100 ng/ml LPS共同培养的细胞作为栀子多糖低、中、高浓度组。将H9C2细胞分为LPS+Experiment-H+anti-miR-NC组、LPS+Experiment-H+anti-miR-141-3p组、LPS+Experiment-H+pcDNA3.1组、LPS+Experiment-H+pcDNA3.1-KLF6组。ELISA检测IL-1β、TNF-α水平;Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Krupple样转录因子6(KLF6)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-141-3p表达;荧光素酶报告实验检测miR-141-3p和KLF6的靶向关系。结果:LPS诱导的心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平、Bax表达、细胞凋亡率显著升高,miR-141-3p表达显著降低,KLF6表达显著升高(P<0.05)。栀子多糖处理后LPS诱导的心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平、Bax表达、细胞凋亡率显著降低,miR-141-3p表达显著升高,KLF6表达显著降低(P<0.05)。抑制miR-141-3p表达和过表达KLF6逆转了栀子多糖对LPS作用的H9C2细胞凋亡和炎症因子的抑制作用。miR-141-3p可靶向调控KLF6表达。结论:栀子多糖可抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡和炎症因子释放,对LPS诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与miR-141-3p和KLF6有关。     

黄芩素调控miR-378a-5p对脂多糖诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤和凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-378a-5p表达有关。方法:将H9C2细胞分为对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素组、LPS+40μmol/L黄芩素组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-con组、LPS+20μmol/L黄芩素+miR-378a-5p组。细胞计数法、流式细胞术分析细胞活力和凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。实时定量PCR分析miR-378a-5p表达量。结果:LPS处理显著降低H9C2细胞存活率、促进细胞凋亡,增加MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,降低SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。黄芩素显著提高LPS处理的H9C2细胞存活率,抑制细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量、miR-378a-5p表达量,并增加SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。过表达miR-378a-5p显著减弱黄芩素对LPS处理的H9C2细胞存活率、凋亡、MDA水平、LDH释放量、TNF-α和IL-6分泌量以及SOD和GSH-Px活性的影响(P<0.05)。结论:黄芩素可减轻LPS诱导的心肌细胞损伤和凋亡,其机制可能与下调受损心肌细胞miR-378a-5p表达有关。     

miR-194靶向FoxA1基因对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤影响

目的探讨微小RNA(miR-194)靶向叉头盒蛋白A1(FoxA1)基因对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤影响及其可能作用机制。方法正常培养的肺泡上皮细胞为NC组,LPS处理的肺泡上皮细胞为LPS组,分别或共同将miR-con、miR-194 mimic、si-con、si-FOXA1转染至肺泡上皮细胞后加入LPS处理。qRT-PCR与Western blot分别检测miR-194、FOXA1的mRNA及蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;双荧光素酶报告实验检测miR-194与FOXA1的作用关系;Western blot检测Bax、Bcl-2的蛋白水平。结果与NC组相比,LPS组肺泡上皮细胞增殖率明显降低,凋亡率明显上升,Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,LDH活性增强;双荧光素酶报告实验验证FOXA1是miR-194的靶基因;miR-194过表达与抑制FOXA1表达后细胞增殖率明显上升,凋亡率明显下降,Bax蛋白表达下调,Bcl-2的蛋白表达上调,LDH活性降低,而共转染miR-194 mimic与pcDNA-FOXA1后可逆转miR-194对LPS诱导的肺泡上皮细胞增殖及凋亡的作用。结论miR-194可通过抑制FOXA1表达进而缓解LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。     

miR-221靶向AdipoR1基因对LPS诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌及凋亡影响

目的:探讨miR-221是否靶向脂联素受体1 AdipoR1基因影响脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌和凋亡。方法:随机将人肺泡上皮细胞A549分为对照组、LPS组和LPS+转染组,RT-qPCR法检测miR-221和AdipoR1 mRNA表达,Western blot法检测AdipoR1蛋白及凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,双荧光素酶报告基因检测miR-221是否靶向AdipoR1。结果:与对照组比较,LPS组细胞中miR-221及Bax蛋白表达升高(P<0.05),AdipoR1 miRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-221靶向负调控AdipoR1的表达;抑制miR-221和过表达AdipoR1均能抑制LPS诱导肺泡上皮细胞分泌炎症因子,抑制细胞凋亡;抑...     

