丹酚酸B对肝纤维化大鼠TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的: 观察丹酚酸B盐(salvianolic acid B, SA-B)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-beta1 (TGF-beta1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响, 并探讨SA-B抗肝纤维化的可能机制. 方法: ♂SD大鼠30只随机分为正常对照组、模型组和丹酚酸B治疗组, 以5 mL/L的二甲基亚硝胺(DMN)建立肝纤维化模型, 治疗组在造模4 wk后给予SA-B治疗4 wk. 应用HE, Masson染色观察肝组织病理纤维化分级, 全自动生化分析仪检测ALT、AST和Alb, 放免法检测HA和LN, S-P免疫组织化学方法检测TGF-β1、MMP-2和TIMP-2蛋白质的表达. 结果: 与模型组相比, SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构, 治疗组血清ALT、AST、HA和LN水平明显减低(87.0±28.7 U/L vs 190.4±27.4 U/L, 85.6±25.3 U/L vs 178.2±15.9 U/L, 179.7±32.8 mg/L vs 433.3±86.1 mg/L, 135.6±21.1 mg/L vs 224.7±29.2 mg/L, 均P<0.01), 经SA-B干预后TGF-beta1和TIMP-2表达明显下降, 与模型组相比有显著性差异(18.53±2.54 vs 12.78±2.65, 21.88±3.83 vs 14.69±4.51, 均P<0.01), 而MMP-2表达水平无明显变化. 结论: SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构, 可能通过抑制TGF-beta1和TIMP-2表达而促进肝纤维化的逆转.     

化学合成经修饰抗TIMP-2小干扰RNA对CCl4诱导肝纤维化动物模型的影响

目的:研究化学合成经修饰抗金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)小干扰RNA(siRNA)对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的影响及其作用机制.方法:SD大鼠42只随机平均分成7组:正常组、阴性对照组、假手术组、模型组,治疗组(分3组,分别用0.05、0.1、0.2mg/kgsiRNA尾静脉注射).以400mL/LCCl4(3μL/g)sc诱导大鼠肝纤维化.8wk后所有动物取肝组织标本,测门静脉血压(PVP)并经腹主动脉取血.常规HE染色和VanGieson(VG)胶原染色,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CIV)和羟脯氨酸(Hyp).应用荧光实时定量PCR法检测TIMP-2、Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)、Ⅲ型胶原纤维(COLⅢ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达.应用Westernblot或明胶酶谱法检测TIMP-2、α-SMA和MMP-2蛋白的表达.结果:各治疗组在应用抗TIMP-2siRNA治疗后组织学病变减轻,PVP较模型组降低(2.2±0.1,1.9±0.1,1.6±0.1kPavs2.7±0.1kPa,P<0.05),血清ALT和AST减少(2089.3±154.5,1869.8±138.0,1422.5±139.7nkat/Lvs2717.2±193.8nkat/L,P<0.05;3634.1±242.7,2739.4±141.3,2286.6±145.5nkat/Lvs4067.5±251.5nkat/L,P<0.05),反映肝纤维化指标的HA,LN,PCⅢ,CIV和Hyp均显著低于模型组(176.0±10.2,160.6±9.3,109.9±9.4μg/Lvs206.3±17.0μg/L,P<0.05;93.1±8.2,71.4±7.5,55.9±7.3μg/Lvs116.6±10.8μg/L,P<0.05;71.2±6.1,64.1±5.1,53.6±4.3μg/Lvs91.2±8.9μg/L,P<0.05;64.3±5.4,50.7±5.8,41.6±4.4μg/Lvs80.3±6.8μg/L,P<0.05;328.7±17.6,279.7±16.3,230.4±16.1μg/gvs380.7±20.6μg/g,P<0.05).各治疗组TIMP-2,COLⅠ,COLⅢ和α-SMAmRNA的表达较模型组明显减少(7.53±0.83,5.04±0.75,1.30±0.49vs23.23±2.14,P<0.05;33.38±2.85,22.80±2.48,11.45±1.27vs43.18±3.32,P<0.05;19.23±1.95,13.21±1.35,10.11±1.09vs25.90±2.23,P<0.05;23.76±2.06,15.33±1.25,10.53±1.02vs34.85±3.16,P<0.05),且TIMP-2,MMP-2和α-SMA蛋白的表达也相应减少(23.27±3.06,14.13±1.86,9.16±1.33vs44.83±5.45,P<0.05;23.80±2.14,15.58±1.52,9.52±0.93vs39.90±3.23,P<0.05;24.58±2.59,19.29±2.31,13.40±1.98vs57.19±7.07,P<0.05).结论:化学合成经修饰抗TIMP-2siRNA能显著降低TIMP-2的表达,促进细胞外基质的降解,抑制肝星状细胞的活化.     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响

