氯喹抑制肾癌细胞活性促进舒尼替尼诱导的细胞凋亡

目的：研究氯喹（经常用于抑制自噬体与溶酶体的融合,是一种晚期自噬的抑制剂）是否能抑制肾癌细胞的增殖以及对舒尼替尼(sunitinib, ST)诱导的细胞凋亡的影响。方法：以肾癌细胞系786-O和ACHN为模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3 羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt, MTS］观察氯喹对细胞活性的影响;透射电子显微镜、免疫杂交等手段检测氯喹影响ST诱导的凋亡、自噬的情况。应用早期自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)、RNA干扰技术敲降自噬相关蛋白Ulk1 (unc-51-like kinase 1)和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein, LC3)确定早期自噬对ST引起的细胞凋亡的影响。结果：氯喹和ST均可以抑制786-O和ACHN细胞的增殖,氯喹可促进ST诱导的细胞凋亡。与氯喹不同,抑制早期自噬减少了ST诱导的细胞凋亡和活性丢失。结论：舒尼替尼既可以引起细胞自噬,也可以促进细胞的凋亡;早期、晚期自噬对ST诱导的细胞凋亡作用不同,氯喹可以作为一种潜在的抗肾癌药物进行相关的临床研究。     

细胞自噬对吉非替尼抑制肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨细胞自噬对吉非替尼（Gefitinib）抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖的影响。方法 采用Western blotting和LC3抗体检测自噬标志物LC3Ⅱ的含量,判断Gefitinib是否诱导NSCLC Calu6和H460细胞自噬。采用增强绿色荧光蛋白（EGFP）-LC3b质粒转染NSCLC细胞系Calu6和H460,再用40 μmol/L Gefitinib处理细胞48 h,观察绿色荧光蛋白（GFP）的分布情况。分别采用细胞自噬诱导剂依维莫司（Everolimus）、Gefitinib和Gefitinib联合Everolimus处理H460细胞,药物处理10 d后用结晶紫染色,显微镜下统计克隆数,计算不同药物刺激后细胞克隆形成数和药物对H460细胞的抑制率。结果 Western blotting检测显示,Gefitinib 40 μmol/L处理细胞48 h后,明显增加LC3Ⅱ的积累,绿色荧光呈散点状分布。经Everolimus、Gefitinib和Gefitinib联合Everolimus处理后,H460细胞克隆形成数差异有统计学意义（P<0.05）,其中Gefitinib联合Everolimus处理对H460细胞的抑制率最强,两者之间有协同作用。结论 Gefitinib能够诱导NSCLC细胞自噬,并且增加细胞自噬能增强Gefitinib对肺癌细胞增殖的抑制率。     

舒尼替尼调控miR-143对人肾癌细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨miR-143在肾癌细胞中的作用、舒尼替尼对miR-143表达的影响及与细胞增殖、侵袭的关系.方法:培养人肾癌786-O细胞株,分为对照组、miR-143组、舒尼替尼组、共同作用组.对照组细胞转染阴性对照序列,miR-143组细胞转染miR-143序列,舒尼替尼组细胞用舒尼替尼处理48 h,共同作用组细胞转染...     

舒尼替尼通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞体外生长和侵袭的实验研究

目的:研究舒尼替尼对肾癌细胞体外生长、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:培养肾癌细胞株ACHN并用不同剂量舒尼替尼(1、2、4、8μmol/L)进行处理,以不含舒尼替尼的处理条件作为阴性对照。处理后24h时,测定细胞中凋亡基因、侵袭基因、Wnt/β-catenin信号通路的mRNA表达量。结果:处理后24h时,1、2、4、8μmol/L舒尼替尼组中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量显著高于阴性对照组,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量显著低于阴性对照组;舒尼替尼剂量越高,细胞中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量越高,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量越低。结论:舒尼替尼能够通过抑制肾癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路来增加凋亡基因的表达、抑制侵袭基因的表达,进而抑制细胞的生长和侵袭。     

舒尼替尼治疗晚期小细胞肺癌1例

1 病案摘要 1.1 一般资料患者男性,50岁.因"右肺小细胞癌多周期化疗后26天,伴憋气加重1周"入院.患者1年前经纤支镜活检病理证实为右下肺小细胞肺癌.PET/CT示右肺门及纵隔淋巴结转移,先后应用EP(Vp-16+DDP)、TI(紫杉醇+IFO)、CAO(CTX+VCR+EPI)IP(伊立替康+奈达铂)方案化疗,同时行右肺门及纵隔放疗和颅脑预防性照射,后复查胸部CT示病灶进展.入院时患者喘憋较重,不能平卧,声音嘶哑.查体:喘憋貌,双侧颈部可扪及多个直径1-2cm肿大淋巴结,质韧.颈软,右肺呼吸音低,左肺闻及干啰音.心率76次/分,律齐,各瓣膜区未及杂音.胸部CT示右肺下叶后基底段肿块合并斑片状高密度影,双侧胸腔积液,心包积液.颈部B超示双侧颈部淋巴结肿大,考虑转移性.     

