欧洲花楸细胞悬浮培养生长动力学研究

目的：探讨欧洲花楸悬浮细胞生长规律和动力学参数。方法：测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液pH值变化;利用细胞鲜重和干重值对欧洲花楸悬浮细胞生长曲线进行拟合,用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞增殖情况,并对拟合函数求一阶、二阶导数,求算欧洲花楸悬浮细胞生长速率及生长加速度。结果：欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随培养时间增加而越来越大,培养时间到16 d,pH〉6,不再适宜细胞生长;Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线变化。培养第5d时细胞增长加速度达到最大,在8 d时生长速率达到最大,结论：欧洲花楸悬浮细胞生长函数符合logistic曲线,函数为f（x）=0.369 9/（1＋10.77e-0.329 2x）,细胞在14 d时进入增长平台期,在细胞生长至第5 d时可进行诱导子处理。     

欧洲花楸细胞悬浮培养生长动力学研究△

目的:探讨欧洲花楸悬浮细胞生长规律和动力学参数.方法:测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液pH值变化;利用细胞鲜重和干重值对欧洲花楸悬浮细胞生长曲线进行拟合,用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞增殖情况,并对拟合函数求一阶、二阶导数,求算欧洲花楸悬浮细胞生长速率及生长加速度.结果:欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随培养时间增加而越来越大,培养时间到16 d,pH ＞6,不再适宜细胞生长;Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线变化.培养第5d时细胞增长加速度达到最大,在8d时生长速率达到最大,结论:欧洲花楸悬浮细胞生长函数符合logistic曲线,函数为f(x)=0.369 9/(1+10.77e-0.329 2x),细胞在14 d时进入增长平台期,在细胞生长至第5d时可进行诱导子处理.     

欧洲花楸悬浮细胞对生物胁迫的记忆功能初探

植物对其所遭受的环境胁迫存在记忆功能,当再次受到重复的环境胁迫时能更快更好地启动对环境胁迫的应答和适应机制,从而实现长期稳定的繁衍生存。但是这类研究大都体现在农作物以及模式植物拟南芥中,在药用植物中少有研究这种记忆功能对植物生长状态的作用以及对植保素生物合成的影响。该研究采用酵母提取物(YE)作为模拟生物胁迫的诱导子,通过对欧洲花楸悬浮细胞给予重复生物胁迫,测定了重复胁迫及单次胁迫下生物量以及部分次生代谢产物含量的变化。结果表明,与第一次受到环境胁迫的欧洲花楸悬浮细胞相比,受到重复胁迫的欧洲花楸悬浮细胞在再次受到环境胁迫后生物量积累水平在部分时间点下显著提高,次生代谢产物在部分时间点下积累水平也显著升高。上述工作确定了欧洲花楸悬浮细胞存在记忆环境胁迫的现象,以及这种记忆环境胁迫的现象对欧洲花楸悬浮细胞部分次生代谢产物合成与积累的影响,为进一步研究药用植物的胁迫记忆功能及其代际遗传机制奠定了基础。     

茉莉酸通路参与Hpa1诱导的欧洲花楸细胞植保素生物合成

Hpa1是一种Harpin蛋白,可诱导植物的防御响应机制。以欧洲花楸悬浮细胞为材料,研究Hpa1粗提物(Hpa1 CE)对其次生代谢产物合成的影响以及茉莉酸(jasmonate,JA)信号通路是否参与相关信号的传导。结果显示,Hpa1 CE可诱导欧洲花楸细胞合成植保素,主要是异欧花楸素及其糖苷;Hpa1 CE处理使细胞内茉莉酸甲酯(Me JA)合成增加,同时细胞内异欧花楸素大量合成。向欧洲花楸细胞中同时添加Hpa1 CE和JA通路抑制剂salicylhydroxamic acid(SHAM),与Hpa1 CE组相比,细胞内合成的Me JA和异欧花楸素的量都大为降低。实时荧光定量PCR结果显示Hpa1 CE诱导后,JA通路中JAZ表达下调而myc2表达上调。因此Hpa1 CE处理导致欧洲花楸悬浮细胞建立了防御机制,茉莉酸通路参与了Hpa1 CE诱导的欧洲花楸细胞内植保素的生物合成。该研究首次从植物次生代谢的角度研究茉莉酸通路在植物防御机制中作用,为全面理解植物应激响应机制提供了线索。     