目的:通过观察丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响,探索其抗肝纤维化的可能机制.方法:♂SD大鼠55只,体质量180-220g,随机分为正常组、模型组、预防组.除正常组外,其余均采用四氯化碳、高脂饮食及乙醇复合因素复制肝纤维化模型,造模同时预防组每日一次予以0.8 g/kg丹芍化纤自来水悬液灌胃,模型组、正常组予以等体积自来水灌胃,持续8 wk.造模结束后肝组织HE染色病理检查,免疫组化检测肝组织PDGFR-β、蛋白印迹检测肝组织p-ERK1/2在各组表达,生化法检测各组血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP),计算白球比(A/G).结果:造模8 wk后经病理学证实模型大鼠形成典型的肝纤维化,模型成功.与正常组相比,模型组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著升高,ALB、A/G显著降低(PDGFR-β:184.6±8.5 vs 89.6±5.8,P<0.05;p-ERK1/2:360.0±14.5 vx 15.4±2.1,P<0.05;HA:517.5±91.5μg/L vs 254.4±33.1μg/L,P<0.05;LN:58.4±11.3μg/L vs 37.3±9.8μg/L,P<0.05:PⅢP:36.9±5.6μg/L vs 4.7±1.5μg/L,P<0.05;ALB:27.4±4.9 g/L vs 42.1±1.6 g/L,P<0.05;A/G:0.89±0.08 vs 1.38±0.09,P<0.05);与模型组相比,预防组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著降低,ALB、A/G显著升高(PDGFR-β:91.1±6.3 vs 184.6±8.5,P<0.05;p-ERK1/2:253.8±18.2 vs 360.0±14.5,P<0.05;HA:322.9±41.4μg/L vs 517.5±91.5μg/L,P<0.05;LN:46.0±9.4μg/L vs 58.4±11.3μg/L,P<0.05;PⅢP:14.5±2.4μg/L vs 36.9±5.6μg/L,P<0.05;ALB:37.2±2.8g/L vs 27.4±4.9g/L,P<0.05;A/G:1.18±0.13 vs 0.89±0.08,P<0.05).结论:PDGFR-β及p-ERK1/2在肝纤维化形成中起重要作用,丹芍化纤胶囊具有良好的预防肝纤维化形成的作用,其降低PDGFR-β及p-ERK1/2在肝组织的表达可能是其作用机制之一.     

安络化纤丸对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的抑制作用

目的 观察安络化纤丸对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化形成的抑制作用.方法 采用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,观察安络化纤丸干预后大鼠肝功能、血清透明质酸(HA)和肝组织羟脯胺酸含量变化,并观察肝组织病理学改变和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况.多组计量资料分析采用One way ANOVA,多重比较采用LSD方法.结果 安络化纤丸干预组血清ALT、AST水平分别为(129.08±53.45)U/L和(321.25±138.32)U/L,血清HA和肝组织羟脯胺酸含量分别为(1644.47±380.45)ng/ml和(0.23±0.08)μg/mg,均明显低于模型组[分别为(611.77±354.17)U/L,(1199.00±763.54)U/L,(3768.38±851.98)ng/ml,(0.51±0.13)μg/mg],差异均具有统计学意义(P<0.01).光镜下显示安络化纤丸干预组大鼠肝组织病理改变较模型组明显减轻(P<0.01),肝组织MMP-2表达强度明显高于模型组(P<0.05).结论 安络化纤丸对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化形成有较好的抑制作用,其可能的机制与保肝降酶、增强肝组织MMP-2活性和促进细胞外基质降解有关.     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响

