正交实验设计优化人顶体酶抑制剂4-胍基苯甲酸-4′-乙酰氨基苯基酯盐酸盐的合成工艺

 目的 优化人精子顶体酶抑制剂4-胍基苯甲酸-4′-乙酰氨基苯基酯盐酸盐(AGB)的合成工艺。方法 按L₉(34)正交表设计考察了缩合剂(A)、反应时间(B)和溶剂(C)3个主要因素对关键中间体4-胍基苯甲酸盐酸盐(3)与4-乙酰氨基苯酚缩合反应制备AGB收率的影响。结果 缩合反应合成AGB的最优反应条件为C₂B₁A₂,收率从44%提高到70%。结论 新工艺反应条件温和、后处理简便、收率较高。     

一种利用蜗牛酶转化重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元的方法＊

目的 建立并优化一种利用蜗牛酶水解重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元的转化方法。方法 利用体外酶促体系，使用蜗牛酶水解重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元，通过高效液相色谱和核磁检测分离并鉴定产物结构。设计反应时间、酶用量、反应温度和pH值四个单因素，以转化率为考察指标，通过多项式回归及响应面法确定最优的反应条件。结果 通过单因素与正交实验，确定了实验室制备偏诺皂苷元的最优反应条件：反应温度为37°C、酶用量为1.5 mg（每100 μg底物），反应时间36 h，pH为5.35，模型预测产率为53.5%，验证产率为51.5%，与预期基本相符。结论 开发并优化了一种用蜗牛酶转化重楼皂苷VI制备偏诺皂苷元的方法，该方法可行性高，反应得率高，耗时短，成本低，可能对开展中试研究具有潜在的指导作用。     

穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元提取工艺优化

目的 优化穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的提取工艺,开发一种在酸水解前的酶解预处理工艺。方法 利用酶的生物降解作用,断开薯蓣皂苷与纤维素的葡萄糖苷键,从而改变植物细胞壁的通透性。通过单因素试验考察酶添加量、酶解温度、酶解时间、酶解pH、料液比对薯蓣皂苷得率的影响,并在此基础上通过Box-Behnken响应面分析法优化薯蓣皂苷的提取工艺条件。结果 纤维素酶提取薯蓣皂苷的最佳工艺条件为纤维素酶用量400 U、酶解温度55 ℃、酶解时间8 h、酶解pH 5.5、料液比1∶30,在此条件下薯蓣皂苷得率为9.78%。酸解得到薯蓣皂苷元得率为32.07%,薯蓣皂苷元纯度为70.89%。结论 通过一步纤维素酶预处理可以使薯蓣皂苷元得率提高140.59%,薯蓣皂苷元纯度提高41.21%。该方法方便、高效,可为薯蓣皂苷元的进一步研究和工业化生产提供参考。     

盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元方法的研究进展

传统工业广泛采用直接酸水解盾叶薯蓣根茎制备薯蓣皂苷元，该方法大量使用无机酸催化剂，废水排放量大，环境污染严重。因此，探寻清洁、高效的制备方法和工艺成为实现薯蓣皂苷元工业生产可持续发展的必然选择。故笔者综述并分析了近10年来酶水解、微生物转化及改进酸水解等方法在盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元中的研究进展及存在问题，并展望了其应用前景。酶水解反应条件温和，但薯蓣皂苷元产率低、经济成本高、活性酶纯化过程复杂。微生物特异性好，转化效率高、转化过程清洁环保，但转化周期长，代谢产物复杂。改进酸水解法中，双相酸水解工艺优势在于酸使用量减少，磺酸功能化离子液体催化优势在于可代替无机酸，循环性能良好，但二者均无法避免废液排放，固体酸催化剂无腐蚀性，易回收，但需使用乙醇作为反应溶剂具有一定安全隐患，且催化剂制备过程繁琐。综上所述，探索清洁高效的转化方法是盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元的重要发展趋势。对于酶水解法，应深入探寻生物转化过程中的关键糖苷水解酶，充分阐明酶解皂苷的转化路径及酶特异性，着力提高酶水解效率；对于微生物转化法，以选育高效转化菌株为基础，优化稳定的转化体系和转化过程，加快推动微生物转化的工业应用进程，深入探究生物转化机制，充分阐明特异性关键水解酶及其催化特性，着力提高生物转化效率；对于改进酸水解法，探索使用结构简单、性能稳定、可生物降解的新型酸催化体系，有效解决环境污染及生产安全问题。     

