青蒿琥酯及其与放疗联用对CNE细胞的作用

目的研究青蒿琥酯及其与放疗联用对鼻咽癌CNE细胞增殖和凋亡的影响。方法采用细胞集落计数法和原位末端标记（TUNEL）法,测定单用青蒿琥酯及其与放疗联用对CNE细胞增殖的抑制作用和对凋亡的诱导。结果青蒿琥酯能够抑制CNE细胞增殖,并呈现明显的剂量效应,药物浓度2．5～50μg／ml的细胞存活率为15．75％～93．64％。青蒿琥酯可诱导CNE细胞凋亡,高浓度组（10μg／ml）作用比低浓度组（5μg／ml）强（P〈0．05）。当青蒿琥酯与放疗联用时作用更为明显,联用组的作用效果均优于单用青蒿琥酯组或单纯放疗组。结论青蒿琥酯对CNE细胞增殖有明显的抑制和诱导凋亡作用,且和放疗联用作用更强。     

青蒿琥酯抗人宫颈癌Hela细胞的实验研究

目的探讨青蒿琥酯的抗肿瘤作用。方法采用四甲基二氮唑蓝（MTT）法观察青蒿琥酯及其含药血清对人宫颈癌Hela细胞的体外抑制作用。结果青蒿琥酯及其含药血清均能明显抑制体外培养的人宫颈癌Hela细胞的生长，青蒿琥酯的半数抑瘤浓度（IC50）为31、21μg／mL，20％和10％的含药血清的抑制率分别为29．78％和21、91％。结论青蒿琥酯对体外培养的人宫颈癌Hela细胞有明显的抑制作用。     

青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin表达的影响

目的　探讨青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin 表达的影响。方法　取对数生长期的结肠癌HT-29 细胞,用12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL的青蒿琥酯分别培养24 h、48 h 和72 h。MTT 检测细胞增殖;AnnexinV/PI 双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot 检测β-catenin 蛋白表达。结果　MTT 结果显示,青蒿琥酯能明显抑制结肠癌HT-29 细胞增殖,与对照组（0 μg/mL）相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;AnnexinV/PI 检测结果表明,细胞的凋亡率随着青蒿琥酯浓度的增高而逐渐增高,明显高于对照组（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞周期变化的结果显示,HT-29 细胞G0/G1 期比例与青蒿琥酯浓度呈反比（P<0.05）,G2/M 及S 期比例逐渐增加（P<0.05）。Western blot 检测结果证实,青蒿琥酯处理细胞后β-catenin 表达随药物浓度升高而降低（P<0.05）。结论　青蒿琥酯可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡,下调β-catenin 的表达,有望成为临床治疗肿瘤的新型药物。     

青蒿琥酯增加小鼠腹腔巨噬细胞内化内毒素、大肠埃希菌的作用及可能机制

目的:观察青蒿琥酯(artesunate,AS)对小鼠腹腔巨噬细胞内化清除脂多糖/内毒素(li-popolysaccharide/endotoxin,LPS)和吞噬大肠埃希菌的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测不同浓度网格蛋白抑制剂(monodansylcadaverine,MDC)、内体酸化抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)对小鼠腹腔巨噬细胞活力的影响,以选择恰当的药物工作浓度;激光共聚焦法检测青蒿琥酯及MDC、CQ对小鼠腹腔巨噬细胞内化FITC-LPS的影响;分别采用激光共聚焦和菌落集落形成计数实验观察青蒿琥酯对小鼠腹腔巨噬细胞内化大肠埃希菌的影响;逆转录PCR检测青蒿琥酯对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体A(class A scavenger receptor,SR-A)mR-NA表达的影响。结果:MDC和CQ浓度分别小于25μg/mL和20μg/mL时对小鼠腹腔巨噬细胞活力无影响;MDC、CQ可抑制小鼠腹腔巨噬细胞内化LPS,青蒿琥酯可增加小鼠腹腔巨噬细胞对LPS的内化,而且青蒿琥酯可增加MDC和CQ处理的巨噬细胞内化LPS的功能。激光共聚焦和菌落集落形成计数实验均显示青蒿琥酯可增加小鼠腹腔巨噬细胞对大肠埃希菌的内化能力。逆转录PCR结果显示青蒿琥酯可增强LPS处理或未处理的小鼠腹腔巨噬细胞SR-A mRNA的表达。结论:青蒿琥酯可增强小鼠腹腔巨噬细胞内化LPS、大肠埃希菌的能力,该作用可能与SR-A mRNA表达升高有关。     