目的通过观察丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响,探索其抗肝纤维化的可能机制.方法♂SD大鼠55只,体质量180-220 g,随机分为正常组、模型组、预防组.除正常组外,其余均采用四氯化碳、高脂饮食及乙醇复合因素复制肝纤维化模型,造模同时预防组每日一次予以0.8 g/kg丹芍化纤自来水悬液灌胃,模型组、正常组予以等体积自来水灌胃,持续8 wk.造模结束后肝组织HE染色病理检查,免疫组化检测肝组织PDGFR-β、蛋白印迹检测肝组织p-ERK1/2在各组表达,生化法检测各组血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP),计算白球比(A/G).结果造模8 wk后经病理学证实模型大鼠形成典型的肝纤维化,模型成功.与正常组相比,模型组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著升高,ALB、A/G显著降低(PDGFR-β1 84.6±8.5 vs 89.6±5.8,P＜0.05;p-ERK1/2360.0±14.5 vs 15.4±2.1,P＜0.05;HA517.5±91.5 μg/L vs 254.4±33.1 μg/L,P＜0.05;LN58.4±11.3 μg/L vs 37.3±9.8 μg/L,P＜0.05;PⅢP36.9±5.6 μg/L vs 4.7±1.5 μg/L,P＜0.05;ALB27.4±4.9 g/L vs 42.1±1.6 g/L,P＜0.05;A/G0.89±0.08 vs 1.38±0.09,P＜0.05);与模型组相比,预防组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著降低,ALB、A/G显著升高(PDGFR-β91.1±6.3vs 184.6±8.5,P＜0.05;p-ERK1/2253.8±18.2vs 360.0±14.5,P＜0.05;HA322.9±41.4 μg/Lvs 517.5±91.5 μg/L,P＜0.05;LN46.0±9.4μg/L vs 58.4±11.3 μg/L,P＜0.05;PⅢP14.5±2.4 μg/L vs 36.9±5.6 μg/L,P＜0.05;ALB37.2±2.8 g/L vs 27.4±4.9 g/L,P＜0.05;A/G1.18±0.13 vs 0.89±0.08,P＜0.05).结论PDGFR-β及p-ERK1/2在肝纤维化形成中起重要作用,丹芍化纤胶囊具有良好的预防肝纤维化形成的作用,其降低PDGFR-β及p-ERK1/2在肝组织的表达可能是其作用机制之一.     

肝细胞生长因子抗大鼠肝纤维化作用及其机制的探讨

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对实验性肝纤维化大鼠的基质金属蛋白酶13(MMP-13),抑制因子1(TIMP-1),转移生长因子β1(TGFβ-1)表达的影响,探讨HGF抗肝纤维化作用的可能机制。方法清洁级wistar大鼠30只,建立CCL4综合因素诱导的大鼠肝纤维化模型,造模2周后大鼠随机分为3组,每组10只正常对照组(A组),HGF治疗组(B组),模型对照组(C组),B组给予HGF治疗。治疗6周后处死全部大鼠,取血清检测肝纤维化指标,采用HE染色及VG染色观察大鼠肝纤维化程度,免疫组化法检验肝组织MMP-13,TIMP-1,TGFβ-1的表达。结果治疗组肝纤维化血清学指标较模型组有一定程度改善(P值<0.05)。HE染色及VG染色显示HGF治疗组(B组)较模型对照组(C组)在形态学及纤维形成方面均有显著性差异(P值<0.05)。B组与C组比较MMP-13活性升高(0.173±0.030vs0.120±0.049,P<0.05);TIMP-1活性降低(0.159±0.047vs0.0229±0.062,P<0.05);TGFβ-1活性降低(0.190±0.040vs0.235±0.028,P<0.05)。结论肝细胞生长因子可能通过促进MMP-13的活性或抑制TGFβ-1,TIMP-1活性而发挥抗肝纤维化的作用。     

