bFGF对神经干细胞分化为星形胶质细胞的影响

 目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成星形胶质细胞亚型的影响。方法：悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞,形成神经球后,以免疫荧光法鉴定神经干细胞。把神经干细胞分为A、B两组,A组加入血清,B组加入血清和bFGF,分化培养7 d后,GFAP抗体标记星形胶质细胞,观察其各亚型的比率和形态特点。结果：神经干细胞分化第7d,A组和B组均形成4种亚型星形胶质细胞,分别为胞体延长型,扁平多角形,星形和双极型。B组中双极型星形胶质细胞的突起长度明显超过A组。结论：bFGF可以显著促进脊髓来源神经干细胞分化成的双极型星形胶质细胞的突起生长。     

星形胶质细胞诱导神经干细胞定向分化试验研究

目的 研究新生SD大鼠星形胶质细胞培养上清液对神经干细胞(neural stem cells，NSCS)体外定向分化的影响，探讨神经干细胞分化条件。方法 收集新生和成年SD大鼠星形胶质细胞培养的上清液，以1：3比例同DMEM／F12培基混合，分别对胎鼠来源的神经干细胞进行诱导分化，倒置相差显微境下观察细胞的生长情况。并采用免疫荧光检测方法对分化细胞鉴定和计数。结果 新生鼠星形胶质细胞培养上清液与DMEM／F12的混合培基诱导神经干细胞分化为神经元的比例明显提高。结论 新生鼠星形神经胶质细胞能促使神经干细胞向神经元方向分化。     

星形胶质细胞条件培养液影响神经干细胞突触形成的神经营养机制探讨

目的 探讨神经营养素家族蛋白[包括脑源性神经营养因子(BDNF),神经生长因子(NGF),神经营养素-3(NT-3)]是否参与星形胶质细胞条件培养液(ACM)影响神经干细胞(NSC)突触形成的过程.方法 实验分两步,(1)PC12细胞分别经10μg/ Aβ1-4诱导不同时间点(0、4、612、24 h)后分为两部分,一部分应用流式细胞技术检测不同时间点PC12细胞凋亡率,另一部分别与星形胶质细胞共育2 d,将收集的ACM分为两部分,一部分应用ELISA法检测ACM中的BDNF、NGF、NT-3蛋白含量.(2)将另一部分ACM以1:3比例同DMEM/F12培养基混合,分别对胚胎大鼠皮质神经干细胞进行诱导分化,激光共聚焦扫描显微镜观察突触素和生长相关蛋白-43(GAP-43)表达,透射电镜观察成熟突触结构数目.结果 在AB1-40作用6 h时间点,PC12细胞凋亡率达高峰(P<0.05);星形胶质细胞与Aβ1-40诱导6 h后的PC12细胞共育2 d后,收集到ACM中的BDNF蛋白总量(A值=1.53±0.25)明显增高(P<0.05),并且收集到的ACM诱导神经干细胞突触素(A值=33.39 4±2.71)、GAP-43(A值=49.18±6.45)表达明显升高、成熟突触结构数目(4.70±0.52个/视野)明显增多,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 星形胶质细胞与AB1-40枷诱导凋亡的PCI2细胞共育后,ACM提高了神经干细胞突触形成,ACM中BDNF可能参与了这一过程.     

瘦素对STAT3信号的调节在小鼠神经干细胞向星形胶质细胞分化中的作用

目的 研究瘦素（Leptin）对神经干细胞的诱导分化作用并分析其分子机制。 方法 将胚胎小鼠神经干细胞与Leptin共培养,设立Leptin浓度梯度（0、0.05、0.2、0.5、1、2 mg/L）,分析Leptin对神经干细胞的诱导分化作用,并用Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活子3（Jak-STAT3）信号通路与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3k-Akt)信号通路抑制剂（10 μmol/L）处理细胞,利用Western blot及免疫荧光检测下游蛋白分子非磷酸化STAT3、磷酸化STAT3、非磷酸化Akt、磷酸化Akt及星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。 结果 荧光免疫显示2 mg/L Leptin组80%表达GFAP,Western blot分析发现0.5、1、2 mg/L Leptin组GFAP的表达较0 mg/L Leptin组增加（P<0.05）。与0 h相比,2 mg/L Leptin共培养后24 h后GFAP表达开始随时间增长而增加,7 d达高峰（P<0.05）。加入STAT3抑制剂的神经干细胞磷酸化STAT3表达减少,GFAP表达减少;加入Akt抑制剂的神经干细胞,磷酸化Akt表达量减少,但GFAP表达量未减少。 结论 Leptin或可通过激活STAT3而非活化PI3k-Akt信号通路,诱导神经干细胞向星形胶质细胞分化。     

