结缔组织生长因子在阿霉素肾病中表达的变化及霉酚酸酯干预作用研究

目的分析阿霉素肾病中结缔组织生长因子(CTGF)的变化,研究霉酚酸酯对其干预作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为对照组、阿霉素肾病模型组、阿霉素肾病霉酚酸酯治疗组。大鼠尾静脉一次注射阿霉素75mg·kg-1,治疗组第6周开始霉酚酸酯粉末20mgkg-1d-1混悬于1ml蒸馏水中灌胃,10周时处死所有大鼠,观察肾组织病理变化,应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测CTGF在肾组织中的表达。结果阿霉素肾病组大鼠较对照组肾小球系膜及基质明显增生,免疫组织化学染色及原位杂交显示肾小球和肾小管区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显上升(P<005),霉酚酸酯治疗组肾小球系膜及基质的增生程度较阿霉素肾病组明显减轻,肾小球和肾小管区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显低于阿霉素肾病组(P<005)。结论阿霉素肾病动物CTGF表达增加,观察到间质纤维化表现;霉酚酸酯可以减轻间质纤维化,延缓慢性肾病发展,其机理可能是通过下调CTGF的表达。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织早期炎症反应的影响

目的:探讨霉酚酸酯(MMF)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织早期炎症反应的影响.方法:36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和MMF治疗组,于4周、14周末每组分别处死6只大鼠,处死前进行24 h尿蛋白定量检测,处死后免疫组织化学染色观察调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞分子(RANTES)、单核/巨噬细胞表面特异性标志抗原(ED-1)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)在肾组织中的表达,RT-PCR方法观察RANTES mRNA在肾组织中的表达.结果:MMF可显著抑制大鼠24 h尿总蛋白的排泄,下调肾组织RANTES,ED-1,Col-Ⅳ蛋白及RANTES mRNA的表达.结论:早期应用MMF对糖尿病大鼠的肾保护作用可能与抑制肾脏早期炎症反应有关.     

依那普利联合霉酚酸酯对大鼠糖尿病肾脏结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨依那普利联合霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾脏结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法建立单侧肾切除链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型。8周后观察24h尿白蛋白排泄率(AER)的变化,并行PAS染色肾小球与肾小管-间质病理观察;应用免疫组化方法检测肾组织CTGF蛋白表达。结果各给药组均可抑制糖尿病大鼠AER增加及肾小球病理结构损害(P<0.05,0.01),联合组尚可明显减轻糖尿病肾小管-间质损伤指数(P<0.05);糖尿病大鼠肾小球与肾小管-间质CTGF蛋白表达明显高于对照组,各给药组肾组织CTGF蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05),其中以联合组最明显(P<0.01)。结论依那普利联合MMF对糖尿病肾脏有明显保护作用,其机制部分与抑制糖尿病肾组织CTGF过高表达有关。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织中IGF-1、MMP-2表达的影响