地龙2号对大鼠肝纤维化TGF-β1,MMP-13及TIMP-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究蚯蚓提取物地龙2号对实验性肝纤维化大鼠转化生长因子-βl(TGF-β1),基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-l)mRNA和蛋白表达的影响.方法:采用四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型.♂Wistar大鼠52只随机分成6组:正常组、阴性对照组、模型组、阳性对照组、地龙2号大剂量组和小剂量组;8 wk末,用免疫组织化学染色法及RT-PCR检测肝组织中TGF-βl,MMP-13,TIMP-l mRNA和蛋白的表达.结果:地龙2号大、小剂量组肝组织内TGF-β1及TIMPlmRNA(TGF-βl:0.68±0.16 ys 0.90±0.29,0.66±0.14vs 0.90±0.29,后者P＜0.05;TIMP-l:1.0l±0.22 vs2.48±1.18,1.2l±0.38vs2.48±1.18,P＜0.01)及蛋白表达均显著低于模型组(TGF-βl:3.14±2.67vs8.22±2.99,3.00±1.90 vs 8.22±2.99,P＜0.0l;TIMP-1:3.57±2.23 vs 7.56±3.40,3.30±2.67 vs 7.56±3.40,P＜0.01),而MMP-13 mRNA(1.69±0.75 vs 0.62±0.21,1.82±0.71 vs 0.62±0.2l,P＜0.01)及蛋白表达则明显高于模型组(7.7l±1.25vs4.67±2.45,P＜0.01,8.50±2.88vs4.67±2.45,P＜0.01).结论:地龙2号可下调TGF-βl,TIMP-lmRNA及蛋白的表达,并上调MMP-13mRNA及蛋白的表达,从而抑制或减轻肝纤维化的形成.     

硫化氢通过调控转化生长因子-β及基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1改善糖尿病大鼠肾小管间质纤维化

目的探讨硫化氢(H_2S)气体信号分子对糖尿病大鼠肾小管间质纤维化及转化生长因子(TGF)-β、基质金属蛋白酶(MMP)-9/基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1表达的影响。方法单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型将成年雄性SD大鼠64只随机分为正常对照组(Control组)、STZ组、STZ+H_2S组、H_2S组。造模72 h后采尾静脉血检测,若血糖>16.7 mmol/L表明造模成功。H_2S组和STZ+H_2S组大鼠腹腔注射Na HS溶液100μmol·kg~(-1)·d~(-1),Control组和STZ组腹腔注射同等量生理盐水。8 w后取标本,Masson染色观察大鼠肾脏组织病理形态学改变,Western印迹检测大鼠肾脏TGF-β、MMP-9、TIMP-1、Ⅳ型胶原蛋白的表达水平。结果与Control组相比,STZ组存在明显肾小管间质纤维化,同时肾脏组织中Ⅳ型胶原、TGF-β、TIMP-1蛋白的表达升高,MMP-9蛋白的表达水平下降(P<0.05);与STZ组大鼠相比,STZ+H_2S组肾小管间质纤维化减轻,肾组织TGF-β、TIMP-1、Ⅳ型胶原蛋白的表达降低,MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 H_2S可改善糖尿病大鼠肾小管间质纤维化,其机制可能与调控MMP-9/TIMP-1失衡以及TGF-β蛋白的表达水平有关。     