欧洲花楸病程相关蛋白基因SaPR1-like的克隆及序列分析

目的:探究欧洲花楸类病程相关蛋白1(Sa PR1-like)在响应生物胁迫中的功能。方法:克隆得到了Sa PR1-like基因全长序列,并对该序列进行生物信息学分析;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测Sa PR1-like在欧洲花楸悬浮细胞响应harpin蛋白胁迫后的表达特征。结果:克隆得到的Sa PR1-like基因包含1个完整开放阅读框,编码161个氨基酸。该编码蛋白质亲水性强且稳定,具有跨膜结构和信号肽,属于分泌蛋白。氨基酸序列比对分析发现,Sa PR1-like蛋白C端具有高度保守结构域[富含半胱氨酸的分泌蛋白、抗原5和致病性相关蛋白1肽段(CAPE)],推测其在欧洲花楸响应生物胁迫中发挥作用。harpin蛋白诱导欧洲花楸悬浮细胞24 h后,Sa PR1-like基因表达量显著提高。结论:克隆得到了欧洲花楸Sa PR1-like基因,并证明其在响应生物胁迫时表达和积累,可为进一步阐释欧洲花楸响应生物胁迫机制奠定基础和提供参考。     

欧洲花楸糖基转移酶基因的全长克隆与表达分析

目的:研究欧洲花楸植保素糖基化修饰的相关基因,从欧洲花楸悬浮细胞中克隆糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)基因,进行序列分析和原核表达。方法:基于欧洲花楸转录组数据设计特异性引物,克隆得到2条Sa UGTs基因的c DNA序列,构建HIS-MBP-pET28a-SaUGTs原核表达载体,诱导表达Sa UGTs重组蛋白。结果:克隆得到2条糖基转移酶基因Sa UGT1和Sa UGT2序列,完整开放阅读框为1 458 bp和1 431 bp,分别编码485和476个氨基酸,相对分子质量为54. 27 k Da和53. 49 k Da,理论等电点为5. 50和5. 63。生物信息学分析显示,无信号肽,含有糖基转移酶家族保守结构域(PSPG)。系统进化结果显示Sa UGT1和Sa UGT2蛋白与拟南芥UGT85家族亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测显示,欧洲花楸悬浮细胞经酵母提取物(YE)诱导后,Sa UGT1和Sa UGT2的相对表达量明显上调,分别在24 h和12 h达到最大值。通过IPTG诱导,在大肠埃希菌中成功表达Sa UGT1和Sa UGT2重组蛋白,并得到了纯化的重组蛋白。结论:该研究首次在欧洲花楸中克隆得到糖基转移酶基因,并成功构建了原核表达载体,为进一步研究该类基因的功能奠定了基础。     

花楸属植物的研究进展

花楸属植物中富含黄酮类、联苯类、萜类及有机酸类成分,具有镇咳平喘、抑菌和抗氧化作用,也是良好的园林应用树种,应用前景十分广阔。为进一步利用开发该属植物,该文总结了近年来花楸属植物在环境胁迫、化学成分分析、药理药效和繁殖栽培等方面的研究成果,获得以下发现:(1)该属植物分类系统不确定,类群范围界定还需要更多的证据;(2)对该属植物的研究只集中在水榆花楸、黄山花楸、花楸树、天山花楸和欧洲花楸少数几个种,对其他种研究较少;(3)现有的研究内容多集中在化学成分分析和繁殖栽培等方面,对该属植物有效成分的形成及作用机制鲜有报道。整体而言,花楸属植物的研究尚处于起步阶段,该文将为促进花楸属植物的种质资源合理利用提供理论依据和研究思路。     

天山花楸的生药学研究

目的研究和利用蔷薇科天山花楸。方法采用性状、显微及理化鉴定方法进行系统的生药学研究。结果描述、绘制了天山花楸性状、显微特征,建立其理化鉴别方法。结论为制定天山花楸质量标准和利用该生药资源提供理论依据。     

天山花楸水提取液药理学研究

天山花楸水提取液民间用以治疗咳嗽、痰症、哮喘等有效。本文实验表明，天山花楸水提取液具有对抗氨水引起小鼠咳嗽的作用，有明显的祛痰作用和对抗乙酰胆碱－组织胺混合液引起的药物性哮喘。天山花楸水提取液还可减慢心率。延长小鼠心电图的P－R间期。离体兔心房实验，发现其可剂量依赖性地抑制心肌收缩力。与一般平喘药不同，它对心肌产生抑制作用，这是其一个特点。     

天山花楸水提取药理学研究

天山花楸水提取液民间用以治疗咳嗽、痰症、哮喘等有效。本文实验表明，天山花楸水提取液具有对抗氨水引起小鼠咳嗽的作用，有明显的祛痰作用和对抗乙酰胆碱－组织胺混合液引起的药物性哮喘。天山花楸水提取液还可减慢心率。延长小鼠心电图的Ｐ－Ｒ间期。离体兔心房实验，发现其可剂量依赖性地抑制心肌收缩力。与一般平喘药不同，它对心肌产生抑制作用，这是其一个特点。