按蚊胃血中恶性疟原虫合子和动合子的免疫检测

用抗恶性疟原虫(P.f)动合子表面抗原(25kDa)的单克隆抗体进行间接荧光抗体试验(IFA),可定量测定合子/大配子、幼动合子(retort)和动合子。所用蚊媒为累代饲养的白足按蚊Wiedemann系、弗氏按蚊Aitken系和冈比亚按蚊Giles系。以体外培养的P.f.NF54株配子体感染蚊媒,相隔一定时间,在PBS(pH7.4)溶液中解剖蚊胃,并     

在鸡疟原虫合子转变成动合子过程中,两种期特异性的膜蛋白的合成

一些学者在研究疟原虫从脊椎动物宿主传到蚊过程中,发现抗蚊虫体内疟原虫中肠期的抗体能够预防媒介的感染,而且,这些抗体可妨碍疟原虫配子体增殖或影响合子进一步发育。这些抗体的目标是有期特异性的表面蛋白。配子体或新发育成的合子具有分子量240,000、56,000及54,000的三种蛋白。而当     

疟原虫配子、合子和动合子的表面抗原分析

前言目前世界上对抗疟疫苗的研究集中于疟原虫裂殖子、子孢子和配子的疫苗,已有许多报告证实抗配子抗体可在脊椎动物宿主(鸡、鼠和猴)体内和人体内产生,当此抗体在血餐中进入蚊胃时,与雌、雄配子的表面反应,使其不能受精,阻断了蚊媒传播。这一反应的免疫原是细胞外配子和合子,传播阻断免疫的主要靶抗原是配子。但循环在免疫宿主内的配子体并不受抗配子抗体影响,在蚊体内受精的合子照常转变为动合子;若在受精前加免疫血清,疟原虫即不能继续发育,表明传播阻断免疫是在蚊胃中通过阻止配子受精而起作用。从免疫血清与蚊胃阶段原虫     

疟原虫动合子入侵按蚊中肠激活的先天性免疫防御反应

在观察疟原虫 -蚊媒相互作用的过程中 ,发现一些很有趣的现象。经遗传选育的两个冈比亚按蚊抗性株 ,一个株系可通过黑化包被反应杀死入侵按蚊中肠上皮细胞的疟原虫动合子 ,另一个株系可将入侵中肠的动合子溶解。在疟原虫易感蚊株中也可见到通过尚未明白的机制使移行发育的疟原虫明显减少 [1,2 ]。摄入中肠的配子体细胞中仅有少部分可发育为成熟的动合子 ,只有少部分动合子能穿过中肠上皮细胞后继续发育为卵囊。当卵囊发育成熟破裂时 ,最终仅有少部分子孢子释放出来进入唾液腺 [3,4 ]。出现以上这种情况的原因 ,很可能是通过激活蚊的先天性免…     

约氏疟原虫动合子移行蚊中肠上皮细胞的透射电镜观察

用透射电镜观察了约氏疟原虫动合子移行斯氏按蚊中肠（胃）上皮细胞的途径，结果发现在两个上皮细胞中间有一个动合子正在细胞间隙中移行，超微结构观察，虫体结构完整，可见圆锥状顶突与蚊中肠壁基底膜相接触，在虫体圆锥状区域的内部具有１－２对呈梨形的棒状体和数量较多的微线体，同时，也看到已穿过上皮细胞间隙并附着于基底膜上的动合子仍保持圆柱状的体形，有的已定位并开始向卵囊分化。由此证实了约氏疟原虫动合子移行中肠上     

人工培养鸡疟原虫动合子的超微结构:无损伤的动合子与埃及伊蚊胃血提取物损伤的动合子相比较

作者曾用光学显微镜研究指出人工培养鸡疟原虫动合子用埃及伊蚊血液消化时的粗提取物培育后有显著的损害。本文对这些损害进一步作电镜比较观察。实验采用10年前Maegraith获得的鸡疟原虫。动合子培养方法和埃及伊蚊胃血提取物的制备均按照Gass和Yeates(1979)采用的方法。无损伤的未成熟和成熟的动合子分别在培养后11和12小时获取;损伤的动合子是在埃及伊蚊胃血提取物培育24小时后得到的。为作电镜观察,将人工培养的动合子用培养液清洗,收集在培养液和鸡血清     

恶性疟原虫合子/动合子、表面蛋白Pfs25特异性传播阻断抗体亦影响子孢子的发育

已知Pfs25表达于刚形成的配子的表面,并持续存在于合子和动合子期,其与抵御蚊中肠的消化,动合子的运动,穿透围食膜及识别中肠表皮细胞受体等功能有关。由于Pfs25特异性单抗系传播阻断性抗体,因此该蛋白被认为是传播阻断疫苗的主要候选抗原。本文目的在于探讨Pfs25是否存在于卵囊期,如果存在,其特异性抗体是否影响卵囊的发育。3～5日龄斯氏按蚊或冈比亚按蚊感染恶性疟原虫配子体(NF54)后,于第3,6,8天     

约氏疟原虫动合子移行蚊中肠上皮细胞的透射电镜观察

用透射电镜观察了约氏疟原虫动合子移行斯氏按蚊中肠(胃)上皮细胞的途径,结果发现在两个上皮细胞中间有一个动合子正在细胞间隙中移行,超微结构观察,虫体结构完整,可见圆锥状顶突与蚊中肠壁基底膜相接触,在虫体圆锥状区域的内部具有1～2对呈梨形的棒状体和数量较多的微线体,同时,也看到已穿过上皮细胞间隙并附着于基底膜上的动合子仍保持圆柱状的体形,有的已定位并开始向卵囊分化。由此证实了约氏疟原虫动合子移行中肠上皮细胞的过程是通过穿透细胞间隙而后定位于基底膜。本文对疟原虫动合子的移行途径及其机制进行了讨论。     

