六神丸逆转白血病细胞多药耐药作用及相关机制研究

[目的]探讨六神丸逆转白血病细胞多药耐药作用及相关机制。[方法]对急性白血病患者随机分组后,两组病例均继续常规化疗。治疗组予六神丸,90粒/d,分3次服。观察1个月。治疗前后取患者骨髓,吸取单个核细胞,采用免疫荧光法定量测量P-糖蛋白(P170),计算P170蛋白细胞百分比率;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对患者的拓扑酶Ⅱα(TopoⅡα)、拓扑酶Ⅱβ(TopoⅡβ)基因进行mRNA水平的检测。[结果]治疗前后组内比较,治疗组P170蛋白表达有所下降,对照组有所上升,但均无显著差异(P>0.01);但两组治疗后组间比较,P170阳性表达例数、阳性表达率以及表达指数,治疗组均明显低于对照组,两者有显著性差异(P<0.01)。TopoⅡβ在治疗前后进行组内比较,治疗组有所上升,对照组有所下降,但均无显著差异(P>0.01);两组治疗后进行组间比较,治疗组明显高于对照组,两者有显著性差异(P<0.01)。TopoⅡα在组间和组内比较均无明显差异。[结论]六神丸可以通过降低P170的表达、提高TopoⅡβ的表达来逆转白血病细胞多药耐药。     

急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达及临床意义

（１）目的 探讨急性白血病（ＡＬ）多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因的表达及临床意义。（２）方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,对７７例ＡＬ病人及１０例健康人基因表达进行检测。（３）结果 ７７例ＡＬ病人ＭＲＰ平均表达水平与对照组比较差异无显著性,复发组ＭＲＰ平均表达水平与初治组比较差异有显著性（ｔ＝５．３２,Ｐ〈０．０１）。（４）结论 ＡＬ的复发与ＭＲＰ表达有关,ＭＲＰ基因的过度表     

中药逆转白血病细胞多药耐药的研究进展

白血病多药耐药是导致化疗失败的主要原因,其机制主要与膜转运蛋白、酶转移系统及抗凋亡通路激活和抗凋亡基因表达等有关。由于西药逆转剂有很强的毒副作用,因此,从中药复方中寻找高效、低毒、多靶点的多药耐药逆转剂已成为当今的一个热点。本文对近年来有关中药逆转白血病细胞多药耐药方面的研究做一综述。     

白血病细胞耐药机理及耐药逆转

联合化疗使初治白血病的完全缓解率达到80％～90％．但取得缓解的患者半数以上在3年内复发，其二次完全缓解率仅为20％～50％。是导致白血病患者死亡的一个重要原因，导致部分初治病例(10%～20％)或复治病例(50％～80％)不能取得完全缓解的重要因素是白血病细胞对肿瘤抗生素的耐药。能否使耐药白血病细胞恢复对肿瘤抗生素的药物敏感性是决定难治与复发性白血病治疗效果的关键之一。     

白血病多药耐药逆转研究现状

化学治疗是白血病重要的治疗手段之一。近年来新的化疗药物不断涌现 ,化疗方案不断更新 ,然而白血病总的完全缓解率和长期生存率仍然低下 ,就其原因 ,主要是白血病细胞对化疗药物的多药耐药 (MDR)。作者就逆转白血病MDR方法的最新进展作一综述。     

中医药逆转白血病多药耐药的机制探微

白血病多药耐药是白血病细胞同时对多种结构和不同作用机制的抗肿瘤药物产生耐受,即白血病细胞对细胞毒药物失去敏感性,限制了抗肿瘤药物的疗效,是白血病化疗失败和复发的主要原因。总结和反思既往中医治疗白血病的经验,提高难治性白血病的缓解率,主要有以下几点：准确辨证,治贵精专;辨病辨证相结合;提高用药的针对性;中西结合,优势互补。在临床上,以毒蕴血瘀作为理论依据,以解毒化瘀立法,辅以辛温、破血行气、活血通络、活血化瘀等药物,一寒一温,一阴一阳,升降相因,异性相制,相反相成,主攻明确,药少而专。灵活加减,补阙创新．在初步临床实践和体外耐药逆转卖验中取得良好疗神．     

