新型bcl-2基因反义寡核苷酸F951诱导人白血病HL60细胞凋亡

目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL60细胞共孵育48h后,线粒体凋亡细胞:未处理组、FNS对照组分别为3.00%、13.57%,F9513个剂量分别为30.95%、38.08%、52.55%;Caspase活性细胞:未处理组、FNS对照组分别为0.08%、0.14%,F9513个剂量组分别为43.68%、60.54%、80.37%。凝胶电泳分析:F951处理组可见典型的DNALadder,且随着药物浓度的提高诱导DNA Ladder的作用更加明显;TUNEL和电镜检查:未处理组与FNS对照组中仅偶见凋亡细胞,F951各剂量组凋亡细胞常见,且随着药物浓度的提高凋亡细胞增多。结论F951具有诱导HL60细胞凋亡的作用;F951诱导肿瘤细胞凋亡的作用是通过抑制bcl-2基因,启动细胞凋亡调控通道而实现的。     

bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡诱导作用

目的探讨bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-ODN)对模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡诱导作用。方法将模拟急性髓性白血病缓解骨髓(正常骨髓与HL-60细胞按1000:1的比例混合)分别与终浓度为10μM的bcl-2反义寡核苷酸(反义组)和bcl-2正义寡核苷酸(正义组)共培养72小时,同时设置空白对照组,观察细胞凋亡现象。结果反义组药物作用48~72小时后,流式细胞仪和DNA电泳检测到反义组出现细胞凋亡现象,而空白对照组和正义组均未检测到细胞凋亡现象。结论bcl-2AS-ODN可诱导模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡,是其应用于体外净化的基本条件。     

反义寡核苷酸抑制人急性早幼粒细胞白血病细胞增殖和蛋白表达

目的 :研究反义寡核苷酸 (antisenseoligonucleotides)对人体引起急性早幼粒细胞白血病的HL 6 0细胞增殖和蛋白质表达的抑制作用。方法 :设计和合成了不同序列、长度和核苷酸磷酸根上有无修饰的多种脱氧寡核苷酸片段 ,进行了对HL 6 0细胞的生长抑制和蛋白表达的抑制试验 ,也测定了它们对人体正常淋巴细胞的毒性。结果 :发现互补于C mycmRNA的 2个区域的反义寡核苷酸序列 (5′ 4 4 6 1和 5′ 556 576 )有较好的抑制效率 ,在一定时间内 ,HL 6 0细胞增殖抑制分别达到 59.5%和6 2 .7% ,并且它们对人体正常淋巴细胞无毒性作用。结论 :我们新设计的互补于 5′ 4 4 6 1序列片段对HL 6 0细胞增殖有抑制作用 ,有望发展成抑制HL 6 0细胞增殖的核酸药物。     

新型反义寡核苷酸F951对HL60细胞Bcl-2基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的　研究新型反义寡核苷酸F951对白血病细胞Bcl- 2基因表达及细胞增殖的影响。方法　不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL60细胞增殖,用流式细胞术和RT -PCR法检测Bcl- 2蛋白及其mRNA表达,DNA片段化分析法检测凋亡细胞。结果　5, 10, 20μmol·L-1F951分别与HL60细胞共孵育1~5d,细胞生长明显受抑,这一抑制作用随F951浓度的升高和作用时间的延长而增强。MTTA值与未处理组相比F951 5, 10, 20μmol·L-1组细胞抑制率分别为: 20 .56%、37 .66%、54 .11%与对照组相比差异均有显著性;F951处理后HL60细胞Bcl 2mRNA水平下降,Bcl- 2蛋白减少;凝胶电泳可见典型的梯形带,且随着浓度提高诱导DNALadder的作用更加明显。结论　F951可下调Bcl -2基因表达,促进细胞凋亡而抑制白血病细胞增殖。     

bcl-2反义肽核酸诱导HL-60 K562细胞凋亡

目的　探讨不同结构的反义药物对HL 60、K562细胞系生物学活性的影响。方法　应用细胞计数、细胞形态观察和流式细胞术观察并比较反义肽核酸和反义寡核苷酸对白血病细胞HL 60、K562生物学活性的影响。结果　 1 0 μmol/L靶向bcl 2mRNA蛋白编码区的反义肽核酸能有效地抑制HL 60、K562细胞的生长、下调bcl 2蛋白的水平及诱导细胞凋亡。 1 0 μmol/L针对bcl 2mRNA同样靶点的反义肽核酸和寡核苷酸作用HL 60和K562细胞 72h ,反义肽核酸仍表现出较强的促细胞凋亡的作用 ,而反义寡核苷酸诱导细胞凋亡的作用则有所下降。结论　反义bcl 2肽核酸能诱导HL 60、K562细胞的凋亡 ,比反义寡核苷酸有更好的反义作用。     

bcl-2反义药物的设计及其对白血病细胞生长的影响

目的　通过计算机模拟bcl 2基因的mRNA二级结构 ,优化反义药物设计。方法　用计算机程序Mfold软件模拟mRNA的二级结构后 ,筛选出不稳定的二级结构区域 ,进行反义药物设计 ;用实验评价所设计反义药物的生物效应 ,筛选出的bcl 2反义寡核苷酸对白血病细胞株HL 60、K5 62生物学活性的影响。结果　有 2个位点的反义寡核苷酸在计量为 10 μmol·L-1以上时 ,能明显抑制细胞的生长活性。结论　bcl 2mRNA二级结构的模拟是设计反义药物的一条新的途径     

