节律蛋白mPER1在NIH3T3细胞增殖和迁移中的作用

目的 研究PER1蛋白对NIH3T3细胞增殖和迁移的影响.方法 将重组表达质粒pcDNA3.1/mPER1转染入NIH3T3细胞中,并以未转染的NIH3T3细胞为对照,利用MTT法检测细胞增殖的改变.利用RT-PCR技术和Western blot检测节律蛋白mPER1对细胞迁移关键性蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.结果 MITT法显示PER1表达上调可以抑制NIH3T3细胞增殖,RT-PCR技术和Western blot检测显示在NIH3T3细胞中,当节律蛋白mPER1表达上调时,细胞迁移关键性蛋白MMP-2在RNA和蛋白水平的表达较对照组降低.结论 上调NIH3T3细胞内的PER1蛋白表达能抑制细胞增殖以及细胞迁移的关键性MMP-2在RNA和蛋白水平的表达.     

核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),C...     

甲基化结合蛋白2对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移的影响

目的: 探讨甲基化结合蛋白2 (methyl-CpG-binding protein 2, MeCP2)对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响。方法: 采用qRT-PCR和免疫印迹法检测MeCP2在PANC1、PaTu8988、SW1990 3种胰腺癌细胞株中的表达水平;将干扰质粒shMeCP2(实验组)与对照质粒shEGFP(对照组)分别转入PANC1细胞中,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力。结果： MeCP2在3种胰腺癌细胞中差异性表达。与对照组相比,实验组PANC1细胞中MeCP2 mRNA和蛋白表达明显降低(t分别为6.58,8.42,P均<0.05);细胞相对增殖率、细胞克隆形成数及迁移能力明显降低(P均<0.05)。结论： 下调MeCP2表达可降低胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力。     

Atg2基因敲除对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨自噬相关基因2(Autophagy-related gene 2,Atg2)对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响。方法 蛋白质免疫印迹法鉴定两组细胞,即腺病毒介导CRISPR/Cas9系统靶向剪切AAVS1位点的基因未敲除组(AAVS1细胞)和Atg2ab基因双敲除组(Atg2ab DKO细胞);细胞划痕实验和Transwell小室法检测两组细胞的迁移能力;CCK-8法和细胞平板克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力。结果 Atg2ab DKO细胞在24、48及72 h的光密度值(OD值)均较对照AAVS1细胞有所降低,但在72 h时,两种细胞的OD值差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞形成的克隆数量少于对照组AAVS1细胞(6.33±2.31 vs15.00±1.00),差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞创面愈合率(0.22±0.05)%显著低于对照组AAVS1细胞(0.82±0.05)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组AAVS1细胞相比,Atg2ab DKO细胞穿过Transwell小室的细胞数量显...     

m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响

探讨N6-甲基腺嘌呤（m6A）甲基化修饰结合蛋白YTH结构域连接蛋白2（YTHDF2）在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中表达及其对食管癌细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。     

miR-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的 分析微小RNA(microRNA)-3614-5p在卵巢癌细胞中的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法 OncoLnc在线数据库分析miR-3614-5p表达水平与卵巢癌患者生存期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-3614-5p在卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3、A2780、HO-8910、OC3)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中的表达。以miR-3614-5p表达最低的细胞系为转染对象,分别转染化学合成的miR-3614-5p模拟物(miR-3614-5p组)和miR-NC(对照组)。分别采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测高表达miR-3614-5p对细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因法预测并验证miR-3614-5p的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3614-5p对靶基因表达的影响。结果 miR-3074-5p表达水平较高的卵巢癌患者生存期长于miR-3074-5p表达水平较低的患者(P<0.05)。与IOSE80细胞比较,miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达显著减少(P<0.01),其在OVCAR-3细胞中表达最少(P<0.01)。与对照组比较,miR-3614-5p组OVCAR-3细胞增殖能力显著降低(P<0.05)、细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。miR-3614-5p与G蛋白α抑制剂2(G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2,GNAI2)mRNA的3′非翻译区存在结合位点(P<0.01)。高表达miR-3614-5p可显著干扰GNAI2基因的表达(P<0.01)。结论 miR-3614-5p在卵巢癌细胞系中的表达降低,其可通过干扰靶基因GNAI2的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移过程,miR-3614-5p可能是治疗卵巢癌的新靶点。     

TNNT1在骨肉瘤中的表达及其对HOS细胞增殖和迁移的影响

目的 研究肌钙蛋白T1(troponin T1,TNNT1)在骨肉瘤细胞系中的表达水平和TNNT1对骨肉瘤HOS细胞增殖、迁移的影响。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库和高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)中获取骨肉瘤患者和细胞系中TNNT1的表达信息并进行生物信息学分析。利用Lipofectamine 2000将TNNT1干扰RNA(si-TNNT1)转染至人骨肉瘤HOS细胞中,并设置siRNA阴性对照组(siR-NC),利用CCK-8法检测si-TNNT1组和siR-NC组细胞增殖能力的变化。利用划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测si-TNNT1组和siR-NC组细胞迁移能力的变化。结果 GEO(GSE36001)数据分析显示,TNNT1在骨肉瘤细胞系中的表达水平较正常成骨细胞上调,差异有统计学意义(P<0.05)。TCGA中骨肉瘤数据生存分析结果显示,高表达TNNT1的骨肉瘤患者整体存活率明显较差(P<0.12)。CCK-8实验结果显示与siR-NC组相比,...     

