补阳还五汤上调miRNA-210表达促进人脑微血管内皮细胞血管生成

目的体外研究miRNA-210在补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD)促进人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成中的作用及其机制。方法制备BYHWD含药血清,脂质体2000将miRNA-210inhibitor转染至HBMECs,HBMECs分为空白血清组(10%正常对照血清)、BYHWD含药血清组(10%BYHWD含药血清)、miRNA-210inhibitor阴性对照组(NC 10%BYHWD含药血清+miRNA-210inhibitor NC)和miRNA-210inhibitor组(10%BYHWD含药血清+miRNA-210inhibitor);采用MTT、Transwell和管腔形成实验分别检测HBMECs增殖、迁移和管腔形成;qRT-PCR检测miRNA-210、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)mRNA表达,Western Blot检测VEGF和VEGFR2蛋白表达。结果与空白血清组比较,BYHWD含药血清组HBMECs增殖、迁移和管腔形成增加(P0.01),miRNA-210、VEGF和VEGFR2mRNA和蛋白表达增加(P0.01)。与BYHWD含药血清组比较,miRNA-210inhibitor组HBMECs增殖、迁移和管腔形成减少(P0.01),VEGF、VEGFR2mRNA和蛋白表达减少(P0.01)。结论 BYHWD可促进HBMECs血管生成,其机制可能与其上调miRNA-210表达激活VEGF信号通路有关。     

复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及miRNA-320的调控机制研究

[目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。对糖尿病脑梗死大鼠的缺血脑组织进行BMECs的分离培养,分别加入对照血清、含药血清、转染miRNA-320 inhibitor、中药血清混合转染miRNA-320 inhibitor;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各组BMECs的miRNA-320、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子受体-1(IGF-1R)基因表达水平,通过甲臜化合物(MTS)检测复元醒脑汤对BMECs增殖能力的影响;通过Transwell实验观察复元醒脑汤对BMECs迁移能力的影响;观察复元醒脑汤对BMECs小管形成能力的影响。[结果]与对照血清组相比,含药血清组、miRNA-320 inhibitor组、含药血清混合miRNA-320 inhibitor组均能使BMECs的增殖、迁移以及小管形成能力显著提高(P0.01),同时显著降低了miRNA-320的表达水平,显著提高了IGF-1的表达水平。[结论]复元醒脑汤能够抑制糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织中miRNA-320表达,增加IGF-1的表达,进而促进BMECs的增殖、迁移及成管能力。     

神经干细胞迁移研究平台的建立及补阳还五汤的干预影响

目的:建立体外神经干细胞(neural stem cells,NSCs)迁移研究的平台,并通过经典名方补阳还五汤对此平台进行适用性验证。方法:分离、培养大鼠脑胚胎NSCs,利用NSCs放射性迁移、划痕修复动态检测以及Transwell趋化性迁移检测的方法,建立体外NSCs迁移研究平台。利用此平台评价经典名方补阳还五汤(300,600 mg·L~(-1)),有效单体川芎嗪(10,50 mg·L~(-1))以及阳性对照基质细胞衍生因子-1(stromal-derived factor 1,SDF-1)等对NSCs迁移的影响。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测放射性迁移系统及Transwell培养上清液中SDF-1及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量。结果:经过不同时间点的观察,放射性迁移、划痕修复动态检测以及Transwell趋化性迁移均可见不同程度的NSCs的迁移;与空白组比较,补阳还五汤及川芎嗪能够明显促进放射性迁移体系中NSCs的迁移,还能够显著增加向Transwell下室迁移的细胞数,且具有剂量依赖性(P0.05,P0.01),此外还可显著提高NSCs培养上清中SDF-1,VEGF的含量(P0.01),其中对SDF-1含量上调作用高于VEGF;给予AMD3100预处理后,600 mg·L~(-1)补阳还五汤及10,50 mg·L~(-1)川芎嗪促进Transwell向下室迁移的细胞数显著降低。结论:该研究建立的NSCs迁移研究平台动态、多维,能模拟不同临床病理生理过程,且经济实用、简便易行,可供中药复方和单体成分活性筛选之用。     

