宫颈癌组织中P53基因5～6外显子的检测及分析

应用ＧＰ－ＰＣＲ技术对４０例宫颈癌活检组织进行ＨＰＶ感染的检测,发现有３５例为阳性（阳性率为８７％）,同时利用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单纯ＤＮＡ构象多态性）分析技术,对３５例ＨＰＶ阳性的宫颈癌组织进行Ｐ５３基因５￣６外显子的检测,其突变率仅为２．８５％（１／３５）,而在５例ＨＰＶ阴性的宫颈癌组织中未检测到Ｐ５３基因突变,结果表明：Ｐ５３基因的突变在宫颈癌的发生过程中不起主要作用,并且与ＨＰＶ的感染无相关     

HPV感染在高发区与低发区宫颈癌中的检测

收集宫颈癌高发区湖北省五峰县宫颈癌活检组织２５例、宫颈炎２２例，低发区的宫颈癌活检组织４０例、宫颈炎１５例由湖北医科大学附二医院妇瘤科提供。应用ＧＰ－ＰＣＲ（ｇｅｎｅｒａｌｐｒｉｍｅｒｓ－ＰＣＲ）技术检测多型ＨＰＶ感染，发现宫颈癌高发区阳性率为８８．０％（２２／２５），低发区为８７．５％（３５／４０），宫颈炎高发区为３６．４％（８／２２），低发区为６．７％（１／１５）。同时同一份样品进行ＨＰＶ１６型Ｅ７基因的检测，在宫颈癌高发区中检出率为６０．０％（１５／２５），低发区为５２．５％（２１／４０），宫颈炎中为２２．７％（５／２２），而在低发区宫颈炎中没有检测到ＨＰＶ１６Ｅ７基因。结果表明：ＨＰＶ感染在高发区宫颈炎组织中明显高于低发区，两者差异具有显著性。     

人乳头瘤病毒感染、p53 基因突变与子宫颈癌的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、单链构像多态性（ＳＳＣＰ）分析银染色法检测了６１例子宫颈癌、５例子宫颈间变、１４例慢性子宫颈炎组织中１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ１６、１８）感染及ｐ５３基因５、６、７、８外显子的变异。结果显示，子宫颈癌、子宫颈间变及慢性子宫颈炎组织中ＨＰＶ１６、１８阳性率分别为８２％、４０％及１４．３％（Ｐ＜０．０５），子宫颈癌组织中ｐ５３基因突变阳性率为２０％，而子宫颈间变及慢性子宫颈炎组织中未见有突变，其中１２例突变阳性的癌组织中９例呈ＨＰＶ阴性，３例呈ＨＰＶ阳性。提示ＨＰＶ１６、１８感染在子宫颈癌发生中起重要的病因学作用；ｐ５３基因变异可能是部分子宫颈癌变的一个重要原因；高危ＨＰＶ除了通过Ｅ６／ｐ５３蛋白复合物形成使ｐ５３蛋白失活的致癌途径外，可能还存在通过ｐ５３基因突变的致癌途径。     

人乳头瘤病毒感染,p53基因突变与子宫颈癌的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、单链构像多态性（ＳＳＣＰ）分析银染色法检测了６１例子宫颈癌、５例子宫颈间变、１４例慢性子宫颈炎组织中１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ１６、１８）感染及ｐ５３基因５、６、７、８外显子的变异。结果显示，子宫颈癌、子宫颈间变及慢性子宫颈炎组织中ＨＰＶ１６、１８阳性率分别为８２％、４０％及１４．３％（Ｐ〈０．０５），子宫颈癌组织中ｐ５３基因突变阳性率为２０％，而子宫颈间变及慢性     

喉部肿瘤HPV感染与p53基因变异的研究

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ交杂技术检测了５６例喉癌和３５例喉乳头状瘤组织中ＨＰＶ１６／１８的ＤＮＡ及ｐ５３基因点突变。结果显示２４例喉部肿瘤组织ｐ５３基因点突变，３５例喉癌及２４例喉癌及２４例喉乳太瘤组织中检出了ＨＰＶ、ＤＮＡ。在１３例喉癌组织和３例喉乳头状瘤组织 同时检出Ｐ５３点突变和ＨＰＶ０ＤＮＡ。提示ＨＰＶ感染和Ｐ５３变异与喉部肿瘤发生有关，其内在联系有待深入研究。     

