调节性B细胞的研究概述

B细胞主要通过分泌各种抗体发挥免疫学作用,新近研究发现在B细胞中存在一种新的细胞亚群——调节性B细胞,它们可通过分泌IL-10和TGF-β1抑制获得性免疫介导的炎症反应发展和（或）加快炎症的恢复,相关研究表明此种细胞可在炎症性肠病、系统性红斑狼疮、肿瘤等疾病中发挥重要作用。本文综述了调节性B细胞的来源、功能、作用机制及相关研究进展。     

B10细胞在自身免疫性疾病中的研究进展

调节性B细胞(Breg)是一群具有负向免疫调节作用的B细胞,可产生负向调节细胞因子,如白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β),或以细胞间接触等方式参与免疫调节,抑制炎性反应。B10细胞是一类可产生IL-10的Breg,参与多种自身免疫性疾病的发生发展过程。我们总结了B10细胞的起源、免疫机制以及B10细胞在类风湿性关节炎、炎症性肠病、干燥综合症等自身免疫性疾病中的作用以及调控机制,在治疗自身免疫性疾病的相关应用尝试,并探讨了B10细胞作为治疗自身免疫性疾病的新方法的可行性。     

心肌肥厚的细胞外信号机制

有关心肌肥厚的细胞内机制及其基因表达模式改变已有比较深入的研究，触发心肌肥厚的细胞外信号机制却不明确。可能与交感神经激活、血管紧张素Ⅱ过量表达以及膜牵张敏感的离子通道、细胞形变传导机制等因素之间的次序和交互作用有关     

调节性B细胞促进前列腺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)是机体内分泌IL-10的主要细胞,在肝癌等恶性肿瘤免疫中发挥重要作用。研究将2015年6月至2017年12月来河北医科大学第四医院就诊的前列腺癌和良性前列腺增生患者纳入研究范围,免疫组化法检测良、恶性组织中IL-10水平和Ki-67增殖指数;流式细胞术检测外周血CD19~+IL-10~+Breg百分比;MTT实验检测前列腺癌细胞增殖率;Transwell侵袭实验检测前列腺癌细胞侵袭能力。免疫组化结果显示良性前列腺增生组织中IL-10平均光密度(average optical density, AOD)为12.60±2.72,Ki-67增殖指数为(3.00±0.84)%,前列腺癌组织中IL-10的AOD为86.10±11.49,Ki-67增殖指数为(45.30±4.11)%(t=6.23,P0.000 1;t=10.08,P0.000 1);流式细胞术检测结果显示良性前列腺增生患者外周血中Breg百分比为(0.14±0.03)%,前列腺癌患者外周血中Breg百分比为(0.41±0.04)%(t=5.082,P0.000 1);相关性分析结果显示前列腺癌患者和良性前列腺增生患者外周血Breg百分比与组织中IL-10表达水平和Ki-67增殖指数均呈显著正相关(r=0.701 9,P=0.000 6;r=0.784 3,P0.000 1);MTT及Transwell实验结果显示Breg促进前列腺癌细胞增殖和侵袭,IL-10在其中发挥重要作用。综上,Breg在前列腺癌患者外周血中所占比例显著升高,能够通过分泌IL-10促进前列腺癌细胞增殖和侵袭,这可能为前列腺癌的免疫治疗提供新靶点。     

调节性B细胞与免疫耐受

B细胞通过产生抗体和递呈抗原发挥免疫应答和调节作用.调节性B细胞( Bregs)是新近发现的一种新的B细胞亚群,通过产生白细胞介素10 (IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受.在自身免疫性疾病、感染、肿瘤等发生、发展、转归过程中起重要调节作用.本文中综述了Bregs的发现、分类及活化、作用机制及在自身免疫病与移植耐受中的相关研究进展.     

