P-糖蛋白抑制剂tariquidar对黄芪甲苷在bEND.3细胞上跨膜转运的影响及机制

目的 研究P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂N-[2-[[4-[2-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)乙基]苯基]氨基甲酰基]4,5-二甲氧基苯基]喹啉-3-甲酰胺(tariquidar)对黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,ASI)跨膜转运的影响及机制.方法 采用b...     

四氢小檗碱对映体在MDCK-MDR1细胞中的跨膜转运研究

 四氢小檗碱(tetrahydroberberine,dl-THB)来源于罂粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的块根,属四氢异喹啉类生物碱。四氢小檗碱具有镇静、镇痛、催眠、降压等药理作用。四氢小檗碱的化学结构上有一个手性中心,图1,研究表明,手性药物的单个对映体在体内的吸收、分布、代谢以及排泄等环节中,常因与机体内的具有高度立体特异性的生物大分子相互作用等,表现出不同的药动学特征,具有立体专一性。吸收是药物发挥药效的关键环节,在药物成分吸收研究模型中,已有利用MDCK-MDR1细胞模型来研究化学药物及中药活性成分吸收转运机制的报道。有关四氢小檗碱单一对映体的跨膜转运机制目前仍不明确,国内外尚未见报道相关研究。因此,本实验采用MDCK-MDR1细胞模型来探讨四氢小檗碱单一对映体的双向转运特性,对深入研究手性药物的药理和毒理作用具有重要的意义。     

马钱子生物碱类成分在MDCK-MDR1单层细胞模型中的转运机制研究

目的研究马钱子碱、士的宁在MDCK-MDR1单层细胞模型中的双向转运机制。方法 MTT法确定马钱子碱、士的宁对MDCK-MDR1单层细胞毒性范围,以MDCK-MDR1单层细胞为体外研究模型,考察转运时间、药物作用质量浓度、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米对马钱子碱、士的宁的累积吸收浓度(C_(cum))和表观渗透系数(P_(app))的影响。结果马钱子碱和士的宁P_(app)均1×10~(-5)cm/s,P_(app)(BL→AP)/P_(app)(AP→BL)均2。马钱子碱、士的宁与维拉帕米合用,显著降低了P_(app)(BL→AP)/P_(app)(AP→BL)值。结论马钱子碱、士的宁以被动转运为主,P-gp抑制剂维拉帕米对其吸收有明显抑制作用,马钱子碱、士的宁可能是P-gp底物。     

LC-MS/MS考察白芷香豆素成分对硫酸长春新碱肠道转运及药代动力学的影响

目的:研究白芷香豆素类成分欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素对硫酸长春新碱肠道转运及药代动力学的影响。方法:采用MDCK-MDR1细胞模型,考察欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素对硫酸长春新碱肠道转运的影响。采用LCMS/MS测定给药后不同时间血浆中药物浓度,研究欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素成分对硫酸长春新碱药代动力学的影响。结果:长春新碱配伍质量浓度为10.80,5.42,1.35 mg·L-1欧前胡素的表观渗透系数(Papp)分别为(0.287 2±0.026 6)×10-6,(0.351 5±0.041 6)×10-6,(0.294 9±0.006 8)×10-6cm·s-1,三者与硫酸长春新碱的Papp[(0.227 2±0.014 8)×10-6cm·s-1]比较有显著性差异(P0.05)。硫酸长春新碱与欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素配伍后药时曲线下峰面积(AUC0-t)分别为(343.50±10.29),(348.70±27.99),(235.70±17.56)μg·h·L-1,与硫酸长春新碱组比较有显著性差异(P0.01)。药峰浓度(Cmax)分别为(81.870±8.517),(83.010±9.276),(60.440±6.679)μg·L-1,与硫酸长春新碱组的比较有显著性差异(P0.01)。结论:白芷香豆素类成分能促进硫酸长春新碱的肠道转运,提高其生物利用度。     

