红花注射液对肺癌A549细胞迁移的影响及分子机制研究

目的:研究红花注射液对A549细胞迁移的影响,并初步探讨其相关的分子机制。方法:体外培养肺癌细胞A549,用不同浓度红花注射液处理12 h,采用MTT法检测红花注射液的增殖抑制效率;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的变化;倒置显微镜下观察红花注射液分别于0、24、48 h下的A549细胞的迁移情况;采用Western blot检测NF-κB、Snail、p-GSK-3β蛋白表达量;采用双荧光素酶报告基因系统检测红花注射液在转录水平对Snail的调控。结果:A549细胞经红花注射液处理12 h后,与对照组相比,细胞的增殖率以剂量依赖性的方式增加(P<0.05);不同浓度红花注射液作用后,细胞凋亡率增加;Western blot显示NF-κB、Snail、p-GSK-3β蛋白表达量随着红花浓度的增加而降低;双荧光素酶报告基因显示Snail启动子活性随浓度的增加而下降,转染NF-κB siRNA后Snail启动子活性下降更明显(P<0.05)。结论:红花注射液可有效抑制肺癌A549细胞的增殖迁移并诱导其凋亡,可能与GSK-3β-NF-κB-Snail通路有关。     

全反式维A酸对肺腺癌H1299细胞放射敏感性研究

目的探讨全反式维A酸（ATRA）对肺腺癌细胞株H1299放射敏感性影响及其分子机制。方法MTT法检测ATRA对H1299细胞存活率的影响;平板克隆形成实验检测H1299细胞的放射敏感性;流式细胞术检测细胞周期;Western blotting检测survivin与NF-κB的蛋白表达情况。结果不同浓度ATRA对H1299细胞均有抑制作用,浓度为10 μmol/L时最佳（P < 0.05）。相对单独ATRA处理,10 μmol/L ATRA联合不同剂量的射线照射后,细胞生长抑制率明显增加（P < 0.01）。ATRA作用和射线照射后的细胞凋亡增多（P < 0.01）,ATRA联合射线照射作用后的细胞总凋亡率明显高于单纯射线照射（P < 0.01）。与对照组、放射组、ATRA组相比,ATRA+放射组G0/G1期比例明显增加（P < 0.01）。与放射组相比,ATRA+放射组的细胞存活分数值降低,ATRA可以增加肺腺癌H1299细胞放射敏感性,增敏比为1.406。Western blotting结果显示,ATRA+放射组细胞survivin、NF-κB蛋白表达明显降低（P < 0.01）。结论ATRA对肺腺癌H1299细胞具有放射增敏作用,其机制可能与ATRA直接抑制H1299细胞增殖、促进H1299细胞凋亡,下调survivin及NF-κB蛋白表达有关。     

去甲泽拉木醛通过抑制AKT/CREB信号通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨去甲泽拉木醛抑制非小细胞肺癌细胞A549和H1299增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡的作用机制。方法 镜下初步观察不同浓度的去甲泽拉木醛（0、1、3、10、30μmol/L）对A549和H1299细胞形态及细胞数量的影响。通过克隆形成、CCK-8、细胞划痕、Transwell和流式细胞实验检测去甲泽拉木醛对A549和H1299细胞增殖、细胞活力、细胞迁移和侵袭、细胞凋亡的影响以及SC79处理后对细胞凋亡的影响。通过Western blotting检测不同浓度的去甲泽拉木醛对A549和H1299细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase 3表达和AKT/CREB磷酸化水平变化的影响,SC79处理后对凋亡蛋白表达的影响。结果 镜下观察药物作用后,细胞形态由饱满变为细长,细胞间隙增宽。CCK-8实验和克隆形成实验结果显示去甲泽拉木醛能抑制A549和H1299细胞活力并且抑制细胞的增殖（P<0.05）。流式细胞术结果表明,去甲泽拉木醛诱导A549和H1299细胞的凋亡,而SC79处理后逆转了促凋亡作用（P&...     

