糖氧剥夺/再灌注抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统

目的建立L2.3神经干细胞糖氧剥夺/再灌注损伤模型,探讨糖氧剥夺/再灌注是否可以抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统。方法体外培养的L2.3神经干细胞经历糖氧剥夺(OGD)6h,再灌注(R)16h,建立OGD/R模型。分别在OGD前、OGD6h、OGD6h再灌注16h,用western blot方法检测Notch1、NICD、DLL3和N-Myc蛋白表达情况。结果与糖氧剥夺/再灌注前比,糖氧剥夺6h,再灌注16h可下调Notch1、NICD、DLL3和N-Myc蛋白表达。结论糖氧剥夺/再灌注损伤可抑制L2.3神经干细胞N-Myc-DLL3-Notch信号系统     

神经干细胞在缺氧后的分化情况及相关信号通路初探

目的 观察缺氧缺糖后神经干细胞在不同时间点的分化趋势,以及与信号通路促红细胞生成素受体(EPOR和βCR)和PDZ连接激酶(PBK)的相关性.方法 分离小鼠原代神经干细胞,制备氧糖剥夺(OGD)模型,缺氧3 h,复氧1 h、2 h、4 h、6 h、8 h,观察神经干细胞OGD的分化趋势,采用RT-PCR技术检测少突胶质...     

转录因子Krüpple样因子7对新生大鼠海马神经元缺血再灌注损伤的影响

目的探讨转录因子Krüpple样因子7(KLF7)对新生大鼠海马神经元缺血再灌注损伤的影响。方法取新生Sprauge-Dawley大鼠海马组织制备海马神经元单细胞悬液,按每孔1×10~6个细胞接种于聚赖氨酸包被6孔细胞培养板,细胞贴壁继续培养7 d后分为正常组、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)组和OGD/R+KLF7组。正常组培养7 d的原代大鼠海马神经元按每孔1×10~6个细胞于含胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养,置于含体积分数5%CO-_2的培养箱中37℃下培养3 d; OGD/R组培养7 d的原代大鼠海马神经元用磷酸盐缓冲液洗3次,用移液器将原培养液置换为无糖平衡盐溶液,置于三气缺氧细胞培养箱(体积分数1%O_2、94%N_2、5%CO_2)中37℃下培养4 h,然后应用4. 5 g·L-1葡萄糖培养基代替无糖平衡盐溶液,置于含体积分数5%CO2的常温培养箱中培养24 h; OGD/R+KLF7组培养成功的OGD/R模型细胞加入Lenti-KLF7慢病毒进行转染,置于含体积分数5%CO2的培养箱中37℃下孵育3 d。应用倒置相差显微镜观察各组海马神经元的生长状态,实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA表达,细胞计数试剂盒检测各组细胞活性,Hoechst33342/磺化丙啶双染法检测各组细胞凋亡情况。结果 3组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F=237. 702、24. 031、476. 505、112. 900、89. 467,P <0. 05); OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量显著高于正常组(P <0. 05); OGD/R+KLF7组细胞中KLF7、NGF和Bcl-2mRNA相对表达量显著高于OGD/R组(P <0. 05),Caspase-3和Bax mRNA相对表达量显著低于OGD/R组(P <0. 05)。正常组、OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞活性分别为1. 080±0. 090、0. 499±0. 049和0. 727±0. 115,3组细胞活性比较差异有统计学意义(F=42. 710,P <0. 05); OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞活性显著低于正常组(P <0. 05),OGD/R+KLF7组细胞活性显著高于OGD/R组(P <0. 05)。正常组、OGD/R组、OGD/R+KLF7组细胞凋亡率分别为(40. 6±6. 3)%、(76. 7±4. 3)%和(58. 5±4. 4)%,3组细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=36. 822,P <0. 05); OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞凋亡率显著高于正常组(P <0. 05),OGD/R+KLF7组细胞凋亡率显著低于OGD/R组(P <0. 05)。结论 KLF7对OGD/R诱导的海马神经元缺血再灌注细胞损伤具有保护作用,其机制可能与介导NGF表达,进而调控Caspase-3、Bcl-2和Bax细胞凋亡信号通路有关。     

