丹皮酚通过JAK-STAT信号通路对宫颈癌细胞增殖迁移及侵袭的作用机制

目的 分析丹皮酚通过Janus激酶(JAK)-信号传导和转录激活因子(STAT)信号通路对宫颈癌细胞(Hela细胞)增殖迁移及侵袭的作用机制。方法 采用不同浓度丹皮酚对Hela细胞进行处理,根据丹皮酚浓度不同分为0、7.5、15.0、22.5、30.0、60.0 mg/L组,分别在培养24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞调亡,Transwells小室检测细胞迁移和侵袭情况,并比较各组细胞培养72 h后的JAK1、JAK2、STAT3水平及其mRNA相对表达水平。结果 使用不同浓度丹皮酚对Hela细胞处理24、48、72 h后,随处理时间的延长各组细胞吸光度(A)值、凋亡率均升高,细胞迁移个数、侵袭个数均增多,差异均有统计学意义(P <0.05);培养24、48、72 h时,7.5、15.0、22.5、30.0、60.0 mg/L组细胞A值、凋亡率均低于0 mg/L组,细胞迁移个数、侵袭个数均少于0 mg/L组,差异均有统计学意义(P <0.05),其中60 mg/L组细胞A值、凋亡率最低,细胞迁移个数、侵袭个数最少,7.5 mg/L组细胞A值、...     

柚皮素缓解高糖对雪旺细胞损伤的作用机制分析

目的 分析柚皮素缓解高糖对雪旺细胞损伤的作用机制。方法 使用Bockes改良法从新生3 d的Wistar乳鼠的坐骨神经组织内分离纯化雪旺细胞,将其随机分为5组,A组细胞使用DMEM培养基培养72 h,B组细胞使用含5.6 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基培养72 h,C组细胞使用含5.6 mmol/L葡萄糖和20μmol/L柚皮素的DMEM培养基培养72 h,D组细胞使用含5.6 mmol/L葡萄糖和40μmol/L柚皮素的DMEM培养基培养72 h,E组细胞使用含5.6mmol/L葡萄糖和80μmol/L柚皮素的DMEM培养基培养72 h。对各组细胞培养不同时间的细胞活力和细胞凋亡率、培养72 h后培养液内炎症因子和氧化应激指标水平、培养72 h后NF-κB相关蛋白表达及其mRNA水平进行比较。结果与A组相比,B组、C组、D组、E组细胞培养24、48、72 h的吸光度（A）值均降低;与B组相比,C组、D组、E组细胞24、48、72 h的A值均升高;且随着柚皮素剂量的升高细胞24、48、72 h的A值升高,差异均有统计学意义（P <0.05）。与A组相比,B组、C组、D组、E组...     

二氢丹参酮Ⅰ对白血病THP1细胞的增殖抑制作用及其机制探讨

目的探讨二氢丹参酮I对白血病THP1细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用机制。方法将不同浓度的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24、48及72 h,分别采用CCK8法、Annexin V/PI双染法检测其对THP1细胞的增殖抑制与促凋亡作用;采用Western blot法检测NF-κB、MAPK及PI3K细胞信号通路的蛋白表达。结果二氢丹参酮I与THP1细胞共孵24、48及72 h,其IC50值分别为6.2、4.3及4.1μmol/L。浓度为5μmol/L的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24 h后,G0/G1期细胞比率均显著增加(P0.01)。二氢丹参酮Ⅰ可使NF-κB、PI3K信号通路的蛋白表达下调,对MAPK信号通路的蛋白表达无显著影响。结论二氢丹参酮Ⅰ对THP1细胞具有增殖抑制作用并呈浓度及时间依赖性,其通过阻滞THP1细胞周期而促凋亡;其发挥抗肿瘤作用的机制可能与抑制NF-κB、PI3K细胞信号通路的蛋白表达有关。     