星形胶质细胞通过激活PKA信号通路在神经干细胞增殖、分化中的作用

目的:研究星形胶质细胞(Astrocyte,AS)对PKA信号通路的激活在神经干细胞(Neural stem cell,NSC)增殖、分化中的调节作用.方法:取孕13 d胎鼠大脑皮层分散培养NSC,应用AS培养上清刺激NSC,以及应用PKA受体拮抗剂H89预处理大脑皮层NSC后,用Western blot方法测定NSC内PKA、nestin、NSF的含量变化.采用MTT测量和分析AS对培养的NSC增殖和定向分化的影响.结果:正常对照组的NSCNSF含量较低,AS刺激后,nestin含量迅速降低,而NSF的含量则逐渐升高;H89(15 μmol/L)可明显抑制AS刺激NSC后NSF含量的增加.结论:AS可通过激活NSCPKA信号通路,促进NSC增殖和分化.     

睫状神经营养因子对星形胶质细胞细胞周期的影响

目的探讨睫状神经营养因子（CNTF）在有血清培养和无血清培养的情况下，对星形胶质细胞分化和增殖的影响。方法将纯化的星形胶质细胞分为有血清培养和无血清培养组，根据CNTF剂量不同，每组再分别分为0、2、20、200ng／ml 4个亚组（共8个亚组）。每个亚组分别在6、12和24h取材，应用流式细胞术检测星形胶质细胞在各细胞周期时相中的百分比。结果CNTF使无血清培养组的星形胶质细胞处于G0／G1期的细胞百分比上升，而使有血清培养组的星形胶质细胞处于G0／G1期的细胞百分比下降。结论无血清培养时CNTF可以刺激星形胶质细胞分化进入活化状态，但不刺激其增殖；有血清培养时CNTF可以协助血清中的丝裂原引起星形胶质细胞增殖。     

丙泊酚对新生小鼠海马星形胶质细胞和小胶质细胞的影响

目的：观察丙泊酚麻醉对新生小鼠海马星形胶质细胞（AST）和小胶质细胞的影响。方法将健康同窝日龄7d（P7）C57小鼠15只,随机分为丙泊酚高剂量组、低剂量组和10％脂肪乳对照组,每组5只,所有小鼠从P7开始接受药物处理。高、低剂量组分别腹腔注射丙泊酚60、30mg／kg;对照组腹腔注射同等体积的10％脂肪乳。药物处理24h后取材,采用免疫组化方法检测AST标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）与小胶质细胞标记物离子钙接头分子（Iba1）在海马内的表达。结果丙泊酚高剂量组小鼠海马齿状回分子层中GFAP标记的AST数量较对照组明显减少（P＜0．01）,低剂量丙泊酚对新生鼠海马中AST数量无显著影响;高剂量和低剂量丙泊酚均显著性降低海马小胶质细胞数量（P＜0．01）。结论丙泊酚抑制新生小鼠海马AST和小胶质细胞的发育,且存在剂量依赖关系。     

星形胶质细胞中LXRβ缺失对生后早期海马神经发生的影响

目的 研究星形胶质细胞中特异性敲除LXRβ对生后早期海马神经发生的影响.方法 使用Cre/LoxP系统构建星形胶质细胞中特异性LXRβ敲除小鼠.实验分为:对照组(LXRβfl/fl,n=3)和星形胶质细胞中特异性LXRβ敲除组(LXRβ cKOGFAP,n=3).生后7 d(postnatal day 7,P7),小鼠...     

亚低温对星形胶质细胞trkB受体表达的影响

亚低温对多种形式的中枢神经损伤均存在预防和保护作用 ,但机制尚不明确。目前认为与低温保护作用有关的因素包括降低代谢率、减少离子流动、降低血管通透性和水肿 ,以及保护血脑屏障等 ,从生物物理的角度进行探讨不足以解释亚低温对中枢神经损伤的显著保护作用。由于神经营养因子及其受体在中枢神经损伤事件中对损伤的促修复和保护作用 ,作者利用体外细胞培养和免疫组化的方法检测亚低温对星形胶质细胞中ＮＴ 3受体ｔｒｋＢ表达的影响 ,试图从生物化学的角度探讨亚低温对神经系统保护作用的机制 ,为亚低温在临床的推广应用提供理论依据。1…     