糖氧剥夺/再灌注损伤对人正常肝L02细胞自噬水平的影响

目的 探讨糖氧剥夺/再灌注损伤(OGD/R)对人正常肝L02细胞自噬水平的影响.方法 体外培养人正常肝L02细胞,制备OGD/R模型,模拟临床的肝脏缺血再灌注损伤.分为5组:正常对照组、OGD 6 h/R 1、3、6、12 h组.随后在倒置显微镜下观察L02细胞形态;采用MTT比色法检测L02细胞的相对增殖情况;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达变化.结果 与正常对照组相比,随着再灌注时间的延长,OGD/R组处理L02细胞的形态损伤逐渐加剧,增殖活性逐渐降低,呈时间依赖性.自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在OGD 6 h/R 1 h即有所增高,随着再灌注时间的延长,LC3的表达量逐渐增高并于再灌注6 h时大量增加,于再灌注12 h时达到最大值(P<0.01);Beclin-1蛋白的表达量随再灌注时间的延长逐渐增加于6 h和12 h急剧增加(P<0.01);p62蛋白于OGD 6 h/R 1 h时和3 h无明显变化,而在再灌注6 h时开始急剧增加,于12 h达到最大值(P<0.01).结论 OGD/R可诱导人正常肝L02细胞自噬水平上调,并且导致细胞的自噬性死亡.     

低氧环境对创面修复主要效应细胞表达MMP-9的作用

目的 探讨低氧(2％O2)对创面修复主要效应细胞(表皮细胞及真皮成纤维细胞)表达MMP-9的影响.方法 常规培养人表皮细胞及人真皮成纤维细胞,分为常氧组和低氧组(设低氧培养3h和6h两个组),采用Western blot、明胶酶谱法和荧光定量PCR法检测人表皮细胞和真皮成纤维细胞MMP-9细胞蛋白表达、MMP-9细胞外分泌和MMP-9转录水平变化.结果 常氧培养的表皮细胞中,MMP-9呈一定程度的基础表达和细胞外分泌.与常氧组比较,低氧能明显促进表皮细胞MMP-9的蛋白表达(6h时增强约20％,P＜0.01)和MMP-9的细胞外分泌[(44.03±3.00)vs(60.64±3.77),P＜0.01].常氧与低氧条件下真皮成纤维细胞极少表达和分泌MMP-9.荧光实时定量PCR结果显示,低氧培养条件下表皮细胞MMP-9 mRNA水平显著增高,常氧对照组为(1.67±0.69),低氧6h组为(5.47 ±0.51),两者比较差异有统计学意义(P =0.002).结论 低氧刺激能显著诱导表皮细胞,而非真皮成纤维细胞,表达和分泌MMP-9,这一作用可能与低氧刺激促进MMP-9的转录有关.     

大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达

目的:探讨Wistar大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后不同时间点NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达情况.方法:体外培养原代大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学鉴定神经元,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD 4 h组、OGD 4 h/R 2 h组、OGD 4 h/R 6 h组、OGD 4 h/R 12 h组、OGD 4 h/R 24 h组为实验组,采用免疫细胞化学、Western印迹检测NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达.结果:(1)免疫细胞化学(神经元烯醇化酶相关抗原及β-tubulin 3)鉴定所培养的细胞为神经元;(2)免疫细胞化学、Western印迹结果显示OGD 4 h组NF-κB P50蛋白表达开始增加明显高于正常组(P<0.05),0GD 4 h/R 2 h组、OGD 4 h/R 6 h组NF-κB P50蛋白表达持续性升高,并在复氧后6 h达高峰(P<0.01),此后逐渐下降,至OGD 4 h/R 12 h时与正常组有显著差异(P<0.05),OGD 4 h/R 24 h NF-κB P50蛋白表达降低与正常组比较无统计学差异(P<0.05);(3)NF-κB c-Rel蛋白表达OGD 4 h组与正常组无差异(P>0.05),OGD 4 h/R 2 h至OGD 4 h/R 12 h表达持续增加,并在复氧后12 h达高峰(P<0.01),OGD 4 h/R 24 h仍未恢复到正常水平(P<0.05).结论:大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后激活了NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达,并具有时间相关性.     