实验性病毒性心肌炎心肌颗粒酶B表达的研究

目的 探讨颗粒酶B(GzmB)在病毒性心肌炎(VMC)心肌损伤过程中的作用及其发病机制.方法 将36只5-6周龄雄性BALB/c小鼠随机分成两组:正常组1O只,模型组26只.于第11天处死小鼠取出心脏观察心肌病变,并以半定量RT-PCR和免疫组化方法检测心肌GzmB的表达.结果 模犁组小鼠心肌组织中均检测到GzmB阳性细胞和GzmB mRNA的表达,且小鼠心肌浸润细胞中GzmB阳性细胞数与心肌病理积分呈显著正相关(r=O.859,P=O.000),而正常组小鼠心肌中未检测到GzmB的表达.结论 心肌浸润细胞中GzmB的表达在病毒性心肌炎心肌损伤中起一定作用,其介导的细胞毒效应是导致病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一;心肌浸润细胞中GzmB的表达量与心肌损害严重程度成显著正相关.     

不同体外刺激对小鼠腹腔产生IL-10的B细胞的影响

目的:探索不同体外刺激对小鼠腹膜腔B细胞产生IL-10的影响.方法:在不同刺激剂作用下,体外培养小鼠腹腔细胞5或48小时,流式细胞仪分析CD19+IL-10+ B细胞比例.结果:PIM刺激5小时后,小鼠腹腔CD19+IL-10+ B细胞比例明显升高至14.69%(P<0.01),在PIM刺激的基础上加入anti-IgM F(ab′)2或anti-CD40均不能进一步提高腹腔B细胞IL-10的表达(P>0.05),而加入IPS后,CD19+IL-10+ B细胞比例升高至平均26.53%(P< 0.01).LPS、anti-CD40刺激48小时可明显升高CD19+IL-10+ B细胞比例,但能够产生更强BCR信号的coated anti-IgM刺激抑制小鼠腹腔B细胞IL-10的表达.结论:体外刺激5小时,LPS+PIM是腹腔产生IL-10的B细胞活化的最佳刺激,刺激48小时,LPS和anti-CD40可进一步促进腹腔B细胞IL-10的表达,这一作用可能是通过诱导腹腔B10前体细胞成熟实现的.而anti-IgM刺激对腹腔B细胞产生IL-10的影响依赖于刺激时间和信号强度.     

调节性B细胞与自身免疫性疾病

以往认为,B淋巴细胞在自身免疫病中作为致病性淋巴细胞发挥作用。近年却发现,在自身免疫病小鼠模型中,采用B细胞清除疗法会加重疾病进程,提示B细胞具有免疫调节功能。调节性B细胞（Breg）是新近发现的一群新的B细胞亚群,它存在于B细胞多个亚型中。Breg通过刺激其表面分子,诱导释放调节性细胞因子如IL-10发挥调节作用。在不同自身免疫性疾病中,各种免疫细胞都可以成为Breg作用的靶细胞,表明Breg在自身免疫病复杂网络中的强大调节作用。     

调节性B细胞在类风湿性关节炎中的研究进展

研究发现某些B细胞能够通过产生调节性的细胞因子(如IL-10、TGF-β)或者直接与病原性的T细胞相互作用抑制免疫反应,这类B细胞亚群被定义为regulatory B(Breg)cells。类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为特征的、伴随骨和软骨结构进行性破坏、最终导致关节破坏和畸形的慢性炎症疾病。已证实Breg在关节炎小鼠模型(collageninduced arthritis,CIA)以及类风湿性关节炎患者中发挥了免疫抑制作用。本文主要总结了近年来国内外有关Breg在RA疾病方面的研究进展,阐述其在RA中可能的作用机制,为RA疾病的预防、治疗提供新思路。     

调节性B细胞在自身免疫病中的作用

传统意义上的B淋巴细胞通过呈递自身抗原、产生自身抗体及分泌细胞因子等多种机制在自身免疫病中发挥重要的作用。但是目前发现,另有一群具有特殊免疫表型的调节性B细胞可发挥负向免疫调节作用,参与诱导免疫耐受。本文综述了近年来国内外对自身免疫病及相应的鼠模型中调节性B细胞的研究进展,展示其在自身免疫病中的作用及其可能机制,为自身免疫病的临床治疗提供理论基础。     