复发及难治急性髓细胞白血病病人多药耐药基因检测及意义

目的研究复发及难治急性髓细胞白血病（AML）病人多药耐药基因（mdr1）的表达及其与临床疗效的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测65例AML病人（其中初诊组38例,完全缓解组14例,复发难治组13例）、27例非白血病病人和健康人（包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例）mdr1基因的表达水平,并分析其临床意义。结果AML病人mdr1基因表达阳性率高于对照组,复发难治组mdr1基因表达阳性率高于初诊组和完全缓解组,临床耐药组mdr1基因表达阳性率显著高于非临床耐药组,CR率非临床耐药组显著高于临床耐药组,差异均有显著性（χ^2=8.334～49.630,P〈0.01）。结论mdr1基因阳性表达与AML病人临床耐药密切相关,是影响预后的重要因素,可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。     

六神丸逆转白血病细胞多药耐药作用及相关机制研究*

【目的】探讨六神丸逆转白血病细胞多药耐药作用及相关机制。【方法】对急性白血病患者随机分组后，两组病例均继续常规化疗。治疗组予六神丸，90粒／d，分3次服。观察1个月。治疗前后取患者骨髓，吸取单个核细胞，采用免疫荧光法定量测量P-糖蛋白（P170），计算P170蛋白细胞百分比率；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对患者的拓扑酶Ⅱα（TopoⅡα）、拓扑酶Ⅱβ（TopoⅡβ）基因进行mRNA水平的检测。【结果】治疗前后组内比较，治疗组Pn170蛋白表达有所下降，对照组有所上升，但均无显著差异（P〉0．01）；但两组治疗后组间比较，Pno阳性表达例数、阳性表达率以及表达指数，治疗组均明显低于对照组，两者有显著性差异（P〈0．01）。TopoⅡβ在治疗前后进行组内比较，治疗组有所上升，对照组有所下降，但均无显著差异（P〉0．01）；两组治疗后进行组间比较，治疗组明显高于对照组，两者有显著性差异（P〈O．01）。TopoⅡα在组间和组内比较均无明显差异。【结论】六神丸可以通过降低P170的表达、提高TopoⅡβ的表达来逆转白血病细胞多药耐药。     

肺耐药相关蛋白与白血病细胞多药耐药研究进展

肺耐药相关蛋白（LRP）是人类的穹隆体主蛋白（MVP）,可在正常细胞和包括白血病细胞在内的多种肿瘤细胞中表达。LRP可通过阻止化疗药物进入胞棱以及胞吐机制将化疗药物排出胞外,降低核内和胞内药物浓度而诱导白血病细胞的多药耐药。检测白血病细胞LRP的表达情况,对预测临床疗效具有一定的参考价值。     

中医药逆转白血病多药耐药细胞的研究进展

白血病细胞的多药耐药（Multidrug resistance,MDR）是指白血病细胞同时对多种结构和不同作用机制的抗肿瘤药物产生耐受,即白血病细胞对细胞毒药物失去敏感性,限制了抗肿瘤药物的疗效,是白血病化疗失败和复发的主要原因。如何逆转多药耐药,提高难治性白血病的疗效是近年来白血病研究的热点。为了寻找有效逆转MDR的药物,许多学者进行了广泛的研究,异搏定、环孢霉素A等化学致敏剂虽有逆转MDR的功效,     

Reversal effect of bufalin on multidrug resistance in K562/VCR vincristine-resistant leukemia cell line