星形胶质细胞上的清道夫受体与神经炎症的关系

在神经退行性疾病的发生与发展中,脑中始终存在着以胶质细胞激活为主要特征的炎症反应。星形胶质细胞作为脑中最丰富的神经胶质细胞群,可分泌大量的促炎因子和抑炎因子,在中枢神经系统的炎症反应中发挥着至关重要的调节作用。星形胶质细胞表达有多种模式识别受体参与炎症反应,清道夫受体是其中重要的一种。清道夫受体是一种细胞表面糖蛋白,能够识别广泛而多样的配基,具有多种生物学功能,对星形胶质细胞上多个与炎症相关的信号通路的激活具有重要影响,可产生宿主防御和促进炎症等多种作用,进而参与了星形胶质细胞对神经炎症的调节,在神经退行性疾病等多种疾病的发生发展中起着重要作用。本文主要介绍了在星形胶质细胞上表达的几种清道夫受体及其功能,详细总结了这些清道夫受体如何调控与炎症相关的信号转导通路,进而参与星形胶质细胞对于神经炎症的调节。     

神经干细胞分化过程中NgR表达的变化

目的 检测大鼠脊髓来源神经干细胞分化过程中NgR的表达情况.方法 悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞,形成神经球后,以免疫荧光法鉴定神经干细胞,检测神经球及其分化后不同时间点、不同细胞亚型的NgR表达情况.结果 神经干细胞分化前和分化第1天所有细胞都显著表达NgR,NgR表达阳性率在分化第2天降至82.1%±4.14%,分化第3天降至最低点35.3%±4.31%.分化后形成的细胞中只有神经元和少量未分化细胞表达NgR,星形胶质细胞和少突胶质细胞不表达NgR.结论 在神经干细胞分化成星形胶质细胞和少突胶质细胞的过程中NgR基因表达被关闭,而在其分化成神经元的过程中则始终表达NgR.     

大鼠脊髓来源神经干细胞NgR的表达

目的：检测大鼠脊髓来源神经干细胞Nogo-66受体（NgR）是否表达。方法：悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞，形成神经球后，以免疫荧光法鉴定神经干细胞并检测NgR的表达情况。结果：神经球及单个神经干细胞均显著表达NgR。结论：NgR在脊髓神经发育的干细胞阶段即开始表达。     

Nogo-66抑制神经元神经突生长的研究

目的 观察在神经干细胞分化过程中Nogo-66对神经元神经突生长是否存在抑制作用.方法 体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,在神经干细胞分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-p4,NSE抗体免疫荧光标记神经元,使用Image-Pro Plus 5.0软件测量神经突长度.结果 对照组神经干细胞分化第3天神经元神经突长度为(97.80±6.97)μm/cell,加入Nogo-p4的实验组神经元神经突长度为(80.54±6.75)μm/cell.实验组和对照组神经元神经突长度差异有显著性,P＜0.01.实验组神经元神经突长度较对照组缩短约17%.结论 Nogo-66对神经干细胞分化过程中形成的神经元具有神经突生长抑制作用.     

神经胶质细胞对神经干细胞增殖和分化影响的研究进展

神经干细胞具有自我更新和多项分化的潜能,在体内外不同的微环境下分化为神经元的比例和种类不同.神经胶质细胞广泛分布于中枢神经系统,为决定神经干细胞增殖、分化和存活的微环境起着至关重要的作用.近年来,研究发现嗅鞘细胞、雪旺细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞等神经胶质细胞能促进神经干细胞的增殖和分化,并取得了一定的进展.     

激活态雪旺细胞对神经干细胞分化作用的研究

目的探讨激活态雪旺细胞(SCs)对神经干细胞(NSCs)的分化作用。方法取出生24 h内的SD乳鼠脊髓NSCs,分离培养并传至4代。取体重(100±5)g的SD大鼠,结扎右侧坐骨神经,1周后取双侧坐骨神经,左侧提取正常坐骨神经分离培养SCs(普通SCs),右侧提取结扎变性的坐骨神经分离培养SCs(激活态SCs),均采用双酶消化加差速贴壁法。将SCs与NSCs应用Transwell培养皿联合培养,分为三组:A组为激活态SCs与NSCs;B组为普通SCs与NSCs;C组仅为NSCs。于培养的第2、4、6天检测各组NSCs活性。1周后,Western blot检测各组SCs表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平,免疫荧光检测各组NSCs分化比例。结果传至4代的NSCs生长稳定,分离的SCs 7 d后大量增殖呈旋涡状。联合培养后MTT法检测细胞活性,第2、4天三组细胞的活性差异无统计学意义(P>0.05),第6天C组活细胞比例开始降低,A、B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot检测A组细胞表皮生长因子(EGF)表达水平(0.486±0.028)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平(0.385±0.023)均高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。MAP-2荧光染色,每高倍视野阳性细胞比例A组[(35.26±2.53)%]高于B组[(27.63±3.45)%],差异有统计学意义(P<0.05);GFAP荧光染色,每高倍视野阳性细胞比例A组[(62.42±3.78)%]低于B组[(70.18±1.26)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活态SCs能够促进NSCs向神经元的分化进程,提高神经元的分化比例。     