β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对肺腺癌A549和H460细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用不同浓度的β-榄香烯干预A549和H460细胞后,台盼蓝拒染试验和MTT试验检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测A549细胞凋亡率,Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:不同浓度β-榄香烯能抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖性,β-榄香烯干预后的A549细胞凋亡率明显升高,其相关抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达下调。结论:β-榄香烯可抑制肺腺癌A549和H460细胞的增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。     

槐耳颗粒抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的:研究槐耳颗粒对肺腺癌细胞系A549和H1299增殖和迁移的作用及机制。方法:通过MTT和细胞划痕实验探究不同浓度槐耳对A549、H1299细胞生长和迁移的抑制作用,并计算抑制率;运用流式细胞术检测细胞凋亡状态;运用Western blot检测不同浓度槐耳对两种细胞系中EMT相关蛋白表达水平的影响。结果:MTT表明随着槐耳浓度升高,A549和H1299的增殖抑制率均上升(P<0.05);流式细胞术结果显示槐耳能诱导两种细胞发生凋亡;细胞划痕实验结果表明,肿瘤细胞的迁移随槐耳浓度的升高而抑制(P<0.05);Western blot表明,上皮细胞标记蛋白E-cadherin表达增高,间充质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin及Snail表达减少。结论:槐耳能有效抑制肺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,并通过Snail通路抑制EMT的发生,从而阻碍肿瘤细胞的迁移。     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。     

斑蝥酸钠维生素B_6注射液对人肺癌细胞系A549增殖抑制及核因子κB和Caspase3/7的影响

目的探讨斑蝥酸钠(SC)维生素B6注射液对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及核因子κB(NF-κB)、凋亡分子Caspase3/7的影响。方法用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0 mg/L)的SC维生素B6注射液处理A549细胞,观察光镜及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态;用噻唑蓝(MTT)比色法检测SC维生素B6注射液对细胞增殖的抑制作用;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;蛋白印迹检测NF-κB P65、I-κB蛋白表达。结果 SC维生素B6注射液对A549细胞的体外增殖有明显抑制作用,细胞形态出现明显凋亡改变,5.0 mg/L组作用A549细胞72 h后,细胞增殖抑制率最大达到67.37%。细胞线粒体膜电位检测结果显示,随着SC维生素B6注射液浓度的增加及时间的延长,线粒体膜电位逐渐减弱,同时Caspase3/7蛋白活性增强;SC维生素B6注射液作用A549细胞后NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而I-κB蛋白表达水平则无显著变化。结论 SC维生素B6注射液可能通过抑制NF-κB P65表达,激活Cas...     

罗格列酮与顺铂联合应用诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用机制

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人肺癌细胞株A549体外生长的影响,探讨其可能机制.方法 体外培养A549细胞;通过Western blot检测药物处理前后细胞内PPARγ,NF-κB,Bax,Bcl-2蛋白表达的变化.结果 RSG能够显著上调A549细胞中PPARγ蛋白的表达,增强CDDP诱导A549细胞的凋亡作用.RSG(1.25 μmol/L)分别与不同浓度的CDDP合用后,A549细胞的PPARγ蛋白核内表达上调,抑制NF-κB表达,下调Bcl-2并且上调Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比值,(P＜0.01);加入PPARγ特异拮抗剂GW9662(2.0 μmol/L)后,能够阻断PPARγ对NF-κB的抑制效应以及上调Bax和下调Bcl-2的作用(P＜0.05).结论 罗格列酮与顺铂合用能诱导肺癌A549细胞调亡,呈明显的时间及剂量依赖性.RSG可通过激活PPARγ受体使其表达上调,进而抑制NF-κB、Bcl-2蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值,从而降低A549细胞的凋亡抗性,增强CDDP对A549细胞的诱导凋亡作用.     

NF-κB抑制介导的黄芪多糖抗人肺癌细胞效应

目的:探讨黄芪多糖(APS)的抗肿瘤效应,并研究核转录因子(NF-κB)在APS抗肿瘤效应中的作用。方法:用不同浓度的APS干预A549细胞,用MTS法检测APS对A549细胞的增殖抑制效应(量效和时效关系)。用Real-time PCR法检测APS对A549细胞p65mRNA的抑制效应,用Western blot法检测APS对A549细胞P65蛋白的抑制效应。用NF-κB荧光素酶报告基因检测APS对A549细胞NF-κB活性的的抑制效应。结果:20g/L和40g/L的APS对A549细胞具有明显的增殖抑制效应,处理48h后抑制效应最强。20g/L的APS处理A549细胞后24h对p65mRNA具有显著抑制效应,同浓度APS处理后48h对P65蛋白有显著抑制效应。荧光素酶报告基因检测显示:20g/L的APS处理A549细胞后6h可显著抑制NF-κB的转录活性。结论:APS可显著抑制人肺癌细胞A549的增殖,通过对NF-κB的抑制介导其抗肿瘤活性。     