防己黄芪汤对脐静脉内皮细胞功能的影响

目的 防己黄芪汤对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力的作用。方法 VEGF（20 μg·L^-1）体外诱导HUVECs，加入不同质量浓度防己黄芪汤（0.25，0.5，1 g·L^-1）作用后，分别采用噻唑蓝（MTT）比色法、划痕修复实验、转移小室（transwell）迁移、黏附、侵袭及管腔形成实验检测防己黄芪汤对VEGF诱导的HUVECs功能的影响。提取HUVECs中的蛋白，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化Janus激酶1（p-JAK1）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，VEGF（20 μg·L^-1）能显著增加HUVECs细胞的增殖、划痕修复，transwell迁移、黏附、侵袭及管腔形成的能力（P<0.01）；与VEGF组比较，防己黄芪汤（0.25，0.5，1 g·L^-1）作用24 h对VEGF诱导的HUVECs增殖活性没有明显影响，作用24 h内能明显降低VEGF诱导升高的HUVECs划痕修复，transwell迁移、黏附、侵袭及管腔形成的能力（P<0.05）。与空白组比较，VEGF能显著诱导p-JAK1在HUVECs中的异常升高（P<0.01），防己黄芪汤（0.25，0.5，1 g·L^-1）能明显降低p-JAK1的表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 防己黄芪汤能够降低VEGF诱导的HUVECs划痕修复，transwell迁移、黏附、侵袭及管腔形成的能力，而其机制可能与JAK1相关。     

风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

五味子酯甲抑制肝窦内皮细胞功能及血管新生的活性评价

探讨五味子酯甲对肝窦内皮细胞细胞功能及血管新生的影响。0~40μmol·L-1五味子酯甲与SK-HEP-1细胞孵育24 h,MTT法评估五味子酯甲对SK-HEP-1细胞活力的影响。血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1增殖,以VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼为对照,同时设空白对照组,五味子酯甲与SK-HEP-1细胞孵育,Ed U法检测细胞增殖;荧光探针法检测胞内NO含量和NOS活性;细胞迁移、Matrigel管腔形成实验检测细胞管腔形成;大鼠主动脉环实验检测血管生长变化;转基因斑马鱼实验观察斑马鱼节间血管、功能血管数变化。与空白对照组比较,VEGF诱导SK-HEP-1细胞增殖、NO含量和NOS活性升高;与模型组比较,五味子酯甲显著抑制VEGF诱导的SK-HEP-1细胞增殖、降低NO含量和NOS活性。五味子酯甲能够显著抑制VEGF诱导的SK-HEP-1细胞迁移和管腔形成,抑制大鼠主动脉环血管形成;对转基因斑马鱼节间血管具有显著抑制作用,显著减少斑马鱼功能血管数量。五味子酯甲能够抑制内皮细胞功能,且具有抑制血管新生活性的作用。     

虫草菌丝中3种活性成分对血管新生与内皮细胞功能的影响

目的探讨虫草菌丝中的3种活性成分(虫草素、腺苷、麦角甾醇)对血管新生和肝内皮细胞功能的影响。方法采用鸡胚绒毛尿囊膜实验和转基因斑马鱼实验分别观察虫草素、腺苷、麦角甾醇对新生血管面积、功能血管数量及碱性磷酸酶变化的影响;MTT法测定3个化合物对人肝癌SK-HEP-1细胞的细胞毒活性;采用血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1细胞增殖为模型,以索拉非尼为阳性对照药,MTT法测定3个化合物对细胞增殖的影响,Transwell法观察细胞迁移,Matrigel管腔形成实验观察细胞管腔形成情况,荧光探针法检测胞内一氧化氮(NO)的量和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果虫草菌丝中腺苷、麦角甾醇能够显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生、减少转基因斑马鱼功能血管数量,而虫草素能够促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生;与对照组相比,VEGF可诱导SK-HEP-1细胞增殖,促进细胞迁移和管腔形成,并可使其胞内NO水平和NOS活性显著升高;与模型组相比,虫草素、腺苷、麦角甾醇呈剂量依赖性地抑制SK-HEP-1细胞增殖,腺苷、麦角甾醇能抑制SK-HEP-1细胞迁移,3者均可不同程度地抑制SK-HEP-1细胞管腔形成,且剂量依赖性地降低胞内NO水平和NOS活性。结论虫草菌丝中的虫草素、腺苷、麦角甾醇对SK-HEP-1细胞增殖、迁移、管腔形成有不同程度的抑制作用,其中腺苷的作用尤为明显;其机制与抑制细胞内NO水平和NOS活性有关。     