Bcl-2基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞株药物敏感性的影响

目的:探讨bcl-2基因反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的bcl-2蛋白的表达和药物敏感性的影响.方法:用人工合成bcl-2基因反义寡核苷酸预培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以免疫组化法检测细胞bcl-2蛋白的表达水平;以MTT法检测bcl-2反义寡核苷酸、阿霉素单独及联合应用对MCF-7细胞生长的抑制情况,比较bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞药物敏感性之间的相关性.结果:联合应用bcl-2反义寡核苷酸与阿霉素能够明显增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性,细胞存活率明显下降.免疫组化结果显示MCF-7细胞bcl-2表达水平与细胞药物敏感性有相关性.结论:bcl-2反义寡核苷酸能够抑制MCF-7乳腺癌细胞bcl-2基因的表达,提高MCF-7细胞对阿霉素的敏感性.     

慢性髓性白血病的反义寡核苷酸治疗

慢性髓性白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）是造血干细胞的疾患,表现为在外周血中含有大量未成熟的粒细胞、嗜碱性细胞、血小板以及能引起脾大的白细胞减少症。发病率为（1～2）／100000,占成年人白血病的15％左右。     

维甲酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞凋亡的研究

目的　探讨全反式维甲酸 (all- trans retinoic acid,ATRA)和 bcl- 2反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺癌的作用及机制 ,寻找肺癌治疗的新途径。方法　采用不同浓度的 ATRA单用或联用 bcl- 2 ASODN和 bcl- 2无义寡核苷酸 (nonsense oligodeoxynucleotides,NSODN)处理 SH- 77细胞 ,通过苔盼蓝拒染实验检测细胞活力 ,MTT法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡和 BCL- 2蛋白的表达。结果　不同浓度的 ATRA和 bcl- 2 ASODN对 SH- 77细胞均有抑制生长和诱导凋亡作用 ,G1 / G0 期细胞比例升高 ,S期细胞比例降低 ,增殖指数 (PI)降低 ,凋亡指数 (AI)和 AI/ PI比值升高 ;BCL- 2蛋白比例下降明显。 ATRA(10 - 6 m ol/ L)与 bcl- 2 ASODN两者联用与两者分别单用或与对照组比较差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。结论　 ATRA和 bcl- 2 ASODN对 S- 77细胞的生长均有抑制作用 ,同时可诱导其凋亡 ,降低其 BCL - 2蛋白表达 ,两者联用时抗癌作用进一步加强 ,提示分化诱导和基因联合治疗可能成为肺癌治疗的新策略     

寡核苷酸的摄取与血液肿瘤细胞种类和增殖活性的关系

目的探讨血液肿瘤细胞摄取寡核苷酸与其种类和活性的关系。方法流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度。结果经过0.60 μmol·L^-1 荧光素FITC标记的G3139作用4 h后，血液系统肿瘤患者外周血及骨髓单个核细胞对G3139的摄取能力明显高于正常人；不同来源的血液肿瘤细胞株摄取G3139的能力不同，单核细胞、B淋巴细胞和髓系粒细胞来源的白血病细胞的摄取能力明显高于T淋巴细胞来源的白血病细胞；经过全反式维甲酸作用的HL60细胞的增殖活性明显受到抑制，同时细胞摄取G3139的能力明显下降。结论血液肿瘤细胞具有摄取寡核苷酸的能力，这种摄取能力与其细胞种类和细胞增殖活性有关。     

Survivin与bcl-2基因反义寡核酸联合对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的：本研究旨在探讨survivin与bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法：在BALB／c裸鼠上建立MCF-7乳腺癌细胞株模型．然后随机分成阴性对照组和5个实验组[分别为脂质体survivin正义脱氧寡核苷酸（SODN）组、脂质体bcl-2 SODN组、脂质体survivin反义寡脱氧核苷酸（ASODN）组、脂质体6cl-2 ASODN组、联合反义给药组]。检测裸鼠体重及肿瘤体积变化，计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果：给药后，联合反义给药组的肿瘤体积抑瘤率为78．4％，肿瘤重量抑瘤率为75．3％，肿瘤缩小率为41．6％。在给药后，各组裸鼠体重变化无明显统计学差异（P〉0．05）。结论：survivin与bcl-2基因反义寡核酸联合在体内能明显抑制肿瘤生长。     