超临界CO2萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的研究

 目的研究超临界CO₂萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的工艺。方法探讨了萃取压力、萃取温度、萃取时间、携带剂类型及携带剂含量等因素对薯蓣皂苷元收率的影响，确定了超临界CO₂萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的最佳条件，并将超临界CO₂萃取法与传统的有机溶剂提取法进行了比较。结果萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的最佳超临界萃取条件：萃取压力35.0 MPa,萃取温度45℃，选择体积分数为95%乙醇为携带剂，携带剂含量为3%，萃取时间3.0 h,CO₂流速2 L·min^-1。结论超临界CO₂萃取法萃取薯蓣皂苷元比传统提取方法收率及纯度均高，且安全高效。     

RP-HPLC测定金刚藤中薯蓣皂苷元的含量

 目的　建立金刚藤中薯蓣皂苷元的测定方法。方法　采用RP-HPLC测定薯蓣皂苷元的含量,色谱柱为Lichrospher C₁₈(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇,检测波长为210nm,峰面积外标法定量。采用正交设计,考察发酵时间(A)、水解时间(B)、硫酸浓度(C)3个因素对薯蓣皂苷水解的影响。结果　薯蓣皂苷元在50～350μg·mL^-1内具有良好的线性关系(r=0.9991,n=7) ,平均回收率为99.97%,RSD=0.85%(n=5 )。采用发酵72h后用浓度为5%的硫酸水解6h,可使金刚藤中薯蓣皂苷水解完全。结论　RP-HPLC是一个简便、快速、分离效果好、精密度高、准确度好的测定金刚藤中薯蓣皂苷元的方法。发酵对水解产率影响显著。     

胡芦巴中皂苷成分的研究

目的　对胡芦巴Trigonellafoenum-graecum种子所含的皂苷成分作深入研究。方法　采用大孔吸附树脂法提取纯化总皂苷,并应用硅胶H柱层析、干柱层析等方法分离出单一皂苷成分,通过13CNMR,FAB-MS,DEPT等光谱及部分水解获得的次生苷的方法进行了结构测定。结果　从总皂苷中分出一个新皂苷A,为测定其结构将其部分水解获得次生苷Ⅰ,Ⅱ。经测定皂苷A的化学结构为薯蓣皂苷元-3-O-α-L-鼠李吡喃糖(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷;次生苷Ⅰ结构为:薯蓣皂苷元-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷;次生苷Ⅱ结构为薯蓣皂苷元-3-O-β-D-葡萄吡喃糖(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷。结论　皂苷A为一新的三糖皂苷。     

HPLC比较研究不同产地与不同生长年限穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量

 目的 研究穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量与产地及生长年限的关系,为制定穿龙薯蓣的质量标准提供参考数据。方法 利用ALLTECH高效液相色谱仪测定不同产地及生长年限的穿龙薯蓣样品中薯蓣皂苷元的含量,并用SPSS16.0软件对测定结果进行统计分析。结果 薯蓣皂苷元在0.2～4.0 μg与峰面积具有良好的线性关系,回归方程为Y=1.711×10-7X+5.084×10-2,r2=0. 999 9,测定了48批穿龙薯蓣样品中薯蓣皂苷元的含量,相同生长年限不同产地样品中薯蓣皂苷元含量呈正态分布,且1年生样品中薯蓣皂苷元含量与2年及3年生相比,差异显著,而2年生与3年生样品中薯蓣皂苷元含量差异不显著。结论 穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量与产地有一定相关性,且最佳生长年限为2年。     