NF-κB和PUMA与重症胰腺炎致急性肺损伤的关系以及PDTC的干预作用

目的 探讨NF-κB(核因子-κB)与PUMA(P53正向凋亡调节因子)表达在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的影响.方法 SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、SAP-ALI组、PDTC组,每组18只.各组再按6,12,24 h时间点分为三个亚组,每个亚组6只.假手术组开腹后翻动胰腺数次;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;PDTC组在SAP-ALI组的基础于术前1h给予PDTC(15 mg/kg),各组按时间点处死大鼠.观察胰腺和肺脏病理变化.Western-blot法检测肺组织NF-κB p65,PUMA表达,采用RT-PCR法测量各组bax,bcl-2和Caspase-3 mRNA,通过荧光检测试剂检测Caspase-3活性.投射电镜下观察各组肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化,TUNEL检测肺泡上皮细胞的凋亡指数.结果 成功建立了大鼠SAP-ALI模型,Western-blotting结果显示,SAP-ALI组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达在6h后增加,24 h增加最明显,NF-κB p65与PUMA显著正相关;SAP-ALI组肺组织bax mRNA和Caspase-3mRNA在6 h后增加,24 h增加最明显,bcl-2 mRNA在6 h后下降,24 h下降最明显,Caspase-3活性在24h增加最明显.PDTC组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达明显降低;bax mRNA和caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性明显降低,bcl-2 mRNA表达明显增加.假手术组肺组织各组蛋白的表达与PDTC组比无显著改变.PDTC组肺损伤病理组织学评分在术后各时间点较SAP-ALI组显著降低,PDTC组细胞凋亡指数较SAP-ALI组明显降低.SAP-ALI组24h市泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失.结论 NF-κB活化激活PUMA与肺泡上皮细胞凋亡有关,PDTC通过抑制NF-κB活化,下调NF-κB活化后引起的PUMA表达,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,减轻SAP-ALI.     

甘草酸二铵对百草枯诱导肺泡上皮Ⅱ型细胞高迁移率族蛋白1的影响

目的了解甘草酸二铵(DG)对百草枯(PQ)诱导肺泡上皮Ⅱ型细胞(alveolar epithelial cellⅡ,AECⅡ)中高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)的影响。方法 AECⅡ用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基,并加入青霉素100 U/ml、链霉素100μg/L,置于37℃含5%CO2的培养箱中培养。将培养后的细胞分为3组,空白对照组(NS组)不采用任何药物干预培养24 h;模型组(PQ组):以1000μmol/L PQ培养24 h;DG预治疗组(DG组):先以0.6 mg/ml DG培养2 h,再以0.6 mg/ml DG+1000μmol/L PQ培养24 h。采用MTT法测定DG对PQ诱导下AECⅡ的增殖作用;采用酶联免疫吸附法检测3组细胞中的HMGB1、Toll样受体4(TLR-4)、髓样分化因子88(My D88)、细胞核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定3组细胞中HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB P65 mRNA表达。结果在1000μmol/L PQ诱导下,AECⅡ以0.6 mg/ml DG干预24 h时生存率最高,以0 mg/ml DG干预生存率最低。与NS组比较,PQ、DG组HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB P65、TNF-α水平均明显升高,且DG组升高程度低于PQ组,差异均有统计学意义(P0.01);与NS组比较,PQ组、DG组HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB P65 mRNA表达均升高,且DG组升高程度低于PQ组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 DG可降低HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB、TNF-α水平,减轻PQ诱导的AECⅡ损伤。     

丹参酮ⅡA对脓毒症肺损伤大鼠氧化应激的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用。方法 采用盲肠结扎穿孔法(CLP),随机将50只健康成年雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、低剂量治疗组(丹参酮ⅡA 5 mg/kg)、中剂量治疗组(丹参酮ⅡA 10 mg/kg)、高剂量组(丹参酮ⅡA 20 mg/kg),每组各10只。假手术组：麻醉,开腹翻动肠道,关腹,2 h后腹腔注射0.9%氯化钠溶液(20 mL/kg),24 h后麻醉并腹主动脉采血,直至大鼠缺血而死。模型组及3个不同剂量的治疗组造模成功后2 h腹腔注射0.9%氯化钠溶液(20 mL/kg)或丹参酮ⅡA(5、10、20 mg/kg),24 h后,大鼠麻醉成功后,采集腹主动脉动脉血,行血气分析,计算PaO₂/FiO₂及ELISA法检测各组大鼠左肺下叶肺组织匀浆中XO、GSH-Px、MDA、SOD含量。结果 与模型组相比,三种剂量的丹参酮ⅡA均可以改善动脉血气中PaO₂/FiO₂比值,促进SOD和GSH-Px水平升高,同时降低了XO、MDA的水平。但是只有高剂量组的丹参酮ⅡA对MDA...     

