免疫缺陷性皮肤病

20100432Alu-LTR PCR检测整合型HIV-1实验方法的优化/李娟(首都医大附属北京佑安医院性病艾滋病诊疗中心),焦艳梅,画伟…∥首都医科大学学报.-2009,30(5).-631～634收集20例HIV-1感染患者及10例健康对照者的抗凝血标本,纯化CD4+T细胞并提取DNA,根据整合型HIV-1DNA的特点设计引物,首轮PCR5′端引物来自于人类保守的ALu序列,3′端引物来自于HIV-1LTR的序列。第二轮引物针对HIV-1LTRU3区的序列。在首轮PCR基础上,PCR产物稀释后进行第二轮PCR。结果经过优化的ALu-LTR PCR,20例HIV病人全部检测到整合的HIV-1     

HIV-1感染者病毒学指标与血浆中CXC趋化因子水平的相关性

目的 探讨未治疗的HIV-1感染者不同HIV-1 RNA或HIV-1 DNA水平组间,患者血浆中趋化因子CXCL8、CXCL10、CXCL11和CXCL13表达水平的差异及其与HIV-1 RNA或HIV-1 DNA的相关性.方法 未治疗HIV-1感染者66例.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆中HIV-1 RNA及外...     

微量明胶颗粒凝集试验检测干血斑HIV-1抗体方法的建立与评价

目的建立微量明胶颗粒凝集试验检测滤纸片干血斑HIV-1抗体的方法,评价其敏感性和特异性。方法采集某吸毒哨点106份全血样本,制成滤纸片干血斑样本和血清样本;摸索微量明胶颗粒凝集试验中抗原明胶颗粒最佳稀释倍比;比较微量明胶颗粒凝集试验检测滤纸片干血斑和ELISA检测血清HIV-1抗体的结果。结果微量明胶颗粒凝集试验检测滤纸片干血斑HIV-1抗体的结果与ELISA检测血清HIV-1抗体的结果一致。结论微量明胶颗粒凝集试验检测滤纸片干血斑HIV-1抗体的方法,可信度较高、操作简便成本低,为大规模开展HIV-1流行病学调查提供了另一种良好的实验室方法。     

检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立

定量检测艾滋病患者体内荷毒水平对于评价治疗效果和研究发病机理至关重要 ,我们建立了一种检测 HIV- 1DNA水平的竞争性 PCR方法 ( QC- PCR)。选择 HIV- 1的高度保守区域 gag基因作为靶序列 ,以重组 PCR方法和基因克隆技术构建两种重组质粒 ,分别插入有 gag和 Δ gag片段 ,其中后者比前者内部缺失 50 bp,用作定量检测中的竞争模板。将梯度稀释的竞争模板加入到反应体系中与待测的野生型模板共同扩增 ,PCR产物经 8%聚丙烯凝胶电泳后进行密度扫描测定 ,结果表明该方法稳定可靠 ;8份艾滋病患者的 PBMC DNA标本经该方法的检测也得到较好的结果。我们认为 QC- PCR是一种较为理想的 HIV- 1DNA水平的定量方法 ,非常适合于临床标本的检测和治疗研究的应用。     

实时荧光定量PCR检测白念珠菌的可靠性评价

目的:评价实时荧光定量PCR检测白念珠菌的可靠性.方法:自行设计白念珠菌种特异性引物,利用标准菌株构建重组质粒,进行实时荧光定量PCR检测,并建立标准曲线.结果:荧光定量PCR检测白念珠菌最低能检测到10个拷贝的基因,即相当于1～5 CFU/mL,同时与其他真菌、细菌及病毒等无交叉阳性反应.结论:实时荧光定量PCR法检测白念珠菌不仅具有较高的敏感性和特异性,可以对白念珠菌进行定量检测.     