壮药“国虾薄”（绞股蓝）热处理产物中人参皂苷Rg3的分离与鉴定

目的：分离、鉴定国虾薄（绞股蓝）热处理产物中皂苷类化合物。方法：国虾薄在温度125 ℃、压力0.24 MPa 的条件下,加热处理3 h,用80%乙醇加热回流提取3 h,通过大孔树脂HP-20、硅胶柱及反相柱色谱等分离手段对其热处理产物进行分离,并用离子阱飞行时间质谱（LCMS-IT-TOF）、核磁共振波谱（NMR）等数据鉴定其成分。结果：从壮药国虾薄热处理产物中首次分离获得20（S）-人参皂苷Rg₃和20（R）-人参皂苷Rg₃两种不同构型的稀有人参皂苷。结论：通过热处理的方法能从国虾薄中分离得到人参皂苷Rg₃,这为人参皂苷Rg₃的制备提供了一个新思路。     

三七炮制品化学成分研究

为了研究三七炮制品的化学成分,采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、RP-C₁₈柱色谱、制备HPLC等分离纯化方法,从三七炮制品的70%乙醇提取物中分离得到23个单体化合物。应用理化测定和波谱(MS,NMR)分析等方法鉴定各化合物的结构,其分别鉴定为6'-O-乙酰人参皂苷Rh₁(1),人参皂苷Rk₃(2),人参皂苷Rh₄ (3),20S-人参皂苷Rg₃(4),人参皂苷Rk₁(5),20R-人参皂苷Rg₃(6),人参皂苷Rg₅ (7),人参皂苷F₂ (8),20S-人参皂苷Rh₁(9),20R-人参皂苷Rh₁(10),绞股蓝皂苷ⅩⅦ(11),三七皂苷Fa(12),人参皂苷Ra₃(13),人参皂苷Rg₁ (14),人参皂苷Re(15),三七皂苷R₂(16),20R-人参皂苷Rg₂(17),三七皂苷R₁ (18),人参皂苷Rd(19),人参皂苷Rb₁ (20),三七皂苷D(21),三七皂苷R₄(22)和人参皂苷Rb₂(23)。化合物 1 为首次从三七中分离得到,化合物 4, 6, 8和11 为首次从三七炮制品中分离得到。根据三七炮制前后样品的指纹图谱分析比对,推测了在炮制过程中三七中人参三醇类和人参二醇类化合物可能的变化途径。结果显示,三七中的三萜皂苷主要发生了糖基水解反应和脱水反应。     

咪唑类离子液体对三七中痕量成分人参皂苷Rh1的体外经皮促渗作用研究

目的 考察咪唑类离子液体([BMIM][Cl])对人参皂苷Rh1(Rh1)的体外经皮促渗作用及促渗机制。方法 以小鼠皮和猪皮为皮肤模型,以油酸、薄荷脑、肉豆蔻酸异丙酯和离子液体[BMIM][Cl]为促渗剂,采用摇瓶法测定Rh1在各促渗剂-水溶液中的溶解度;采用Franz扩散池进行体外经皮渗透实验;采用傅里叶转换红外线光谱(FTIR)法测定研究离子液体的经皮促渗机制。结果 与其他促渗剂相比,5%的[BMIM][Cl]能够显著增加Rh1在水中的饱和溶解度;同时对Rh1的体外经皮渗透有显著的促进作用。FTIR的研究结果表明,[BMIM][Cl]能够改变小鼠皮肤角质层结构。结论 [BMIM][Cl]作为一种新型的经皮吸收促渗剂,在外用制剂领域有潜在的使用价值。     

方剂配伍增加中药方剂活性——一项来自毒理学的实验研究

[目的]比较不同制备方法对清热解毒方水煎剂毒性的影响。[方法]清热解毒方中各味药材分别制备成不同待测样品:合煎样品、分煎样品及单味药给药样品,采用简化机率法测定各样品对小鼠灌胃给药的半数致死量(LD50),并比较测定结果。[结果]所测得合煎样品和分煎样品的LD50分别为(91.26±7.92)g/kg和(111.47±9.12)g/kg,与合煎样品比较,分煎样品的毒性显著降低(P0.05),且动物死亡时间及死前表现不同。单味药样品给药后多未出现明显毒性反应。[结论]与单味中药比较,复方配伍确能提高中药的生物活性。     

