抗广州管圆线虫噬菌体抗体库的构建及初步筛选

目的以广州管圆线虫感染的小鼠脾细胞为源,构建抗广州管圆线虫抗体库,并筛选可用于广州管圆线虫病早期诊断的目的抗体。方法提取感染广州管圆线虫的小鼠脾细胞RNA,并逆转录合成cDNA第一链,PCR扩增出抗体轻链和重链基因,将轻、重链基因先后连接到表达载体pComb3上,转化大肠杆菌XLI-Blue,构建组合文库。用广州管圆线虫排泄分泌抗原（EsAg）作为筛选抗原,进行富集筛选,用ELISA法鉴定阳性克隆。结果成功构建了小鼠抗广州管圆线虫噬菌体抗体文库,库容为2.32×106,滴度为1.7×1013cfu/ml。筛选到了抗广州管圆线虫排泄分泌抗原特异性抗体克隆5株,用过氧化物酶标记的抗M13抗体进行初步鉴定,具有一定的特异性。结论构建的抗广州管圆线虫噬菌体抗体库达到了要求,为研制广州管圆线虫金标诊断试剂盒奠定了基础。     

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库的构建

目的 :构建白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫cDNA文库。方法 :抽提、纯化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫总RNA ,进行反转录合成第 1链cDNA ;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒进行长距离PCR ,合成全长双链cDNA ;PCR产物经蛋白酶K消化、提纯后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,然后经 1 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定 ,回收 40 0bp以上的组分 ,并与λTriplEx2载体连接 ;连接产物经体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度 ;随机挑取 9个噬菌体 ,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增 ,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 :经检测 ,未扩增文库滴度达 2 0× 10 7pfu mL ,重组效率在 10 -4 稀释度时每块平板约 2 10～ 2 5 5个噬菌斑中均未发现任何蓝色噬斑 ,扩增文库滴度达 1 75× 10 9pfu mL ;用载体克隆位点两端的引物进行PCR鉴定 ,结果显示 :所选 9个噬菌体中均含有重组的cDNA ,并且均在 5 0 0bp以上 ,其中 1kb以上的有 2个、 70 0bp的有 5个、 5 0 0bp的有 2个。结论 :已成功地获得一高质量的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫cDNA文库。     

寄生虫学

弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究；zs株弓形虫p22基因片段在巨噬细胞中的表达；急性弓形虫感染所致昆明鼠不孕的实验研究；弓形虫p24基因敲除转染质粒pGB／P5-P3的构建；大鼠天然抗体相关的弓形虫抗原基因的免疫筛选与克隆；弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选；大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验病理学研究；卡氏肺孢子虫病鼠氧化损害与中药防治的实验研究；肾移植后并发卡氏肺孢子虫肺炎12例临床研究；人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导人肺上皮细胞凋亡；旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选；广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选；用组织化学方法鉴别日本血吸虫细胞来源的研究；日本血吸虫EST序列的电子延伸及结果分析。     

羊种布鲁菌05／43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞cDNA文库的构建

目的构建羊种布鲁菌05／43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库。方法培养的绵羊肺泡巨噬细胞经羊种布鲁菌05／43株侵染后，以Trizol试剂提取其总RNA，用cDNA文库构建试剂盒构建巨噬细胞的cDNA文库。随机选取cDNA文库中的18个克隆进行表达序列标签（EST）序列测定，测序结果用BlastX和BlastN软件在GenBank蛋白质库和核酸库中进行序列同源性比对。结果构建的cDNA文库的库容量为1．192×10^6，重组率为95．65％。18个EST测序，12个与CD抗原基因、细胞因子基因、蛋白酶基因等已知功能的基因序列相关，6个为未知功能基因的EST序列。结论成功构建了羊种布鲁菌05／43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的cDNA文库，这将有助于阐明该菌株的致病机制。     

广州管圆线虫感染的观察与成虫特异性肌蛋白-1基因的扩增

目的观察广州管圆线虫在非适宜宿主体内的移行过程,探寻该病新的更有效的诊断方法.方法用广州管圆线虫第三期幼虫,经灌胃和腹腔注射两种方式感染小鼠.分别于感染后第4、20、30天随机抽取小鼠进行解剖,观察其脑组织的病理改变;并从脑组织分离和计数虫体;同时采集小鼠的全血、血清和脑脊液样本待检.根据广州管圆线虫成虫特异性肌蛋白-1基因的序列,设计半嵌套式PCR引物扩增成虫DNA和检测感染小鼠样本.结果①小鼠感染以30条幼虫/鼠为宜,经灌胃与经腹腔注射感染无显著性差异;②感染后30天从小鼠脑组织内检获的虫体数较20天时显著下降;③感染后第30天小鼠脑组织病理改变及其程度类似第20天或略轻;④PCR扩增产物经测序证实:其与广州管圆线虫基因序列完全一致.结论①广州管圆线虫在非正常宿主体内也会出现类似在适宜宿主体内的移行过程,只是向脑组织外的移行在时间上明显延迟.②用PCR方法扩增成虫DNA获得成功,但用该方法未能从感染小鼠的样本中探测到期望的目标.     