microRNA-499通过靶向调节SOX6抵抗缺氧诱导的神经细胞损伤

目的:探讨microRNA-499(miR-499)在缺氧诱导的PC12细胞损伤中的作用及其调控机制。方法:将PC12细胞随机分为:对照(control)组、缺氧(hypoxia)组、miR-499过表达(miR-499 mimic+hypoxia)组、mimic阴性对照(mimic-NC+hypoxia)组、SOX6过表达(miR-499 mimic+pc DNA3.1-SOX6+hypoxia)组和SOX6阴性对照(miR-499 mimic+pc DNA3.1+hypoxia)组。MTT试剂检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH漏出量;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶活性检测测定miR-499和SOX6的靶向关系;Western Blot检测SOX6的蛋白表达。结果:与对照组相比,缺氧组的miR-499表达下调,细胞活性降低,LDH漏出量增加,细胞凋亡率提高;与缺氧组相比,miR-499过表达组的细胞活性提高,LDH漏出量减少,细胞凋亡率降低。MiR-499直接靶向SOX6,SOX6过表达能够逆转miR-499过表达的作用。结论:MiR-499过表达能够通过直接靶向SOX6来抵抗缺氧诱导的PC12细胞损伤,提高细胞活力,减少LDH漏出量,并降低细胞凋亡率。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡率；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系；Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较，细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

目的 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法 采用人SH-SY5Y细胞，设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达，Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p3...     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

miR-153通过靶向SORBS2促进LPS诱导的心肌H9C2细胞损伤

目的:研究微小RNA-153(miR-153)对脂多糖(LPS)诱导的胚胎大鼠心肌H9C2细胞的炎症因子、细胞活力及凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用LPS建立H9C2细胞损伤模型;将细胞分为anti-miR-Con组(转染anti-miR-Con)、anti-miR-153组(转染anti-miR-153)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-SORBS2组(转染pcDNA-SORBS2)、anti-miR-153+si-Con组(共转染anti-miR-153和si-Con)和anti-miR-153+si-SORBS2组(共转染anti-miR-153和si-SORBS2),转染后用LPS处理。RT-qPCR法检测细胞中miR-153和SORBS2 mRNA的表达;MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中SORBS2的蛋白表达;ELISA实验检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双萤光素酶报告基因实验验证miR-153与SORBS2的靶向关系。结果:成功构建LPS诱导的H9C2细胞损伤模型;与对照...     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

MicroRNA-132转染对脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的作用

 目的:探讨转染微小RNA-132（miR-132）对肺泡巨噬细胞炎症反应的作用。方法: 将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组、阴性对照组和转染组,分别采用miR-132增敏剂、错义链和PBS作用。转染24 h后,CCK-8法检测细胞増殖;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-132的表达;用脂多糖（LPS）作用细胞后,凝胶电泳迁移率实验（EMSA）检测细胞中NF-κB活性;Western blotting法检测细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的表达。结果: 与空白对照组和阴性对照组相比较,转染组细胞中miR-132的表达明显升高;转染组细胞増殖被明显抑制,与空白对照组相比较,差异有统计学意义（P<0.05）;LPS作用后,转染组NF-κB、TNF-α和IL-6表达量显著下降,与空白对照组和阴性对照组相比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论: 转染miR-132可抑制NR8383细胞増殖,并抑制LPS诱导的NR8383细胞的炎症反应。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

miR-132 靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究

目的:探讨微小核糖核酸分子(miRNA)-132 在卵巢癌中生物学作用和作用靶点。方法:收集22 例卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本,RT-PCR 检测miR-132 表达量;RT-PCR 检测人正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞系中miR-132 表达量;选择miR-132 表达量最高或最低的卵巢癌细胞株,分别转染阴性对照质粒(NC)和miR-132 mimic 质粒,RT-PCR 检测转染后miR-132 表达量;CCK-8 法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 检测Ezrin 蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miR-132 表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,而卵巢癌细胞系中miR-132 表达量显著低于正常卵巢上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);选择卵巢癌细胞株中miR-132 表达量最低卵巢癌SKOV3 细胞株进行基因转染,与转染阴性对照质粒相比,转染miR-132 mimic 质粒后miR-132 表达量显著上升,细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot 结果显示,上调miR-132 表达后,卵巢癌SKOV3 细胞株中Ezrin 蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:在卵巢癌中,miR-132 可能作为一种抑癌基因通过靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡。     