黄芪甲苷和三七的主要有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后脑组织能量代谢的影响

目的研究黄芪甲苷和三七的主要有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1分别配伍对小鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织能量代谢的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分组,连续给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24 h。采用HPLC法测定脑组织ATP、ADP、AMP水平,计算能荷(EC)值;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和Western-blotting法测定脑组织葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)基因和蛋白表达。结果模型组脑组织ATP、ADP、AMP的量及EC值显著降低(P<0.01),GLUT3基因和蛋白表达显著增强(P<0.05)。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1均可显著增加脑组织ATP、ADP、AMP的量,增强脑组织GLUT3基因和蛋白表达,黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1改善上述指标的作用强于其单个有效成分;除4个有效成分单用外,黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1可显著增加EC值;黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1配伍对改善脑组织能量代谢指标具有协同或相加作用。结论黄芪甲苷和三七的主要有效成分可改善脑缺血再灌注损伤后脑组织能量代谢,促进缺血脑组织对能量物质的利用,黄芪甲苷与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍对改善脑缺血后脑组织能量代谢具有增效作用。     

硫熏白芍配方颗粒检控指标的探讨

目的鉴于前期研究发现硫熏药材特征含硫衍生物比二氧化硫(SO_2)残留指标更具专属性和重现性,现探讨SO_2、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯(硫熏特征含硫衍生物)作为硫熏白芍配方颗粒检控指标的可行性。方法采用《中国药典》2015年版SO_2残留测定法和HPLC法,考察模拟硫熏白芍配方颗粒制剂过程中(提取、浓缩和干燥)SO_2残留和芍药苷及芍药苷亚硫酸酯的量转移规律。结果在硫熏白芍提取液、浓缩液和干浸膏中均能检测到SO_2残留、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯,说明三者均可指示硫熏白芍配方颗粒制剂过程质量变化;但三者量转移规律不同,SO_2和芍药苷呈下降趋势,最终转移率分别为25.5%和91.8%,而芍药苷亚硫酸酯呈上升趋势,最终转移率为118.5%。对市售白芍配方颗粒检测可知,全部样品中均检测到芍药苷,凡测到SO_2残留的样品,也可检测到芍药苷亚硫酸酯。结论鉴于SO_2残留是安全性指标,而芍药苷和芍药苷亚硫酸酯分别反映了白芍配方颗粒内在质量和硫熏影响程度,故三者结合可科学评价硫熏白芍配方颗粒的品质,客观表征其安全性和有效性。     

硫熏当归配方颗粒的安全性检控指标分析

目的:探讨SO_2残留和藁本内酯含硫衍生物含量作为硫熏当归配方颗粒安全性检控指标的可行性。方法:采用2015年版《中国药典》(四部)通则2331测定SO_2残留量,采用HPLC-MS/MS半定量检测藁本内酯含硫衍生物的含量,考察当归配方颗粒制剂过程(提取、浓缩和干燥)中SO_2残留和藁本内酯含硫衍生物的含量转移规律。结果:在硫熏当归提取液、浓缩液和干浸膏中均能检测到SO_2残留和藁本内酯含硫衍生物,二者在干浸膏中的最终转移率分别为8.13%和60.75%。藁本内酯含硫衍生物在配方颗粒制剂过程中的稳定性及检测方法的专属性和灵敏度均好于SO_2残留。结论:鉴于SO_2公认的有害性和藁本内酯含硫衍生物潜在的毒性,可以考虑将藁本内酯含硫衍生物结合SO_2残留作为硫熏当归配方颗粒的安全性检控指标。     

UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析白头翁皂苷B3在大鼠肠道菌群中的代谢产物

目的:研究大鼠肠道菌群对白头翁皂苷B_3的代谢作用,为皂苷类物质在肠道菌群的代谢特征研究提供参考。方法:以连翘苷为内标物,建立UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS检测条件,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~8 min,10%~95%A;8~10 min,95%A;10~10.10 min,95%~10%A),流速0.3 m L·min~(-1),扫描方式为电喷雾(ESI)负离子模式,离子喷雾电压-3 500 V,碰撞电压130 V,干燥气流量12 L·min~(-1),温度350℃,鞘气流量12 L·min~(-1),温度350℃,碎裂电压分别为20,35,50 V。总离子流全扫描的范围m/z 100~1 100。采用负离子和多反应离子监测模式分析白头翁皂苷B_3与大鼠肠道菌群共孵育后的代谢产物。结果:从药物-菌群孵育液中鉴定出白头翁皂苷B3的3-位侧链脱糖代谢产物及苷元母核上羟化、羧化和脱羧、甲基化和去甲基化代谢产物共8种。结论:大鼠肠道菌群在实验条件下能有效代谢白头翁皂苷B3,提示上述代谢产物是其生物活性成分。     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。     