ObjectiveTo probe insights into the reversal effect of bufalin on vincristine-acquired multidrug resistance (MDR) in human leukemia cell line K562/VCR.MethodsProliferative inhibition rate and the reversal index (RI) of bufalin were determined by Methyl thiazolyl tetrazolium assay. The uptake of Adriamycin (ADM) in K562/VCR cells, cell cycle and apoptosis rate were determined by flow cytometry (FCM). Cell morphologic changes were observed with Wright-Giemsa staining. The expression of P-glycoprotein (P-gp), multidrug-associated protein-1 (MRP1), Bcl-xL and Bax protein were measured by immunocytochemistry.ResultsThe human leukemia multidrug resistant K562/VCR cells showed no cross-resistance to bufalin. The RIs of bufalin at concentrations of 0.0002, 0.001 and 0.005 μmol/L were 4.85, 6.94 and 14.77, respectively. Preincubation of 0.001 μmol/L bufalin for 2 h could increase intracellular ADM fluorescence intensity to 28.07% (P<0.05) and down-regulate MRP1 expression simultaneously, but no remarkable effect was found on P-gp protein. Cell cycle analysis indicated increased apoptosis rate and apparent decreased G2/M phase proportion after treatment with bufalin. When exposed to 0.01 μmol/L bufalin, typical morphological changes of apoptosis could be observed. Down-regulation of Bcl-xL and up-regulation of Bax expression in K562/VCR cells could be detected by immunocytochemistry.ConclusionBufalin could partly reverse the MDR of K562/VCR cells, with a possible mechanism of down-regulating MRP1 expression and activating apoptosis pathway by altering Bcl-xL/Bax ratio.     

MCF-7/BCRP细胞系的建立及其生物学特征

目的：建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7／BCRP。方法：提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达栽体pcDNA3．1(-)上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系。结果：MCF-7／BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14．72：外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长：MCF-7／BCRP细胞能表达一定量的BCRP。结论：MCF-7／BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型。     

人参皂甙Rg3对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP逆转作用及其机理的研究

目的探讨人参皂甙Rg3对耐顺铂(CDDP)人肺腺癌细胞系A549DDP的逆转作用及其机理.方法以A549DDP及其亲本细胞A549为研究对象,MTT法观察Rg3对A549DDP耐药的逆转作用,采用免疫组化及RT-PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测耐药相关蛋白MDR1、MRP、LRP表达.结果 MTT法显示低细胞毒浓度Rg3(10 μmol)有效逆转A549DDP细胞耐药7.3倍,而20、30 μmol Rg3分别逆转耐药1.3、1.2倍;10 μmol Rg3预处理A549DDP细胞12、24、36及48 h后分别逆转耐药1.0、1.6、7.6及10.4倍,表明Rg3逆转耐药呈时间依赖性.免疫组化和RT-PCR显示:A549DDP细胞MDR1、MRP、LRP呈过量表达,以Rg3(10 μmol)预处理A549DDP 12、24、36及48 h后,MDR1、MRP表达减弱,呈时间依赖性,而LRP表达无明显时间依赖性.结论 Rg3具有中度逆转肿瘤耐药作用,并呈时间依赖性.     

重组人肿瘤坏死因子诱导HL－60白血病细胞分化及调控原癌基因表达的作用

采用２０～２００Ｕ／ｍｌ的重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）处理体外液相培养的人早幼粒白血病细胞珠ＨＬ－６０，观察到５０～２００Ｕ／ｍｌ的小剂量ＴＮＦ具有诱导其向单核－巨噬细胞途径分化及抑制其增殖的效应。采用细胞总ＲＮＡ打点杂交技术检测１～１００Ｕ／ｍｌＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞早期（１２小时内）对其ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响，发现ＴＮＦ可抑制ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平及ｃ－ｆｏｓ短暂性表达增高。结果表明此小剂量ｒｈＴＮＦ－α具有诱导白血病细胞分化的效应及调控多癌基因表达的作用。     