荧光多重实时PCR检测单纯疱疹病毒

目的建立单纯疱疹病毒的荧光多重实时PCR检测及分型技术，为生殖器疱疹的诊断及病毒分型提供快捷、敏感、特异的方法。方法以细胞培养法为对照，用Smart Cycler System作为实验平台，以DNA探针荧光标记技术建立荧光多重实时PCR，用于检测生殖器疱疹患者临床标本中的1型和2型单纯疱疹病毒(HSV1、HSV2)DNA。结果荧光多重实时PXR检测HSV1和HSV2 DNA的敏感性和特异性均为100％，可检测出低至1～5拷贝的HSV DNA，30min左右即可完成整个检测过程．而细胞培养的敏感性和特异性分别为70．10％和100％。结论基于Smart Cycler System的荧光多重实时PCR是一种易于操作、扩增效率高、封闭式的核酸扩增技术，可用一次PCR反应就能快速、敏感、准确地对临床标本中的单纯疱疹病毒进行检测和分型。     

彩色乳胶免疫层析法检测单纯疱疹病毒1,2型抗原临床应用分析

目的探讨彩色乳胶免疫层析法检测单纯疱疹病毒(HSV)1和2型抗原的临床应用价值。方法采用彩色乳胶颗粒免疫层析法检测各种水疱、溃疡和其他皮损中的HSV-1和2型抗原,同时用实时荧光定量PCR法进行对照。结果免疫层析法可检出≥1×106DNA拷贝/mL的HSV-1型混悬液和≥5×105DNA拷贝/mL的HSV-2型混悬液。132例标本中,免疫层析法检出HSV阳性43例,PCR检出HSV阳性50例。以PCR法为金标准,免疫层析法的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为84.00%,98.78%,97.67%和91.01%。结论免疫层析法检测HSV敏感性和特异性高,具有方便、快速和经济的特点,适于有症状患者的及时检测,对疱疹感染早期诊断和及时治疗有重要作用。     

三种方法检测性病患者泌尿生殖道沙眼衣原体感染的对比观察

目的：了解EUSA、酶联荧光测定技术(VIDAS)和荧光定量PCR三种方法检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染结果。方法：分别用EUSA和VIDAS检测300例性病患者宫颈或尿道拭子沙眼衣原体抗原，同时以荧光定量PCR检测结果为对照。结果:ELISA与荧光定量PCR检测结果和VIDAS和荧光定量PCR检测结果比较，符合率均为98．33％。结论：荧光定量PCR、ELISA和VIDAS三种方法均可用于检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染，其中ELISA不需要特殊仪器设备，更适合临床推广应用。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测解脲支原体感染

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术，准确定量检测待检标本中解脲支原体(UU)的感染状况。方法采用实时FQ-PCR技术，检测标本765份，并用常规PCR技术，对比检测了85例。结果FQ-PCR检测的765份标本，UU-DNA阳性279份，阳性率36.5％，其DNA平均拷贝数为2.4×104。38例阳性患者治疗2周内复查，转阴率为44.7％，治疗3周后复查，转阴率76.0％(P＜0.005)。常规PCR结果重复检测时，25例阳性者中2例变为阴性，而60例阴性者中4例变为阳性。FQ-PCR结果重复时完全吻合。结论实时FQ-PCR检测UU是一个较好的方法。     

实时荧光定量PCR技术对淋球菌感染的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术对淋球茵感染的临床诊断价值。方法201例淋茵性尿道炎患者分别采用PCR法及涂片（Smear）法染色进行检测，并对阳性检出率进行比较。结果201例中PCR法、Smear法阳性检出率分别为29．35％、5．97％，PCR法明显高于Smear法（P〈0．05）。结论PCR法检测淋球菌优于涂片法，并具有快速、特异性高、敏感性强等特点，对临床诊断及治疗有重要的指导意义。     