工业大麻地上部分化学成分研究（Ⅱ）

目的 研究工业大麻 Cannabis sativa 地上部分的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱及HPLC等色谱技术进行分离纯化,通过理化性质与波谱数据分析鉴定结构。结果 从工业大麻地上部分的醋酸乙酯萃取物中分离得到20个单体化合物,分别鉴定为大麻色原烯(1)、次大麻色原烯(2)、次大麻酚(3)、(2E, 6Z)-2,6-壬二烯酸(4)、大麻艾尔松酚(5)、acetyl cannabispirol(6)、对羟基苯甲醛(7)、8-羟基乙酸芳樟酯(8)、羟基二氢博伏内酯(9)、次大麻艾尔松酚(10)、6-hydroxy-∆^(7,8)-cannabichromene(11)、cannabispiran(12)、cannabispiradienone(13)、13-羟基-9Z,11E,15E-十八碳三烯酸(14)、(±)-2,3,3a,5-tetrahydro- 1H-benzo[d]pyrrolo[2,1-b] [1,3]oxazin-1-one(15)、次大麻艾尔松酸B(16)、亚麻酸甲酯(17)、棕榈酸甲酯(18)、2,5-二叔丁基苯(19)、N-[2-(S)-hydroxy-2-(4-hydroxy-phenyl)-ethyl]-3-(4-hydroxy-3-methoxy- phenyl)-acrylamide(20)。结论 化合物15为新天然产物,命名为大麻内酰胺A;化合物4、8、9、14、19、20为首次从该属植物中分离得到,且补充了化合物10、16的核磁共振碳谱数据。     

盾叶薯蓣中有效成分含量的影响因素研究

目的:探讨影响盾叶薯蓣中有效成分含量的因素,更好地控制其质量。方法:参照2010年版《中国药典》(一部)测定水分,高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元的含量,对含水量、生长年限、产地及土壤类型与薯蓣皂苷元含量的相关性进行研究。结果:生长在沙土地上的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量相对较高,一般生长3~5年薯蓣皂苷元含量达到最大值,而且薯蓣皂苷元含量与盾叶薯蓣根茎中含水量呈正相关,但3个产区的盾叶薯蓣薯蓣皂苷元的含量差别不大。结论:本实验以薯蓣皂苷元为评价盾叶薯蓣质量的指标,分析了生长年限、水分含量、土质、产地等对其质量的影响,为指导工业生产和药农规范化种植,获得更高的经济效益,建立和完善盾叶薯蓣药材的质量标准体系提供参考。     

白花丹参及其提取物中总丹酚酸含量测定方法研究

目的：建立并测定白花丹参及其提取物中总丹酚酸的含量。方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法,以供试品溶液和对照品溶液紫外-可见吸收图谱一致性为依据,比较丹酚酸B、丹参素钠和原儿茶醛作对照品的合理性;对亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法中各显色剂加入量、加入显色剂后放置时间进行了考察,进行方法学考察。结果：丹酚酸B更适合作对照品,最佳显色条件为：精密加入1%NaNO₂ 2.5 mL,暗处放置10 min,再精密加入20%Al（NO₃）₃ 0.25 mL,暗处放置10 min,再精密加入1 mol·L^-1 NaOH 4 mL,暗处放置15 min。丹酚酸B在0.028~0.309 mg线性关系良好（r=0.999 9）,白花丹参和提取物的回收率分别为96.29%,99.53%。5个批次白花丹参总丹酚酸的含量在5.65%~6.19%,提取物中总丹酚酸的含量在61.03%~61.96%。结论：建立了亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法测定白花丹参及其提取物中总丹酚酸含量的方法。