花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨花旗松素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞分为A组、B组、C组、D组、E组,A组于37℃、5%CO_2恒温箱中培养30 h; B组缺氧(O_2浓度6%的厌氧培养箱)培养24 h,再复氧(37℃、5%CO_2恒温箱)培养6 h; C组加入1μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; D组加入10μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; E组加入100μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h。比较各组H9c2细胞形态学变化、存活率、凋亡率、NF-κB蛋白表达量、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 HE染色显示,A组细胞形态结构正常,B组H9c2细胞形态结构异常,横纹模糊,可见大量点状坏死灶,间质水肿明显,炎性细胞浸润明显; C、D、E组H9c2细胞病理改变较B组显著改善,随着花旗松素剂量增大,H9c2细胞病理改善越明显。B组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较A组明显下降(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较B组明显升高(P 0. 05),呈剂量依赖性。B组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较A组明显升高(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较B组明显下降(P 0. 05),呈剂量依赖性。结论花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤起到保护作用,并这种作用呈剂量依赖性,这可为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的方向。     

弥漫性脑损伤后大鼠肠黏膜上皮细胞的凋亡和核因子-κB的表达

目的 观察弥漫性脑损伤后大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡以及核因子-κB（NF-κB）表达的动态变化，探讨两者在肠黏膜屏障功能障碍中的作用。方法 采用Marmarou模型致大鼠重型弥漫性脑损伤，150只雄性Wistar大鼠随机分成对照组和伤后1、2、4、8、12、24、48、72、168h组，共10组，利用免疫组化技术检测NF-κB在不同时相组的表达，采用原位末端标记（TUNEL）法计数不同时相组凋亡细胞。结果 致伤组NF-κB表达的积分光密度均显著大于对照组（P〈0．01）；伤后1h凋亡细胞数量即开始增加，于伤后12h达到峰值后逐渐下降，但直到168h均较对照组明显升高（P〈0.01）。结论 弥漫性脑损伤后激活NF-κB。肠黏膜上皮细胞凋亡增加，两者在肠黏膜屏障功能障碍发生中可能起重要作用。     

槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及miR-29s家族的影响分析

目的探讨槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及微小RNA-29s(miR-29s)家族的影响。方法采用悬浮细胞培养人脑胶质瘤SHG44干细胞。根据槲皮素浓度不同分为0μg/ml(对照组),6μg/ml组、12μg/ml组、24μg/ml组、48μg/ml组、96μg/ml组,采用MTT法检测人脑胶质瘤SHG44增殖活性。用0μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml培养48 h,采用细胞迁移实验和细胞侵袭实验检测细胞迁移数目和细胞侵袭数目;采用RT-PCR检测miR-29s家族表达。结果培养24 h和48 h,槲皮素各组抑制率高于对照组,且随着浓度增加抑制率不断增加,差异均有统计学意义(P 0. 05);培养48 h,槲皮素各组抑制率高于培养24 h,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与对照组比较,槲皮素各组细胞迁移数目和细胞侵袭数目减少,差异均有统计学意义(P 0. 05);槲皮素48μg/ml组细胞迁移数目和细胞侵袭数目少于12μg/ml组和24μg/ml组,且24μg/ml组少于12μg/ml组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与对照组比较,槲皮素各组miR-29a和miR-29b表达升高,差异均有统计学意义(P 0. 05);槲皮素48μg/ml组miR-29a和miR-29b表达高于12μg/ml组和24μg/ml组,且24μg/ml组高于12μg/ml组,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论槲皮素对人脑胶质瘤干细胞SHG44具有良好抑制作用,且具有剂量依赖性,降低体外迁移及侵袭能力,及促进miR-29a和miR-29b表达。     