HMGB1参与HBSS诱导的Lewis细胞凋亡及其相关机制研究

目的探讨HBSS饥饿缓冲液能否诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡及可能的机制。方法 Hank′s平衡溶液(HBSS)饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12 h后采用Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡。Lewis细胞在HBSS处理30 min后流式检测ROS的产生,4、8、12 h后通过免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达。另外,HBSS刺激Lewis细胞12 h后采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的表达。结果 HBSS饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12 h后与对照组相比凋亡百分比明显增多。流式结果表明Lewis细胞在HBSS处理30 min后ROS表达量明显上升,免疫印迹检测发现HBSS作用Lewis细胞3 h后HMGB1表达增加,6 h后在细胞培养上清中检测到HMGB1的分泌。另外,HBSS刺激12 h后Caspase-3表达也显著增加,且有统计学意义。结论 HBSS饥饿缓冲液能诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡,且凋亡可能依赖于ROS-HMGB1-Caspase-3通路。     

调节性B细胞与过敏性疾病

B细胞经典的作用是产生抗体.此外,B细胞还可以作为抗原提呈细胞发挥加工呈递抗原作用.然而研究表明B细胞中也存在一类在免疫应答中起到负性调节作用的B细胞,它们的缺乏或者减少会引起一些自身免疫性疾病与过敏性疾病的加重.基于近些年来调节性B细胞与过敏性疾病的研究,因此有必要对调节性B细胞的生物学特性、功能和与过敏性疾病的关系进行总体的阐述和概括.     

心肌肥厚重塑的免疫机制研究进展

心血管疾病严重威胁人类健康,其继发的心肌肥厚和重塑是导致心脏功能逐渐恶化的关键因素.近年来,分子免疫学机制在心肌肥厚和重塑形成中的作用逐渐引起关注.研究多种细胞类型在心肌肥厚和重塑中的作用,如非心肌细胞,尤其是免疫细胞相互作用和炎症信号作用的机制,巨噬细胞、成纤维细胞和肾素-血管紧张素-醛固酮系统在心肌肥厚与重塑病理生理中的作用,对不同免疫细胞类型在心肌细胞肥大调控具有重要性以及潜在的治疗靶点.     

蛋白酶体抑制剂MG-132改善大鼠心肌梗死后心肌肥厚

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠心肌梗死后心肌细胞肥大的影响及机制.方法 制作大鼠心肌梗死模型,随机分为MG-132干预(MG)组和心肌梗死(MI)组,另设假手术(sham)组,每组6只.MG组于术后24 h腹腔注射MG-132[0.1 mg/(kg·d)],MI组及SH组注射0.9％氯化钠注射液对照.连续给药28 d后超声检测心脏左室后壁厚度;称取左室重量,计算左室质量指数;计算非梗死区心肌细胞面积、周长及平均直径.RT-PCR和免疫组化分别检测核转录因子-κB P65 (NF-κB P65)及白介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白质表达量.结果 与SH组比较,MI组和MG组的左室后壁厚度、左室质量指数、心肌细胞的直径、周长和表面积明显增大,NF-κB P65和IL-1β的mRNA及蛋白质表达量明显增加(P＜0.01).MG组的上述指标明显低于MI组(P＜0.01).结论 MG-132在一定程度上能改善大鼠心梗后心肌细胞肥大,其机制可能与抑制NF-κB激活,下调炎性细胞因子如IL-1β表达有关.     

反义人IL-10和反义病毒性IL-10抗鼻咽癌细胞成瘤效应的研究

目的:探讨反义人IL-10和反义病毒性IL-10抑制鼻咽癌细胞成瘤的效果。方法:扩增及克隆hIL-10 cDNA和 vIL-10基因,构建反义hIL-10和反义vIL-10双价真核表达载体pcDNA3/AS hIL-10 AS vIL-10,转染鼻咽癌细胞株SUNE。将转染阳性的SUNE细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种SCID小鼠和经健康人外周血白细胞免疫重建的SCID小鼠（hu-PBL-SCID鼠）,观察成瘤效应。结果:ELISA法测得未转染SUNE细胞培养上清液中IL-10和vIL-10的总含量为242±23pg/ml,而转染阳性的SUNE细胞培养上清液中hIL-10和vIL-10的总含量仅为22±6pg/ml。在SCID鼠体内,vIL-10和hIL-10的表达与否,并不影响鼻咽癌细胞的成瘤活性,但在hu-PBL-SCID鼠体内,抑制vIL-10和hIL-10的表达则可明显抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。结论:反义人IL-10和反义病毒性IL-10可显著抑制鼻咽癌细胞在血hu-PBL-SCID鼠体内的成瘤作用,鼻咽癌组织表达vIL-10和hIL-10的确与鼻咽癌免疫耐受有关。     