肾透明细胞癌舒尼替尼耐药的分子标志物筛选及相关生物学功能分析

目的 通过公共数据库,利用生物信息学方法分析对舒尼替尼敏感或耐药的肾透明细胞癌(ccRCC)样本间的基因表达差异,筛选出舒尼替尼耐药相关分子并探讨介导获得性耐药的潜在信号通路和分子机制.方法 从GEO数据库中下载对舒尼替尼敏感或耐药的ccRCC基因表达谱,利用GEO2R在线工具对不同表达水平基因进行筛选得到差异表达基因...     

舒尼替尼联合信迪利单抗治疗晚期肾细胞癌的疗效及安全性分析

目的 探究舒尼替尼联合信迪利单抗治疗晚期肾细胞癌的疗效及安全性。方法 回顾性分析2017年7月—2019年12月海南省肿瘤医院收治的48例晚期肾细胞癌患者的病历资料,根据治疗方法分为单一组（26例）和联合组（22例）,单一组予以口服舒尼替尼治疗,联合组在对照组基础上联合信迪利单抗治疗。比较两组治疗2个月后的临床疗效,记录药物不良反应,查阅患者复诊资料并电话跟踪随访3年,记录患者预后生存状况。结果 联合组疾病控制率（DCR）高于单一组（P <0.05）,两组客观缓解率（ORR）差异无统计学意义（P>0.05）。联合组肺部感染、贫血发生率高于单一组（P <0.05）。联合组和单一组手足综合征、乏力、消化道反应、白细胞降低、血小板降低、中性粒细胞计数降低、甲状腺功能减退、γ-谷氨酰转移酶升高及高血压发生率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。截止随访期,单一组死亡14例,3年总生存率为41.67%,中位无进展生存期（PFS）为15个月,中位总生存期（OS）为22个月。联合组死亡8例,3年总生存率61.90%,中位PFS为18个月,中位OS为29个月。两组PFS曲线...     

自噬在A549肺腺癌细胞耐厄洛替尼中的作用研究

目的探讨自噬在A549肺腺癌细胞耐厄洛替尼中的作用。方法不同水平厄洛替尼处理A549细胞及其获得性耐厄洛替尼细胞(A549/ER)后,细胞免疫荧光和Western blot观察自噬标记蛋白微血管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(MAP1-LC3-Ⅱ)的变化;应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬,流式细胞仪(FCM)检测用药后细胞周期及凋亡率。结果低水平(1、5μmol/L)厄洛替尼作用下两种细胞MAP1-LC3-Ⅱ表达水平较对照组(0.1%DMSO)均升高,高水平(25μmol/L)厄洛替尼作用下A549细胞MAP1-LC3-Ⅱ表达水平较低水平时降低,而A549/ER细胞MAP1-LC3-Ⅱ表达水平较低水平时仍升高。厄洛替尼水平提高至100μmol/L可诱导A549/ER细胞凋亡,3-MA抑制自噬后A549/ER细胞的凋亡率从7.76%上升至18.85%。结论自噬增强了A549/ER的耐厄洛替尼作用,抑制自噬可增强厄洛替尼的抗肿瘤作用。     

苹果酸舒尼替尼对人结肠癌细胞株LoVo的增殖抑制作用

目的 探讨苹果酸舒尼替尼体外对结肠癌LoVo细胞的生长抑制及诱导凋亡的作用.方法 利用四亚基噻唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法观察苹果酸舒尼替尼对结肠癌LoVo细胞生长抑制作用.应用流式细胞仪、电子显微镜检测苹果酸舒尼替尼诱导LoVo细胞的凋亡作用.结果 MTT结果显示苹果酸舒尼替尼在(2.5～20 μM)的浓度范围内对结肠癌LoVo细胞的生长具有显著的抑制作用.生长曲线结果显示各个浓度的药物对LoVo细胞的抑制作用呈时间依赖性.流式细胞仪可以观察到细胞周期阻滞在G0/G1期.透射电子显微镜下见到典型的早期凋亡形态学表现.结论 在一定的浓度范围内,苹果酸舒尼替尼可以抑制LoVo细胞的生长,并呈剂量和时间依赖效应.其抗肿瘤的特性与引起肿瘤细胞的凋亡有关.     