不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 表达及细胞凋亡的影响

目的比较不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡的影响。方法雌性SD 大鼠200 只,随机分为5 组,每组40 只。A 组大鼠不打击脊髓,缝合切口后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃。B、C、D、E 组大鼠制作Allen'sT9脊髓损伤模型。B组造模后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃,C、D、E 组分别以FTY720 按1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg 生理盐水稀释至0.3 ml 灌胃。分别于术后6 h、12 h、24 h、48 h 和72 h 取损伤段脊髓超薄切片,行SP 免疫组化染色观察Caspase-3 表达及TUNEL 染色观察细胞凋亡情况,并计算相应时间点免疫组化学染色阳性细胞比值。结果A组各时间点几乎见不到Caspase-3 和细胞凋亡阳性表达。B、C、D、E 组均在伤后6 h 开始出现凋亡细胞表达,伤后24 h 达高峰,伤后48 h 开始减弱,伤后72 h 进一步减少。伤后各时间点细胞凋亡表达均为B 组>C 组>D 组=E 组(P>0.05)>A 组(P<0.05)。Caspase-3 表达与细胞凋亡同步。相关性检验显示B、C、D组中,FTY720 的剂量与Caspase-3 表达、细胞凋亡表达呈负相关(P<0.05)。D组和E 组中,FTY720 剂量与上述指标不相关(P>0.05)。结论FTY720 可以显著减少大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡。FTY720 的剂量与其减轻Caspase-3 表达和细胞凋亡效果之间存在一定量效关系。3 mg/kg 是FTY720 治疗大鼠急性脊髓损伤的最适剂量。     

酸性肽对大鼠星形胶质细胞分泌神经生长因子和脑源性神经因子水平的影响

背景：神经生长因子和脑源性神经因子对神经细胞的存活和增殖非常重要。阿尔茨海默病患者的神经生长因子和脑源性神经因子水平均较低。目的：探讨酸性肽能否增加大鼠星形胶质细胞分泌神经生长因子和脑源性神经因子。设计：随机对照动物实验。单位：郑州大学医学院生物化学与分子生物学教研室。材料：实验于2003—09／2005—05在郑州大学生物活性肽研究所第一实验室和郑州大学基础医学院细胞培养中心完成。选取出生后2d内的SD乳鼠15只作为实验对象。方法：①将SD乳鼠在无菌条件下断头取出大脑皮质部分，进行星形胶质细胞的纯化培养，采用胶质纤维酸性蛋白免疫组化方法鉴定星形胶质细胞。②将培养的星形胶质细胞随机分为6组：空白对照组、血清对照组、阳性对照组、酸性肽37．5，75，150mg／L治疗组。空白对照组不施加任何实验因素，血清对照组加入体积分数为0．2的血清，阳性对照组加入1000U／mL干扰素，酸性肽治疗组则分别加入37．5，75，150mg／L的酸性肽。③将长满瓶底的第2代星形胶质细胞消化成单细胞悬液，以5&;#215;10^5mL等量接种于3块12孔培养板中。各组均于培养24，48，72h各时间点测定细胞存活率、细胞上清液中和细胞内神经生长因子及脑源性神经因子含量。主要观察指标：①不同培养时间各组细胞计数和存活率的检测结果。②酸性肽对大鼠星形胶质细胞增殖的影响。③不同培养时间各组星形胶质细胞上清液中神经生长因子及脑源性神经因子含量的变化。结果：①与空白对照组比较，酸性肽75，150mg／L治疗组细胞计数和细胞存活率在培养24，48，72h时均明显增加（P〈0．05，0．01，0．001）；酸性肽37．5mg／L治疗组虽有所增加但不明显。②与空白对照组比较，酸性肽37．5，75，150mg／L治疗组细胞增殖率均显著升高（0，17．5％，45．5％，72．5％，P〈0．001）。③与空白对照组比较，酸性肽37．5，75，150mg／L治疗组细胞上清液中神经生长因子的吸光度值在培养24，48，72h时均明显增加（P〈0．001）；除了在培养24h时间点酸性肽37．5mg／L治疗组不能增加星形胶质细胞分泌脑源性神经因子外，其他各浓度酸性肽治疗组在培养24，48，72h时脑源性神经因子的吸光度值均显著提高（P〈0．05，0．001）。结论：酸性肽能够不同程度地增加大鼠星形胶质细胞分泌神经生长因子和脑源性神经因子。     