免疫缺陷性皮肤病

981387 检测艾滋病患者外周血HIV-1 DNA水平的竞争性PCR方法的建立/范雪莉（四军大西京医院）…//中国皮肤性病学杂志.-1997,11（6）.-325 建立竞争性定量PCR（QC-PCR）方法检测外周血单个核细胞（PBMC）中的前病毒含量。结果表明,这种QC-PCR反应敏感性及重复性均极好,同样适合于高浓度的靶序列的检测,8份艾滋病患者的PBMC DNA标本经该方法检测也得到较好结果。作者认为,QC-PCR是一种较为理想的HIV-1 DNA水平的定量方     

荧光定量PCR检测梅毒孕妇引产胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体

目的：研究荧光定量PCR(FQ-PCR)检测梅毒孕妇引产胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体，评估其在早期诊断先天梅毒中的作用。方法：采用荧光定量PCR技术检测13例梅毒孕妇引产胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体DNA。结果：13例胎盘和脐带标本中6例(46．15％)荧光定量PCR检测阳性，6例阳性者中，4例未接受治疗，2例接受了治疗。结论：FQ-PCR可检出胎盘脐带组织中的梅毒螺旋体，可用于先天梅毒的早期诊断，干预治疗并不能完全阻断妊娠期间梅毒螺旋体的垂直传播。     

4例HIV-1耐药感染者的发现及其耐药毒株的分离与检测

目的研究从笔者发现的4例HIV-1耐药感染者分离获得的HIV-1毒株是否为耐药毒株。方法用RT-PCR法连续检测13例HIV-1感染者在接受抗病毒治疗过程中血浆病毒载量的变化情况;用HIV-1感染者淋巴细胞与健康人淋巴细胞共培养的方法从13例HIV-1感染者分离获得HIV-1毒株;从4例耐药感染者分离获得4株HIV-1毒株,在其培养液中加入逆转录酶抑制剂,检测毒株逆转录酶活性。结果13例接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中的9例从治疗开始第1个月到第15个月中,病毒载量明显下降,感染者对于治疗药物敏感;其余4例从治疗开始第1个月到第10个月,病毒载量明显下降,从第11个月到第13个月病毒载量维持在此水平,但从第14个月到第19个月,病毒载量明显上升,持续在此水平并有上升趋势,确认为耐药感染者。病毒分离培养发现13例血样从第2周开始均出现HIV特有的细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果为阳性,成功分离获得HIV-1毒株13株。4例耐药HIV-1感染者分离获得的4株HIV-1毒株体外培养中加入逆转录酶抑制剂,发现HIV-1感染特有细胞病变持续存在,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果也始终为阳性,说明此4株HIV-1毒株为耐药毒株。结论从耐药HIV感染者成功分离获得耐药HIV毒株,流行病学检测发现4例HIV-1感染者来自同一地区,有耐药毒株传播的可能。     

荧光PCR在早期梅毒患者诊断中的应用

目的探讨荧光PCR在早期梅毒诊断中的应用价值。方法应用FL-PCR方法检测40例一、二期梅毒患者皮损中梅毒螺旋体DNA,与传统的血清学TRUST和TPPA方法的检测结果进行比较。结果一期梅毒硬下疳损害中梅毒螺旋体DNA的检出率100.00%,血清TRUST阳性率为59.09%,TPPA阳性率为81.82%;二期梅毒扁平湿疣损害中梅毒螺旋体DNA的检出率100.00%,以斑疹和丘疹表现的二期梅毒疹中梅毒螺旋体DNA的检出率为60.00%,TRUST和TPPA法检测阳性率均为100.00%。结论荧光PCR法在一期梅毒诊断中有极高特异性和敏感性,可作为一期梅毒早期诊断的依据,二期梅毒诊断血清学方法优于荧光定量PCR法。     

拭子和尿液取材荧光定量PCR检测沙眼衣原体的比较研究

近年来对CT感染检测方法的研究比较活跃.荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术是近几年才研究成功的,解决了常规PCR技术检测CT定性不定量的问题.国内一般用其检测尿道/宫颈拭子(urinary tract swabs/cervical swabs,US/VS)标本,敏感性和特异性均可达90%以上.我们利用荧光定量PCR技术检测了179例就诊于宣武医院性病门诊的患者,同时检测尿道/宫颈拭子和尿液标本,阳性者以尿液LCR进行确证,对两种取材方法的检测结果进行比较分析.     