羊种布鲁氏菌05/43株侵染绵羊肺泡巨噬细胞cDNA文库的构建

 目的 构建羊种布鲁菌 05/43 株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的 cDNA 文库。 方法 培养的绵羊肺泡巨噬细胞经羊种布鲁菌 05/43 株侵染后，以 Trizol 试剂提取其总 RNA， 用 cDNA 文库构建试剂盒构建巨噬细胞的 cDNA 文库。随机选取 cDNA 文库中的 18 个克隆进行表达序列标签（EST）序列测定，测序结果用 BlastX 和 BlastN 软件在 GenBank 蛋白质库和核酸库中进行序列同源性比对。 结果 构建的 cDNA 文库的库容量为 1.192 × 10⁶，重组率为 95.65%。18 个 EST 测序，12 个与 CD 抗原基因、细胞因子基因、蛋白酶基因等已知功能的基因序列相关，6 个为未知功能基因的 EST 序列。 结论 成功构建了羊种布鲁菌 05/43 株侵染绵羊肺泡巨噬细胞的 cDNA 文库，这将有助于阐明该菌株的致病机制。     

广州管圆线虫感染致大鼠肺组织病理改变及免疫组化研究

目的观察动物感染广州管圆线虫后肺组织病理改变,以及应用抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体进行感染鼠肺免疫组织化学研究。方法20只大鼠实验室人工感染广州管圆线虫,组织学方法观察肺组织的形态学变化,免疫组织化学方法应用实验室制备的抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体IgG和IgM进行肺组织切片的免疫反应性研究。结果受感染的大鼠肺组织肿胀实变,表面及切面质硬粗糙,有灰白色虫卵结节,病变范围广泛。HE染色镜下观察可见肺组织中有多个圆形、椭圆形的虫卵结节,结节周围组织细胞反应及纤维化．肺泡隔增厚,肺泡轮廓消失。结节内虫卵发育形成桑葚期、仔虫期及一期幼虫。用抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体IgG和IgM分别行免疫组化,结果显示桑葚期虫卵表达IgG,而IgM则在桑葚期、仔虫期及一期幼虫等部位均有显著阳性表达。结论广州管圆线虫感染所致大鼠肺脏病理改变,主要表现在肺内形成多个虫卵结节,并可致肺呈纤维化改变：抗广州管圆线虫成虫单克隆抗体IgG和IgM在肺组织虫卵结节内的阳性表达有显著差别。     

广州管圆线虫感染的观察与成虫特异性肌蛋白-1基因的扩增

目的 观察广州管圆线虫在非适宜宿主体内的移行过程，探寻该病新的更有效的诊断方法．方法 用广州管圆线虫第三期幼虫，经灌胃和腹腔注射两种方式感染小鼠．分别于感染后第4、20、30天随机抽取小鼠进行解剖，观察其脑组织的病理改变；并从脑组织分离和计数虫体；同时采集小鼠的全血、血清和脑脊液样本待检．根据广州管圆线虫成虫特异性肌蛋白-l基因的序列，设计半嵌套式PCR引物扩增成虫DNA和检测感染小鼠样本．结果 ①小鼠感染以30条幼虫／鼠为宜，经灌胃与经腹腔注射感染无显著性差异；②感染后30天从小鼠脑组织内检获的虫体数较20天时显著下降；③感染后第30天小鼠脑组织病理改变及其程度类似第20天或略轻；④PCR扩增产物经测序证实：其与广州管圆线虫基因序列完全一致．结论 ①广州管圆线虫在非正常宿主体内也会出现类似在适宜宿主体内的移行过程，只是向脑组织外的移行在时间上明显延迟．②用PCR方法扩增成虫DNA获得成功，但用该方法未能从感染小鼠的样本中探测到期望的目标．     

北方蚋幼期的补充描述并蚋属一新纪录(双翅目:蚋科)

本文补充描述北方蚋 Simulium ( Simulium) septentrionale( Tan et Chow,1 976)的蛹和幼虫 ,并报告贝氏蚋 Simulium ( Simulium) behningi Enderlein,1 92 6为一新纪录。     

颞下颌关节与颅面指标的计算机相关及回归分析

本文用计算机分析统计了118例(236侧)颞下颌关节的12项骨性指标及10项颅面指标的正常值及相关关系。结果表明颞下颌关节各项指标之间、颞下颌关节与颅面各主要指标之间,均存在良好的相关关系。说明颞下颌关节,特别是关节窝和髁突的形态大小具有明显的规律性。由于颅面诸指标与颞下颌关节主要指标之间高度相关,因而本文用逐步回归方法,建立了由颅面特征指标推算髁突形态的回归方程。本文的结果可为该关节的形态研究及人工关节的设计和应用提供有益的依据。