牛磺熊去氧胆酸抑制四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化

目的:探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对四氯化碳(CCl4)诱发大鼠肝纤维化的抑制作用.方法:健康6周龄♂SD大鼠75只,随机分为空白对照组、模型对照组、TUDCA低剂量组、TUDCA高剂量组、己酮可可碱(PTX)阳性对照组,每组15只.用40%的CCl4油溶液,大鼠背部皮下注射3 mL/kg(首次5 mL/kg)造大鼠肝纤维化模型.各组给予相应浓度干预药物溶液灌胃8 wk,检测血清纤维化指标HA、LN、Ⅳ-C:胶原纤维染色(Masson三色染色)观察各组胶原纤维面积比变化;免疫组织化学SP法观察TGF-β1及α-SMA在大鼠肝组织中的表达及分布变化.结果:8 wk后,TUDCA及PTX干预组与模型组相比,血清HA、LN、Ⅳ-C有明显降低(146.33±35.13,162.2±24.80,137.14±22.24 vs 252.83±51.94;77.20±11.84,66.80±16.78,82.00±10.74 vs 108.00±30.00;14.14±2.59,12.60±3.17,10.09±2.22 vs 25.08±5.93,均P<0.05);肝组织纤维间隔变细或消失,形成弥漫性肝硬化结节减少,胶原面积比降低(P<0.05);免疫组织化学结果显示,TUDCA及PTX干预组与模型组相比,TGF-β1及α-SMA阳性表达减少,图像软件半定量分析结果显示差异有显著性(P<0.05).而TUDCA低剂量组与高剂量组及PTX组三者之间结果差异无显著性.结论:TUDCA对CCl4诱发的大鼠肝纤维化有拮抗作用,主要是通过减少TGF-β1合成,抑制HSC细胞活化,降低细胞外基质合成.延缓肝纤维化进程.     

地龙2号对大鼠肝纤维化α-SMA、TGF-β1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响

目的研究地龙2号对肝纤维化大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响.方法采用四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,52只雄性Wistar大鼠随机分成6组:正常组、阴性对照组、模型组、阳性对照组、地龙2号大剂量组和地龙2号小剂量组,8周末用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA、TGF-β1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达情况.结果与模型组相比,地龙2号组肝纤维化程度明显减轻,α-SMA、TGF-β1、及TIMP-1蛋白表达均显著降低,MMP-13表达显著升高.结论地龙2号抑制大鼠肝脏纤维组织的形成可能与其降低α-SMA、TGF-β1、TIMP-1蛋白表达并促进MMP-13蛋白表达有关.     

熊果酸对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和α-SMA表达的

织TGF-β1基因与蛋白及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响, 并探讨其抗肝纤维化作用机制.方法: SD大鼠96只随机分为正常对照组(N组)、模型组(M组)、UA低剂量组(U1组)、UA中剂量组(U2组)、UA高剂量组(U3组)及秋水仙碱组(C组), 每组16只. 除N组外, 均用二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine, DMN)诱导肝纤维化4 wk, 分别给予安慰剂、不同剂量的UA、秋水仙碱腹腔注射, 治疗4 wk处死大鼠,取肝组织行病理HE染色及VG染色判断炎症和肝纤维化程度; 分别采用免疫组织化学和Western blot检测TGF-β1蛋白和α-SMA蛋白的表达; 采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达.结果: U2和U3组肝细胞坏死和纤维组织增生明显减轻; M组TGF-β1蛋白、TGF-β1 mRNA及α-SMA蛋白较N组的表达明显增加(8.76±1.47 vs 1.48±0.24; 0.60±0.11 vs 0.05±0.02;0.51±0.10 vs 0.09±0.02, 均P<0.01). U1组和C组TGF-β1蛋白的表达较M组降低( P<0.05),U2和U3组TGF-β1蛋白的表达较M组明显降低(5.32±1.63, 3.98±0.67 vs 8.76±1.47,均P<0.01), 且低于C组的表达(7.14±1.29,P<0.05或0.01). U2和U3组的TGF-β1 mRNA的表达也明显低于M组(0.36±0.07, 0.25±0.06 vs 0.60±0.11, 均P<0.01)和C组(0.47±0.10, P<0.05或0.01). U1-U3组较M组α-SMA蛋白的表达明显降低(0.36±0.08, 0.23±0.02,0.15±0.03 vs 0.51±0.10, 均P<0.01); U2和U3组α-SMA蛋白的表达也显著低于C组(0.43±0.05, 均P<0.01).结论: UA能明显改善肝纤维化大鼠的肝脏组织结构, 减轻肝纤维化; 其抗肝纤维化的机制可能与降低TGF-β1表达, 抑制HSC的激活有关.     