裘氏内异方含药血清对人脐静脉内皮细胞血管新生活性的影响

目的:观察裘氏内异方含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:设浓度分别为5%、10%、15%的裘氏内异方含药血清组和空白血清组,运用MTT法、Transwell实验和Tube formation实验观察细胞增殖、迁移及管腔形成能力。结果:裘氏内异方含药血清能够显著抑制内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成能力,上述作用呈剂量依赖性。结论:抗血管新生活性可能是裘氏内异方治疗子宫内膜异位症的作用机制。     

桂皮醛经JAK2/STAT3通路抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖、迁移及成管

目的:为探讨桂皮醛对糖尿病视网膜病变新生血管的作用及机制,观察了桂皮醛对血管内皮生长因子(VEGF)诱导EA. hy926细胞增殖、迁移、成管以及Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法:将EA.hy926细胞分成空白组、模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和划痕实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞增殖和迁移作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(90,150μmol·L-1)组,采用管腔形成实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞成管作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+AG490 (50μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(90μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)+AG490(50μmol·L-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果:与空白组比较,模型组能够显著地促进EA. hy 926细胞增殖和迁移(P 0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组能显著抑制VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖和迁移(P 0. 01)。与空白组比较,VEGF对EA. hy 926细胞成管具有一定的促进作用,成管的节点数、交叉点数、网眼数和血管分支数均有增加,但无统计学差异。与模型组比较,桂皮醛(90,150μmol·L-1)组对成管的节点数、交叉点数和网眼数均有明显抑制作用(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,模型组p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(150μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P 0. 01),桂皮醛(90μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖、迁移、成管具有明显的抑制作用,该作用与抑制JAK2/STAT3通路的激活有关。     

补肾活血汤对SDF-1α诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响

目的探讨补肾活血汤对SDF-1α诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖迁移作用机制。方法 1利用MTT比色法观察补肾活血汤对SDF-1α诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖情况;2Transwell小室迁移袭实验检测补肾活血汤对SDF-1α诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响;3Western blot实验检测补肾活血汤对SDF-1α诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞CXCR4蛋白表达的影响。结果 SDF-1α可明显促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,补肾活血汤可抑制MDA-MB-231细胞生长,并且呈剂量依赖型(P0.001);补肾活血各组较SDF-1α组迁移细胞数量明显减少,且呈剂量依赖关系(P0.001);补肾活血汤能够抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞中CXCR4蛋白表达量且呈剂量依赖关系,与时间成反比。结论补肾活血汤可能通过SDF-1/CXCR4信号通路抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移。     