高效液相色谱法测定青蒿琥酯的含量

目的:建立高效液相色谱法,以青蒿素为内标测定青蒿琥酯的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱:ASM-Kro-masil-C18液相色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-醋酸缓冲液(60∶40),检测波长:205 nm,流速:1 mL.min-1,柱温:30℃,进样量:20μL,内标物:青蒿素。结果:HPLC法的标准曲线线性范围为0.1～1.6 mg.mL-1(r=0.999 5),线性方程为A=1.714C+0.062,平均加样回收率为99.86%(RSD为1.39%,n=9)结论:该法准确、简便、重现性好,可以用于青蒿琥酯原料药的含量测定。     

高效液相-柱后衍生化法测定青蒿琥酯含量

目的建立测定青蒿琥酯的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱-柱后衍生化法,流动相为乙腈-醋酸盐缓冲液(pH4.0)(60∶40),流速0.8ml/min;衍生试剂为1mol/L氢氧化钾的90%乙醇溶液,流速0.5ml/min;反应温度70℃,柱温30℃,检测波长289nm。结果青蒿琥酯在2～100μg/ml范围内线性关系良好,以峰面积对青蒿琥酯浓度进行线性回归,方程为A=1746.8+8525.4C,r=0.99999;日内、日间精密度RSD均<2%;平均回收率均在98.0%～102.0%。结论该法准确、简便、重现性好,可用于青蒿琥酯的质量控制。     

青蒿琥酯对非小细胞肺癌A549放射增敏的初步研究

目的初筛青蒿素及其衍生物联合放射线对非小细胞肺癌A549细胞的放射增敏效应,并以青蒿琥酯为主要研究对象,研究其对A549细胞的体内、外放射增敏效应,初步探讨其对A549细胞的放射增敏作用机制。方法通过MTT法初筛低毒剂量的青蒿素及其衍生物对非小细胞肺癌细胞株A549的放射增敏作用,发现青蒿琥酯具有较强放射增敏效应;采用裸鼠移植瘤模型,观察青蒿琥酯联合β电子线对荷痛裸鼠移植瘤生长抑制作用。同时采用Giemsa染色、流式细胞术,观察青蒿琥酯联合电子线对A549细胞的形态学变化以及细胞周期、凋亡的影响,初步探讨青蒿琥酯联合电子线对肿瘤细胞A549的放射增敏作用机制。结果MTT法得到青蒿素及其衍生物对非小细胞肺癌A549细胞生长抑制的IC10,以IC10为剂量参考,发现青蒿琥酯、双氢青蒿素具有放射增敏效应：联合射线后20rtM和40州的青蒿琥酯对A549细胞有生长抑制作用（p〈0．05）并呈一定量效关系,10μM、20μM和40μM的双氧青蒿素也有一定放射增敏作用（p〈0．05）。体内移植瘤实验结果表明青蒿琥酯（30mg／kg）可显著增加荷瘤裸鼠肿瘤组织B放射线的敏感性,肿瘤生长抑制率达50．90％。体外Giemsa染色结果表明,80μM的青蒿琥酯可以引起A549细胞出现显著的凋亡形态学变化;流式细胞术结果提示,20μM青蒿琥酯可将A549细胞周期阻滞于G2仃订期;凋亡结果分析,20μM青蒿琥酯联合放射线不引起A549细胞凋亡。结论青蒿素衍生物中双氢青蒿素、青蒿琥酯对A549细胞有一定的放射增敏作用。青蒿琥酯联合放射线在体内、外实验中均表现出较强的放射增敏效应,其放射增敏作用机制可能与青蒿琥酯的过氧桥断裂,产生自由基导致细胞周期的延迟以及诱导细胞凋亡相关,其具体机制与青蒿琥酯剂量之间的联系有待进一步研究。     

青蒿琥酯及注射用青蒿琥酯中有关物质的HPLC测定

建立了反相高效液相色谱法测定青蒿琥酯及注射用青蒿琥酯中杂质二氢青蒿素及其它有关物质.采用Kromasil C18色谱柱,以乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 3.0)(1:1)为流动相,流速0.8ml/min,检测波长210nm.二氢青蒿素在6～60μg/m1浓度范围内,线性关系良好(r=0.9999).稳定性试验结果显示,样品溶液配制后须立即进样.     