大黄素对荷人K562细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察大黄素对白血病K562细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达水平,探讨其作用机制。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜方法观察肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果:各用药组抑瘤作用与阴性对照组相比差异均具有显著性(P<0.05),高浓度组与羟基脲组具有同等的抑瘤效应(P>0.05),光镜和电镜检测发现大黄素低、中、高浓度组均可见瘤细胞凋亡和坏死,其中以高浓度处理组最为显著,羟基脲处理组部分瘤细胞以坏死为主。免疫组化和RT-PCR结果表明大黄素处理后肿瘤组织中Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达下调。结论:大黄素可以明显抑制K562细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bax及Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。     

CA46细胞对Bcl-2反义核酸(F951)的摄取及F951在CA46细胞内的分布

针对Bcl 2mRNA的反义寡核苷酸能特异性地抑制靶细胞中Bcl 2基因的表达 ,下调Bcl 2mRNA和蛋白质的水平[1] 。F95 1是我所自行研制的不同于现有其它序列的针对癌基因Bcl 2mRNA的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 ,本研究采用同位素技术研究了CA4 6细胞在体外对F95 1的摄取及F95 1在CA4 6细胞中的分布。1　材料与方法1.1　F95 1的来源与同位素标记　F95 1是与Bcl 2mRNA起始密码AUG附近的 18个核苷酸特异性互补的单链DNA ,经硫代修饰 ,委托中国国家原子能研究院同位素研究所行氚标记、纯化 ,比活度为～ 2 9 6GBq·g-1。1.2　CA4 6细胞的…     

不同靶点的反义bcl—2寡核苷酸对白血病细胞足叶乙甙敏感性影响的研究

目的探讨针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对足叶乙甙诱导HL-60和K562细胞凋亡的影响。方法应用MTT法和流式细胞仪检测反义寡核苷酸与足叶乙甙联合作用的HL60和K562细胞中bcl-2蛋白表达和细胞凋亡及足叶乙甙IC50值。结果10μmol     

新型c-Myc反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸在小鼠体内的药动学

目的 :研究新筛选合成的c Myc基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotidestoc Myc ,c MycAS PS ODN )在小鼠体内的药动学、组织分布和排泄情况。方法 :给小鼠按 5 ,10 ,2 0mg·kg- 13个剂量静脉注射3H c MycAS PS ODN后 ,液闪仪测定不同时间点血浆药物浓度 ;按 10mg·kg- 1静脉注射3H c MycAS PS ODN ,测定不同时间组织器官中3H c MycAS PS ODN的含量和其在粪、尿中排泄率 ,药动学统计程序拟合分析。结果 :静脉注射后 3种剂量血浆药物浓度 时间曲线均符合二室分布模型 ,3种剂量下的AUC之间有明显的线性关系 ;多数组织药物分布浓度 2h达高峰 ,肝、脾、肾、肺和骨髓中药物浓度较高 ,2 4h尿、粪总排泄率 82 %。结论 :c MycAS PS ODN在体内分布快 ,除脑、生殖腺等亲脂性组织外 ,其他组织含量高 ;主要通过尿液排泄。     

脂质体转染bcl-2反义寡核苷酸G3139在HL-60细胞中的动力学模式

目的　应用阳离子脂质体介导或直接转染时 ,建立HL 6 0细胞摄入由 5 FITC标记的bcl 2反义寡核苷酸G3139的动力学模式及观察G 3139在细胞内的分布。方法　流式细胞仪测定细胞内的相对平均荧光强度 ,荧光显微镜观察细胞内的荧光分布。结果　①脂质体介导转染法显著提高HL 6 0细胞对G 3139的摄入 ,当DOSPER/G 3139(μg/μg)为 2 2 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达G 3139直接作用时的 40倍 ,而且HL 6 0细胞对G 3139的摄入跟G3139的浓度和作用时间有关。②细胞内的G 3139可向胞外转运 ,在DOSPER介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1/ 2 约为 4h ,而G 3139直接作用后 ,t1/ 2 约为 0 5h ;③DOSPER介导转染 6h后 ,细胞内荧光物质主要以明亮的点状聚集在细胞核和部分细胞浆的细胞器中 ,而G 3139直接作用时 ,荧光物质则弥漫分布于胞浆中。结论　DOSPER可以增加G 3139的细胞摄入并改变其胞内分布 ,可能是阳离子脂质体增加bcl 2反义寡核苷酸生物活性的重要原因。     

蟾蜍灵对小鼠S_(180)肉瘤bcl-2基因表达的影响

目的检测蟾蜍灵对小鼠S180肉瘤bcl-2基因表达的影响,探讨蟾蜍灵对肿瘤的抑制作用。方法建立小鼠S180肉瘤模型,从瘤组织中提取总RNA,设计目的基因引物和内参照甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPD)引物。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分别检测实验组及对照组小鼠瘤体bcl-2基因的表达,应用Bio-RAD凝胶成像系统及在QuantityOne软件辅助下分析测定表达结果。结果实验组小鼠瘤bcl-2表达低于对照组,差异有统计学意义。结论蟾蜍灵对小鼠S180肉瘤有抑制作用。