宫颈癌及癌旁组织中人乳头瘤病毒DNA检测

目的：探讨人乳头瘤病毒（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ） 与宫颈癌及癌旁组织的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术（ＩＳＰＣＲ）对４４ 例宫颈癌、１８ 例癌旁组织及３０ 例慢性宫颈炎和１５ 例正常宫颈组织中的ＨＰＶ１６ＤＮＡ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：４４ 例宫颈癌组织中ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性３５ 例（７９－５％ ）,ＨＰＶ１８ＤＮＡ 阳性５ 例（１１－３ ％） 。其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性４ 例;ＨＰＶ１８ＤＮＡ 阳性而ＨＰＶ１６ＤＮＡ阴性１ 例;ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性而ＨＰＶ１８ＤＮＡ 阴性３１ 例。１５ 例癌旁组织伴宫颈上皮内新生物（ｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｍ , ＣＩＮ） Ⅱ～Ⅲ级,ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性１２ 例（８０％ ）,其他３ 例癌旁组织中１ 例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性;３０ 例慢性宫颈炎有４ 例ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性（１３－３％ ） ;１５ 例正常宫颈组织ＨＰＶＤＮＡ均阴性。结论：宫颈癌及癌旁伴ＣＩＮⅡⅢ与ＨＰＶ１６、１８ 感染有密切关系,以ＨＰＶ１６ 感染为主     

肺癌病人乳头瘤病毒感染与P^53基因突变的关系研究

应用病理学证实的肺癌新鲜标本,用ＰＣＲ检测癌组织中ＨＰＶ１６,１８ＤＮＡ,用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析癌组织中Ｐ＾５３基因突变情况。４０例肺癌标本中,ＨＰＶ１６,１８ＤＮＡ阳性１４例,占３５％,Ｐ＾５３基因突变者１６例,占４０％。ＨＰＶ１６,１８ＤＮＡ阳性的１４例中,有Ｐ＾５３基因突变的９例,占６４．３％。而ＨＰＶ１６,１８ＤＮＡ阴性的２６例中,有Ｐ＾５３基因突变的７例,占２６．９％。提示人乳头瘤病毒感     

维吾尔族妇女子宫颈癌中 p53 基因的表达和 HPV DNA 检测研究

应用Ｅ６特异性引物ＰＣＲ检测新疆维吾尔族妇女子宫颈癌活检组织标本中的ＨＰＶ６，１６和１８ＤＮＡ。并应用免疫组化研究ｐ５３基因的表达。结果显示，６５例标本中７例不适应用于ＰＣＲ，其余５８例中ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性４５例（７７．６％），而ＨＰＶ６ＤＮＡ和１８ＤＮＡ为阴性。免疫组化显示，６５例中ｐ５３表达阳性４９例（７５．４％）。在４５例ＨＰＶＤＮＡ阳性标本中，ｐ５３表达阳性３４例（７５．６％）；１３例ＨＰＶＤＮＡ阴性标本中，ｐ５３表达阳性１１例（８４．６％）。提示，ＨＰＶ阳性或阴性与ｐ５３表达之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

人食管鳞状上皮细胞癌变过程中P53基因蛋白产物的表达

选取３５例食管癌手术切除标本，多点取材，使每例中至少含有单纯增生、不典型增生粘膜上皮和癌组织，建立一个食管癌发生的多阶段模型。用免疫组化法检测了Ｐ５３基因蛋白产物在这一过程中的变化，并用ＰＣＲ技术检测了３５例标本中不同病变人乳头状瘤病毒１６、１８和３５型ＤＮＡ的存在状态。结果显示，６０％（２１／３５）的病例存在有Ｐ５３基因蛋白产物的高表达。凡癌组织表达阳性的病例，其对应的单纯增生，不典型增生粘膜上皮也均有不同程度的表达。在Ｐ５３表达阴性的１４例标本中，８例癌旁粘膜上皮显示有ＨＰＶ感染的组织学特征，而Ｐ５３蛋白高表达的２１例标本中仅有４例。但用ＰＣＲ方法３５例中均未检测到ＨＰＶ１６／１８／３５ＤＮＡ的存在。结果表明：Ｐ５３基因蛋白产物的高表达在食管癌的发生中是一个早期生物学标志。     