亚低温对OGD/R模型新生大鼠海马神经元损伤的保护分子机制研究

目的 观察亚低温（MH）对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 体外培养新生大鼠海马神经元,将实验细胞随机分为对照组、OGD/R组、OGD/R+MH组和OGD/R+MH+Chl组;OGD/R组神经元给予OGD处理6 h,再于37℃复糖复氧处理24 h建立OGD/R模型。OGD/R+MH组和OGD/R+MH+Chl组神经元均给予OGD处理6 h,再分别于32℃不加或加氯喹（Chl）条件下复糖复氧处理24 h。收集各组复糖复氧处理24 h后的细胞及细胞培养上清液;采用电镜观察神经元超微结构变化,MTT法检测神经元活力,ELISA法检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,TUENL染色法检测神经元凋亡情况,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3剪切体（Cleaved caspase-3）、聚ADP核糖聚合酶剪切体（Cleaved PARP）、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、泛素结合蛋白P62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）表达水平。结果 与对照组比较,OGD/R组出现明显的细胞器损伤、降解、线粒体肿胀等神经元损伤表现,神经元活...     

Max作用蛋白1⁃0在氧糖剥夺诱导SH⁃SY5Y细胞凋亡中的作用

目的：探讨Max作用蛋白1?0（max action protein 1?0,Mxi1?0）在氧糖剥夺（oxygen?glucose deprivation,OGD）诱导SH?SY5Y细胞凋亡中的作用。方法：利用Western blot检测SH?SY5Y细胞在OGD条件下Mxi1?0和线粒体自噬相关蛋白LC3?Ⅱ、p62、Tom20的表达水平。Mxi1?0 siRNA转染SH?SY5Y细胞,以CCK?8法和Annexin V/PI染色法检测Mxi1?0在OGD诱导细胞凋亡中的作用。结果：OGD条件下,SH?SY5Y细胞中Mxi1?0的表达先上升后下降。OGD处理使线粒体自噬相关蛋白LC3?Ⅱ表达升高,p62和Tom20蛋白表达下降。OGD条件下,Mxi1?0沉默可抑制OGD诱导的线粒体自噬,增强OGD诱导的SH?SY5Y细胞凋亡。结论：Mxi1?0通过增强线粒体自噬拮抗OGD诱导的SH?SY5Y细胞凋亡。     

米诺环素对PC12细胞缺氧缺糖损伤后神经突生长的影响

目的：探讨米诺环素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）缺氧缺糖（OGD）损伤后细胞存活率及神经突生长的影响。方法分别缺氧缺糖2、4、6h及8h建立PC12细胞OGD损伤模型,将细胞分为正常对照组,OGD组和不同浓度的（0．1、1．0μM和10．0μM）米诺环素治疗组,在缺氧缺糖／复氧24h后,用CCK‐8法检测细胞存活率,免疫荧光法标记MAP‐2并在荧光显微镜下观察神经突的生长,Westernblot法检测各组GAP‐43蛋白的表达水平。结果与OGD组比较,米诺环素能显著提OGD后PC12细胞的存活率［（46．1±2．9）％vs．（77．0±2．5）％,P＜0．01］,促进PC12细胞OGD损伤后神经突的生长,同时上调轴突再生蛋白GAP‐43的表达［（0．34±0．04）vs．（2．11±0．10）,P＜0．01］。结论米诺环素能减轻OGD损伤所致PC12细胞的死亡,并促进细胞神经突的生长。     

rhEPO对缺糖缺氧大鼠星形胶质细胞的保护作用及对其DNA甲基转移酶的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对氧糖剥夺(OGD)条件下大鼠星形胶质细胞DNA甲基转移酶(DNMT)水平的影响。方法用不同浓度rhEPO与星形胶质细胞在OGD条件下共培养6h,用台盼蓝拒染法测定细胞损伤程度,RT-PCR测定DNMT1、DNMT3A/3BmRNA的表达变化。结果在缺糖缺氧培养组,星形胶质细胞在OGD培养后1h出现死亡并持续加重,至5~6h时死亡率达到高峰;20U/ml rhEPO组和100U/ml rhEPO组细胞死亡率,星形胶质细胞DNMT1、DNMT3A/3BmRNA水平均低于OGD对照组(P<0.05或P<0.001),但不同浓度rhEPO对DNMT3A/3B影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rhEPO可以对缺糖缺氧培养大鼠星形胶质细胞起到保护作用,其作用机制可能与其改变DNMT1、DNMT3A/3BmRNA水平有关。     

