胰岛素对心脏细胞增殖的影响及其在心肌肥厚中的作用

目的　研究胰岛素对心肌细胞和心肌成纤维细胞增殖的影响 ,探讨其在心肌肥厚中的作用。方法　①乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的培养及光镜、电镜和免疫细胞化学染色的鉴定。②两种细胞在不同浓度胰岛素作用下细胞数量、代谢活性与DNA合成 (WST 1、BrdUELISA法 )的测定及细胞周期分析 (流式细胞仪 )。结果　①培养的心脏细胞分别为心肌细胞和成纤维细胞。②胰岛素作用下 ,心肌细胞的数量、WST 1与BrdU的OD值及S +G2 +M期细胞百分比无变化 (P >0 0 5 ) ;而心肌成纤维细胞的数量、WST 1与BrdU的OD值及S +G2 +M期细胞百分比均升高 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论　胰岛素可促进培养的心肌成纤维细胞增殖 ,可能在心肌肥厚中起重要作用     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察噻唑烷二酮(TZD)类药物吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响,进一步推测TZD类药物对糖尿病并发心肌肥厚的可能作用机制。方法以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后。利用结晶紫染色法测定细胞的数量;利用[3H]thym id ine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果吡格列酮可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞数量、DNA合成及S+G2+M期细胞的百分比增加,并呈一定的剂量依赖性。结论吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞的增殖,这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进

目的建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型.方法通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞.结果形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达95%以上.结论该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础.     

LncRNA-ZFAS1对心肌纤维化调控作用研究

目的探究lncRNA-ZFAS1对心肌纤维化的调控作用。方法采用结扎小鼠心脏冠状动脉左前降支的方式建立心肌缺血诱发的心肌纤维化模型;利用CRISPR/Cas9技术构建心脏特异性过表达lncRNA-ZFAS1的转基因小鼠;利用Masson染色检测小鼠心脏组织心肌纤维化情况;利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导原代培养的小鼠心肌成纤维细胞,建立离体心肌纤维化模型,并转染siRNA(siZFAS1)用于敲减lncRNA-ZFAS1;利用MTT法检测心肌成纤维细胞增殖情况;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测lncRNA-ZFAS1、转化生长因子β1(TGFβ1)、Ⅰ型胶原(Col1a1)和Ⅲ型胶原(Col3a1)的表达情况。利用Western blot实验检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMΑ)的表达情况。结果在心肌纤维化模型小鼠的心脏组织中,lncRNA-ZFAS1的表达显著升高,AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中敲减lncRNA-ZFAS1后,Col3a1和TGFβ1的表达显著降低;心脏特异性过表达lncRNA-ZFAS1的转基因小鼠心脏组织中出现胶原沉积,并且α-SMA、Col1a1和Col3a1的表达显著升高。结论lncRNA-ZFAS1在心脏组织中的高表达会诱导心肌纤维化,敲减lncRNA-ZFAS1可以缓解心肌纤维化。     

瓜蒌薤白半夏汤对心肌纤维化中整合素β1的抑制作用

目的研究整合素β1和纤维连接蛋白在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌纤维化中的作用,探讨瓜蒌薤白半夏汤(GXB)抗心肌纤维化的作用机制。方法 采用胰酶消化法培养乳鼠心肌成纤维细胞,建立AngⅡ诱导心肌纤维化模型。实验分为空白对照组,AngⅡ组,5%、10%、15%GXB含药血清组和缬沙坦含药血清组。空白对照组心肌成纤维细胞以空白对照组大鼠血清温育,其余各组均以AngⅡ1×10-6mmol/L刺激24h后,再分别以空白对照组大鼠血清、5%GXB含药血清、10%GXB含药血清、15%GXB含药血清、缬沙坦含药血清温育24h。RT-PCR法检测GXB对整合素β1mRNA表达水平的影响;ELISA检测培养上清液中纤维连接蛋白的量;MTT法检测心肌成纤维细胞增殖。结果与空白对照组比较,AngⅡ1×10-6mmol/L作用心肌成纤维细胞24h,整合素β1mRNA表达水平及纤维连接蛋白的量明显上调(P0.01),心肌成纤维细胞增殖指数明显升高(P0.01);经GXB含药血清干预后,与AngⅡ组比较,整合素β1mRNA的表达水平明显下降(P0.01),纤维连接蛋白的量减少(P0.05),心肌成纤维细胞增殖指数明显降低(P0.01)。结论瓜蒌薤白半夏汤能够抑制AngⅡ诱导心肌纤维化,其作用机制可能与下调纤维连接蛋白/整合素β1表达有关。     

苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β_1的影响

目的 :研究苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1(TGF β1)表达的影响 ,阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法 :用甲基噻唑基四唑MTT(methylthiazolyltetrazolium)比色法、HE染色及免疫细胞化学技术分别检测小鼠皮肤成纤维细胞(NIH3T3)增殖、形态学及TGF β1的表达。结果 :苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达 ,并呈剂量依赖性。结论 :苦参素可通过抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达而起到抗肝纤维化作用。     

小白菊内酯对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响

目的探讨小白菊内酯(PNT)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响。方法选择12周龄健康SD大鼠12只,组织块法体外培养大鼠肺成纤维细胞,免疫细胞化学染色,观察不同浓度PNT对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。结果 TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,表达α-SMA增强(P<0.05),20μmol/L的PNT部分抑制TGF-β1的诱导作用(P<0.05);50μmol/L的PNT可完全抑制TGF-β1的诱导作用。结论 PNT有抑制TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化的作用。     

DDPH对心肌肥厚大鼠PCNA,TGFβ_1,Collagen Ⅲ蛋白表达水平的影响

目的　研究PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ型在心肌组织的表达及DDPH的作用。方法　用部分狭窄腹主动脉方法 ,从术后第 4周开始 ,ig不同剂量的DDPH (2 5、5 0mg·kg-1·d-1)持续 8wk。用免疫组织化学方法检测PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ蛋白表达的变化。 结果　术后 12wk ,发现肥厚组心肌组织PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ表达水平分别是对照组的 1 5、1 4和 2 4倍。而DDPH两个给药组蛋白表达水平明显低于肥厚组 ,但仍高于对照组。结论　DDPH对大鼠腹主动脉部分狭窄所致心肌肥厚PCNA、TGFβ1、Col lagenⅢ表达水平的增加有一定逆转作用。     

糖尿病大鼠肾间质TGF-β1表达与细胞外基质沉积的关系

目的：了解糖尿病（DM）大鼠肾间质转化生长因子－β1（TGF－β1）表达与纤维粘连蛋白（FN）和胶原Ⅲ型（ColⅢ)沉积的关系。方法：四氧嘧啶复制糖尿病模型，免疫组化法检测肾间质TGF－β1、FN和ColⅢ,PAS染色观察肾组织形态学改变。结果：正常肾间质和糖尿病1周，可见FN和ColⅢ,但未见TGF－β1表达，糖尿病2周开始肾小管见TGF－β1表达，并随疾病进展而逐渐增多。糖尿病1月肾间质中见FN和ColⅢ沉积开始增多，2月时更多，FN和ColⅢ增多与TGF－β1呈正相关。结论：TGF－β1促进糖尿病大鼠肾小管间质FN和ColⅢ的沉积。     

转化生子因子β1对培养心脏成纤维细胞α-SMA及Cx43表达的影响

目的：本研究拟观察转化生子因子β1（TGFβ1）诱导乳鼠CFs向MFs分化中α—SMA及Cx43表达的影响。方法：酶解-差速贴壁分离法分离培养乳鼠CFs,将10ng／mL的TGFβ1诱导培养第1天细胞;细胞免疫荧光及共聚焦纤维观察α—SMA及Cx43表达;以免疫印迹和RT—PCR分别半定量比较两者a—SMA及Cx43蛋白和mRNA表达。结果：分离培养2d的原代CFs细胞极少表达a-SMA及Cx43蛋白及其mRNA;经TGFβ1诱导24h后α—SMA及Cx43蛋白及其mRNA表达显著增高（P〈0．01）。结论：TGFβ1,可诱导乳鼠CFs向MFs分化,导致α—SMA及Cx43蛋白及其mRNA表达显著增高。     

尾加压素Ⅱ对心肌成纤维细胞表型转换的影响

目的 探讨尾加压素Ⅱ对心肌成纤维细胞表型转换的影响. 方法 培养1 d龄乳鼠心肌成纤维细胞,用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原含量,免疫荧光法及免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)表达,免疫印迹法检测细胞外调节蛋白激酶(extracellularregulatedprotein kinases,ERK)磷酸化;并观察ERK通路阻断药PD98059对尾加压素Ⅱ促进心肌成纤维细胞表型转换的影响. 结果 尾加压素Ⅱ刺激后,心肌成纤维细胞上清液中Ⅰ型胶原含量显著提高,胞内α-SMA表达明显增高浓集、ERK磷酸化显著提高. 给予PD98059后,α-SMA表达明显下调. 结论 尾加压素Ⅱ可以诱导体外培养的心肌成纤维细胞表型转换,机制与上调ERK通路有关.     