血脑屏障上的P-糖蛋白及其他ABC超家族转运蛋白的调控

ATP结合盒式蛋白是血脑屏障上重要的选择性因素。它们保护中枢神经系统不受神经毒物的侵害但同时也限制了治疗药物递送入大脑。最近的研究突出了血脑屏障上P-糖蛋白和其他ABC类转运体在外源性物质、应激、疾病干预下表达和活性改变的多种信号通路。该文对相关信号通路调控的研究进展作一综述,旨在为神经保护研究,增加治疗药物递送入大脑提供新的研究思路。     

淫羊藿苷元的肠道跨膜转运机制研究

目的 探讨淫羊藿苷元（icaritin,ICT）在肠道内的转运机制,并阐明ICT生物利用度低的主要原因。方法 采用体外细胞模型人结肠癌Caco-2细胞及小肠癌LS-180细胞和人药物转运蛋白细胞系[P-糖蛋白（P-glycolprotein,P-gp,又名MDR1）、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP）和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,MRP2)过表达的狗肾细胞系MDCK-MDR1、MDCK-BCRP、MDCK-MRP2及空白转染的狗肾细胞系MDCK-mock;有机阴离子转运多肽2B1(organic anion transporting polypeptides 2B1,OATP2B1)过表达的人胚胎肾细胞HEK293-OATP2B1及空白转染的人胚胎肾细胞HEK293-mock],应用实时定量荧光PCR、LC-MS/MS联用、放射性同位素示踪等技术,共同研究淫羊藿苷元在肠道的跨膜转运机制。结果 Caco-2细胞研究中,ICT在低浓度给药时摄入方向表观渗透系数...     

三七皂苷Rg1对肝纤维化大鼠线粒体质子跨膜转运的作用机制

目的探讨在三七皂苷(panax notoginseng saponins,Pn S)Rg1干预下,肝纤维化大鼠线粒体质子跨膜转运的变化和肝线粒体膜的流动性的变化,为开发三七单体Rg1在临床抗纤维化的应用提供详尽的试验依据和理论基础。方法 72只Wistar大鼠随机分为对照组、四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝纤维化大鼠模型组、Pn S Rg1组各24只。除对照组外,其余2组用5%CCl4橄榄油按5 m L/kg灌胃制作肝纤维化大鼠模型。Pn S Rg1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射Pn S Rg1(5 mg/kg)用稳态荧光探针标记技术动态观察肝纤维化大鼠线粒体质子跨膜转运的变化,用荧光偏振法测定肝线粒体膜的流动性和膜的微黏度的改变。结果 (1)与对照组相比,肝纤维化模型组大鼠用单因素多组间方差分析,发现模型组大鼠质子跨膜转运中,肝线粒体质子跨膜转运能力显著下降(P0.01)。Pn S Rg1组与对照组相比质子跨膜转运的变化没有显著性意义(P0.05),与模型组相比,有显著性差异(P0.01)。(2)肝纤维化模型组大鼠用单因素多组间方差分析,与对照组相比,证实模型组大鼠线粒体膜的流动性显著下降(P0.01),增加膜的微黏度(P0.01);而Rg1组与模型组相比增加线粒体膜的流动性(P0.01),降低膜的微黏度(P0.01)。结论肝纤维化大鼠肝线粒体质子跨膜转运能力下降和线粒体膜的流动性显著下降是导致肝纤维化的重要原因之一。Pn S Rg1通过增加肝线粒体质子跨膜转运能力和线粒体膜的流动性而防治肝纤维化的发生发展的。     