慢性肝病患者血清基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-2组织抑制因子与肝纤维化指标的关系

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）和乙肝后肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-2组织抑制因子（TIMP-2）和肝纤维化指标（HA、LN、ⅣC）及其相关性。方法 检测36例慢性乙肝、36例乙肝后肝硬化和20例对照组的血清MMP-2及TIMP-2,同时检测上述肝病患者血清肝纤维化指标。分析MMP-2、TIMP-2和肝纤维化指标之间的相关性。结果 慢性乙肝重度、肝硬化A级、B级、C级患者血清MMP-2、TIMP-2分别较对照组、慢性乙肝轻度、中度明显升高（P〈0．001）;而慢性乙肝轻度、中度患者MMP-2、TIMP-2与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。慢性乙肝轻、中度之间MMP-2、TIMP-2比较无明显差异（P〉0．05）。血清MMP-2、TIMP-2水平分别与HA、LN、ⅣC有良好相关性;MMP-2与后三者的r值分别为0．928、0．909和0．826;TIMP-2与后三者的r值分别为0．688、0．556和0．644,P值均〈0．001。结论 TIMP-2、MMP-2在慢性肝病患者血清中明显升高,并且分别与肝纤维化血清学指标（HA、LN、ⅣC）有良好的相关性。MMP-2和TIMP-2可作为评价纤维化的指标之一。     

PAI-1在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中的动态变化

目的: 探讨纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI.1)mRNA在胆汁淤积性肝纤维形成中的动态变化及其作用.方法: 应用胆管结扎法复制胆汁淤积性肝纤维化动物模型,分为假手术组,模型组1 wk、2 wk、3 wk、4 wk,观察模型大鼠肝组织病理、纤维化程度、RT.PCR检测PAI-1 mRNA的水平、ELISA法检测MMP-2和MMP-9含量的动态变化.结果: 随胆管阻塞时间延长,胆管阻塞性肝纤维化大鼠纤维化程度逐渐增加,模型组1 wk、2 wk、3 wk、4 wk组PAI-1 mRNA表达与假手术组相比,逐渐增强,有显著性差异(1.53±0.01,1.84±0.03,2.06±0.04,3.62±0.04vs 0.72±0.02,P<0.01),而MMP-2和MMP-9表达先升高后下降.结论: PAI.1mRNA表达存在动态变化,其表达升高与胆汁淤积性肝纤维化形成和发展有关.     

辛伐他汀对肝纤维化大鼠Ⅳ-C、MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的探讨辛伐他汀治疗肝纤维化的可行性及机制。方法将24只肝纤维化大鼠随机分为药物组、模型组各12只,另取12只正常大鼠作为对照组。模型组不干预,药物组予辛伐他汀5mg／（kg·d）灌胃13周;对照组予等量生理盐水灌胃。13周后取大鼠肝组织,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学改变,免疫组织化学方法检测肝组织中Ⅳ型胶原（Ⅳ—C）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及基质金属蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）表达。结果与对照组比较,模型组肝组织炎症明显、Ⅳ-C表达与沉积增加,TIMP-2蛋白表达显著增加（P均〈0．05）,MMP-2蛋白表达变化不明显。药物组肝脏炎症较轻,相对模型组Ⅳ—C显著减少,MMP-2蛋白表达增多,TIMP-2蛋白表达减少。结论辛伐他汀可以在一定程度上减轻肝纤维化程度,其机制可能是抑制TIMP-2表达、增加MMP-2表达、促进Ⅳ-C降解。     