目的:探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病(DM)大鼠肾组织中胰岛素样生长因子1(IGF-1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组(n=12)、糖尿病组(DM组,n=11)、MMF组3组(n=10)。于8周末检测24h尿蛋白量、血糖、内生肌酐清除率(Ccr)、相对肾质量(左肾质量/体质量);PAS染色观察肾脏病理改变;免疫组化、Western印迹检测肾脏IGF-1、MMP-2的表达。结果:3组大鼠相对肾质量、血糖、24h尿蛋白和Ccr差异有统计学意义(F分别为51.097、150.925、161.315和103.307,P<0.001),MMF组相对肾质量、24h尿蛋白和Ccr均低于DM组,高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,DM组肾小球体积增大,系膜区基质明显增生,肾小球毛细血管袢受压,基底膜增厚,而MMF组较DM组有所改善。3组大鼠肾组织IGF-1、MMP-2蛋白表达差异有统计学意义(F分别为15.715和20.449,P<0.001),DM组中IGF-1的表达较对照组增加,MMP-2的表达较对照组下降;MMF组IGF-1较DM组下降,MMP-2增加(P<0.05)。结论:MMF可能通过减少肾脏IGF-1的表达,同时上调MMP-2表达,起到保护肾脏的作用。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠模型肾组织氧化应激的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠模型肾组织氧化应激的影响.方法建立单侧肾切除糖尿病模型,大鼠随机分为对照组、糖尿病组与糖尿病MMF 10 mg/(kg*d),灌胃为给药组,每组 10只.8周末观察体重、肾重、肾重/体重及24 h尿白蛋白排泄率 (AER)变化,并检测肾组织与尿丙二醛(MDA)含量及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性.结果 MMF给药组可明显抑制糖尿病大鼠模型肾重、肾重/体重、AER的增加(P<0.05, P<0.01).与对照组相比,糖尿病模型组肾组织及尿MDA含量明显增加(P<0.01),肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性明显下降(P<0.05, P<0.01);MMF给药组可明显降低肾组织及尿MDA含量,提高肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性(P<0.05).结论 MMF对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关.     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1与OPN表达的影响

目的探讨霉酚酸酯（MMF）对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）和骨调素（OPN）表达的影响和肾保护作用。方法应用链脲佐菌素（STZ）将SD大鼠制作为糖尿病肾病大鼠模型,将SD大鼠分为健康对照组（NC组）、糖尿病肾病组（DM组）和霉酚酸酯干预组（MMF组）。12周后观察24 h尿蛋白定量、血糖、肾功能、肾重/体重比,处死后采用免疫组化观察肾组织中TGF-β1、OPN的表达。结果 DM组和MMF组的尿蛋白定量、血糖、肾重/体重比较NC组明显升高,免疫组化检查TGF-β1、OPN的表达明显增加,而MMF组中TGF-β1、OPN的表达较DM组明显减少,而且TGF-β1、OPN的表达与尿蛋白、肾重/体重比成正比。结论糖尿病肾病大鼠肾组织中TGF-β1、OPN的表达明显增加;MMF对TGF-β1、OPN的表达有抑制作用;MMF可以减少蛋白尿,减轻肾小球、肾小管的硬化和纤维化,机制可能与MMF对TGF-β1、OPN表达有抑制作用相关,对糖尿病肾病有一定的治疗作用     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1与OPN表达的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨调素(OPN)表达的影响和肾保护作用。方法应用链脲佐菌素(STZ)将SD大鼠制作为糖尿病肾病大鼠模型,将SD大鼠分为健康对照组(NC组)、糖尿病肾病组(DM组)和霉酚酸酯干预组(MMF组)。12周后观察24 h尿蛋白定量、血糖、肾功能、肾重/体重比,处死后采用免疫组化观察肾组织中TGF-β1、OPN的表达。结果 DM组和MMF组的尿蛋白定量、血糖、肾重/体重比较NC组明显升高,免疫组化检查TGF-β1、OPN的表达明显增加,而MMF组中TGF-β1、OPN的表达较DM组明显减少,而且TGF-β1、OPN的表达与尿蛋白、肾重/体重比成正比。结论糖尿病肾病大鼠肾组织中TGF-β1、OPN的表达明显增加;MMF对TGF-β1、OPN的表达有抑制作用;MMF可以减少蛋白尿,减轻肾小球、肾小管的硬化和纤维化,机制可能与MMF对TGF-β1、OPN表达有抑制作用相关,对糖尿病肾病有一定的治疗作用。     

