血管紧张素Ⅱ对肾成纤维细胞增殖及分泌白细胞介素—6的影响

目的 研究血管紧张素（Ang)Ⅱ对人肾成纤维细胞（KFB）增殖及分泌白细胞介素（IL－6）的影响，为完善Ang Ⅱ致肾纤维化机理提供新实验依据。方法 分离培养人胎肾成纤维细胞，经鉴定后分别采用MTT法和放射免疫分析法（RIA）检测AngⅡ对KFB增殖及分泌IL－6的影响。结果 10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于KFB后48及72小时，可明显促进细胞增殖；无AngⅡ刺激时，体外培养的正常人KFB可分泌微量的IL－6，且呈时间依赖性，10^-7-10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于细胞6小时，即可迅速而显著地刺激细胞分泌IL－6，10^-6mol/L AngⅡ作用24－48小时，均可显著增加细胞IL－6的分泌。结论 不同浓度的Ang Ⅱ（10^-7-10^-6mol/L)作用于人KFB后，可促进细胞增殖，提高细胞对IL－6的分泌量。推测这可能是在各种肾脏疾病进展时，AngⅡ 参与肾小管间质病变、促进肾纤维化的机制之一。     

阿托伐他汀及血管紧张素Ⅱ对脂肪组织分泌白细胞介素-6的影响

目的初步观察不同部位脂肪组织的分泌功能,以及血管紧张素Ⅱ和他汀类药物对脂肪组织分泌IL-6的影响.方法检测体外培养的人内脏及腹部皮下脂肪组织在加用阿托伐他汀及血管紧张素Ⅱ后IL-6的分泌情况.结果内脏脂肪组织分泌IL-6(2042.98±585.95pg/g组织)高于皮下脂肪组织(1 390 45±293.15 pg/g组织,P＜0.05);血管紧张素Ⅱ使内脏及皮下脂肪组织分泌IL-6增加分别为19%和18%;阿托伐他汀可使内脏及皮下脂肪组织分泌IL-6降低25%和21%;内脏及皮下脂肪组织分泌IL-6与体重指数均呈正相关(r分别为0.85、0.69,均P＜0.01).结论脂肪组织可分泌炎性细胞因子,存在部位差异,且与肥胖程度有关.血管肾张素Ⅱ可刺激其分泌增加,阿托伐他汀可抑制其分泌,该结果为临床防治心血管疾病提供了新的思路.     

大黄素对血管紧张素Ⅱ刺激人肾成纤维细胞增殖、胶原表达的抑制效应研究

目的：研究大黄素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激人肾成纤维细胞（KFB）增殖、胶原表达等的抑制效应。方法：用^H-TdR掺入法，流式细胞仪及免疫组化化学技术观察了AngⅡ1对KFB增殖，细胞周期及I型胶原表达的影响以及大黄素对AngⅡ作用于KFB的保护效应。结果：①AngⅡ10^-10mol/L至10^-6mol/L增加KFB^3H-TdR掺入率，第1、3天呈计量依赖关系（r1=0.709,P＜0．01；r3=0.806,P＜0．01）；不同浓度的大黄素（30－100μg/ml）第1、3和5抑制了AngⅡ10^-6mol/L诱导的KFB^3H-TdR掺入率，呈剂量依赖性特点。②AngⅡ在10^-6mol/L明显促进KFBG1向S期转化（P＜0．01）；大黄素在100μg/ml抑制了KFBG1向S期转化（P＜0．01）。③AngⅡ在10^-6mol/L增加了KFBI型胶原表达（P＜0．05），大黄素明显降低了AngⅡ诱导的I型胶原表达（P＜0．05）。结论：大黄素可抑制AngⅡ诱导的KFB增殖，I型胶原表达，在预防肾间质纤维化可能起重要作用。     

血管紧张素Ⅱ2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞，观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果在血管紧张素Ⅱ刺激下，ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０４６２±００２６）增殖能力明显强于正常组成纤维细胞（０３８９±００２１，Ｐ＜００１），纤维连接蛋白基因及蛋白质表达与正常组成纤维细胞比较显著增加，（３４１±４１）％、（１６２±２３）％（Ｐ＜００１）。结论ＡＴ２受体对ＡＴ１受体介导的细胞增殖和分泌纤维连接蛋白有一定的抑制作用     