不同温度糖氧剥夺对人神经母细胞瘤细胞表达小泛素样修饰蛋白化相关蛋白的影响

目的观察缺血缺氧状态下不同低温对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)表达小泛素样修饰蛋白(SUMO)化相关蛋白的影响,探讨SUMO化在深低温停循环(DHCA)过程中对人神经系统的保护作用。方法在18℃、26℃、30℃、37℃环境中进行4 h缺氧的细胞与正常培养细胞对比,观察细胞缺氧后形态,微板法检测再灌注24 h后培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western Blot检测缺氧后UBC9、SUMO1、SUMO2/3水平及再灌注24 h后caspase-3水平,q PCR检测缺氧后UBC9的mRNA表达情况。结果 LDH检测结果示,糖氧剥夺(OGD)4 h使LDH漏出量显著增加,低温可减少LDH漏出(P0.05,n=6)。Western Blot结果显示,与37℃OGD组相比,低温干预可上调结合态SUMO1表达,温度越低表达量越高,18℃组明显高于30℃组(P0.05,n=6),但18℃组与26℃组差异无统计学意义(P0.05,n=6);低温干预可同时上调结合态及游离态SUMO2/3表达(P0.05,n=6),但与37℃OGD组相比,并不额外增加SUMO2/3蛋白结合游离比(P0.05,n=6);OGD和低温对UBC9蛋白表达影响均不显著(P0.05,n=6);OGD损伤4 h再灌注24 h后Caspase-3蛋白水平明显上调,低温干预下调Caspase-3表达(P0.05,n=6)。q PCR结果显示,OGD和低温对UBC9蛋白表达影响均不显著(P0.05,n=3)。结论细胞遭受缺血缺氧时,低温可增加SUMO蛋白整体表达水平,提高SUMO1蛋白结合能力,提高神经细胞抗缺血缺氧耐受能力。短时间缺血缺氧情况下,26℃和30℃的神经保护作用与18℃深低温效果相近。     

PFT-α对脑缺血后神经干细胞移植中PUMA的调控研究

目的探索p53抑制剂(PET-α)对脑缺血后神经干细胞(NSCs)中p53下游促凋亡基因(PuMA)的表达影响。方法利用SD仔鼠分离NSCs,原代及传代培养,经氧糖剥夺(OGD)处理6 h后分为OGD+二甲基亚砜(DMSO)组和OGD+PFT-α组,采用免疫印迹技术比较2组p53蛋白及PUMA的表达变化。体内实验中采用Longa法建立经CT证实的大脑中动脉栓塞模型大鼠48只,随机分为PFT-α+NSCs移植组(n=24)和DMSO+NSCs移植组(n=24);采用免疫荧光技术检测不同移植组中PUMA的表达。结果 (1)体外实验中氧糖剥夺6 h后OGD+PFT-α组中p53蛋白入核水平下调,胞浆内表达上调,而OGD+DMSO组主要表达位于胞核;PUMA的表达水平明显低于OGD+DMSO组(P<0.05);(2)体内实验中,与DMSO+NSCs组相比,PIT-α+NSCs移植组中PUMA表达阳性的细胞明显减少[(38.9±4.3)%vs.(29.4±5.6)%,P<0.01]。结论 PFT-α与神经干细胞联合应用后,可明显抑制PUMA的表达,这可能是PFT-α促进移植后神经干细胞在脑缺血区存活的重要机制。     

培养不同时间大鼠皮质在缺糖缺氧损伤中神经元凋亡的观察

目的 观察培养不同时间的大鼠脑皮质神经元对缺糖缺氧的敏感程度,探讨培养时间在皮质神经元损伤中的作用.方法 首先分离孕18天胎鼠的皮质神经元,分为对照组和实验组.实验组于培养6天、8天、12天时分别进行缺糖缺氧(OGD)2h,然后培养24h;采用DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞的形态变化.对照组除不进行OGD的损伤外,其他条件与实验组一致.结果 培养12天较培养8天的皮质神经元细胞凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05);培养6天的皮质神经元的细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 不同培养时间的皮质神经元对OGD损伤反应不同;未成熟的皮质神经元对OGD不敏感,具有耐受性;成熟的皮质神经元随成熟程度的增加,对OGD敏感性增强.     