JNK信号通路在细胞凋亡与自噬中作用的研究进展

JNK信号通路在多种疾病的发生与发展中起着至关重要的作用,导致JN K信号通路激活的因素复杂多样,具体机制尚不明确.JN K信号通路参与细胞凋亡与自噬这两种密切相关的应激反应,但其之间的分子相互作用有待探究.本文主要综述了JN K信号通路及其在细胞凋亡与自噬中的部分机制.     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

冬虫夏草对糖尿病肾病大鼠肾小管细胞中AMPK/mTOR 信号传导途径的影响

目的 研究冬虫夏草（CS）对糖尿病肾病大鼠肾小管细胞中AMPK/mTOR 信号传导途径的影响。方法 60 只成年雄性Wistar 大鼠用链脲佐菌素腹腔内注射复制糖尿病肾病（DN）大鼠模型,并随机分为对照组、模型组和实验组。模型构建8 周后处死大鼠,常规测定尿蛋白量和血肌酐;HE 染色检测肾脏病理改变;TUNEL 检测肾小管细胞凋亡;采用Western blot 检测磷酸化腺苷酸激活的蛋白激酶（p-AMPK）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）和自噬相关蛋白Ⅱ（LC- Ⅱ）的蛋白表达。结果 与模型组比较,实验组CS 可降低糖尿病肾病大鼠的物理和生化指标,差异有统计学意义（P <0.05）;HE 染色观察,CS 可以有效缓解肾小管损伤和肾小管上皮细胞脱落死亡。与模型组比较,实验组肾小管上皮细胞凋亡数降低,差异有统计学意义（P <0.05）;实验组p-mTOR 蛋白含量升高,p-AMPK 和LC- Ⅱ的蛋白含量降低,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 冬虫夏草具有肾脏保护作用,可能与调节肾小管上皮细胞中自噬相关的AMPK/mTOR 信号通路有关。     

血小板衍化内皮细胞生长因子在肾细胞癌中的表达及其预后意义

目的 探讨血小板衍化内皮细胞生长因子(PD-ECGF)在肾细胞癌中的表达及其预后意义.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测2002年6月至2006年12月76例肾细胞癌患者肿瘤组织中PD-ECGF的表达水平,并分析其与肾细胞癌患者临床病理特征及预后的关系.结果 76例肾癌患者肿瘤组织中PD-ECGF高表达41例,低表达35例.PD-ECGF表达水平与肿瘤分期及组织学分级呈正相关.PD-ECGF高表达患者5年总生存率(60.98％)显著低于PD-ECFG低表达患者(94.29％,P=0.000).单因素分析显示肿瘤分期、淋巴结转移、远处转移、组织学分级及PD-ECGF表达水平均与肾癌患者5年生存率密切相关,Cox比例风险模型多因素分析显示肿瘤分期、组织学分级及PD-ECGF表达水平为影响肾癌患者预后的独立危险因素(OR=17.971、9.702、6.790,95％CI:3.010～107.290、1.835 ～ 51.305、1.156 ～ 39.894).结论 PD-ECGF在肾细胞癌的发生、发展中可能起重要作用,PD-ECGF高表达可能与肾细胞癌的预后有关.     

白藜芦醇调节Akt/mTOR通路对大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的影响机制研究

目的:探讨白藜芦醇对多囊卵巢综合征大鼠模型颗粒细胞自噬的影响,并探讨其机制。方法:40只雌性SD大鼠幼鼠随机分为2组,即多囊卵巢综合征模型组(n=30)和模型对照组(n=10)。将经免疫细胞化学法鉴定证实的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)颗粒细胞进行体外培养。用不同浓度的白藜芦醇处理,CCK-8观察细胞的增殖率变化情况;电镜观察颗粒细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内自噬相关蛋白轻链3Ⅰ(light chain 3Ⅰ,LC3Ⅰ)、自噬相关蛋白轻链3Ⅱ(light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)、Beclin1的表达,以及总(磷酸化)蛋白激酶B[total(phosphorated)protein kinase B,T(p)-Akt]、总(磷酸化)雷帕霉素靶蛋白[total(phosphorated)mammalian target of rapamyoin,T(p)-mTOR]的变化,并检测Akt抑制剂LY294002作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:免疫细胞化学结果显示,与模型对照组比较,模型组卵巢颗粒细胞中卵...     

甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

目的 探究甘草查尔酮A（LCA）对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法 通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC50）;不同浓度LCA（0、10、20及40 μmol/L）处理H226细胞48 h,通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响,通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1,以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响,并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况;选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型,随机分为两组（对照组和LCA处理组）,腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量,从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,与空白组比较,随着LCA浓度的增加,细胞存活率明显降低,48 h的IC50为28.3 μmol/L;流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期（P<0.05）,Western blot的结果显示,LCA处理后,CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低（P<0.05）;PI3K和Akt的表达无明显变化,但是它们的磷酸化水平（p-PI3K和p-Akt的表达）显著降低（P<0.05）;裸鼠荷瘤实验表明,LCA可使肿瘤体积和质量明显减小（P<0.05）。结论 LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞,其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。     

不同肾细胞癌病理亚型影像学特点

目的分析肾细胞癌不同亚型影像学特点,提高诊断水平。方法对37例肾细胞癌（其中透明细胞癌29例、乳头状癌7例、嫌色细胞癌1例）的B超、CT、MRI影像学差异进行比较分析。结果32例实性肾癌B超示：透明细胞癌多表现为低回声（20／26）,乳头状癌多为等或弱强回声（4／5）,嫌色细胞癌呈中强回声,透明细胞癌与非透明细胞癌差异有统计学意义（P=0．005）。29例实性肾癌行CT检查：透明细胞癌（23例）和非透明细胞癌（6例）平扫均显示软组织密度影,但强化后透明细胞癌表现出明显的不均匀强化,增强幅度明显高于非透明细胞癌（P=0．004）。17例实性肾癌行MRI检查,透明细胞癌T2WI多为高信号（10／11）,与乳头状癌的T2WI等／低信号（5／5）比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论综合术前B超、CT、MRI影像学检查结果,有助于肾细胞癌亚型的术前诊断。     

抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法:本文建立PI3K抑制剂作用786-O细胞模型,CCK-8法检测PI-103的IC50值,Western blot法检测PI-103作用后细胞内pAkt蛋白表达水平。结果:786-O细胞72 h的IC50为(9.06±0.06)μmol/L,在此浓度下,细胞内p-Akt蛋白的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:PI-103通过抑制PI3K来调控PI3K/Akt/mTOR信号通路下游分子,此信号通路在肾细胞癌发生发展中起着重要作用,为肾细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。     

银杏内酯K调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨银杏内酯K（GK）调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响。方法 取对数生长期的MCF-7细胞,设置分组为对照组、GK低浓度（GK-L,12.5 μg/mL）组、GK中浓度（GK-M,25 μg/mL）组、GK高浓度（GK-H,50 μg/mL）组、GK-H+AMPK抑制剂（Compound C,50 μg/mL GK+50 μmol/L Compound C）组。观察各组细胞形态以及细胞增殖、凋亡、自噬状况并分析自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达以及AMPK、p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1、LC3、P62、Beclin1表达。结果 与对照组相比,GK-L、GK-M、GK-H组细胞自噬泡数量增多,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62表达显著下降,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著增加（P＜0.05）;与GK-H组相比,GK-H+Compound C组细胞自噬泡数量减少,增殖率、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1、p62显著增加,凋亡率、LC3、Beclin1表达、AMPK蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论 GK可以诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡、抑制其增殖,可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路有关     

野生型肺炎链球菌溶血素通过PI3K-I/Akt/mTOR途径诱导A549细胞自噬

目的:研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法:常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组(Sp,MOI=30∶1)、阴性对照组[渥曼青霉素(wortmannin,WT),2μmol/L 2 h,自噬抑制剂]、阳性对照组[雷帕霉素(rapamycin,Rapa),1 mmol/L 10 h,mTOR抑制剂]和参照组(WT和Sp共同处理),各组处理时间均为1、2、3和4 h;荧光显微镜观察各组自噬点形成,透射电镜观察各组细胞自噬体结构,Western blot检测各组微管相关蛋白轻链-Ⅰ/Ⅱ(microtuble-associated protein light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ)、磷酸化UNC-51-K激酶1(phosphorylated UNC-51-like kinase1,P-ULK1)和螯体1(sequestosome 1,P62)的表达;将溶血素表达载体RFP-PLY(red fluorescent protein-pneumo...