香附多糖对牛血清白蛋白诱导的肝纤维化大鼠血清MMP-2、TIMP-2和TGF-β1水平的影响

目的研究香附多糖对牛血清白蛋白诱导的肝纤维化大鼠血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)和转化生长因子-β1的影响。方法将60只SD大鼠随机平均分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.1 mg·kg~(-1))、大剂量香附多糖组(200 mg·kg~(-1))、中等剂量香附多糖组(100 mg·kg~(-1))和小剂量香附多糖组(50 mg·kg~(-1)),每组10只。在造模成功后,分别给予生理盐水、秋水仙碱和香附多糖灌胃处理,连续60 d。在末次给药后,采用腹主动脉取血,分离血清,并取肝组织行病理学检查。检测各组大鼠血清肝功能指标和肝纤维化指标,采用酶联免疫分析法检测血清MMP-2、TIMP-2和TGF-β1水平,并观察各组大鼠肝组织病理学变化情况。结果与模型组比较,大剂量、中剂量和小剂量香附多糖组大鼠血清ALT、AST、TP、ALB水平得到显著改善(P0.05),血清LN、HA、PC-Ⅲ和Ⅳ-C水平均明显降低(P0.05);大、中、小剂量组大鼠血清MMP-2水平分别为(221.58±23.76)ng/mL、(291.12±29.35)ng/mL、(375.14±38.21)ng/mL,TIMP-2水平分别为(161.89±16.12)μg/mL、(180.34±17.12)μg/mL和(196.56±19.34)μg/mL,TGF-β1水平分别为(206.23±21.45)ng/mL、(251.53±26.10)ng/mL、(302.09±31.21)ng/mL,均显著低于模型组(P0.05);肝组织病理学检查结果显示,与模型组比较,大、中、小剂量药物处理组大鼠肝纤维化程度均有明显减轻。结论香附多糖具有较好的保肝及抑制肝纤维化的活性,可能是有效改善了大鼠MMP-2/TIMP-2失衡和降低TGF-β1水平有关。     

Genistein对大鼠肝星状细胞的增殖及TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及TGF-β1、MMP-2及TIMP-2基因表达的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制.方法:将体外培养的大鼠HSC-T6分别给予不同浓度的Genistein作用24 h后,用噻唑兰比色法(MTT)检测测定活细胞数,采用半定量RT-PCR法检测细胞中TGF-β1、MMP-2及TIMP-2的mRNA水平.结果:Genistein作用于大鼠HSC-T6后,活细胞数目减少,12.5、25及50 mg/L 3个作用浓度组与对照组的4值比较有显著性差异(0.306±0.0067,0.256±0.0085,0.1316±0.0049VS 0.4468±0.0299,均P<0.05).不同浓度的Genistein干预HSC-T6,MMP-2 mRNA表达水平与对照组比较均明显增强(均P<0.05);TGF-β1和TIMP-2 mRNA表达水平与对照组比较均明显降低(均P<0.05).结论:Geni Steill可能通过增强大鼠HSCMMP-2 mRNA的表达,同时抑制TGF-β与TIMP-2 mRNA的表达发挥抗纤维化的作用.     

晚期血吸虫病肝纤维化指标与肝组织病理学的相关性研究、

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）在晚期血吸虫病（晚斑）肝组织和血清中的表达及其与肝组织病理学的关系。方法采用免疫组化sP法检测45例晚血（观察组）肝组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1表达;采用EIASA法检测观察组和30例健康人（对照组）血清TIMP-1、TGF-β1、MMP-1水平。结果观察组肝组织中TGF-β1、TIMP-1表达强度与肝纤维化程度、有无合并HBV感染呈正相关（P均〈0．05）;而MMP-1无相关性。与对照组比较,观察组血清TGF-β1、TIMP-1水平及TIMP-1／MMP-1值明显增高（P均〈0．01）,并与肝纤维化程度、免疫组化表达强度呈正相关（P均〈0．01）,而血清MMP-1差异无统计学意义。结论TGF-β1、MMP-1、TIMP-1与晚血肝纤维化的发生、发展密切相关,三者联合检测可作为晚血患者肝纤维化诊断和疗效评估指标。     