丹参酮ⅡA对神经祖细胞系C17．2的保护作用

目的:了解丹参酮ⅡA对神经祖细胞系C17.2的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:本实验于2005年起在广州血液中心器官移植配型中心实验室进行。C17.2祖细胞系由澳大利亚新南威尔士大学解剖教研室David Walsh博士惠赠。将C17.2细胞以1×109L-1的密度接种,用含10%胎牛血清IMDM,37℃、体积分数为0.05CO2、饱和湿度的CO2培养箱培养,接近融合的C17.2细胞用含0.1mmol/LEDTA的胰酶室温消化,按1∶3的比例传代。C17.2细胞以5×107L-1的密度接种于96孔板或25cm2的培养瓶中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4g/L AAPH(水溶性偶氮引发剂2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐)无血清的IMDM培养基培养建立神经细胞凋亡模型。C17.2细胞以5×103/孔的密度接种于96孔板中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4g/LAAPH无血清的IMDM培养基培养。对照组不加入丹参酮ⅡA,实验组分别加入0.02,0.05,0.1,0.2mg/L丹参酮ⅡA培养8h,噻唑蓝法检测细胞活性:细胞活性的相对值=(实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①AAPH处理8h后,C17.2细胞被过氧化损害,大多数细胞失去正常的形态,细胞呈圆形,脱落。加入丹参酮ⅡA后,细胞形态基本保持正常,少数细胞呈圆形。②C17.2细胞在IMDM的培养液中,细胞数量是含4g/L AAPH无血清的IMDM培养基条件下的2.5～3倍。浓度为0.02,0.05,0.1mg/L的丹参酮ⅡA对C17.2细胞有保护作用,质量浓度大于0.2mg/L丹参酮ⅡA对C17.2细胞保护作用降低。③AAPH作用前大部分C17.2细胞的线粒体完整,有少量的早期凋亡细胞和凋亡细胞,AAPH作用后凋亡细胞总数、凋亡细胞明显增加。丹参酮ⅡA处理组可以明显减少早期凋亡细胞。结论:在体外丹参酮ⅡA对神经细胞具有抗凋亡的作用,可以保护神经细胞。     

神经生长因子对新生大鼠高胆红素血症细胞凋亡以及相关基因的影响

目的研究神经生长因子对新生大鼠高胆红素血症细胞凋亡以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、核因子-κB(NF-κB)水平的影响。方法将105只SD新生大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组35只。模型组、干预组大鼠1 h内腹腔注射剂量为100μg/g的胆红素溶液1次,对照组腹腔注射0. 5 ml的生理盐水。通过腹腔注射100μg/g的胆红素溶液建立高胆红素血症大鼠模型。造模后,按50μg/kg腹腔注射神经生长因子,持续给药3 d。造模后12 h、24 h、36 h、48 h、72 h,观察三组大鼠神经行为的变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测定神经细胞的凋亡率;免疫印迹试验(Western Blot)检测NF-κB、Caspase-3蛋白的表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠活动明显减少,出现翻滚、抽搐、对外界刺激的反应迟钝等神经异常行为,细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白水平显著增加(P 0. 05),NF-κB水平显著增加(P 0. 05);与模型组相比,干扰组大鼠活动增加,神经异常状况显著减轻,细胞的凋亡率、Caspase-3和NF-κB蛋白水平显著降低(P 0. 05),且具有时间依赖性。结论神经生长因子可能通过降低Caspase-3和NF-κB蛋白水平抑制神经细胞的凋亡,保护高胆红素血症大鼠的神经损伤。     

硫辛酸对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：以内毒素（lipopolysaccharide,LPS）诱导法建立大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型,探讨不同剂量的硫辛酸（lipoic acid,LA）处理对大鼠ALI的保护作用.方法：选择健康SD大鼠90只,其中72只SD大鼠腹腔注射LPS 25 mg/kg,构建大鼠ALI模型,再按不同干预方法将72只大鼠分为LA阴性对照组（腹腔注射等量0.9％氯化钠液）、LA大剂量组[腹腔注射LA 120 mg/（kg·d）]、LA中剂量组[腹腔注射LA 60 mg/（kg·d）]、LA小剂量组[腹腔注射LA 30 mg/（kg·d）],每组18只;其余18只大鼠,仅腹腔注射等量0.9％氯化钠液（正常组）.检测各组大鼠处理24、48、72 h后肺组织中核因子κB （NF-kappa B,NF-κB）、白细胞介素1（interleukin 1,IL-1）、NO合成酶（NO synthetase,NOS）、NO、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor α,TNF-α）的水平.结果：LPS诱导后,LA阴性对照组大鼠肺组织中NF-κB、IL-1、NOS、NO、TNF-α在72 h时最高.与正常组大鼠比较,其余各组NOS、NO、TNF-α的水平均较高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LA阴性对照组比较,处理24、48、72 h后LA大剂量组IL-1、NF-κB、NOS、NO、TNF-α的水平明显下降（P均＜0.05）,LA中剂量组在处理24 h后的NOS、NO水平以及处理72 h的NO水平也明显下降（P均＜0.05）.结论：LA对ALI大鼠的治疗效果以大剂量组最为明显,其机制可能与LA抑制NF-κB激活以及下调肺组织中IL-1、NOS、NO、TNF-a的表达有关.     