青蒿琥酯对人大肠癌Lovo细胞侵袭影响的初步研究

目的观察青蒿琥酯对大肠癌细胞的侵袭作用,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯(20、80、160μmol·L-1)作用于人大肠癌Lovo细胞,软琼脂集落形成实验检测青蒿琥酯对Lovo细胞锚着不依赖性增殖的影响;Transwell侵袭实验检测其对Lovo细胞侵袭的影响;Western blot方法分别检测Lovo细胞内HMGB1和MMP-2蛋白质水平的表达情况。结果青蒿琥酯能有效抑制Lovo细胞的增殖和侵袭能力,且呈剂量依赖性(P<0.01)。与对照组相比,不同浓度青蒿琥酯处理组HMGB1和MMP-2蛋白表达逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论青蒿琥酯可明显抑制大肠癌Lovo细胞侵袭,其机制可能与抑制HMGB1蛋白,下调MMP-2表达有关。     

HPLC法测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质

目的建立草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质测定方法。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱：Hy-persilBDSCg-15（4．6mmx250mm,5μm）;柱温：25℃;流动相：O．05mol／L乙酸钠（用磷酸调节pH=4．0）-乙腈（40：60）,流速：1．0mL／min;检测波长：283nm;进样量：20μL。结果草酸萘呋胺酯与杂质能完全分离,草酸萘呋胺酯最小检测限为3ng。结论该方法灵敏、专属,可用于草酸萘呋胺酯包衣微丸有关物质的检查。     

高效液相色谱法同时测定乐舒洗液中黄柏碱和小檗碱含量

目的建立测定乐舒洗液中黄柏碱和小檗碱含量的高效液相色谱法。方法采用SPD-20AC18（250mm×4．6mm,5．0μm）为色谱柱,柱温为30℃,流动相为乙腈（A）-磷酸调pH=3．95的0．2％三乙胺（B）梯度洗脱,流速为1．0mL／min,检测波长为284nm。结果黄柏碱的质量浓度在6．3—201．6μg／mL范围内与峰面积线性关系良好,小檗碱的质量浓度在12．6～403．1μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。黄柏碱的平均加样回收率为100．63％,RSD为3．16％（n=9）;小檗碱的平均加样回收率为98．37％,RSD为1．50％（n=9）。结论所用方法操作简单,结果准确,可用于乐舒洗液的质量控制。     

高效液相色谱法测定甘芍颗粒中甘草苷和甘草酸的含量

目的建立甘芍颗粒中甘草苷和甘草酸的含量测定方法。方法色谱柱为KromasilC18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈和磷酸盐溶液,梯度洗脱,流速为1 mL min-1,柱温为25℃,检测波长为237 nm,样品用甲醇超声提取后进样分析。结果甘草苷在0.02～0.18μg与峰面积线性关系良好（r=0.9997）,甘草酸铵在0.02～0.4μg（甘草酸在0.019 6～0.391 9μg,甘草酸量=甘草酸铵重量/1.020 7）与峰面积线性关系良好（r=1.000 0）;平均回收率101.8%。结论本方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,可用于甘芍颗粒中甘草苷和甘草酸铵的含量测定。     

高效液相色谱梯度洗脱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1含量

目的 采用高效液相色谱梯度洗脱法测定三七总皂苷中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量。方法 色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm,3.5μm）,流动相为乙腈-水、梯度洗脱,检测波长为203nm,流速1.0 mL/min,柱温为室温。结果 人参皂苷Rg1进样量线性范围是6.0~18μg（r=0.996 7）,平均回收率为98.79%,RSD=0.33%（n=6）;人参皂苷Rb1进样量线性范围是6.0~18μg（r=0.996 4）,平均回收率为98.64%,RSD=0.46%（n=6）;三七皂苷R1进样量线性范围是1.6~4.8μg（r=0.997 1）,平均回收率为98.84%,RSD=0.56%（n=6）。结论 该方法准确、灵敏度高,可用于三七总皂苷的质量控制。     

高效液相色谱法测定三七血伤宁散中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的含量

目的建立高效液相色谱法测定三七血伤宁散中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。方法采用色谱柱ODSHypersil C18柱（4．6mm×250mm,5μm）,以乙腈（A）-水（B）为流动相,进行梯度洗脱（0～25min,20％A,25-75min,20％～35％A）,流速：1．0mL·min^-1,柱温：35℃,检测波长：203nm。结果三七皂苷R1在0．225-5．625μg与峰面积线性关系良好,r=1．0000,平均加样回收率为100．06％,人参皂苷Rg1在2．076=20．76μg与峰面积线性关系良好,r=0．9997,平均加样回收率为99．92％,人参皂苷Rb1在2．056～20．56魑与峰面积线性关系良好,r=0．9998,平均加样回收率为96．91％。结论本法准确可靠、灵敏度高、重现性好,可作为该产品质量控制的方法。     