血管紧张素1-7对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心室成纤维细胞的影响

目的 在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)存在情况下,探讨血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7)对SD大鼠心室成纤维细胞的影响.方法 采用新生1～3d的SD乳鼠,用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心室,采用差速贴壁法获取成纤维细胞,将细胞完全随机化分组为对照组(不予处理)、AngⅡ组、Ang1-7组、AngⅡ+Ang1-7组(先用Ang1-7预处理30 min,再加入AngⅡ处理).采用免疫荧光鉴定细胞,CCK-8检测细胞增殖,Western blot检测细胞Rac1、Rad、gp91 phox(Nox2)、P65、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白的表达,实时荧光定量PCR测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅰ、ColⅢ)和纤维连接蛋白(fibronectin) mRNA的表达.结果 AngⅡ能够促进SD大鼠心室成纤维细胞增殖,Ang1-7能减弱AngⅡ的促增殖作用(P＜0.05);与对照组比较,AngⅡ组Rac1、Nox2、P65、CTGF表达增加,Rad表达下降,Col Ⅰ、ColⅢ、fibronectin转录增加(P＜0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+Ang1-7组Rac1、Nox2、P65、CTGF表达减少,Rad表达升高,Col Ⅰ、ColⅢ、fibronectin转录下降(P ＜0.05);Ang1-7组上述各项指标与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ存在时,Ang1-7对心室成纤维细胞具有保护作用.Ang1-7通过调节Rac1、Rad及下游蛋白的表达,能够抑制成纤维细胞合成细胞外基质.     

红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察红景天苷对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,ANG-Ⅱ)诱导的大鼠血管成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:采用细胞贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF,分为对照组,终浓度0.1μmol·L-1ANG-Ⅱ组,浓度为10μmol·L-1红景天苷组,浓度为20μmol·L-1红景天苷组,ANG-Ⅱ联用浓度为40μmol·L-1红景天苷组,浓度为80μmol·L-1红景天苷组,均作用24 h。MTT法检测细胞增殖活性,ELISA法测定细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:1与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著刺激VAF增殖(P<0.01);40μmol·L-1和80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能够显著抑制VAF增殖(P<0.05)。2与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著升高VAF培养上清液OD值(P<0.01);浓度为80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能显著降低VAF培养上清液中OD值(P<0.05)。结论:红景天苷能够通过抑制VAF增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达,发挥抗血管重塑作用。     

血管紧张素II2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的 研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法 分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞,观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果 在血管紧张素Ⅱ刺激下,ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０．４６２±０．０２６）增殖能力明显增强于正常组成纤维细胞（０．３８     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的：观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ（ Ang Ⅱ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响,探讨其可能机制。方法应用血清药理学方法制备大鼠含药血清,采用复合酶消化和差速贴壁法原代培养心肌成纤维细胞,MTT法测定芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响, ELISA法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与转化生长因子β1（ TGF－β1）水平,比色法测定细胞总抗氧化能力（ T－AOC）及丙二醛（ MDA）含量,Western blot法测定Smad3活化水平。结果芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌（ P＜0.05,P＜0.01）,降低TGF－β1含量及Smad3活化水平（P＜0.05,P＜0.01）。此外,芝麻素含药血清可明显提高成纤维细胞抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA生成（ P＜0.05,P＜0.01）。对照血清对上述各项指标均无明显影响。结论芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖与胶原分泌,其机制可能与改善氧化应激状态、调节TGF－β1／Smad信号通路有关。     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的调节作用