丹参酮ⅡA减轻氧糖剥夺诱导心肌细胞损伤的机制

目的：丹参酮ⅡA具有广泛的心肌保护作用。AK003290是1种在心肌组织中高表达的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA),在心肌发生损伤时表达下调。本研究旨在探讨丹参酮ⅡA减轻氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)诱导心肌细胞损伤的机制。方法：以H9C2大鼠心肌细胞为研究对象,构建OGD损伤模型。采用转染siRNA的方法敲低AK003290的表达。将H9C2细胞分为6组：对照(control)组、丹参酮ⅡA(TAN)组、OGD组、丹参酮ⅡA+OGD(TAN+OGD)组、scrambled siRNA转染+丹参酮ⅡA+OGD(scrambled siRNA+TAN+OGD)组、AK003290 siRNA转染+丹参酮ⅡA+OGD(AK003290 siRNA+TAN+OGD)组。TAN组只用40μmol/L的丹参酮ⅡA预处理细胞12 h。OGD组只进行OGD处理12 h。TAN+OGD组先用40μmol/L的丹参酮ⅡA预处理12 h,再行OGD处理12 h。Scrambled siRNA+TAN+OGD组和AK003290...     

人表皮干细胞的快速分离培养及鉴定

目的 探讨人表皮干细胞的体外快速分离和培养方法.方法 运用Dispase Ⅱ酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮组织中分离获得表皮干细胞.分离的表皮片经表皮干细胞培养基(ESCM)悬浮,接种于IV型胶原包被的培养板中,37 ℃、5%CO2 饱和湿度的细胞培养箱内静置培养10 min,留用贴壁细胞;Ⅳ型胶原黏附、分离并富集后继续培养.倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况;检测细胞克隆形成率及克隆维持时间;免疫组化染色观察表皮干细胞标志物β1整合素和角蛋白19(K19)的表达.以角质形成细胞作为对照.结果 组织学观察显示,培养24 h后细胞呈克隆状生长;所分离、培养细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞,且克隆维持时间较长; 免疫组化染色显示,培养细胞β1整合素及Kl9均呈阳性表达.结论 运用Ⅳ型胶原黏附结合ESCM培养可以实现人成体表皮干细胞的快速分离和培养.     

自体表皮移植加中药治疗白癜风33例

1　临床资料　稳定期白癜风患者 6 4 (男 15 ,女 4 9)例 ;年龄9～ 6 5 (平均 31.9)岁 ;病程 3ｍｏ～ 2 8ａ ,平均 7.3ａ .局限型 2 8例 ,节段型 19例 ,肢端型 10例 ,泛发型 7例 ,共移植皮片 4 4 3片 .治疗组 33例 ,进行自体表皮移植联合口服中药 ,对照组31例 ,进行单纯自体表皮移植 .采用ＹＷ Ⅱ型负压治疗仪进行自体表皮移植 ,对白斑区及供皮区均用负压吸疱 ,压力调至0 .0 6ｋＰａ,维持 30～ 6 0ｍｉｎ ,待水疱出现后 ,在无菌条件下 ,弃白斑区水疱壁 ,完整剪下供皮区水疱壁 ,平整地贴于白斑区表皮剥离面上 ,敷油纱布后包扎 1ｗｋ ,1ａ后随…     

人原代表皮干细胞及其传代细胞生物学特性的比较

目的 比较体外培养条件下人原代表皮干细胞与传代细胞的生物学差异.方法 选择2009年5-12月在我科医学美容门诊行包皮环切术后的包皮标本共20例,从包皮标本获得人原代表皮干细胞,利用0.25%胰蛋白酶冷消化4 h获得传代细胞,利用CASY系统计数后计算细胞的黏附率,倒置相差显微镜下观察原代干细胞及传代细胞的形态学变...     