人宫颈癌多基因致癌机理的研究

应用核酸分子杂交、ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＡＳＯ杂交等技术，对人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ等三种癌基因、ＨＰＶ１６病毒基因及Ｐ５３、Ｒｂ抑癌基因等多基因变化及其致癌机理进行了研究。结果表明：①宫颈癌中存在Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子Ｇ→Ｔ点突变，突变率为１８．２％（８／４４），并有Ｈａ－ｒａｓ基因扩增，扩增率为４５％（９／２０）；②ｃ－ｅｒｂＢ２基因在宫颈癌中的扩增率为７３．３％（１１／１５），５例伴有重排；③ｃ－ｍｙｃ基因在宫颈癌中的扩增率为９１．７％（１１／１２）；④ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７为引物的ＰＣＲ检测结果，宫颈癌中的阳性率为８０．５％（３３／４１）；⑤１２例宫颈癌中未发现Ｐ５８、Ｒｂ基因缺失。上述多基因致癌机理的研究表明，人宫颈癌中Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ２经点突变、扩增、重排而被激活，在癌变中起着协同致癌作用。ＨＰＶ１６基因的整合可能启动ｃ－ｍｙｃ，为癌变的起始因素，而Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ２的基因改变可能为中、晚期事件，抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ的作用尚需进一步研究。     

应用PCR／RFLP法检测宫颈颈癌组织中P^53基因杂合性丢失

本文首次在国内建立了ＰＣＲ／ＲＦＬＰ法检测宫颈癌组织中的Ｐ＾５３基因杂合性丢失，以Ｐ＾５３基因外显子４中７２密码子两侧设计的一对引物进行ＰＣＲ扩增，产物对１６２ｂｐ，在ＢＳＨ１２３６Ｉ限制性内切酶消化下，８％聚丙烯酰胺凝胶电泳，ＥＢ染色，ＰＦＬＰ分析，观察了２０例宫颈癌组织中有５例为杂合性丢失，１５２５％（５／２０），该法需微量的标本ＤＮＡ和快速的特点，ＰＣＲ／ＲＦＬＰ检测肿瘤组织中的Ｐ＾５３基因     

宫颈癌组织中HPV16 E6C基因变异的研究

为探讨ＨＰＶ１６肿瘤相关抗原Ｅ６羟基端基因片段（Ｅ６Ｃ）在宫颈癌组织中的变异性以及采用Ｅ６Ｃ做为肿瘤治疗性轩抗原基因的可行性，采用ＰＣＲ方法自１８例单纯ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌组织中扩增ＨＰＶ１６５Ｅ６ＣＤＮＡ，经单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列测定法检测其基因变异性。ＳＳＣＰ分析结果显示，１８例宫颈癌组织ＨＰＶ１６Ｅ６ＣＤＮＡ电泳条带与标准对照ＤＮＡ条带一致，提示无基因变异现象存在     

人大肠腺癌组织P^53基因突变与表达

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术和免疫组织化学方法检测１８例人大肠腺癌和腺瘤变组织Ｐ＾５３基因第５－８外显子的突变和Ｐ＾５３蛋白的表达，另对９７例大肠腺瘤和腺瘤癌变组织Ｐ５３蛋白表达进行了检测。１８例大肠腺癌中８例Ｐ＾５３基因，第５－６外显子中存在突变。１０例（５６％）Ｐ＾５３表达阳性。     

非霍奇金淋巴瘤中EB病毒BNLF_1片段及其表达产物的检测及意义

为研究ＥＢ病毒与非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，采用ＰＣＲ、原位杂交、ＬＳＡＢ（ｌａｂｅｌｉｎｇｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｖｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化技术，检测３２例ＮＨＬ和３３例反应性增生淋巴结中的ＥＢＶＢＮＬＦ１基因片段及其表达产物潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）。ＮＨＬ中ＥＢＶＢＮＬＦ１ＰＣＲ扩增阳性率为５３％，明显高于反应性增生淋巴结组２７％（Ｐ＜０．０５），其中５例Ｔ细胞淋巴瘤全部阳性。１７例ＰＣＲ阳性的ＮＨＬ中５例原位杂交阳性。ＬＭＰ１检测仅２例阳性。结果表明本组病例半数以上ＮＨＬ中有ＥＢＶ感染，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。     