朊蛋白在耐阿霉素胃癌细胞系SGC7901/ADR中的过表达及其意义

目的 探讨朊蛋白(PrP)在耐阿霉素胃癌细胞系SGC7901/ADR中过表达及其与胃癌多药耐药性的相关性。方法(1)利用Northern印迹和Western印迹分别从RNA 水平和蛋白质水平检测朊蛋白在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR及其亲本细胞SGC7901中的表达;(2)借助DNA重组技术构建朊蛋白基因的正反义真核表达载体;(3)通过电穿孔方法将正反义真核表达载体分别转入SGC7901和SGC7901/ADR细胞;(4)以流式细胞仪检测瞬时转染细胞中的阿霉素蓄积和潴留。结果(1)Northern印迹和Western印迹结果提示朊蛋白在SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达显著高于其在SGC7901中的表达;(2)将正反义真核表达载体转入SGC7901(命名为PS)和SGC7901/ADR(命名为PA)中,PCDNA3.1空载体转入SGC7901(命名为BS)和SGC7901/ADR(命名为BA);转染48h后检测转染细胞的平均阿霉素荧光强度,阿霉素蓄积BS为8.9±0.7,PS为6.6±0.3,BA为5.5±0.7,PA7.5±0.6,阿霉素潴留BS为8.0±0.7,PS为5.9±0.5,BA5.1±0.7,PA为7.1±0.5,PS与BS相比两组均为P<0.01,BA与BA相比均为P<0.01表达,并对胃癌细胞,具有统计学意义。结论 朊蛋白在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中高表达并对胃癌细胞的药物蓄积有影响。     

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的] 探讨苦参碱对人白血病K562／ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。[方法] MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K562／ADM细胞药敏性的影响,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。[结果] 苦参碱的非细胞毒性剂量为50μg／mL,低细胞毒性剂量为125μg／mL。50μg／mL苦参碱可增加K562／ADM细胞内阿霉素(ADM)浓度和K562／ADM细胞凋亡百分率,使K562／ADM细胞的IC50由原来的35．2μg／mL降低至15．8μg／mL,其逆转倍数为2．2倍。[结论] 苦参碱可部分逆转人白血病K562／ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。     

脉冲磁场对多药耐药细胞K562/ADR的逆转作用

目的:研究脉冲磁场(PMF)对多药耐药(MDR)肿瘤细胞K562/ADR的逆转作用及机制。方法:MTT法测定敏感株K562/S和耐药株K562/ADR对多柔比星(ADR)的IC50,观察PMF对肿瘤细胞增殖的影响。测定不同频率PMF照射的K562/ADR耐药细胞株对ADR的IC50,分析PMF的逆转效果。用流式细胞术(FCM)检测细胞内ADR的浓度。结果:K562/ADR细胞的耐药倍数为29.36,PMF对耐药株肿瘤细胞增殖无影响。相同磁场强度、不同频率的PMF对耐药株K562/ADR的IC50影响不同,在相同的时间里,70 Hz的PMF影响作用最明显。70 HzPMF处理的K562/ADR细胞中药物浓度高于对照组。结论:PMF可通过提高细胞内的药物浓度,对肿瘤细胞K562/ADR的MDR具有逆转作用;逆转作用的大小与脉冲磁场的频率有关,低频率的PMF比高频率的PMF的逆转效果更明显。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

人红白血病细胞株c-myc/N-ras/P_(53)mRNA的表达及其与细胞生物学特性的关系

本实验用一定浓度的苦参碱作用Ｋ５６２细胞１６ｈ, ２４ｈ,４８ｈ,采用分子生物学Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术分析ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ及Ｐ５３ ｍＲＮＡ在Ｋ５６２细胞诱导分化过程中表达水平改变,以探讨其表达水平与细胞生物学特性的关系。结果显示苦参碱作用Ｋ５６２细胞２４ｈ时,Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ表达活化;Ｐ５３－基因表达增强：作用４８ｈ时,ｃ－ｍｙｃ　ｍＲＮＡ水平表达明显受抑。说明苦参碱在诱导Ｋ５６２细胞分化启动时,能明显改变早期相关癌基因的表达。提示ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ和Ｐ５３等癌基因是一类重要的细胞增殖、分化调控因素。     

IL—4基因修饰对HL—60及其诱导人PBMC增殖反应的影响

为探讨人白细胞介素４（ｈＩＬ－４）ｃＤＮＡ修饰对人髓系白血病株ＨＬ－６０细胞体外生物学特性的影响，构建了ｈＩＬ－４重组逆录病毒载全。用脂质体转染法将其导入包装细胞获高效价病毒上清，用其感染ＨＬ－６０细胞株并筛竿了ＨＩＬ－４高表达克克隆５株，用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测其增殖反应及其讫地的正常人ＰＢＭＣ增殖反应。结果显示，ＩＬ－４同表达克隆体外增殖反应明显强于低表达克隆；丝裂线素处理后，前者诱导的正常