荧光定量PCR在诊断尖锐湿疣中的应用

尖锐湿疣是性病的一种,是常见的因感染人乳头瘤病毒(HPV)所致的疾病。HPV有多种血清型,主要有6、11、16、18、31、33、52b、58等血清型。我们使用荧光定量PCR法检测HPV DNA的载量,为尖锐湿疣的临床诊断和鉴别诊断在分子水平上提供了理想的方法。我们采集了本院性病门诊311例临床诊断为尖锐湿疣(CA)的患者疣体组织,进行HPV定量测定,来研究了解CA患者HPV病毒载量及分型与临床关系,结果报告如下。     

实时荧光定量PCR技术对淋球菌感染的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术对淋球茵感染的临床诊断价值。方法201例淋茵性尿道炎患者分别采用PCR法及涂片（Smear）法染色进行检测，并对阳性检出率进行比较。结果201例中PCR法、Smear法阳性检出率分别为29．35％、5．97％，PCR法明显高于Smear法（P〈0．05）。结论PCR法检测淋球菌优于涂片法，并具有快速、特异性高、敏感性强等特点，对临床诊断及治疗有重要的指导意义。     

实时荧光定量PCR检测白念珠菌的可靠性评价

目的:评价实时荧光定量PCR检测白念珠菌的可靠性.方法:自行设计白念珠菌种特异性引物,利用标准菌株构建重组质粒,进行实时荧光定量PCR检测,并建立标准曲线.结果:荧光定量PCR检测白念珠菌最低能检测到10个拷贝的基因,即相当于1～5 CFU/mL,同时与其他真菌、细菌及病毒等无交叉阳性反应.结论:实时荧光定量PCR法检测白念珠菌不仅具有较高的敏感性和特异性,可以对白念珠菌进行定量检测.     

荧光定量PCR技术在性病临床标本实验诊断中的应用

目的　探讨荧光定量PCR技术在性病标本实验诊断中的应用。方法　同时用荧光定量PCR法和常规PCR法检测 189例性病门诊患者和 3 0例健康体检者的淋球菌 (NG)、沙眼衣原体 (CT)和解脲支原体 (UU) ,并与培养法作比较。结果　 189例患者标本中 ,荧光定量PCR法对NG、CT和UU的阳性检出例数 (分别为 91例、67例和 88例 )均高于常规PCR法 (分别为 82例、5 5例和 77例 ) ,亦高于培养法 (分别为 80例、5 5例和 77例 )。 3种方法检测 3 0例健康体检者标本 ,结果均为阴性。与培养法比较 ,荧光定量PCR法的灵敏度、特异性、阳性预期值和阴性预期值均高于常规PCR法。结论　荧光定量PCR技术具有高灵敏性、高特异性、高精确性、效率高和污染小等特点 ,是一种有效、快速和简便的检测方法 ,具有广泛应用价值。     

荧光定量PCR检测人类乳头瘤病毒在尖锐湿疣中的应用

目的　对尖锐湿疣 (CA)患者进行乳头瘤病毒 (HPV )DNA定量测定。方法　用聚合酶链反应 (PCR )测定HPVDNA的载量及HPV分型。结果　 2 0 0例尖锐湿疣患者中 198例疣体组织HPV测定阳性 ,2例阴性。在 84例疣体组织HPV6、11阳性者中有 12例合并HPV16、18阳性。 5例疣体组织及宫颈分泌物同时阳性。定量测定结果显示 :HPV6、11患者最高 2 .0× 10 8copy/ml ,最低 3 .0× 10 4copy/ml,HPV16、18患者最高 1.75× 10 7copy/ml,最低 3 .0× 10 5copy/ml。 结论　尖锐湿疣患者应用荧光定量PCR检测HPV阳性率高 ,并可快速区分致癌型及致疣型HPV感染 ,对尖锐湿疣复发及癌变作出可能性预测     

实时荧光定量PCR检测石蜡标本中麻风菌DNA

目的：评价实时定量荧光PCR(Real-time PCR)法检测石蜡标本中麻风菌DNA的应用价值。方法：根据基因库(GenBank)发表的M. leprae的全基因组序列,以一段重复序列(repetitive ele￣ment,RLEP)为扩增靶序列,合成引物和探针,构建质粒pGEMT-101作为标准品,用Real-time PCR对石蜡标本进行麻风菌DNA检测,并评价其敏感性。结果：对52例麻风患者的石蜡包埋组织标本麻风菌进行了检测,不同型别麻风(LL：8;BL：10;BT：28;TT：6)的石蜡标本检测阳性率分别为100％(8/8)、80％(8/10)、78.57％(22/28)、50％(3/6)。结论： Real-time PCR方法可在石蜡标本中快速灵敏的检测到麻风菌DNA。     