目的：探讨缬沙坦对血管紧张素Ⅱ（angiontensinⅡ,AngⅡ）诱导的大鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）增殖的调节作用,并探讨其新的作用机制.方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;用不同浓度的缬沙坦（10-5、10-6、10-7 mol/L）对AngⅡ诱导CFs增殖干预,应用四氮唑盐试验（MTT）和3H-TdR掺入法检测其对心脏成纤维细胞的增值作用.结果：在一定范围内,缬沙坦以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFs的增殖（P＜0.01）.结论：缬沙坦能降低AngⅡ诱导的大鼠CFs的增值作用,是抗心肌纤维化发生的有效药物.     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:研究槲皮素(Quercetin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖的影响,并探讨其对心肌纤维化的可能作用机制.方法:采用细胞培养技术在体外建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖建立心肌纤维化细胞模型,采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,分别观察蛋白激酶A抑制剂(H-89)、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(genistein)及槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响.结果:genistein抑制AngⅡ诱导心脏成纤维细胞增殖作用(P＜0.01),加入Que后其抑制作用更加显著(P＜0.01),但对H-89的抑制作用不明显(P＞0.05),说明Que与genistein有协同作用,部分通过酪氨酸激酶途径抑制AngⅡ(10-6mol/L)诱导的细胞增殖.结论:槲皮素通过部分酪氨酸激酶途径抑制CFb增殖.     

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究苦参碱 (matrine)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardialfibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型 ,采用MTT法检测Mat对CFb增殖的影响 ;羟脯氨酸测定检测CFB胶原合成量 ;RT PCR检测Mat作用下CFb的Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP 13)、组织金属白酶抑制因子 1(TIMP 1)、TGFβ 1的基因表达情况。结果 :①在一定范围内 ,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成 (P <0 .0 1) ,②苦参碱可以降低Ⅰ型胶原和TGFβ 1基因mRNA表达 ,③苦参碱可以提高MMP 13基因mRNA表达。结论 :苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原合成增加 ,从而发挥有效的抗心肌纤维化作用     

血管紧张素-(1-7)对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响.方法:分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定CFsⅠ,Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果: ① 0.1 μmol/L AVP作用24 h,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较无血清对照组(0.14±0.01)明显增加(P<0.01);0.001～1 μmol/L Ang-(1-7)和0.1 μmol/L AVP共同干预后吸光度值逐渐降低,分别为0.22±0.01,0.21±0.01,0.18±0.01和0.16±0.01,均显著低于AVP组(P<0.01).② AVP组CFs的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.44±1.75)较对照组(5.40±0.67和10.82±2.40)明显增高(P<0.01);0.1 μmol/L Ang-(1-7)干预后S期百分率(8.52±0.70)和增殖指数(16.24±2.04)较AVP组降低(P<0.01).③ AVP刺激后CFs的Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别较对照组明显增高(P<0.01);给予0.001～1 μmol/L Ang-(1-7)和0.1 μmol/L AVP共同干预后,胶原表达水平浓度依赖性的下降,均显著低于AVP组(P<0.05).结论: Ang-(1-7)具有抑制CFs增殖和胶原合成的作用.     

氯胺酮超前镇痛对患者围术期血管紧张素Ⅱ及白细胞介素-2的影响

目的探讨氯胺酮超前镇痛对围术期血浆内血管紧张素Ⅱ（AⅡ）和白细胞介素-2（IL-2）的影响。方法 56例择期腹部手术患者随机分为对照组（Ⅰ组）常规气管插管全身麻醉和超前镇痛组（Ⅱ组）气管插管全身麻醉诱导前10分钟静脉推注氯胺酮0.5mg/kg,术中给予氯胺酮0.25 mg/kg/h持续泵入。两组患者于麻醉前（T1）、手术缝皮时（T2）、术毕24小时（T3）分别抽取静脉血6ml测血浆血管紧张素AⅡ含量和血清白细胞介素-2含量。于手术结束后4、12、24和48 h分别观察术后镇痛情况及不良反应,同时记录两组患者静脉镇痛泵首次触发时间,按压有效进药次数和芬太尼总量。结果Ⅱ组AⅡ较Ⅰ组在三个时间点均降低,且在T2点差别有统计学意义（P〈0.05）;两组AⅡ在T2、T3时间点较T1均降低且差异有统计学意义;与麻醉前比较,两组患者各时点血清IL-2水平明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ⅱ组与Ⅰ组各时点相比血清IL-2水平差异亦有统计学意义（P〈0.05）。术后疼痛VAS评分,Ⅱ组较Ⅰ组在术后4、12、24和48 h各个时点均降低,且在术后4、12和48 h三个时间点差别有统计学意义。术后PCIA泵的使用Ⅱ组与Ⅰ组首次触发时间、按压有效进药次数、芬太尼总量差别有统计学意义。结论氯胺酮超前镇痛能够抑制围术期AⅡ值升高,提高IL-2水平,有效控制围术期应激反应,减轻由于手术创伤及术后疼痛导致的免疫抑制状态。同时可明显增强术后镇痛效果。     