miR-152调控糖尿病心肌病心肌成纤维细胞增殖的作用

目的探究miR-152调控糖尿病心肌病心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用。方法应用链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,应用高糖(33.3 mmol·L-1)诱导CFs增殖模型。多聚甲醛固定心肌组织后,行HE和Masson染色;Western blot检测心肌组织和CFs中α-SMA、CollagenⅠ的蛋白表达;qPCR检测心肌组织和CFs中miR-152的表达;MTT检测miR-152对细胞增殖活性的影响。结果HE和Masson染色显示,糖尿病组大鼠心肌胶原含量明显增多,细胞排列紊乱;在高糖模型中,α-SMA和CollagenⅠ表达增加,而miR-152表达降低;乳鼠CFs转染miR-152模拟物后,α-SMA和CollagenⅠ表达降低,同时CFs增殖活性减弱。结论miR-152可能在糖尿病心肌病CFs增殖中起重要作用,提示其可能改善糖尿病心肌病。     

Jagged1/Notch1信号通路介导丹酚酸B盐对纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨丹酚酸B盐(SA-B)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肾间质成纤维细胞活化的作用及可能机制。方法 TGF-β1 2ng/ml刺激肾间质成纤维细胞NRK-49F后,分为对照组(C组)和SA-B 0.5、1、2、4、8μmol/L组(A1、A2、A3、A4、A5组),分别孵育24、48h,采用Westernblot检测Notch1、Jagged1、纤维连接蛋白(FN)的表达。结果与C组相比,不同浓度SA-B均能降低Notch1、Jagged1、FN蛋白表达;其中,A5组抑制效应最为明显(P<0.01),24h时Notch1、Jagged1、FN蛋白表达分别下降35.62%、34.39%、33.46%,48h时分别下降27.86%、30.79%、29.83%。结论 SA-B在体外可能通过下调Jagged1/Notch1信号通路,抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞FN增加,从而防治肾间质纤维化。     

地塞米松抑制转化生长因子β1对人α1(Ⅰ)前胶原基因的转录激活

目的探讨地塞米松与转化生长因子β1(TGFβ1)之间的相互作用及对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动转录的影响.方法人皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养.采用FuGENE转染试剂,分别瞬间转染含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列-2.5kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体phCOL2.5至人皮肤及瘢痕成纤维细胞.ELISA法测定地塞米松及TGFβ1作用24h后,转染了phCOL2.5的2种成纤维细胞的报告基因CAT表达量.结果地塞米松能抑制转染了phCOL2.5重组体的人皮肤及瘢痕成纤维细胞CAT表达量,且能拮抗TGFβ1对转染了phCOL2.5重组体的2种成纤维细胞CAT表达的上调作用(P＜0.05).结论在正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中,地塞米松均能抑制人α1(Ⅰ)前胶原基因的启动转录,且能拮抗TGFβ1对人α1(Ⅰ)前胶原基因的转录激活.     

黄芪对尾加压素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及分泌转化生长因子-β_1的影响

目的观察黄芪注射液对尾加压素Ⅱ（UⅡ）诱导的心脏成纤维细胞合成胶原及分泌转化生长因子（TGF-β1）的影响。方法体外培养乳鼠心脏成纤维细胞,分成3组：对照组、UⅡ组、UⅡ＋黄芪组。作用一定时间后,Real-time RT-PCR法测定各组细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1基因表达情况,3H-脯氨酸掺入测定胶原合成情况,双抗体夹心ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况。结果UⅡ可以促进乳鼠心脏成纤维细胞胶原合成,刺激TGF-β1的分泌,黄芪注射液可明显抑制UⅡ的上述作用。结论黄芪可以通过抑制UⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及TGF-β1分泌,延缓心肌纤维化及心脏重构的进展。     