蟾毒灵对非小细胞肺癌顺铂化疗的增敏作用及机制

目的：研究蟾毒灵对人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞、H1975细胞的顺铂化疗增敏作用并探讨其可能的参与机制。方法以不同浓度蟾毒灵、顺铂及二者联合分别处理A549细胞、H1975细胞,采用CCK-8法、流式细胞术等方法检测药物对细胞增殖和凋亡的影响;Western blotting 技术检测药物作用后核因子-κB （NF-κB ）、c-myc等的表达。结果蟾毒灵可显著抑制A549细胞、H1975细胞增殖并诱导细胞凋亡,且具有一定的时间、浓度依赖性;低剂量蟾毒灵可明显增加A549细胞、H1975细胞对顺铂的化疗敏感性,且此过程伴随NF-κB、c-myc的表达下调。结论蟾毒灵显著增加A549细胞、H1975细胞对顺铂的敏感性;抑制NF-κB 的活化及其下游分子c-myc的表达是其可能的参与机制之一。     

Urolithin A在肺癌细胞系A549中的抗增殖效应

目的:研究尿石素A(Urolithin A)对肺癌细胞系A549增殖的影响和作用机制。方法:流式细胞术检测Urolithin A对A549细胞凋亡的影响;SA-β-gal检测Urolithin A对A549细胞衰老的状态;Western blot检测Cleaved PARP、p21、PUMA、p53蛋白的表达量。MTT实验探究Urolithin A对A549细胞的生长抑制作用。结果:不同浓度Urolithin A作用A549细胞,细胞凋亡率升高(P<0.05);SA-β-gal实验显示,Urolithin A促进A549细胞衰老(P<0.05);Western blot显示,Cleaved PARP、p21、PUMA、p53的蛋白表达量随Urolithin A浓度的升高而上调;不同浓度Urolithin A处理A549细胞,细胞活力以浓度依赖性下降,增殖抑制率升高(P<0.05),敲低p53能减弱Urolithin A对A549细胞引起的增殖抑制(P<0.05)。结论:Urolithin A抑制A549细胞的增殖,可能是由p53介导的。     

GSK-3β在结直肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在结直肠癌细胞凋亡中的作用机制.方法以化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导结直肠癌细胞colo320凋亡,应用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用Western blot检测凋亡细胞总GSK-3β,分离细胞核与细胞浆蛋白,分析细胞浆/核GSK-3β和转录因子NF-κB水平.结果 Colo320细胞凋亡比例随5-Fu作用剂量增加和时间延长显著提高.对照组细胞GSK-3β和NF-κB主要位于胞浆中,凋亡组细胞总GSK-3β水平没有明显改变,但发生了细胞浆到细胞核的迁移.结论 GSK-3β以细胞浆/核迁移方式参与并促进了5-Fu诱导的结直肠癌细胞凋亡,其机制可能是通过抑制转录因子NF-κB向核中移位,从而阻断NF-κB的促生存作用.     

PDTC对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及星形细胞上调基因-1表达的影响

目的:观察NF-κB特异性抑制剂PDTC对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及星形细胞上调基因-1(AEG-1)表达的影响。方法:用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)的PDTC分别处理A549细胞,对照组不给PDTC。应用MTT法检测处理24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞术检测处理24h后细胞周期的变化,Ho-echst33342荧光染色检测处理24h后细胞的凋亡情况,RT-PCR和Westernblot检测处理24h后细胞AEG-1mRNA和蛋白的表达。结果:经PDTC处理的A549细胞增殖明显受抑,呈时间和浓度依赖性(F时间=531.981,F浓度=388.475,P<0.05);与对照组相比,PDTC处理24h后A549细胞G0/G1期细胞比例上升(P<0.05),细胞形态出现明显凋亡改变;随着PDTC浓度的增加,癌细胞内AEG-1mRNA和蛋白的表达水平降低(F=275.162、59.473,P<0.05)。结论:PDTC可抑制A549细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与PDTC抑制NF-κB、AEG-1的表达有关。     

蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法:人黑色素瘤细胞株A375细胞体外培养,将对数生长期的A375细胞以不同浓度的蛇床子素处理,MTT法检测A375细胞增殖;流式细胞术检测A375细胞凋亡;RTPCR法检测A375细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达水平;Western blotting检测A375细胞IκB-α、p-NF-κB、NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:蛇床子素可降低A375细胞增殖率以及Bcl-2 mRNA、p-NF-κB和Bcl-2蛋白表达水平,呈浓度依赖性;同时增加A375细胞凋亡率以及Bax mRNA、IκB-α、Bax蛋白表达水平,呈浓度依赖性,但对NF-κB表达无明显影响。结论:蛇床子素能诱导A375细胞增殖抑制和凋亡,呈浓度依赖性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

槲皮素对IL-1β刺激肺上皮细胞表达ICAM-1的影响

目的:研究槲皮素对重组人白介素-1β(IL-1β)刺激肺上皮细胞株A549细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响,并探讨可能的分子机制。方法:IL-1β处理A549细胞,用不同浓度槲皮素干预;RT-PCR法检测ICAM-1 mRNA的表达;Western blotting检测核转录因子NF-κB及其抑制剂IκB的表达。结果:IL-1β能刺激A549细胞表达ICAM-1,这种现象可以被槲皮素抑制,并有一定浓度依赖关系,IL-1β可增加NF-κB的活化,抑制IκB的表达,而槲皮素作用后,NF-κB活化抑制,IκB表达增加。结论:槲皮素通过调节NF-κB的活化而抑制IL-1β诱导A549细胞表达ICAM-1,提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用。     

miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

大叶茜草素抑制肺癌A549、H1299细胞增殖和迁移的机制研究

目的:观察大叶茜草素对肺癌A549、H1299细胞增殖和迁移的作用,探讨其抑制肿瘤细胞可能的分子机制。方法:在体外培养肺癌A549、H1299细胞,加入大叶茜草素共同培养,采用MTT实验和细胞划痕实验探究细胞增殖和迁移的变化情况;利用蛋白质印迹法检测细胞上皮-间充质转化(EMT)蛋白(Fibronectin、E-cadherin、Vimentin、Snail)和Wnt/β-catenin信号通路蛋白(GSK-3β、pGSK-3β、β-catenin)的表达情况。结果:大叶茜草素对A549、H1299细胞的增殖和迁移具有显著抑制作用,并且其抑制增殖作用与药物浓度呈依赖性(P<0.05)。细胞划痕实验48 h后,加药组A549、H1299细胞的迁移均受到抑制(P<0.05)。蛋白质印迹实验结果显示,大叶茜草素作用后,Fibronectin、Vimentin、Snail、pGSK-3β(失活型)、β-catenin蛋白表达受到抑制,而E-cadherin蛋白表达上升(P<0.05)。结论:大叶茜草素具有抑制肺癌A549、H1299细胞的增殖与迁移作用,其机制可能与抑制Wnt...     

细梗香草总皂苷诱导肺癌细胞H460凋亡及其机制的研究

目的：观察细梗香草总皂苷（LC）对非小细胞肺癌H460细胞增殖和凋亡的影响。方法在H460肺癌细胞培养时加入不同浓度的LC,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖活性,AnnexinⅤ/PI（FCM）法观察LC对肺癌细胞凋亡的诱导作用和周期分布的影响。DCFH- DA荧光探针FCM检测细胞内活性氧生成,Western blot法检测NF-κB、I-κB、Bax、Bcl-2、Capase-3的蛋白表达。结果 LC可抑制H460细胞生长,具有剂量、时间依赖性;LC作用H460细胞后克隆形成率明显下降。LC可引起H460细胞凋亡,并可将H460生长阻滞在S期。LC以浓度依赖方式增高H460细胞内活性氧水平,还可使H460细胞I-κB、Bax和Capase-3表达增加,而使NF-κB和Bcl-2表达降低。结论 LC可以抑制H460细胞增殖,可能是通过增加细胞内活性氧表达,激活了肺癌细胞线粒体凋亡途径。     

芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和凋亡诱导的作用

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法体外常规培养NCI-H1299细胞,芹菜素作用终浓度分别为10、20、40、80μmol/L。MTT法测定芹菜素对细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测芹菜素对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果芹菜素能够抑制NCI-H1299细胞的增殖,并随药物浓度的增加、作用时间的延长,作用更明显;Hoechst 33258染色结果显示,芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和凋亡小体产生等典型的细胞凋亡特征;不同浓度的芹菜素作用24 h,细胞凋亡率逐渐增加,呈一定浓度依赖性;Western blot结果显示,芹菜素处理组细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H1299细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与调控Bax和Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax比值下降有关。