柴胡皂苷a对难治性癫痫大鼠多药耐药蛋白P-糖蛋白表达的影响

目的:研究柴胡皂苷a(SSa)对氯化锂-匹鲁卡品致难治性癫痫模型大鼠多药耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:将制备成功的30只SD难治性癫痫大鼠随机分为5组,丙戊酸钠(VPA)组以VPA 200 mg·kg-1灌胃给药,SSa低、中、高剂量组分别ip SSa 0.54,1.09,2.18 mg·kg-1,空白对照组(A)和模型组(B)均等容积生理盐水ig,各组连续给药8周后用Western blotting检测各组大鼠海马、颞叶皮层P-gp的表达.结果:在大鼠海马、颞叶皮层,各组P-gp的表达,差异有统计学意义(P ＜0.001).与空白对照组相比,其余各组P-gp表达水平明显增强(P＜0.05);与模型组相比,VPA 200 mg·kg-组表达水平增加(P＜0.05),SSa 3个剂量组表达水平降低,以SSa高剂量组最明显(P＜0.05).结论:SSa低、中、高剂量均可降低大鼠颞叶皮层、海马区P-gp的表达,其效果成剂量依赖性,以高剂量组效果明显.     

川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对P-糖蛋白表达的影响

目的 研究川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征以及对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法 MTT法确定川芎嗪对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;以Caco-2细胞单层模型研究川芎嗪的双向转运机制,以表观渗透系数(Papp)为检测指标,考察时间、药物浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对川芎嗪转运的影响;Western blotting法检测川芎嗪对P-gp表达的影响.结果 从顶侧(AP)到底侧(BL) (AP→BL),川芎嗪的Papp＞ 10-6 cm/s,表明其吸收性良好;川芎嗪的转运量与其浓度和时间呈正相关,且川芎嗪AP→BL的转运量明显大于BL→AP的转运量;川芎嗪不仅受到P-gp的外排作用,同时也抑制P-gp表达.结论 川芎嗪在Caco-2细胞模型的转运方式为被动转运,且受到P-gp的外排作用,并对P-gp的表达有抑制作用.     

以ABC膜转运蛋白为靶点的中药逆转肿瘤多药耐药的研究现状

肿瘤细胞多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一,其机制异常复杂,是多基因、多步骤综合作用的结果,寻找高效低毒的多药耐药逆转剂已成为肿瘤研究领域的热点,本文主要从ABC膜转运蛋白介导的多药耐药途径,总结近几年中药对这个经典途径的逆转作用的研究。     

天麻中天麻素含量测定方法的研究

目的 :改进 2000年版《中国药典》天麻中天麻素的含量测定方法。方法 :样品用 50%乙醇回流提取 ;Hypersil-C₁₈色谱柱 ,流动相乙腈 水 (3∶97) ,流速 1mL·min^-1,检测波长 220nm ,室温下进行测定。结果 :天麻素线性范围为0.040～4.0μg(r=0 .9999) ,平均加样回收率为 97.1% ,RSD为 0 .87% (n=9)。 结论 :采用 2000年版《中国药典》天麻中天麻素的含量测定方法 ,天麻素提取不完全 ,检测灵敏度较低。本方法灵敏、结果准确可靠。     

天麻钩藤配伍对天麻素和钩藤碱体内药动学的影响

测定天麻素及钩藤碱体内药动学参数,研究天麻钩藤药对配伍后对天麻素和钩藤碱体内药动学行为的影响。结果天麻钩藤以9∶12配伍后,与二者单味药对照组相比,天麻素和钩藤碱C_(max)及AUC均显著增加,钩藤t_(max)后移1.5 h,天麻t_(max)后移0.25 h,二者由原来相同的达峰时间改变为前后相差1.25 h,说明配伍可显著改变药物体内药动学行为。从整体组方分析,天麻药性缓和滋补,钩藤寒凉苦降,配伍后天麻达峰较快且C_(max)及AUC增加,先发挥滋阴潜阳作用同时弥补钩藤达峰延后损失的药效;之后,在滋阴的前提下钩藤碱继续达峰且C_(max)及AUC增加,可弥补天麻半衰期较短的缺点,有利于更好地维持降压作用。二者配伍各自发挥优势互补,避免了单用钩藤苦寒过重累及伤阴,或单用天麻滋补有余,苦寒不足,充分说明钩藤、天麻二者共为君药、标本兼顾的治疗原则具有可靠的药动学依据。该研究通过对天麻钩藤药对配伍后的药动学特征进行研究,发现中医通过天麻、钩藤配伍实现对"肝阳上亢"整体施治目的是具有其药动学基础的,进一步为中医组方用药的科学性、合理性提供药动学依据。     