碱性成纤维细胞生长因子与转化生长因子β1在类风湿关节炎滑膜组织中的表达

目的 了解类风湿关节炎(RA)滑膜组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子β1(TGF—β1)的表达分布情况，探讨其与RA发病机制的关系。方法 应用免疫组织化学SABC法对24例RA及4例正常滑膜组织中bFGF、TGF—β1的表达分布情况进行观察分析。结果 21／24例RA滑膜组织衬里层的巨噬细胞样细胞、成纤维细胞、浸润的炎症细胞与血管内皮细胞、细胞间质可见bFGF的表达分布，并且巨噬细胞样细胞、成纤维细胞、浸润的炎症细胞的阳性程度强于血管内皮细胞、细胞间质。22／24例RA滑膜组织衬里层与衬里下层的成纤维细胞、巨噬细胞样细胞、血管内皮细胞均见TGF-β1的阳性表达分布。两者比较，阳性细胞的染色程度、染色细胞数与分布范围大致相等。4例正常滑膜组织中bFGF、TGF—β1的表达分布均为阴性。结论 RA滑膜组织中bFGF、TGF—β1的表达分布均较正常增多且表达程度大致相等，两者协同作用，参与了RA病理过程的滑膜衬里层增生、炎症细胞浸润、血管增殖与滑膜血管翳的形成及对骨与软骨的破坏。     

巨噬细胞极化对心肌成纤维细胞活化的影响

目的 观察巨噬细胞极化上清对心肌成纤维细胞活化的影响。方法 提取SD大鼠的骨髓细胞和心肌成 纤维细胞。利用巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）处理骨髓细胞后,加入刺激因子：M0（无刺激因子）、M1（100 μg/L脂 多糖+10 μg/L干扰素-γ）、M2（20 μg/L白细胞介素-4）诱导巨噬细胞极化。将极化后的不同型别巨噬细胞及其培养 上清分别与心肌成纤维细胞共培养,分别设空白对照组、M0组、M1组和M2组,通过细胞免疫荧光检测心肌成纤维细 胞中纤维化蛋白的表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞和成纤维细胞特征分子的表达; Western blot检测纤维化相关蛋白及转化生长因子β受体（TGFβR）、血小板衍生生长因子受体（PDGFRs）信号通路活 化情况。结果 经M-CSF及相应刺激因子诱导,成功获得M1和M2型巨噬细胞。细胞共培养结果显示,与M0组相 比,M1组上清培养的心肌成纤维细胞中胶原蛋白1（Col1a1）和Col3a1的mRNA水平以及平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表 达水平显著降低（P＜0.05）,而M2组上清培养的心肌成纤维细胞中Col1a1和Col3a1的mRNA水平以及α-SMA、结缔 组织生长因子（CCN2）表达水平显著升高（P＜0.05）。M1组上清培养的心肌成纤维细胞中PDGFRβ蛋白磷酸化水平 显著低于 M0 组（P＜0.01）,而 M2 组上清培养的心肌成纤维细胞中 PDGFRβ 蛋白磷酸化水平显著高于 M0 组（P＜ 0.05）。结论 M1型巨噬细胞上清能够抑制心肌成纤维细胞活化,而M2型巨噬细胞上清能够激活心肌成纤维细胞。 M1型巨噬细胞抑制纤维化的作用可能与抑制PDGFRβ通路的活化有关。     

姜酮对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞激活的抑制作用

目的:探讨姜酮对心肌成纤维细胞激活的作用及机制.方法:分离培养原代大鼠乳鼠成纤维细胞,将细胞随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激组、姜酮不同浓度组(5,50,250,500 μmol·L-1).AngⅡ刺激24 h诱导成纤维细胞活化;MTT法检测细胞活性,CCK8法检测细胞增殖,qPCR法检测细胞胶原的转录情况...     

Effect of salvianolic acid B on expression of fibronectin through Jagged1/Notch1 signaling pathway

目的 探讨丹酚酸B盐(SA-B)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的肾间质成纤维细胞活化的作用及可能机制.方法 TGF-β1 2 ng/ml刺激肾间质成纤维细胞NRK-49F后,分为对照组(C组)和SA-B 0.5、1、2、4、8μmol/L组(A1、A2、A3、A4、A5组),分别孵育24、48 h,采用Western blot检测Notch1、Jagged1、纤维连接蛋白(FN)的表达.结果 与C组相比,不同浓度SA-B均能降低Notch1、Jagged1、FN蛋白表达;其中,A5组抑制效应最为明显(P＜0.01),24 h时Notch1、Jagged1、FN蛋白表达分别下降35.62％、34.39％、33.46％,48h时分别下降27.86％、30.79％、29.83％.结论 SA-B在体外可能通过下调Jagged1/Notch1信号通路,抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞FN增加,从而防治肾间质纤维化.