伊贝沙坦对糖尿病大鼠结缔组织生长因子表达的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦（Irbesartan,Irb)对链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为正常对照（N）组、糖尿病肾病（DN）组、Irb治疗（DNI）组。腹腔注射STZ诱导糖尿病模型，观察治疗后第4、8、12周血糖、体重、尿白蛋白排泄量（24hUalb)、尿总蛋白排泄量（24hUpro)的变化，并观察12周时肌酐清除率（Ccr)、肾小球硬化程度（GS）的改变，免疫组织化学方法分析肾皮质CTGF、转化生长因子β1（TGF－β1)的表达。结果：DN组24hUalb、24hUpro的排泄量较N组明显增加（P＜0．01），Ccr明显增高（P＜0．01），DNI组24hUalb、24hUpro和Ccr较DN组显著减少（P＜0．01）。DN组肾小球硬化程度较N组增高（P＜0．01），Irb可显著减轻肾小球硬化程度（P＜0．01）。DN组肾皮质CTGF和TGF－β1的表达较N组增高（P＜0．01），Irb能明显抑制两者的表达（P＜0．05，P＜0．01）。另外，肾皮质CTGF的表达与TGF－β1呈显著正相关关系（P＜0．05）。结论：早期应用Irb对STZ诱导的糖尿病大鼠有肾保护作用，可能与抑制糖尿病大鼠肾皮质CTGF的表达有关。     

霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾组织 TLR4、IL-18表达的影响

目的：探讨霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾脏Toll样受体-4（ TLR4）及白细胞介素-18（ IL-18）表达的影响。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组（n＝12）、模型组（n＝11）、治疗组（n＝11）,后2组制作糖尿病肾病模型。治疗组每天给予霉酚酸酯15 mg／kg灌胃,余2组给予溶媒灌胃。于12周末采用HE染色、PAS染色观察肾脏病理改变,免疫组化、Western blot检测肾组织TLR4、IL-18蛋白的表达。结果：与对照组比较,模型组大鼠肾小球体积增大,基底膜增厚,炎症细胞浸润明显,而治疗组较模型组有所改善。3组大鼠肾组织TLR4、IL-18蛋白的表达差异有统计学意义,其中模型组大鼠肾组织TLR4、IL-18蛋白的表达均高于对照组（P＜0．05）,治疗组上述2指标较模型组下降（ P＜0．05）。结论：霉酚酸酯可能通过下调肾脏TLR4、IL-18蛋白的表达对糖尿病肾病大鼠的肾脏起保护作用。     

罗格列酮对糖尿病肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨罗格列酮(RGZ)对糖尿病肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:大鼠随机分成治疗组、模型组、正常组(n=9)。治疗组、模型组大鼠用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型,均造模成功7只。治疗组大鼠于造模前24h行RGZ灌胃,模型组和正常组以等体积蒸馏水灌胃。12周后处死动物,观察肾小球病理学变化及细胞外基质(ECM)相对面积,用免疫组织化学法检测肾皮质CTGF的表达。结果:治疗组及模型组肾小球ECM相对面积及肾皮质CTGF表达水平均较正常组升高,但治疗组2指标均较模型组低(P<0.01);治疗组肾脏病理学改变较模型组减轻。结论:RGZ能改善糖尿病时肾脏的病理变化,延缓肾纤维化的发生,其作用可能与抑制肾组织中CTGF的表达有关。     

结缔组织生长因子在糖尿病大鼠肾脏中的表达及其意义

目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)在链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏中的表达及其与肾小球肥大的关系。方法 :将SD大鼠随机分为正常对照 (N)组与糖尿病肾病(DN)组。大鼠单侧肾切除后 ,腹腔注射STZ诱导糖尿病模型 ,观察第 4、8、12周血糖、体重、尿白蛋白排泄 (Ualb)和 2 4h尿蛋白定量 (2 4hUpro)的变化 ,同时观察 12周时肌酐清除率(Ccr)、肾小球面积及体积、肾重、肾组织总蛋白含量和肾皮质CTGF表达的改变。结果 :DN组 2 4hUpro、Ualb和Ccr较N组明显增加 (P <0 .0 1) ,肾小球面积及体积、肾重和肾组织总蛋白含量均较N组显著增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。免疫组织化学半定量检测结果显示 ,DN组肾皮质CTGF表达较N组明显增加 (P <0 .0 1) ,CTGF表达与肾小球体积及 2 4hUalb呈显著正相关关系 (均为P <0 .0 5 )。结论 :糖尿病大鼠早期肾脏CTGF表达增加可能是DN发生的重要机制     