胰岛素对氧糖剥夺诱导大鼠脑神经元损伤的改善作用

目的:探讨胰岛素对氧糖剥夺诱导新生大鼠脑皮质神经元损伤的改善作用.方法:将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用胰岛素预处理加OGD/R处理,B、C组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性.采用脱氧尿嘧啶缺口末端标记法检测神经元凋亡情况,采用免疫细胞化学方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养子(BDNF)的表达.结果:①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数日明显少于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论:胰岛素预处理可明显提高OGD/R后神经元的存活率,抑制神经元凋亡,使GAP-43、BDNF表达增加,实现神经元损伤的改善作用.     

表皮干细胞分离及基因特异性表达

目的利用Ⅳ型胶原快速黏附特性分离表皮干细胞 ,以基因芯片技术检测表皮干细胞基因特异性表达。方法观察表皮角质形成细胞 (KCs)在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)上的黏附、生长 ,相差显微镜和扫描电镜观察Ⅳ型胶原快速黏附KCs形态 ,流式细胞仪测定细胞周期 ,基因芯片技术检测表皮干细胞基因特异性表达。结果KCs在Ⅳ型胶原上黏附和生长良好 ,IV型胶原上快速黏附的KCs形态较为原始 ;S期、G2 /M期细胞比例分别为 (2 .18± 1.85 ) %和 (0 .6 0± 0 .2 1) % ,明显低于非黏附KCs的 (3.92± 0 .99) %和 (1.4 4± 0 .78) % ,符合表皮干细胞的形态和细胞周期特征。与原代KCs比较 ,黏附KCsCTNNB1、TOB1、PP2R5E等 2 1个增殖相关基因上调 ,17个下调。结论IV型胶原是表皮干细胞分离的适宜基质 ,在Ⅳ型胶原上快速黏附的KCs符合表皮干细胞的形态和细胞周期特征。黏附KCsCTNNB、TOB1、PP2R5E等基因表达上调 ,可能与表皮干细胞特性的维持有关。     

骨髓间充质干细胞培养液对大鼠皮层神经元氧糖剥夺损伤的保护作用及机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）培养液对大鼠皮层神经元氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤后细胞存活的作用及其影响机制。方法：分别取清洁级6~8周60~80 g SD大鼠和孕16~18 d孕鼠进行BMSCs和皮层神经元培养。培养第5天的皮层神经元建立OGD损伤模型,实验随机分为4组：氧糖剥夺组（OGD组）;氧糖剥夺+BMSCs培养液组（OGD+CM组）,神经元OGD后培养基更换为BMSCs培养液（CM）继续培养;OGD+CM+LY294002组及OGD+LY294002组,以上2组分别加入PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002。各组培养12 h后分别通过电子显微镜和光学显微镜观察神经元形态结构。各组培养2 h后分别检测AKT、pAKT（Ser473）、激活型Casepase-3蛋白表达量,在培养48 h后检测神经元的存活率。结果：OGD培养后的神经元突起断裂、缩短、溶解,线粒体、内质网细胞器肿胀。OGD+LY294002组、OGD+CM组分别与OGD组相比,OGD+LY294002组的细胞存活率和pAKT（Ser473）蛋白表达降低（t=3.679,P=0.021;t=2.938,P=0.042）,而激活型Casepase-3蛋白表达升高（t=4.733,P=0.009）;OGD+CM组的细胞存活率和pAKT（Ser473）蛋白表达升高（t=6.630,P=0.003;t=3.288,P=0.030）,而激活型Casepase-3蛋白表达降低（t=3.454,P=0.026）。与OGD+CM组相比,OGD+CM+LY294002组细胞存活率和pAKT（Ser473） 蛋白表达降低（t=14.255,P=0.000;t=3.872,P=0.018）,而激活型Casepase-3蛋白表达升高（t=6.699,P=0.003）。结论：BMSCs对OGD损伤后的神经元具有保护作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通道的激活相关。