鸡疟原虫在蚊胃内各期的抗原特性:Ⅱ.雌、雄配子及合子表面抗原的比较

作者等(1983)曾研究了鸡疟原虫合子的表面抗原,在此基础上又对雌、雄配子及合子的表面抗原进行了比较。将含有鸡疟原虫配子体的雏鸡血液进行蚊期的体外培养,以取得雌、雄配子和合子。将雌、雄配子及合子的表面蛋白经乳过氧化物酶(LPO)方法进行放射性碘处理,再对经过~(125)I标记的细胞表面蛋白进行提取。将获得的提取物与各期特异的抗血清进行免疫沉     

高抗拒性埃及伊蚊体内鸡疟原虫动合子的发育及其蛋白水解酶动力学

尽管蚊抗感染性基因表型检测技术取得了很大进展,但是对蚊抗性的生理学机制仍知之甚少。本研究采用了能够抑制卵囊形成的埃及伊蚊-鸡疟模型系统来研究蚊抗性的生理学机制,探索在抗性蚊体内动合子发育的动力学资料以及蚊胃分泌的蛋白水解酶是否是蚊产生抗性的原因。     

抗蚊胃抗体在蚊体内对疟原虫发育的抑制作用

疟原虫疫苗的开发主要针对抑制血液期原虫的复制和阻断经蚊的子孢子传播。因此,进一步研究疟原虫的媒介体内各期如合子、动合子和卵囊的发育可提供研制发展独特而理想的疟疾疫苗。已知经血餐摄入抗蚊胃抗体的蚊媒死亡率及卵囊感染率均低,本研究     

在按蚊传播疟疾过程中疟原虫运动的成像

为了了解子孢子在蚊虫唾腺中如何运动,法国巴斯德研究所的研究人员利用鼠疟原虫子孢子可由期特异性的CS启动子启动表达绿色荧光蛋白(GFP)的原理,运用滞时荧光显微镜,跟踪拍摄了标记GFP的子孢子在斯氏按蚊活体内和分离唾腺中的运动过程。观察结果显示,子孢子主要侵袭蚊虫唾腺泡外叶远端,在穿过基底层和腺细胞后,聚集于腺细胞外的腺泡腔中,腺泡腔直接与腺泡内管相连。在腺泡腔中,大部分子孢子聚集成球形,其他约25%的子孢子处于运动状态。其中,绝大多数进行来回运动、也有一些为圈状运动、很少有子孢子向前运动。尽管被感染蚊虫的腺泡腔中…     

白端按蚊的血淋巴和胃内的超氧阴离子对伯氏疟原虫动合子是有毒的

对疟原虫有抵抗力的蚊是如何清除体内疟原虫的机制尚不完全清楚。有学者发现 ,某些有抵抗力的按蚊株能使其中肠中疟原虫动合子黑色素化 ,提示其可能在清除寄生原虫中起作用。本研究以伯氏疟原虫动合子接种白端按蚊 (Anophelesalbimanuswsp表型 )进行试验 ,以观察超氧阴离子对疟原虫的作用。白端按蚊取自INSP研究室 ,此蚊株能使伯氏疟原虫发育成卵囊 ,但不是天然媒介 ,实验采用 3～ 4天的雌成蚊。疟原虫取自感染伯氏疟原虫ANKA株的BALB/c小鼠血 ,经培养后最后获得混悬于RPMI 1 6 40培养基的动合子。蚊经短时间冰冻使眩晕 ,用 0 .2 5μ…     

恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体与按蚊Cecropin A融合基因的构建、原核表达及生物活性的初步评价

目的 构建、原核表达恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体与按蚊Cecropin A融合基因并对其表达产物的生物学活性进行评价。方法 根据按蚊对编码同种氨基酸不同密码子的偏嗜性,对鼠源性恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体4B7编码基因进行改造,并与按蚊抗菌肽Cecropin A基因融合;将融合基因Cep＆m4B7克隆入原核表达载体pET32a（＋）并在大肠埃希菌中进行表达;对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,体外抑菌试验鉴定表达蛋白的抑菌活性。结果 构建了融合基因Cep＆m4B7和重组表达质粒pET32a（＋）-Cep＆m4B7,融合基因在大肠埃希菌中以包涵体形式高效表达融合蛋白,Western blot显示重组蛋白能被抗6-His抗体识别;琼脂糖扩散法显示纯化后的目的蛋白无抑菌活性。结论 成功构建了融合基因Cep＆m4B7,该基因在大肠埃希菌中高效表达,表达产物纯化后无体外抑菌活性。     

蚊内期疟原虫的肠壁阶段

疟原虫在蚊体内发育的生活史,约100年前就已阐明。但至今对这一发育阶段中分子转化机制仍不清楚。如果能找到一种外来的或蚊体内的可阻断原虫发育或杀死原虫的基因,那就有可能建立一种抗疟原虫的新蚊系。寄生虫与宿主关系的研究涉及到模型的选择。库蚊-乌疟的模型是否适于研究按蚊-人疟的关系?目前已发现埃及伊蚊与斯氏按     

影响疟原虫蚊期早期发育的因素

疟原虫在蚊体内的早期发育受很多因素的影响,适宜的pH值及环境温度是其生长的必要条件。蚊的一系列生理过程,如消化血液、运输代谢物、贮存基本营养物质以及对代谢产物的排泄等,都与疟原虫的发育密切相关。同时疟原虫还诱导蚊产生细胞和体液免疫,在很大程度上抑制了疟原虫的生长发育。而蚊-疟原虫间的相互作用,贯穿从配子发生、动合子形成、动合子穿越围食膜至中肠上皮及卵囊发育的整个过程。