积雪草苷对烫伤创面成纤维细胞及结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨积雪草苷对烫伤创面成纤维细胞及结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法将30只SD大鼠按随机数字表法进行分组,选取6只大鼠不予烫伤,其余进行烫伤建模,采用积雪草苷和凡士林对烫伤创面组织进行同体对照研究,HE染色评估成纤维细胞变化,免疫组织化学法检测CTGF蛋白表达情况,并用透射电镜观察成纤维细胞微观结构改变。结果积雪草苷治疗组大鼠伤后第14天创面CTGF含量高于对照组（P〈0．05）,伤后第21天创面CTGF含量低于对照组（P〈0.05）。成纤维细胞HE染色的大体形态及电镜观察呈现双相动态变化。结论积雪草苷可能对成纤维细胞增殖及CTGF表达存在双相调节作用,对促进创面少瘢痕愈合有一定作用。     

维生素D对2型糖尿病肾病大鼠肾脏中转化生长因子-β1、重组人胶原蛋白-1 和结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨维生素D对糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1（TGF—β1）、结缔组织生长因子（CTGF）和重组人胶原蛋白-1（collagen-1）表达的影响,进一步探讨以上3个基因在糖尿病肾病中相互作用以及维生素D对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用。方法将54只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（18只）、模型组（18只）、治疗组（18只）。其中,模型组及治疗组大鼠均行糖尿病肾病造模,饲以高脂高糖饲料6周,空腹12h后给予小剂量链腺佐菌素腹腔注射。注射1周后,不同日期测随机血糖（GLU）3次,若3次GLU均≥16．7mmol／L为2型糖尿病大鼠。2型糖尿病成模后的大鼠在6周和7周时用尿微量蛋白试纸连续测大鼠晨尿3次以上,若为阳性,则为2型糖尿病肾病的大鼠。治疗组给予骨化三醇溶于0．05mL花生油以0．03μg／（kg·d）灌胃37d,模型组给予花生油灌胃37d。处死大鼠,取肾脏,采用HE、电镜技术观测。肾脏组织的形态学变化,采用实时荧光定量PCR技术（RT—PCR）评价肾脏TGF—β1、collagen-1及CTGF基因表达的变化。结果①模型组TGF—β1、collagen-1及CTGF基因表达高于正常对照组（P〈0．05）,治疗组TGF—β1、collagen-1及CTGF基因表达明显低于模型组（P〈0．05）。②采用HE、电镜技术可以看出治疗组病理组织形态学,尤其是组织结构完整性明显优于模型组。结论糖尿病。肾病大鼠中,维生素D可以通过下调TGF—β1、collagen-1及CTGF基因的表达,对糖尿病肾病起保护作用。     

缬沙坦和氟伐他汀干预CTGF对糖尿病肾病的影响

目的通过检测结缔组织生长因子（CTGF）在糖尿病肾病（DN）患者外周血中的含量,观察缬沙坦及氟伐他汀治疗前后对24h尿白蛋白排泄率（UAER）和CTGF的影响,探讨DN的发病机制及治疗方法。方法选取我院DN住院患者20例,选取年龄相匹配的健康志愿者20例为对照组（NC组）。根据用药情况将DN患者分为DN＋缬沙坦治疗组（DA组）、DN＋氟伐他汀治疗组（DF组）,观察3个月。应用ELISA法检测血中CTGF浓度,并检测患者24h尿白蛋白排泄率（UAER）,进行组间及治疗前后比较。结果 DN组患者治疗前血CTGF浓度较NC组明显增多（P〈0.01）;与治疗前比较,DA组、DF组血CTGF浓度均减少（P〈0.05）,但DA组下降的程度与DF组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗后DA组、DF组24h尿白蛋白排泄率（UAER）减少（P〈0.01）,但DA组下降的程度与DF组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CTGF在DN患者血中浓度增加,其在DN发病过程中起重要作用。氟伐他汀及缬沙坦通过降低CTGF来改善DN病情。     