侵袭性马尔尼菲青霉感染实时荧光定量PCR检测技术的初步建立

目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式,并做灵敏性、特异性试验。结果:荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为1.938,最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论:建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。     

柬埔寨幼儿中HIV-1的传播

1995年11月1日,作者从在金边儿童医院住院并怀疑为患结核病的5岁以下患儿中收集血清,采用ELISA法检测了HIV-1抗体。截至1997年1月31日,共对9026例幼儿(占该年龄组内全部住院患儿的83％)进行了HIV-1血清学检测。结果290例(3.2％)检出阳性;236例HIV-1血清阳性的18个月以下的幼儿中,205例检测了p24抗原,结果51例(25％)阳性。173例HIV-1血清阳性幼儿的母亲也采样进行了HIV-1抗     

口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与血清ELISA试剂检测不同人群HIV-1抗体的评价

目的探讨口腔黏膜渗出液(OMT)快速诊断试剂与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测不同人群HIV-1抗体的一致性.方法对已经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阳性并经蛋白印迹(WB)试验确诊的HIV感染者200例(HIV阳性组),和经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阴性的健康人群600例(HIV阴性组)采集OMT标本,使用OMT快速诊断试剂进行HIV-1抗体检测.同时评价口腔黏膜渗出液快速诊断试剂在实际应用中的影响因素.结果 HIV阳性组200例中198例OMT标本检测为阳性,其中192例(96%)检测线清楚,易做阳性结果判断.4例(2%)"模糊",2例(1%)"很模糊",需经专业人员判断;2例(1%)检测线"看不见",为阴性.HIV阴性组600例OMT标本检测HIV抗体全为阴性.结论口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与生物梅里埃血清ELISA诊断试剂检测HIV-1抗体相比,在HIV阳性标本中检测一致性为99.0%,在HIV阴性标本中检测一致性为100%,总体一致性为99.75%.     

免疫缺陷性皮肤病

20031940 原位PCR方法检测国人艾滋病肾组织HIV DNA/刘蕾(北京大学基础医学院病理学系)…//北京大学学报(医学版).-2003,35(2).-174～175 为探讨HIV和艾滋病肾病的关系,应用原位PCR方法检测9例国人艾滋病尸体解剖肾组织标本。结果:9例标本HIV均阳性,棕黄色阳性物位于肾小管上皮细胞核和胞浆。提示:肾脏可被HIV直接感染。图1参6(赵丽敏)     

实时FQ-PCR在诊断解脲脲原体感染中的应用研究

目的:探讨实时荧光定量聚合酶链反应检测非淋病性尿道炎、宫颈炎等疾病中解脲支原体(Uu)感染的准确性及其在实验室诊断中的应用价值。方法:将临床116例标本分别用实时FQ-PCR检测及常规培养法同时检测,并对两种方法的检测结果进行分析比较。结果:116例临床标本,Uu培养阳性49例,阳性率为42.2%,实时FQ-PCR阳性47例,阳性率为40.5%。Uu培养阳性的49例标本中,实时FQ-PCR法阳性46例,二者诊断符合率为96.6%,经卡方检验两种方法无显著差异(χ2=0.25,P>0.05)。实时FQ-PCR相对于培养法的敏感性为93.9%,特异性为98.5%,两法检测Uu的效率基本相当。结论:实时FQ-PCR法不仅能对标本中DNA模板拷贝数准确定量,而且比常规培养法更简便、快捷,但不能用于判定治愈。