P53基因突变、人乳头瘤病毒16，18型感染与肺鳞癌发病的关系

应用单链构象多态性分析多聚酶链反应ＥＢ染色法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＥＢ）对４０例肺癌组织标本的Ｐ５３基因序列５～８外显子突变进行分析，同时应用ＰＣＲ方法检测上述标本及１８例肺良性疾病组织标本中ＨＰＶ１６、１８型ＤＮＡ相关序列，旨在分析二者在肺鳞癌发病中的作用及相互关系，并就肺鳞癌与Ｐ５３基因结构和功能异常的关系进行初步探讨。     

宫颈鳞状上皮癌蜡块中 HPV16 感染检测方法的比较研究

分别用原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）和原位多聚酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）方法，检测３９例宫颈鳞状上皮癌石蜡切片中ＨＰＶ的感染。ＩＳＨ的检出率为４６．２％（１７／３９），明显低于ＩＳ－ＰＣＲ的６６．７％（２６／３９，Ｐ＜０．０１）和ＰＣＲ的８４．６％（３３／３９，Ｐ＜０．０１）。用常规ＩＳＨ和地高辛标记探针能检出宫颈鳞状上皮癌ＨＰＶ１６感染的表皮细胞，而用ＩＳ－ＰＣＲ方法在同样标本中可显示出更多的ＨＰＶ１６阳性表皮细胞，并且着色更深。ＰＣＲ方法敏感性最高，但它不能用于组织细胞内的ＨＰＶ１６ＤＮＡ精确定位。     

非小细胞肺癌P53基因突变的研究

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对３５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）肿瘤切除组织的Ｐ５３基因５￣８号外显子进行突变检测，对８号外显子同时采用ＰＣＲ－ＤＧＧＥ进行突变检测。发现ＮＳＣＬＣ中Ｐ５３突变率为６５．７％。Ｐ５３率在肿瘤细胞不同分化程度间有显著差异，低分化ＮＳＣＬＣ的Ｐ５３突变率（８９．５％）明显大于高、中分化的ＮＳＣＬＣ（３７．４），虽然有纵膈淋巴结转移的Ｐ５３突变率（７１．４％）高于无给膈转移者（５７     

睑板腺癌P53基因和人乳头状瘤病毒HPV—16的检测

目的 探讨睑板腺癌发生的分子生物学机制，方法 采用多取酶链反应－限制性片段长度多态性方法，对３４例眼睑组织（睑板腺癌和霰粒肿各１７例）中Ｐ５３基因２４８位点进行检测，并用ＰＣＲ技术检测其中人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）致癌型ＨＰＶ－１６ＤＮＡ片段。结果 ２９．５％的睑板腺癌中有Ｐ５３基因的突变，粒肿中则未检测到，两者比较差异有显著性（Ｐ＝０．０２２），Ｐ５３基因突变与睑板腺癌临床病理特征无关（Ｐ〉０．０     

P53基因突变,人乳头瘤病毒16,18型感染与肺鳞癌发病的关系

应用单链构象多态性分析多聚酶链反应ＥＢ染色法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＥＢ）对４０例肺癌组织标本的Ｐ５３基因序列５￣８外显子突变进行分析，同时应用ＰＣＲ方法检测上述标本及１８例肺良性疾病组织标本中ＨＰＶ１６、１８型ＤＮＡ相关序列，旨在分析二者在肺鳞癌发病中的作用及相互关系，并就肺鳞癌与Ｐ５３基因结构和功能异常的关系进行初步探讨。     

用聚合酶链反应检测喉鳞癌细胞内人乳头状瘤病毒DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测喉鳞状细胞癌患者的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本２８例。从石蜡包埋的癌组织提取的人乳头状瘤病毒ＤＮＡ（ＨＰＶＤＮＡｓ）用ＨＰＶ－１６，１８试剂盒进行ＰＣＲ扩增。其中５例（１８％）扩增阳性。声带癌ＨＰＶ－１６，１８的阳性率较其它部位的高（占阳性８０％）。结果提示：ＨＰＶ－１６，１８的感染在喉癌的发生中起到一定的作用。声门区的喉鳞癌与宫颈癌的发生类似，与ＨＰＶ－１６，１８的感染有密切的联系。