以MRP2/MRP3转运体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分筛选

目的：建立以胆红素外排转运体多药耐药相关蛋白2 (MRP2)、MRP3为靶点的何首乌中潜在肝毒性成分的快速筛选方法,并评价相关化合物的肝毒性大小。方法：采用计算机分子对接方法对何首乌中的主要单体成分进行高通量筛选,以MRP2、MRP3转运体底物胆红素为参考对象,将48个目标单体与MRP2、MRP3蛋白进行分子对接,实现虚拟筛选;采用CCK-8细胞计数试剂盒法考察目标单体对肝细胞HepaRG的毒性作用;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定目标单体对HepaRG细胞外排转运体MRP2、MRP3 mRNA相对表达量的影响。结果：MRP2对接结果显示,大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-(6’-O-乙酰基)-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷高于底物胆红素与MRP2对接打分值的80%;MRP3对接结果显示,大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-(6’-O-乙酰基)-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷及芦荟大黄素-8-O-β-D-葡...     

醋柴胡对HEK293细胞中MRP1蛋白摄取活性、蛋白表达及mRNA水平的影响

目的:研究醋柴胡水提液对人胚肾细胞HEK293中MRP1影响的作用机制。方法:MTT法观察醋柴胡水提液对HEK293细胞增殖的影响;蛋白摄取活性实验以秋水仙碱作底物,采用高效液相色谱(HPLC)法检测胞内底物含量;采用Western blot法检测蛋白表达水平;荧光定量RT-PCR法检测mRNA水平。结果:与对照组相比,醋柴胡水提液(10mg·mL-1)作用48 h后,细胞对秋水仙碱的摄取率降低了21%,差异有统计学意义(P<0.01);相应的MRP1 mRNA水平降低了40%,差异有统计学意义(P<0.05);而蛋白表达则无变化。结论:醋柴胡能增加胞内MRP1转运底物秋水仙碱的外排,但可能并非通过改变MRP1 mRNA和蛋白表达水平而实现。     

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠皮质和海马多药耐药相关蛋白1表达影响的研究

[目的]研究熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠皮质和海马多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响。[方法]1)利用氯化锂-匹罗卡品制作癫痫大鼠模型。2)实验大鼠按随机数字表法随机分为正常组、模型组、熄风胶囊高剂量组(熄高组)、熄风胶囊中剂量组(熄中组)、熄风胶囊低剂量组(熄低组)、熄风胶囊大剂量+卡马西平(CBZ)组(联高组)、熄风胶囊大剂量+CBZ1/2剂量(联低组)和CBZ组。3)通过Western-blot方法检测癫痫大鼠海马和皮质MRP1的表达程度。[结果]实验结果显示治疗组与模型组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]熄风胶囊能有效抑制MRP1的过度表达。     

ATP结合盒转运蛋白与药用植物次级代谢物转运的研究进展

三磷酸腺苷结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白是生物体内分布最为广泛的蛋白家族之一.在调控植物生长发育、根系形态、次级代谢物转运、抗逆胁迫上发挥重要作用.在逆境中产生和累积的次级代谢物往往决定着药用植物的品质.因此,如何提高次级代谢物累积一直作为药用植物品质形成的研究领域热点.研究表明,次...     