钩吻总碱通过JAK2/STAT3/Survivin通路调控人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用探讨

目的观察钩吻总碱对人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用,并探讨其对酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)/Survivin通路的调控作用。方法取人舌癌细胞株Tca8113,培养至对数期,分装至6孔板中,分为对照组、A组、B组和C组,每组设置5个复孔。A组、B组和C组分别加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度的钩吻总碱处理(20μl),对照组加入等量PBS缓冲液。以倒置显微镜观察72 h后各组细胞形态;以MTT法检测24 h、48 h、72 h后细胞增殖抑制率;以流式细胞仪检测72 h后细胞凋亡率;以RT-PCR检测72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量;以WB检测72 h后IL-6蛋白、JAK2、STAT3、Survivin蛋白表达并计算p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin。结果72 h后,倒置显微镜下观察结果显示对照组细胞紧密,轮廓清晰,贴壁生长状态良好;A组细胞有浮起、变圆,B组和C组可见不同程度细胞壁皱缩和细胞碎片,其中C组变化最为明显,B组次之,A组变化最轻;各组24 h、48 h、72 h后增殖抑制率比较差异均有统计学意义(P<0.05),各组增殖抑制率均随时间延长显著增长,且呈时间依赖性和剂量依赖性;各组72 h后细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.05),各组凋亡率均随剂量升高显著增高;各组72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin比较差异均有统计学意义(P<0.05),每两组间比较也可见差异具有统计学意义(P<0.05),其中对照组均最高,A组均次之,B组均稍低,C组均最低;各组IL-6蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论钩吻总碱能够呈剂量依赖性抑制人舌癌细胞株Tca8113增殖、促进凋亡,推测与直接调控JAK2/STAT3/Survivin通路,抑制JAK2、STAT3、Survivin蛋白磷酸化有关。     

IRAK4基因对高糖诱导的心肌细胞炎症因子分泌及凋亡的影响

目的探讨沉默白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)基因对高糖诱导的心肌细胞炎症因子分泌及凋亡的影响。方法分别将siRNA阴性对照和siRNA IRAK4转染H9C2心肌细胞,并进行高糖干预。实验分为正常对照组(采用含5. 5 mmol/L D-葡糖糖的正常培养基培养细胞)、高糖对照组(正常培养基培养24 h后更换为含33 mmol/L D-葡糖糖的高糖培养基培养72 h)、高糖+siRNA-NC组(转染siRNA阴性对照24 h后更换为高糖培养基)、高糖+siRNA-IRAK4组(转染siRNA IRAK4 24 h后更换为高糖培养基)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中IRAK4蛋白、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、核转录因子κB(NF-κB)蛋白水平。结果与正常对照组相比,高糖条件显著上调心肌细胞中IRAK4蛋白(P 0. 05),抑制细胞的活力、促进其凋亡(P 0. 05),提高炎症因子IL-6、TNF-α水平(P 0. 05),上调p-p38MAPK、NF-κB蛋白水平(P 0. 05);沉默高糖诱导的心肌细胞中IRAK4的表达量显著提高心肌细胞活力(P 0. 05)、降低其凋亡率(P 0. 05),抑制炎症因子IL-6、TNF-α水平(P 0. 05),下调p-p38MAPK、NF-κB蛋白水平(P 0. 05)。结论沉默IRAK4显著抑制高糖诱导的心肌细胞的凋亡,提高细胞的活力,可能通过调节p38MAPK、NF-κB活性及其下游炎症介质的表达调控。     

结核分枝杆菌抗原激活核因子κB延迟中性粒细胞自发凋亡的作用

目的 探讨结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发凋亡的影响.方法 取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用核因子κB(NF-κB)抑制剂N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理30 min后,膜联蛋白V(AnnexinV/PI)染色,流式细胞术观察细胞凋亡情况;并用凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)化学发光法检测Mtb-Ag刺激0、1、2、4、6、24h后,中性粒细胞NF-κB的DNA结合活性.结果 加Mtb-Ag(1.125 mg/ml)培养的中性粒细胞凋亡率(32%±3%)与中性粒细胞体外培养24 h后自发凋亡率(55%±6%)相比,明显降低(P＜0.05).Mtb-Ag(1.125 mg/ml)作用中性粒细胞1 h后明显可见NF-κB活化,2 h NF-κB的DNA结合活性达高峰,24h回到静息水平;经TPCK(30 μmol/L)预处理后可阻断Mtb-Ag的抑制凋亡作用.结论 经激活NF-κB介导后,Mtb-Ag对中性粒细胞自发凋亡有抑制作用.     