RhoA／Rho激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

【目的】探讨RhoMRho激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）刺激心肌成纤维细胞（cadiac fibroblasts，CFBs）增殖和胶原合成中的作用。【方法】采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFBs,并用AngⅡ诱导CFBs增殖和胶原合成。采用四氮唑盐比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸法测定CFBs胶原含量．RT-PCR检测RhoA/Rho激酶mRNA的表达，Western blot检测肌球蛋白结合亚基磷酸化（phosphorylation of myosin—binding subunit，MBS-P）表达作为Rho激酶功能活化的标志。【结果】AngⅡ（10-Tmol／L）刺激48h可诱导新生SD大鼠CFBs的Rho激酶活化（P〈0．01），上调RhoA、Rho激酶mRNA表达（P〈0．05，P〈0．05）；Rho激酶特异性抑制剂HYDROXYFASUDIL（h4413）对AngⅡ刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用（P〈0．05，P〈0．05）。【结论】RhoMRho激酶信通路可能在调控AngⅡ刺激CFBs增殖和胶原合成中发挥重要作用。     

钙蛋白酶对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及纤维化模型的影响

【目的】 研究钙蛋白酶在血管紧张素ＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）诱导的心肌纤维化中的作用及作用机制。【方法】 原代培养ＳＤ大鼠心肌成纤维细胞（ＣＦ）,取传代２－４代细胞,,预先给予不同浓度ｃａｌｐａｉｎ抑制剂ＰＤ１５０６１６,观察对Ａｎｇ ＩＩ诱导致纤维化模型的影响。实验分为空白对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ）、模型组（Ａｎｇ ＩＩ）、低浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿５ μｍｏｌ／Ｌ）、高浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿１０ μｍｏｌ／Ｌ）。Ｅｄｕ检测ＣＦ增殖,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测纤维化因子纤连蛋白（ＦＮ）、结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）、α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）蛋白表达,同时检测ｃａｌｐａｉｎ激活的下游产物Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ以及胞浆中ｐ－ＩκＢ与细胞核内Ｐ６５、ＮＦＡＴ４的蛋白水平变化。【结果】 ＰＤ１５０６１６显著抑制由Ａｎｇ ＩＩ诱导的ＣＦ增殖及ＦＮ、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ等纤维化因子表达上调。Ａｎｇ ＩＩ显著提高Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ的表达,ＰＤ１５０６１６可阻断Ａｎｇ ＩＩ的作用,提示ｃａｌｐａｉｎ受Ａｎｇ ＩＩ激活,是Ａｎｇ ＩＩ作用的下游因子。ＰＤ１５０６１６可抑制Ａｎｇ ＩＩ引起的胞内ＩκＢ磷酸化和胞核中ｐ６５、ＮＦＡＴ４的表达上调,提示ｃａｌｐａｉｎ的作用与ＮＦ－κＢ 、ＮＦＡＴ４转位入核的信号通路相关。【结论】 ｃａｌｐａｉｎ在Ａｎｇ ＩＩ刺激诱导心肌纤维化过程中发挥重要作用,其机制可能与ＮＦ－κＢ和ＮＦＡＴ信号通路的激活有关。     

小檗碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的作用及机制研究

目的研究小檗碱(Ber)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖、羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量、化学比色法测定NO含量和NOS活力、ELISA法测定TGF-β1含量。结果小檗碱在1.25~10 mg/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高NO含量和NOS活力、降低TGF-β1含量。结论小檗碱可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成的作用,对抑制心肌纤维化,改善心室重构有积极意义,其作用机制与促进心肌成纤维细胞分泌NO、减少TGF-β1含量有关。