胚胎大鼠脊髓源性神经干细胞的分离培养及分化观察

目的：研究脊髓源性神经干细胞的分离、培养、增殖和分化特点。方法：利用无血清培养和细胞克隆培养技术及免疫细胞化学方法，观察脊髓源性神经干细胞的体外扩增和贴壁分化情况。结果：脊髓源性神经干细胞具有增殖能力，并可传代培养，经含血清培养基培养，贴壁可分化为MAP2、GFAP和GC阳性细胞。结论：分离培养的脊髓源性神经干细胞具有增殖能力，并具有多向分化潜能。     

嗅鞘细胞分泌蛋白IGFBP-2对神经干细胞分化的作用

目的:探讨嗅鞘细胞分泌蛋白IGFBP-2在诱导神经干细胞(NSCs)分化过程中的作用.方法:采用新生1 d昆明小鼠嗅球培养嗅鞘细胞(OECs),并制备无血清上清液.C17.2 NSCs置于含10%FBS的DMEM/F12培养基培养,传至第3代,待细胞生长至80%融合时,分别加入OECs无血清上清液(实验组)、H-DMEM/F12培养基(对照组)培养;实验组和对照组均分别加入终浓度为0 ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL的IGFBP-2.倒置显微镜下观察诱导后细胞生长情况,于诱导5d后收集各组细胞,行Western blot检测细胞巢蛋白(Nestin)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)及 β-微管蛋白Ⅲ(TUJ-1),蛋白激酶1/2(ERK 1/2)表达情况,免疫荧光染色鉴定GFAP,TUJ-1阳性细胞并计数,流式分析GFAP,TUJ-1阳性细胞.结果:Western blot、流式分析示对照组中各浓度组GFAP、TUJ-1表达差异无统计学意义;Western blot示实验组随IGFBP-2浓度升高,GFAP表达增多,TUJ-1表达减少,且加入IGFBP-2后ERK1/2表达迅速增多,免疫荧光鉴定表明,随着IGFBP-2浓度升高,GFAP阳性细胞增多,TUJ-1阳性细胞减少,结果有统计学意义.结论:IGFBP-2可以促进OCM诱导NSCs向星形胶质细胞分化,且与浓度呈正相关,其机制与ERK1/2通路有关.     

体外诱导人胚胎干细胞定向分化为神经干细胞

目的:探讨体外定向诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法.方法:模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境,分三阶段诱导hESCs定向生成NSCs.形态学观察结合免疫荧光细胞化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志和神经干细胞标志;NSCs分化实验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测.结果:体外培养的hESCs在胚胎成纤维细胞饲养层上连续传代培养50代,仍保持SSEA-4,TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为83.44%;经三步法最终可诱导形成纯度高达90%以上的nestin阳性细胞,表达nestin基因,流式细胞术检测nestin阳性表达率为89.38%;诱导生成的细胞反复传代,仍表现为nestin阳性,并可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞.结论:模拟体内神经分化过程的三步诱导法,可诱导hESCs生成较高纯度的NSCs,并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力.     

神经干细胞分化及诱导的研究进展

神经干细胞(NSC)的分化及诱导是目前神经科学研究的热点。因其有着巨大的潜在应用价值和重大的理论研究意义，越来越引起学者们的关注。为此，作者从NSC的体内发育、分化开始，到体外培养分化诱导的研究，从内因(基因)和外因(细胞因子、微环境)两个方面对近年来NSC诱导分化研究的一些进展作一综述。     

BDNF对大鼠胚胎神经干细胞诱导分化的影响

【目的】脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠神经干细胞（NSCs）诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的方法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。【结果】在倒置光显微镜下可见细胞接种后5 d形成小细胞球,7 d成为大小不等的细胞克隆。在电镜下可见具有典型的神经干细胞和神经胶质样细胞特征。经BDNF处理7 d后星形胶质样细胞增多,且突起的长度随浓度的增加逐渐延长,尤以40 ng/ml组突起最为显著（P〈0.05）。免疫细胞化学检测GFAP的阳性颗粒位于细胞浆中,经40 ng/mlBDNF诱导后阳性率可达86.1%,与对照组（13.1%）比较有显著性差异。【结论】BDNF可诱导神经干细胞分化为星形胶质细胞。