核因子-κB在重症急性胰腺炎模型肝脏损伤中的作用

目的研究核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)模型中的动态改变与肝脏损伤变化的关系。方法24只健康雌性SD大鼠随机分为SAP组及假手术组。SAP模型经胆胰管内加压注射4%牛磺胆酸钠溶液1mL/kg完成。建模后24h、48h、72 h 3个时间点将大鼠处死,留取肝组织苏木精-伊红染色下观察肝脏病理情况,外周血检测ALT水平,应用TransAM NF-κB p65试剂盒检测肝组织NF-κB的表达。结果48h肝脏病理示3区出现点状坏死,72h呈灶性坏死,均见核皱缩、碎裂,周围散在炎症细胞;SAP组NF-κB活性与ALT水平各时点渐次升高(P<0.05),各时点SAP组NF-κB活性与ALT水平较假手术组明显升高(P<0.05)。结论重症急性胰腺炎存在肝损伤,病理出现缺血性肝脏损伤变化,随炎症的持续肝损伤加重,肝脏核因子-κB在肝损伤中发挥重要作用。     

三氧化二砷联合硼替佐米对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制的实验研究

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）单独或联合硼替佐米（Bor）对髓系白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度的As2O3、Bor处理细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测单用As2O3、Bor及二者联用的细胞凋亡率及细胞周期的变化;免疫组织化学法分析各组核转录因子（NF-κB）的表达水平。结果表明,As2O3（0．1-0．8μmol／L）和Bor（5-50nmol／L）均能抑制K562细胞的增殖,且与作用时间和药物浓度有关,时间越长,浓度越大,抑制越明显（P〈0．05）;Bor和As2O3作用48h的IC50值分别为20nmol／L和0．6μmol／L。As2O3（0．5μmol／L）或Bor（10nmol／L）分别单独处理细胞24h,K562细胞凋亡增加,联合用药组的细胞凋亡率高于单药组（P〈0．01）。As2O3或Bor处理K562细胞6h时细胞周期分布显示：As2O3组细胞阻滞于G0／G1期,Bor组细胞阻滞于G2／M期。As2O3或Bor分别单独处理细胞24h,NF-κB表达阳性率及积分较对照组明显降低（P〈0．05）,联合用药组的NF-κB表达阳性率及积分较As2O3及Bor单用组均明显降低（P〈0．01）。结论：As2O3及Bor单药均可以直接抑制K562细胞增殖,促进凋亡,两药小剂量联合作用后,细胞增殖抑制及促凋亡作用较单药明显增强。细胞周期阻滞点的不同及NF-κB表达的下降可能是As2O3和Bor联用后协同作用的机制之一。     

雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏Toll样受体4，核因子-κB，白细胞介素-8表达的影响

目的：探讨雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏Toll样受体4,核因子κB,白细胞介素-8表达及尿蛋白量的影响。方法：雄性wistar大鼠40只,随机分为对照组（A组）,模型组（B组）,常规剂量治疗组[C组,5mg／（kg·d）],大剂量治疗组[D组,10mg／（kg·d）]。采用尾静脉注射阿霉素6mg／kg的方法建立阿霉素肾病大鼠模型。分别于4周,8周未观察各组大鼠24h尿蛋白定量及肾脏病理变化。免疫组织化学方法测定肾脏Toll样受体4,核因子-κB,白细胞介素-8的表达水平。结果：与B组比较,C,D组24h尿蛋白定量明显降低（P〈0．05）,肾组织Toll样受体4,核因子-κB,白细胞介素-8表达明显降低（P〈0．05）。与C组比较,D组上述指标明显降低（P〈0．05）。结论：雷米普利可能通过下调Toll样受体4,核因子-κB,白细胞介素-8的表达减少尿蛋白。