恩替卡韦联合康艾注射液治疗HBV相关性中晚期肝癌的疗效分析

目的建立RP-HPLC法同时测定丹灯通脑软胶囊中葛根素和阿魏酸的含量。方法采用Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈、0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速:1.0 mL.min-1,检测波长:318 nm,柱温:35℃。结果葛根素和阿魏酸分别在21.0～210.0 mg.L-1(r=0.999 7,n=6);2.6～26.0 mg.L-1(r=0.999 8,n=6)浓度范围内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率(n=9)分别为99.0%(RSD=1.6%)和98.7%(RSD=1.9%)。结论该测定方法简便、快捷、准确,为测定丹灯通脑软胶囊中葛根素和阿魏酸的含量提供了准确可靠的分析方法。     

高效液相色谱法与紫外光谱法测定索拉非尼原料药含量的比较

目的 分别采用高效液相色谱(HPLC)法与紫外分光光度(UV)法对相同批号的索拉非尼原料药进行含量测定并进行比较.方法 高效液相色谱法中,色谱柱为Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙酸铵缓冲液(50 mmol/L)-乙腈(28:72),检测波长为265 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为40℃,进样量为50μL.紫外分光光度法中,索拉非尼原料药样品溶液用甲醇配制,在265 mm波长处进行测定.结果 高效液相色谱法测得索拉非尼进样质量浓度在0.5～40 μg/mL(r=0.99999)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为102.92%,RSD=1.30%(n=9).紫外分光光度法测得索拉非尼进样质量浓度线性范围是0.1～20 μg/mL(r=0.999 9).紫外分光光度法含量测定结果比高效液相色谱法平均高出1.067倍.结论 紫外分光光度法不适用于准确测定索拉非尼原料药的含量.高效液相色谱法的专属性好、稳定性、精密度以及加样回收率都较好,适用于索拉非尼原料药含量的准确测定.     

HPLC法测定枸磺新啶片中枸橼酸喷托维林和盐酸溴己新含量

目的建立HPLC法测定枸磺新啶片中枸橼酸喷托维林和盐酸溴己新含量。方法色谱柱为Inertsil ODS-3(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为10 mL.L-1磷酸溶液-10 mL·L-1三乙胺溶液-乙腈(35∶35∶30);检测波长:215 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:35℃,进样量:20μL。结果线性范围分别为质量浓度73.8~172.2μg·mL-1(r=0.999 9)和51.1~119.3μg·mL-1(r=0.999 8),平均回收率分别为99.5%(RSD=0.5%)和100.2%(RSD=0.4%)。结论方法简便、准确、专属性强,可用于枸磺新啶片的质量控制。     

RP-HPLC法测定变通丸中盐酸小檗碱的含量

目的:建立测定变通丸中盐酸小檗碱含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为SunFireTMC18(250mm×4.6mmi.d.,5μm),流动相为1.5mmo·lL-1十二烷基硫酸钠溶液(以磷酸调pH5.0)-乙腈(梯度洗脱),流速为0.8mL·min-1,柱温为25℃,检测波长为265nm。结果:盐酸小檗碱的质量浓度在60.8～304.0μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;平均加样回收率为97.59%,RSD=1.34%(n=6)。结论:本法简便、快速、重复性好,结果准确、可靠,可作为变通丸中盐酸小檗碱含量测定的方法。     

HPLC法测定丹红注射液中丹酚酸B和迷迭香酸的含量

目的测定丹红注射液中丹酚酸B和迷迭香酸的含量,为该品种质量标准提高及产品质量评价提供试验依据。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱;流速为1 mL.min-1;检测波长为286 nm。结果丹酚酸B进样在0.179 6~2.155 2μg间线性关系良好,加样回收率为100.42%(n=6);迷迭香酸进样在0.133 6~0.801 6μg间线性关系良好,加样回收率为99.27%(n=6)。结论该方法简便、准确、可靠,可用于标准提高,测定数据可作为质量评价依据。     

高效液相色谱法测定补骨胶囊中补骨脂素的含量

目的：建立补骨胶囊中补骨脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱：Hypersil ODS柱（250 mm×4.6mm,5μm）;流动相∶甲醇-水（6∶7）;流速：1.0 mL.m in-1;检测波长295 nm;柱温：30℃;进量样：20μL。结果：空白试验阴性无干扰,平均回收率为98.12%,RSD=1.9%。结论：本法简便、准确、重现性好,可作为补骨脂胶囊的质量控制方法。