黏附分子在沙利度胺所致大鼠肝纤维化中的作用机制

目的:观察沙利度胺对大鼠实验性肝纤维化的治疗效果并探讨其作用机制.方法:四氯化碳腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型后,应用沙利度胺(100 mg/kg)ig分别治疗2、4、6 wk作为动态观察时相点.HE染色观察肝组织病理变化,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)的表达,免疫组织化学法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和E-选择素(E-selectin)蛋白质的表达,逆转录聚合酶链反应法检测ICAM-1、VCAM-1和E-selectin mRNA的表达.结果:与肝纤维化组相比,沙利度胺治疗4wk、6 wk能显著降低大鼠肝组织纤维化积分,显著降低血清HA(176.6±7.5 μg/L,173.8±6.7 μg/L vs 486.9±12.4 μg/L)、LN(38.4±5.8 μg/L,34.7±7.3 μg/L vs 84.5±5.2 μg/L)、PC Ⅲ(44.3±5.5 μg/L,40.2±6.1 μg/L vs 65.0±5.6μg/L)、CⅣ(31.8±6.7 μg/L,30.4±5.7 μg/L vs 55.6±6.5 μg/L)的含量(P＜0.05),沙利度胺治疗2 wk 4 wk,6 wk组均可显著降低ICAM-1、VCAM-1和E-selectin蛋白和mRNA的表达(P＜0.05).结论:沙利度胺可通过下调ICAM-1、VCAM-1和E-selectin表达水平而发挥抗肝纤维化作用.     

紫七软肝片对大鼠肝纤维化湿热瘀毒证模型转化生长因子-β1和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的动态影响

目的：探讨紫七软肝片对复合因素致大鼠肝纤维化湿热瘀毒证模型作用的动态影响。方法：采用复合因素（CCl4＋高脂饮食＋酒精）干预大鼠,分正常组、模型组、紫七软肝片治疗组和秋水仙碱对照组,分别观察第4周和8周大鼠肝纤维化相关指征的变化,检测其血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原氨端肽（PⅢP）以及采用肝组织免疫组化检测其转化生长因子-β1（TGF-β1）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的动态表达情况。结果：模型组大鼠从4周和8周末HA、LN、PⅢP以及TGF-β1和TIMP-1均有不同程度的改变,并呈现动态加重的过程,而紫七软肝片和秋水仙碱均有明显的治疗作用,且紫七软肝片的作用更为明显（P〈0.05或P〈0.0l）。结论：抑制纤维组织增生、拮抗TGF-β1和TIMP-1表达等是紫七软肝片有效防治肝纤维化的重要机制。     

干扰素-γ对大鼠肝组织中的MMP-13与TIMP-1表达的干预作用

目的 探讨干扰素-γ对实验性大鼠肝组织中的基质金属蛋白酶-13(MMP-13)与金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响.方法 SD大鼠22只,随机分为3组:正常组(7只)、模型组(6只)和干扰素-γ组(9只);用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,在10周末处死各组大鼠,取肝脏进行HE染色,并运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中MMP-13 mRNA与TIMP-1 mRNA的表达量.结果 MMP-13 mRNA的表达,与正常组对比,模型组和干扰素-γ组的MMP-13 mRNA的表达量增高(P<0.01),但模型组和干扰素-γ组之间还不能认为有统计学差别(P>0.01);而TIMP-1 mRNA表达与正常组相比,模型组和干扰素-γ组中的TIMP-1 mRNA的表达都升高(P<0.01),而且模型组中的TIMP-1 mRNA表达量比干扰素-γ组高(P<0.01).在肝纤维化病理学观察的量化秩和分析中,各组之间的差别明显(P<0.005).结论 干扰素-γ逆转肝纤维化的机制可能是减少肝纤维化大鼠肝脏中的TIMP-1 mR-NA的表达,从而逆转肝纤维化.