纤维粘连蛋白和骨桥蛋白对血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响及分子机制

血管平滑肌细胞 (ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ,ＶＳＭＣ)增殖、向内膜下迁移是动脉粥样硬化、血管再狭窄等病理过程的关键环节。有报道ＶＳＭＣ的增殖和迁移与病变局部细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ)的合成降解的再平衡即细胞外基质的重构有关。纤维粘连蛋白 (ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ)和骨桥蛋白(ｏｓｔｅｏｐｏｎｉｔｉｎ)是细胞外基质中的重要功能蛋白 ,在血管受损伤时表达量均明显增加 ,但是纤维粘连蛋白和骨桥蛋白对ＶＳＭＣ增殖和迁移的影响及其分子机制尚不清楚。本研究探讨了纤维粘连蛋…     

受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。     

lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的 探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法 收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例,qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后,通过CCK-8实验评估细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞MG-63迁移与侵袭能力。基于TARGET数据库,根据患者骨肉瘤组织中DIO3OS表达水平分为高表达组与低表达组,Kaplan Meier生存分析评估DIO3OS表达水平与患者预后的关系。结果 qRT-PCR结果显示,骨肉瘤组织及细胞中DIO3OS表达下调。敲降DIO3OS表达时,CCK-8实验结果表明骨肉瘤细胞MG-63增殖能力增加,划痕实验和Transwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加(P<0.05)。过表达DIO3OS后,CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果显示,MG-63细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,DIO3OS高表...     

在舌鳞癌中的表达及对舌鳞癌细胞增殖及迁移的影响

探讨成纤维生长因子3（FGF3）在舌癌中的表达水平及对舌鳞状细胞癌SCC-9细胞增殖及迁移的影响。方法 收集2015年1月～2020年1月新疆医科大学第一附属医院明确诊断的40例舌鳞状细胞癌组织及对应癌旁组织。将舌磷癌细胞株SCC-9细胞分为空白组（正常培养72 h)、FGF3干预组（加入100ng/mL FGF3进行干预后培养72 h)、FGFR抑制剂干预组（加入100ng/mL FGFR抑制剂后进行干预后培养72 h)。采用免疫组化检测舌鳞状细胞癌及癌旁组织FGF3的表达;采用划痕实验、CCK-8实验检测空白组、FGF3干预组、FGFR抑制剂干预组对舌鳞癌细胞迁移及增殖的影响。结果 在40例舌鳞癌及对应癌旁组织中,FGF3高表达分别为90%及12.5%,两者具有显著的统计学差异（P＜0.01）;划痕实验组中,24 h时,空白组、FGF3干预组、FGFR抑制剂干预组划痕面积百分比分别为：(13.106±0.907)%、(7.515±0.733)%、(21.099±1.113)%;与空白组比较,FGF3干预组及FGFR抑制剂干预组划痕面积百分比差异均有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8实验的结果显示空白组、FGF3干预组、FGFR抑制剂干预组细胞的存活率为（100.000±4.026）%、（136.330±9.779）%、（83.199±4.954）%,与空白组比较,FGF3干预组及FGFR抑制剂干预组细胞的存活率差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 FGF3在舌鳞癌中高表达,促进舌鳞癌细胞系SCC-9细胞的增殖及迁移。     

Smad3对非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞迁移的影响

目的过表达、敲低或抑制Smad3的活性,探讨Smad3对非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌He La细胞迁移的影响。方法设计扩增Smad3基因全长编码序列c DNA的引物,通过分子克隆技术构建p CMV-MycSmad3过表达载体,同时设计并合成靶向Smad3的siRNA序列,在A549和He La细胞中过表达或敲低Smad3,或者利用Smad3的抑制剂SIS3 2μM处理细胞,采用细胞划痕的方法研究Smad3对A549和He La细胞迁移的影响。结果利用分子克隆技术成功构建p CMV-Myc-Smad3过表达载体。过表达Smad3促进A549和He La细胞的迁移。敲低Smad3抑制A549和He La细胞的迁移。SIS3抑制Smad3的活性导致A549和He La细胞的迁移速率变慢。结论Smad3促进A549和He La细胞的迁移。     