三种冬凌草素和毛萼乙素体外对人血管生成的影响

 目的研究4种二萜化合物(冬凌草甲素、信阳冬凌草甲素、冬凌草乙素、毛萼乙素,分别简称为SH-A、SX-A、SH-B、ER-B)在体外对血管生成的影响,为发现新的抗肿瘤药物提供线索。方法采用人脐静脉内皮细胞ECV304增殖、迁移试验及小管形成试验研究了4种化合物对血管生成的影响。结果4种二萜化合物对ECV304(人脐静脉内皮细胞系)的增殖、迁移、小管形成具有不同程度的抑制作用,IC₅₀值分别在1.47×10^-5～3.76×10^-5mol·L^-1(抑制作用SX-A>SH-A>SH-B>ER-B)、8.01×10^-7～5.41×10^-6mol·L^-1(抑制作用SH-B最强,而SH-A、SX-A和ER-B相仿)和4.25×10^-7～2.80×10^-6mol·L^-1内(抑制作用SH-B>SH-A>SX-A>ER-B),抑制血管迁移、小管形成的IC₅₀值均低于抑制增殖的IC₅₀。结论4种二萜化合物在体外对人脐静脉内皮细胞系血管形成均有不同程度的抑制作用,值得作为抗肿瘤药物的候选物进一步深入研究。     

红花多糖对人宫颈癌Hela细胞增殖和VEGF表达的影响

目的:通过研究红花多糖对人宫颈癌Hela细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达情况的影响,探讨红花多糖抗宫颈癌作用的分子机制。方法:体外培养人宫颈癌Hela细胞,加入含不同质量浓度(0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64和1.28 g·L-1)红花多糖的培养液,培养48 h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测红花多糖对Hela细胞增殖的影响;以不同质量浓度(0.16,0.32,0.64 g·L-1)的红花多糖处理Hela细胞48 h,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中VEGF的表达,实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGF mRNA的表达,免疫印迹法(Western blot)检测VEGF蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,(0.16,0.32,0.64 g·L-1)的红花多糖作用于宫颈癌Hela细胞48 h后能显著抑制细胞的体外增殖,呈现剂量依赖性(P0.05)。红花多糖能明显下调Hela细胞VEGF mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论:红花多糖可通过抑制VEGF的表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,发挥抗肿瘤作用。     

赤芍总苷对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响及作用机制探讨

目的:探讨赤芍总苷对肝癌细胞SMMC-7721细胞迁移能力的影响及对血管内皮生长因子(VEGF),环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:体外培养SMMC-7721细胞,随机分组,不加药物作用的为空白组,其他各组为赤芍总苷低、中、高剂量组,将不同质量浓度(200,400,600 mg·L-1)的赤芍总苷作用于细胞24 h后,采用MTT法检测赤芍总苷对细胞抑制作用,细胞划痕实验测定迁移能力,RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果:与空白组比较,赤芍总苷能够明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈现量效关系(P<0.01),并能够抑制细胞的迁移(P<0.01),RTPCR及Western blot结果显示,赤芍总苷作用细胞24 h后,可使COX-2 mRNA和VEGF蛋白的表达明显下降(P<0.01)。结论:赤芍总苷能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、迁移,其机制可能是通过下调COX-2,VEGF的表达来实现,从而为赤芍总苷治疗肝癌的发展及其临床应用提供理论和实验依据。     

三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍对高糖培养成骨细胞增殖功能的影响

目的:观察三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍对高糖条件下成骨细胞增殖功能的影响.方法:取3～5代成骨细胞进行试验,成骨细胞(OB)密度为1×105个/mL,观察葡萄糖(Glu)浓度分别为20,40,60 mmol·L-1时成骨细胞的生长情况.三七总皂苷和淫羊藿苷质量浓度为10,20,50,100 mg·L-1,采用MTT法观察单剂量药物及其配伍对高糖条件下成骨细胞的增殖抑制的改善情况.结果:与对照组相比,60 mmol· L-1 Glu的高糖环境对于OB的增殖有明显的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01);三七总皂苷和淫羊藿苷在质量浓度为10,20,50 mg·L-1时对高糖引起的OB增殖抑制具有显著改善作用(P ＜0.05,P＜0.01),组分配伍比例三七总皂苷:淫羊藿苷为50 mg·L-1∶20 mg·L-1时,对高糖条件下成骨细胞增殖抑制具有明显的改善作用(P＜0.01).结论:从对高糖条件下成骨细胞增殖抑制改善作用的角度证实了三七总皂苷和淫羊藿苷组分配伍的合理性.     