miR-24通过SIRT1调控晶状体上皮细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激情况下miR-24对晶状体细胞凋亡的调控。方法采用实时定量PCR检测40例白内障患者晶状体上皮组织及临近晶状体上皮组织中miR-24的表达水平,并在氧化应激情况下检测miR-24的表达变化。通过miR-24 mimics、miR-24 inhibitor转染晶状体上皮细胞SAR01/04以过表达和敲低miR-24,利用pcDNA3.1-SIRT1转染SAR01/04以过表达SIRT1,FITC/PI流式细胞术检测晶状体细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况,CCK-8检测细胞活性状态。结果miR-24在白内障晶状体上皮组织中的表达高于临近组织,氧化应激情况下促进miR-24表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);氧化应激情况下,敲低miR-24抑制晶状体上皮细胞的凋亡;过表达或敲低miR-24可以分别降低或促进SIRT1的表达;过表达miR-24和过表达SIRT1后抑制了晶状体细胞的凋亡。结论氧化应激促进晶状体上皮细胞miR-24表达上调,miR-24通过下调SIRT1促进晶状体上皮细胞的凋亡,为白内障的靶向治疗提供一定的策略。     

MicroRNA-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应

 目的: 探讨microRNA-132(miR-132)通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法: 向大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中转染miR-132 mimic、mimic阴性对照(NC)、miR-132 inhibitor或inhibitor NC,转染后用脂多糖(LPS)和(或)乙酰胆碱(ACh)处理细胞;采用real-time PCR检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的mRNA表达;采用Western blot检测细胞中AChE、信号转导及转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3),以及细胞浆和细胞核中核因子κB(NF-κB)蛋白的改变;采用AChE活性测试盒检测细胞上清液中AChE活性的改变;采用免疫荧光检测NF-κB的核移位变化。结果: 上调或下调miR-132不影响AChE的mRNA相对表达水平;上调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著降低(P < 0.05),下调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著升高(P < 0.05)。当给予LPS+ACh作用时,miR-132 mimic组对NF-κB p65核移位的抑制作用较mimic NC组更强(P < 0.05),miR-132 inhibitor组较inhibitor NC组更弱(P < 0.05);miR-132 mimic组对STAT3及p-STAT3蛋白的抑制作用较mimic NC组更强(P < 0.05)。结论: miR-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制可能是miR-132靶向作用AChE,抑制AChE对ACh的水解作用,从而增强ACh的抗炎作用,抑制NF-κB及STAT3的活化。     

miR-377-5p靶向IRAK1通过抑制JNK信号通路改善脑缺血再灌注大鼠神经损伤和炎性反应

目的 探究miR-377-5p对脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠神经损伤和炎性反应的作用及机制.方法 通过生物信息学预测到miR-377-5p与白介素1受体相关激酶(interleukin-1 receptor-associated kinases,IRAK1)靶向关系.SD大鼠随机...     

Resveratrol protects BV2 mouse microglial cells against LPS-induced inflammatory injury by altering the miR-146a-5p/TRAF6/NF-κB axis

Abstract

Objective: To investigate the role of miR-146a-5p in the effects of resveratrol (RSV) on inflammatory response in BV2 mouse microglial cells.

Materials and methods: BV2 cells were pretreated by RSV and stimulated with lipopolysaccharide (LPS). Cell Viability was checked using a MTT assay. Real-Time PCR was performed to detect the levels of pro-inflammatory cytokines (tumor necrosisfactor-α－TNF-α, interleukin-1β－IL-1β and interleukin-6 － IL-6) and miR-146a-5p expression. Western blot was used to analyze the protein expression of TNF receptor associated factor 6 (TRAF6) and phospho-nuclear factor kappa B (pNF-κB). Gain-of-function and loss-of-function analysis of miR-146a-5p was performed using transfection of miR-146a-5p mimic and miR-146a-5p inhibitor, respectively.

Results: Pretreatment with RSV significantly and dose dependently inhibited LPS-induced production of TNF-α, IL-1β and IL-6 in BV2 cells. MiR-146a-5p was significantly upregulated after LPS treatment, and further increased in RSV and LPS-co-treated cells. MiR-146a-5p overexpression via miR-146a-5p mimic transfection downregulated the mRNA level of TNF-α, IL-1β and IL-6, as well as abrogated the protein expression of TRAF6 and pNF-κB in BV2 cells exposed to LPS. More importantly, the reducion of TNF-α, IL-1β and IL-6 level by RSV were reversed by miR-146a-5p silence via miR-146a-5p inhibitor transfection. Furthermore, silencing miR-146a-5p attenuated the inhibitory effect of RSV on the TRAF6/NF-κB pathway which was activated after induction with LPS. Conclusions: RSV can suppress LPS-induced inflammatory injury via modulating the miR-146a-5p/TRAF6/NF-κB axis in BV2 mouse microglial cells.