缺氧对肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的观察不同缺氧时间对肺成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法原代培养的人肺成纤维细胞在缺氧(37℃、5%CO2、5%O2、90%N2)条件下分别孵育0、1.5、3、6及12 h,同时用抗CTGF抗体干预的人肺成纤维细胞在缺氧条件下培养12 h。RT-PCR法测定细胞CTGF mRNA、基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA表达情况,ELISA法测定细胞培养上清液CTGF、MMP9的浓度。结果缺氧刺激肺成纤维细胞CTGF mRNA高表达出现在1.5 h,并保持一相对平台至6 h,12 h开始下降。MMP9 mRNA在缺氧1.5 h出现高表达,并保持持续增高的趋势。ELISA结果证实CTGF与MMP9一样其峰浓度在缺氧12 h,用抗CTGF抗体干预的成纤维细胞组较未干预组表达MMP9量明显减少。结论缺氧可刺激人肺成纤维细胞高表达CTGF;缺氧可能是通过刺激成纤维细胞高表达CTGF,进而调节细胞分泌MMP9的量,参予细胞外基质沉积和气道重构。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的：观察苯那普利对糖尿病（DM）大鼠肾脏结缔组织生长因子（CTGF）基因表达和肾脏病 变的影响。 方法：将实验动物分为正常对照组（CON）、糖尿病组（DM）和苯那普利治疗组（DM+B）。 苯那普利处理12周后检测血清肌酐、尿素氮水平、尿白蛋白排泄率（UAER）和肾皮质血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量,RT-PCR检测肾皮质CTGF mRNA表达,免疫组化检测肾纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）蛋白表达水平。 结果：实验终止时,DM组UAER（12.92±3.56）mg·24 h^-1明显高于CON组（2.74±1.09）mg·24 h^-1（P<0.01）,DM+B组大鼠UAER（5.69±2.74）mg·24 h^-1明显低于DM组（P<0.01）。与CON组相比,DM组血清肌酐和尿素氮水平均明显增高（P<0.01）;苯那普利治疗使其水平明显降低（P<0.01）。DM大鼠肾皮质CTGF mRNA表达水平约为CON组的2.65倍（P<0.01）,在DM+B组其表达水平减少23.68%（P<0.05）。DM大鼠肾小球FN和Col Ⅳ蛋白表达均较CON组明显上调（均为P<0.01）,苯那普利治疗后其表达水平明显降低（P<0.01）。 结论：苯那普利能降低DM大鼠肾脏CTGF基因表达,并能明显减轻肾病变。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法雄性SD大鼠28只,随机选取8只作为正常对照组(N组),其余20只注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,并随机分为糖尿病组(DM组)、霉酚酸酯组(M组)。12周后测量大鼠血糖、体质量、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量、血肌酐(SCr),观察肾小管间质病理形态学变化,应用免疫组化技术和Western blot检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果 DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量、血SCr、肾小管-间质损伤指数(TII)均明显高于N组(P<0.01),M组除血糖、体质量外(P>0.05),其余指标均明显低于DM组(P<0.01);免疫组化结果显示,DM组肾小管上皮细胞胞浆中α-SMA、TGF-β1表达均明显高于N组(P<0.01),M组明显低于DM组(P<0.01);Western blot结果显示,DM组肾组织α-SMA、TGF-β1表达较N组分别增加3.4倍与1.1倍,M组肾组织α-SMA、TGF-β1表达较DM组分别下降55%与40%。结论 MMF能下调糖尿病大鼠肾小管上皮细胞α-SMA、TGF-β1的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,起到肾脏保护作用。