天麻素和葛根素在大鼠体内联合应用的药动学研究

建立同时测定天麻素及其代谢产物天麻苷元、葛根素和内标对羟基苯乙醇(Tyr)4种成分在大鼠血浆中药物浓度的HPLC方法,并应用该法研究单独或合并静脉注射及灌胃给药天麻素、葛根素后,三者在大鼠体内药代动力学过程及相互影响。以Tyr为内标,血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,上清液用N2吹干,残渣用乙腈-0.05%磷酸(20∶80)复溶后,以乙腈-0.05%磷酸水为流动相梯度洗脱,用Agilent ZORBAX SB-Aq C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱分离,在221 nm处测定天麻素、天麻苷元和内标,250 nm处测定葛根素。单独或合并给药天麻素、葛根素后,检测大鼠血浆中三者浓度,用Win Nonlin 5.2药动学软件和SPSS 17.0软件分别计算各给药组药动学参数并进行统计分析,比较单独或合并给药后天麻素、葛根素药动学过程。天麻素、天麻苷元和葛根素低、中、高浓度及内标对羟基苯乙醇的绝对回收率均>77.20%;天麻素、天麻苷元、葛根素分别在0.10~101,0.03~7.58,0.05~5.98 mg·L-1具有良好的线性(r>0.999 6,n=5),三者定量下限分别为0.10,0.03,0.05 mg·L-1,日内及日间精密度均<12%,准确度85.61%~110.3%,且测定物在整个分析过程中稳定。结果表明,天麻素和葛根素联合给药后,大鼠体内主要药代动力学参数(AUC,Cmax,T1/2,Tmax,MRT)与单独给药后有显著性差异。无论是灌胃还是静脉注射,清除率(CL)降低,平均滞留时间(MRT)延长;相对生物利用度均有提高,尤以灌胃组效果显著,其中灌胃天麻素合用组为单用组的1.5倍,灌胃葛根素合用组为单用组的10.7倍。天麻素和葛根素合用后能相互促进吸收,降低消除速率,增加体内滞留时间。该法可同时测定大鼠体内天麻素、天麻苷元和葛根素血药浓度和药动学,且方法准确,操作简便。     

单向在体肠灌流模型研究P-gp和MRP2抑制剂对芒果苷肠吸收的影响

目的:研究P糖蛋白(P-gp)和多耐药相关蛋白2(MRP2)对芒果苷肠吸收的影响。方法:采用大鼠单向在体肠灌流模型,以酚红为标示物;UPLC法测定灌流液中芒果苷的含量,计算芒果苷在空肠和回肠段及加入P-gp抑制剂和MRP2抑制剂后的吸收常数(Ka)和表观渗透系数(Peff)。结果:芒果苷(5μg/ml)在回肠和空肠的吸收差异无统计学意义。在回肠段,加入P-gp抑制剂维拉帕米(0.1mmol/L)和环孢霉素A(0.1mmol/L)或MRP2抑制剂吲哚美辛(0.04mmol/L)后,芒果苷吸收的Peff值和Ka值均明显增加;在空肠段,维拉帕米可明显升高芒果苷吸收的Ka值,而其他各组的Peff值和Ka值虽有一定程度的增加,但无显著性差异。结论:P-gp和MRP2抑制剂对芒果苷的肠吸收,特别是回肠吸收,具有明显的促进作用,提示芒果苷为P-gp和MRP2的底物。     

立方液晶纳米粒在MDCK-MDR1细胞模型中的摄取及摄取机制研究

[目的]考察MDCK-MDR1细胞对立方液晶纳米粒的摄取及摄取机制。[方法]以钙黄绿素为标准荧光物质制备液晶纳米粒。采用流式细胞仪检测不同时间点MDCK-MDR1细胞内荧光强度,比较细胞对钙黄绿素、钙黄绿素液晶纳米粒摄取的差异;采用不同抑制剂(非律平、细胞松弛素D、氯丙嗪、2-D-去氧葡萄糖)与钙黄绿素液晶纳米粒共同孵育后,流式细胞仪测定胞内荧光强度,判断MDCK-MDR1细胞摄取液晶纳米粒的通路。[结果]摄取2 h内,立方液晶纳米粒不仅可以增加MDCK-MDR1细胞对钙黄绿素的摄取也可改变细胞的摄取行为。经氯丙嗪、2-D-去氧葡萄糖孵育的细胞胞内荧光含量低,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]立方液晶纳米粒可增加MDCK-MDR1对钙黄绿素的摄取,摄取途径为能量依赖网格蛋白介导的主动内吞。