侵袭性马尔尼菲青霉感染实时荧光定量PCR检测技术的初步建立

目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式,并做灵敏性、特异性试验。结果:荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为1.938,最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论:建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。     

荧光多重实时PCR检测单纯疱疹病毒

目的建立单纯疱疹病毒的荧光多重实时PCR检测及分型技术，为生殖器疱疹的诊断及病毒分型提供快捷、敏感、特异的方法。方法以细胞培养法为对照，用Smart Cycler System作为实验平台，以DNA探针荧光标记技术建立荧光多重实时PCR，用于检测生殖器疱疹患者临床标本中的1型和2型单纯疱疹病毒(HSV1、HSV2)DNA。结果荧光多重实时PXR检测HSV1和HSV2 DNA的敏感性和特异性均为100％，可检测出低至1～5拷贝的HSV DNA，30min左右即可完成整个检测过程．而细胞培养的敏感性和特异性分别为70．10％和100％。结论基于Smart Cycler System的荧光多重实时PCR是一种易于操作、扩增效率高、封闭式的核酸扩增技术，可用一次PCR反应就能快速、敏感、准确地对临床标本中的单纯疱疹病毒进行检测和分型。     

荧光PCR在早期梅毒患者诊断中的应用

目的探讨荧光PCR在早期梅毒诊断中的应用价值。方法应用FL-PCR方法检测40例一、二期梅毒患者皮损中梅毒螺旋体DNA,与传统的血清学TRUST和TPPA方法的检测结果进行比较。结果一期梅毒硬下疳损害中梅毒螺旋体DNA的检出率100.00%,血清TRUST阳性率为59.09%,TPPA阳性率为81.82%;二期梅毒扁平湿疣损害中梅毒螺旋体DNA的检出率100.00%,以斑疹和丘疹表现的二期梅毒疹中梅毒螺旋体DNA的检出率为60.00%,TRUST和TPPA法检测阳性率均为100.00%。结论荧光PCR法在一期梅毒诊断中有极高特异性和敏感性,可作为一期梅毒早期诊断的依据,二期梅毒诊断血清学方法优于荧光定量PCR法。     

荧光定量PCR检测女性商业性性工作者性传播感染

目的：了解女性商业性性工作者(FSWs)沙眼衣原体(Ct)、淋球菌(NG)、单纯疱疹病毒(HSV)及人乳头瘤病毒(HPV)等常见性传播感染(STI)的患病情况。方法：选取深圳市收容教育所2002年11～12月因卖淫而收容教育的130例FSWs作为研究对象，采用荧光定量PCR(FQ—PCR)检测宫颈分泌物Ct、NG、HSV及HPV感染。结果：FQ—PCR检测130例FSWs宫颈分泌物的Ct阳性检出率为32．3％、NG阳性检出率为16．2％、HSV为5．4％、HPV6／11、HPV16和HPV18分别为7．7％、23．8％和12．3％。STI总的阳性检出率为60．8％，混合感染率为25．4％。结论：女性商业性性工作者的STI患病率高，应引起足够重视。     

荧光定量聚合酶链反应在一期梅毒诊断中的临床意义探讨

为评价荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）在一期梅毒诊断中的临床应用价值，以暗视野（D－F）、血清学（RPR／TPHA）检查方法作对照，用FQ－PCR方法检测68例疑诊为一期梅毒病人的生殖器溃疡处分泌物。在68例疑诊为一期梅毒病人中，D－F阳性率27．94％（19／68），RPR阳性率48．53％（33／68），TPHA阳性率61．76％（42／68），FQ－PCR阳性率44．12％（30／68），FQ－PCR与D－F、TPHA比较有显著性差异（P＜0．05），与RPR比较无显著性差异（P＞0．1）。本研究表明FQ－PCR检测生殖器溃疡TP在一期梅毒诊断中有一定的价值。     

实时FQ-PCR在诊断解脲脲原体感染中的应用研究

目的:探讨实时荧光定量聚合酶链反应检测非淋病性尿道炎、宫颈炎等疾病中解脲支原体(Uu)感染的准确性及其在实验室诊断中的应用价值。方法:将临床116例标本分别用实时FQ-PCR检测及常规培养法同时检测,并对两种方法的检测结果进行分析比较。结果:116例临床标本,Uu培养阳性49例,阳性率为42.2%,实时FQ-PCR阳性47例,阳性率为40.5%。Uu培养阳性的49例标本中,实时FQ-PCR法阳性46例,二者诊断符合率为96.6%,经卡方检验两种方法无显著差异(χ2=0.25,P>0.05)。实时FQ-PCR相对于培养法的敏感性为93.9%,特异性为98.5%,两法检测Uu的效率基本相当。结论:实时FQ-PCR法不仅能对标本中DNA模板拷贝数准确定量,而且比常规培养法更简便、快捷,但不能用于判定治愈。     