miR-27b-3p调控SMAD1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用的影响

目的 寻找并验证miR-27b-3p和SMAD1的关系,探讨miR-27b-3p对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移作用的影响,为骨肉瘤靶向治疗提供理论依据。 方法 采用生物信息学方法预测候选靶基因;应用双荧光素酶报告实验确定miR-27b-3p和SMAD1靶向关系;采用qRT-PCR法选择SAOS-2骨肉瘤细胞系。采用miR-27b-3p转染SAOS-2细胞后,分为miR-27b-3p inhibitor组、空白对照组和阴性对照组。采用MTT、Transwell迁移和侵袭实验检测miR-27b-3p对SAOS-2细胞的影响;采用Western blotting法检测沉默miR-27b-3p后SMAD1的表达量。 结果 生物信息学检测显示,miR-27b-3p与SMAD1-UTR存在结合位点;双荧光素酶报告实验显示,miR-27b-3p inhibitor组SMAD1的表达量高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),SMAD1是miR-27b-3p的靶基因。SAOS-2细胞MTT、Transwell迁移实验和侵袭实验结果均显示,miR-27b-3p inhibitor组与空白对照组和阴性对照组细胞数相比降低,差异有统计学意义(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低。miR-27b-3p inhibitor组与阴性对照组SMAD1蛋白表达量相比明显降低(P<0.05)。 结论 miR-27b-3p可以通过调控SMAD1的表达促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用。miR-27b-3p可能在骨肉瘤细胞中起着促癌基因作用。     

桂皮醛对NIH3T3细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察肉桂主要成分桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察不同浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响,并采用流式细胞仪检测桂皮醛对NIH3T3细胞周期的影响。结果桂皮醛作用NIH3T3细胞48 h后,细胞增殖速度较对照组明显增加,增殖率为15%(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G2/M期比例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。结论桂皮醛可促进NIH3T3的增殖,这种促增殖作用可能是通过调节细胞周期使更多细胞进入S期而实现的。     

稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析

目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长?增殖和侵袭特性的影响?方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2)?用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力?结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖?克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多?结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用?     

肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响

目的：研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响，探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法：构建真核表达质粒pcDNA3-TM4B，利用脂质体稳定转染LAPTM4B cDNA至NIH3T3细胞中，用RT～PCR、Northem和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株，研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果：与转染空载体的对照组相比，转染了LAPTM4B cDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化，微绒毛的数量和长度增加，多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附／铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多，而G0-G1期细胞数减少。Western杂交显示Cyclin E蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论：LAPTM4B基因能影响细胞增殖的调节，促进NIH3T3细胞的增殖，并使NIH3T3细胞具有成瘤性，在肿瘤发生过程中具有重要的作用。     

钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖影响的研究

目的探讨不同浓度钒化钠(sodium vanadate,SV)对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖作用的影响。方法将培养的NIH3T3细胞给予不同浓度及时间的SV刺激,以噻唑蓝(MTT)比色法检测小鼠成纤维NIH3T3细胞增殖及增殖抑制情况。结果与对照组比较,0.1μM对细胞增殖无影响(P>0.05);1.0、5.0、10.0μM SV可以促进细胞增殖,而200μM SV抑制其增殖(P<0.01),不同处理时间变化趋势一致;100μM SV对细胞作用随处理时间不同而不同。结论SV对NIH3T3细胞增殖作用因处理剂量和时间不同而呈现差异。     

mTOR基因转染对NIH3T3成纤维细胞增生的影响

目的 探讨mTOR基因转染对NIH3T3成纤维细胞增生的影响.方法 运用电穿孔法将pcDNA3-mTOR质粒转染NIH3T3成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆,RT-PCR和Western印迹分析检测转染组和对照组细胞mTOR mRNA与蛋白的表达,MTT方法检测细胞增生.结果 转染组细胞mTOR mRNA和蛋白质的表达显著增强(P＜0.01);MTT法检测转染组光吸收值显著大于对照组(P＜0.01);结论 mTOR基因转染成纤维细胞可获稳定表达,并明显促进成纤维细胞增生.     

2-羟基戊二酸对胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨2-羟基戊二酸(2-HG)对异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型胶质母细胞瘤增殖、迁移的作用.方法 通过细胞培养,细胞增殖实验(CCK-8)检测不同浓度(5、10、15、20、30、40 mmol/L)2-HG对胶质瘤细胞的增殖抑制作用,细胞迁移实验检测细胞迁移能力,聚合酶链式反应(PCR)检测相关基因mRNA的表达.结果 外源性加入2-HG使胶质母细胞瘤细胞形态发生间质样改变,随浓度的升高作用愈明显,呈浓度依赖性,促进胶质母细胞瘤细胞的增殖和迁移,下调上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达,上调间质细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和β-链蛋白(β-catenin)的表达.结论 2-HG能够促进IDH野生型胶质母细胞瘤的增殖、迁移.