灵巴菌质油对A549细胞成瘤能力及伪足形成的影响

目的：探讨灵巴菌质油对人肺癌细胞A549成瘤能力及伪足形成的效应。方法：灵巴菌质油25,50,100 mg·L^-1分别作用A549细胞20 d和24 h,通过软琼脂克隆形成法和PI单染法观察灵巴菌质油对A549细胞的成瘤能力和生长周期的影响;灵巴菌质油100 mg·L^-1作用A549细胞24 h,通过免疫荧光染色法观察细胞骨架的影响。结果：灵巴菌质油能够抑制细胞克隆的形成,低、中、高剂量组作用A549细胞20 d后的平均细胞克隆形成数与空白对照组比较均有极显著差异（P<0.01）,抑制率与药物浓度呈正相关,并将细胞的生长阻滞在G₂期,中、高剂量组G₂期细胞比例分别为21.92%和29.94%,与空白对照组12.44%相比均有显著性差异（P<0.05）;但灵巴菌质油能改变A549细胞中微丝结构的分布,使其产生伪足。结论：灵巴菌质油具有降低A549细胞克隆形成能力及损伤其细胞骨架的作用,但它亦可能导致瘤细胞的迁移。     

川芎嗪对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用研究

 目的观察川芎嗪(TMP)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制。方法通过密度梯度离心分离脐静脉血单个核细胞,利用血管内皮生长因子(VEGF)诱导纯化方法培养EPCs。CCK-8细胞计数试剂盒、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测TMP对细胞氧化应激损伤的保护作用及机制探讨。结果200mg·L^–1 TMP抑制内皮祖细胞增殖功能;但是25mg·L^-1 TMP显著减少H₂O₂致细胞凋亡和细胞生长停滞在G0/G1期,而L-单甲基精氨酸(L-NMMA)抵消TMP的保护作用。结论TMP对氧化应激损伤诱导细胞凋亡和生长停滞具有明显的保护作用,eNOS受体拮抗剂L-NMMA能抵消TMP这种保护作用,说明TMP对EPCs抗氧化应激损伤的保护作用可能是通过eNOS途径。     

岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移

目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制。方法:分别用25,55,85 mg·L~(-1)岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组。获得25,55,85 mg·L~(-1)JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基。利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L~(-1)JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组。分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化。结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P0.01),HUVEC增殖显著降低(P0.01);25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P0.01)。与MCF-7比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/m TOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子。结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/m TOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性。     

重组蜂毒肽对C6胶质瘤细胞的抑制作用及对 VEGF,Flt-1,MMP-9表达的影响

目的： 探讨重组蜂毒肽作用于大鼠C6胶质瘤细胞后,对细胞生长的抑制作用及对血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体（Flt-1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法： 对大鼠C6胶质瘤细胞进行体外培养后,分为对照组及重组蜂毒肽低、中、高剂量治疗组,治疗组分别给予相应浓度的重组蜂毒肽（20,50,80 mg·L^-1）,采用MTT法于24,48,72 h分别测定C6胶质瘤细胞的生长情况;并采用Western blot法测定不同浓度重组蜂毒肽作用72 h后C6胶质瘤细胞VEGF,Flt-1,MMP-9的表达情况。结果： 与对照组比较,不同浓度的重组蜂毒肽作用于细胞24 h后,细胞生长情况无明显变化,但48,72 h后,低、中、高浓度治疗组的细胞的增殖活性均有不同程度的降低、生长抑制率增高（P<0.01或P<0.05）;同时中、高浓度重组蜂毒肽作用72 h后,胶质瘤细胞的VEGF,Flt-1,MMP-9表达水平均有不同程度的降低（P<0.01或P<0.05）。结论： 重组蜂毒肽对C6胶质瘤细胞的生长和VEGF,Flt-1,MMP-9的表达均有明显的抑制作用,因此重组蜂毒肽可能通过抑制VEGF,Flt-1,MMP-9的表达来抑制胶质瘤的生长。