自身淬灭探针荧光定量PCR检测淋病奈瑟菌

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101～109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。     

荧光定量PCR观察中药抗病毒胶囊对豚鼠HSV-2系统感染的影响

目的探讨中药抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的作用机理。方法用抗病毒胶囊治疗初发性生殖器疱疹豚鼠模型,然后对豚鼠的大脑、脊髓、宫颈、阴道进行HSV鄄2DNA荧光定量PCR检测。结果在各组动物中,4个不同部位均有病毒DNA的存在;不同部位的病毒拷贝量有差异,不同组之间相应部位比较也存在差异。经单因素方差分析,脊髓、阴道处病毒拷贝量最高,大脑、宫颈处病毒拷贝量相当;生理盐水组与其它各组比较相应部位差异均有显著性(P<0.01)。中药抗病毒胶囊组与阿昔洛韦组各处病毒拷贝量差异无显著性(P>0.05)。结论中药抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的作用机理可能为阻止HSV的潜伏和抑制HSV的复制增殖。     

实时荧光定量 PCR 在皮肤结核诊断中的应用

目的：比较实时荧光定量 PCR (qPCR)技术在皮肤结核(CTB)石蜡包埋组织及新鲜组织中的敏感性,以探讨在CTB石蜡包埋组织中开展结核分枝杆菌(MTB)检测的可行性。方法：应用qPCR技术检测临床确诊为CTB的6例新鲜组织样本和20例石蜡包埋组织样本的MTB阳性率。结果：新鲜组织敏感性为50%，石蜡包埋组织敏感性为35%。结论：qPCR技术可检测CTB新鲜组织和石蜡包埋组织中的MTB，前者的敏感性高于后者。     

荧光定量聚合酶链反应检测早期梅毒患者梅毒螺旋体

笔者应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCB）检测3例早期梅毒患者梅毒螺旋体及其血液中梅毒螺旋体特异基因片段,现报告如下。     

两种实时定量PCR方法检测系统性红斑狼疮患者DNA甲基化状态的比较研究

目的:应用两种不同方法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者CD4~+T细胞p16基因甲基化状态,比较两种检测方法的差异。方法:采用以Taqman探针为基础的MSP法(方法1)和以SYBR Green Ⅰ为基础的MSP法(方法2)分别检测40例SLE患者和20例正常人CD4~+T细胞中p16基因启动子区甲基化状态。结果:Taqman探针方法的结果为:SLE患者CD4~+T细胞p16基因甲基化阳性率(35.7%,10/28)高于对照组(10%,2/20),两者比较差异有统计学意义(x~2=4.11,P0.05)。SYBR Green Ⅰ方法的结果为:患者组和对照组的CD4~+T细胞的p16基因均呈高甲基化状态,应用t检验分析发现P0.05,二者无统计学差异。结论:Taqman探针法消除了引物二聚体和非特异性扩增对试验结果的影响,提高了结果的特异性和准确性,被证明是进行DNA甲基化状态检测的可靠方法。     

荧光定量PCR检测梅毒孕妇引产胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体

目的：研究荧光定量PCR(FQ-PCR)检测梅毒孕妇引产胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体，评估其在早期诊断先天梅毒中的作用。方法：采用荧光定量PCR技术检测13例梅毒孕妇引产胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体DNA。结果：13例胎盘和脐带标本中6例(46．15％)荧光定量PCR检测阳性，6例阳性者中，4例未接受治疗，2例接受了治疗。结论：FQ-PCR可检出胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体，可用于先天梅毒的早期诊断，干预治疗并不能完全阻断妊娠期间梅毒螺旋体的垂直传播。     

应用荧光定量(FQ)PCR法对泌尿生殖道感染衣原体、支原体的检测与临床分析

沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)是非淋菌性生尿道(宫颈)炎(NGU)的主要病原体,由这两种病原体感染并发的前列腺炎及不育不孕症也日益增多,为了解CT和UU感染状况,1999年6月～2000年6月,我们对性病门诊疑诊为NGU的195例患者,采用荧光定量(FQ)PCR法检测,并与CT抗体和UU培养法对照;现报告如下.     

荧光PCR和蛋白免疫印迹技术在诊断新生儿先天梅毒中的意义

目的:探讨荧光PCR和蛋白免疫印迹技术在诊断新生儿先天梅毒中的运用。方法:对我院收治的50例先天梅毒患儿以及40例正常新生儿进行荧光PCR和蛋白免疫印迹技术在诊断新生儿先天梅毒的敏感度以及特异性研究。结果:荧光PCR其敏感度为98%,特异性为100%,明显高于蛋白免疫印迹的84%以及85%。两种方法比较具有统计学差异性(P<0.05)。结论:荧光PCR在诊断新生儿先天梅毒中较蛋白免疫印迹技术具有更好的敏感性以及特异性,值得在临床中推广。