心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的: 探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法: 获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果: 分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P<0.01)、CT-1组(6.63%±0.55%,P<0.01)和空白对照组(1.62%±0.09%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.05)。cTnT红色荧光染色结果显示:合用组的诱导分化心肌样细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P<0.01)、CT-1组(7.50%±0.61%,P<0.01)和空白对照组(1.12%±0.23%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.01)。结论: 适宜浓度的5-Aza(10 μmol/L)和CT-1(0.1 μg/L)能够在体外诱导小型藏猪骨髓MSCs转化为心肌样细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。     

心肌营养素-1诱导小鼠心肌细胞分化抑制因子基因的表达

目的 :CT - 1是新近发现的一种细胞因子 ,属IL - 6家族成员 ,能够引起心肌细胞肥大而且具有强大而广泛的心肌保护功能。在心肌细胞中CT - 1主要通过JAK/STAT3信号转导途径介导心肌肥大 ,通过p4 2 /p4 4MAPK信号转导途径介导心肌保护作用。为了进一步研究其在心肌中的功能 ,观察了CT - 1对分化相关基因Id1、Id2和凋亡相关基因Fas、Bcl - 2、Bax表达的影响。并对CT - 1诱导Id2基因表达的分子机制进行初步的探讨。方法 :应用胰酶消化法分离培养BALB/C乳鼠心肌细胞 ,加CT - 1(1nmol/L)处理心肌细胞不同时间。提取总RNA ,用RT -…     

小鼠 B10细胞的分离、鉴定及功能特征北大核心CSCD

目的：评估小鼠不同组织中B10细胞的比例,分离B10细胞并鉴定其生物学功能,探讨其对效应性T细胞（ CD4＋CD25-T）及调节性T细胞（ Treg）的免疫调节机制。方法采用流式细胞仪检测小鼠不同组织来源B10细胞的表达以及脂多糖（ lipopolysaccharide ,LPS）对B10激活的影响;采用流式细胞分选术（ FACS）和免疫磁珠分选术（ MACS）分选B10细胞、CD4＋CD25-T 细胞和Treg;利用混合淋巴细胞培养实验观察B10对CFSE标记的CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞增殖的调节作用及机制。结果（1）脾脏CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞表达为（3．95±0．79）％,与外周血、肠系膜淋巴结和外周淋巴结相比较表达最高,组间差异有统计学意义（P＜0．05）;脾脏CD19＋IL-10＋B细胞表达为（2．02±0．16）％,与外周血、肠系膜淋巴结和外周淋巴结相比较表达最高（P＜0．05）,且IL-10主要由CD1dhighCD5＋B细胞亚群分泌（P＜0．01）;（2） LPS联合乙酸佛波醇（PMA）、莫能菌素（monen-sin）和离子霉素（ionomycin）能活化B10细胞分泌IL-10。延长LPS的作用时间（48 h）能促进CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞高表达及IL-10分泌增加（P＜0．01）;（3） CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞在体外可抑制CD4＋CD25-T细胞增殖（P＜0．01）、促进CD4＋T细胞分泌IL-10（P＜0．01）,同时可促进Treg增殖（P＜0．01）。结论 B10细胞在小鼠脾脏高表达,通过Toll样受体（TLR）信号通路被激活。活化的B10细胞具有免疫抑制性,可抑制CD4＋CD25-T细胞增殖,促进Treg增殖,其可能免疫调节机制是IL-10的释放增加。因此B10细胞有望为治疗多种自身免疫性疾病提供一种全新的治疗方法。