塞隆骨抗炎作用的实验研究

通过塞隆骨和虎骨抗炎作用对比研究 ,比较二者抗炎效果的异同 ,探讨在抗炎方面塞隆骨代虎骨使用的可能性。采用大鼠佐剂性关节炎原发和继发病变实验 ,皮肤毛细血管渗透性实验和胸膜炎白细胞游走实验。结果 ,塞隆骨和虎骨对大鼠佐剂性关节炎原发病变和继发性病变 (尾结节 ) 均有明显的预防和治疗作用 ,对大鼠皮肤毛细血管渗透性也有明显的抑制作用 ,而且塞隆骨与虎骨还可明显减少胸膜炎大鼠胸腔内渗出液和白细胞数 ,即具有抑制大鼠胸膜炎白细胞游走的作用 ,实验结果中 ,同剂量的塞隆骨相当于虎骨作用强度 ,无显著性差异。塞隆骨和虎骨对多种抗炎实验模型均有明显作用 ,在抗炎作用方面塞隆骨代替虎骨使用是可行的。     

塞隆骨形态鉴别研究

塞隆骨是青藏高原特有的仓鼠科动物高原鼢鼠Myospalax baileyi的干燥全架骨骼,国家食品药品监督管理局一类新药材。在药材检验工作中,缺少高原鼢鼠骨骼形态学研究,难以鉴定塞隆骨。为更好执行并完善塞隆骨质量标准,该文使用啮齿动物学,中国鼢鼠研究文献及药材鉴定学对塞隆骨生药及各部分粉末显微形态特征进行研究,同时对其详细观察、记述并用标号标出特征部位,应用研究结果能够更有效鉴别塞隆骨药材。     

塞隆骨与虎骨中矿物质元素的比较

目的对比分析国家一类动物药塞隆骨和禁用传统中药材虎骨中的19种矿物质元素的含量.方法骨骼样品经灰化或消解处理后,采用原子吸收光谱法、氢化物原子荧光光谱法、催化极谱法等分析方法测定矿物质元素.结果两种动物骨骼中元素含量差异显著,塞隆骨11种元素高于虎骨,特别是Cu、Zn、Fe、Mn、Se等生命活动必需微量元素塞隆骨极为显著地高于虎骨,而组成骨骼的主要成分Ca、P则为虎骨高于塞隆骨.矿物质元素在头骨、脊梁骨和腿骨中分布非常不平衡,多数元素以头骨中分布最为丰富,而5种常量元素Ca,P,Na,Mg,K的含量为腿骨＞头骨＞脊梁骨.骨骼中主要成分Ca和P的存在形式主要为羟磷灰石Ca10(PO4)6(OH)2.结论塞隆骨骨骼中的矿物质元素与虎骨有可比性,必需微量元素塞隆骨明显优于虎骨.     

塞隆骨对大鼠骨质疏松症治疗作用的研究

目的 :通过塞隆骨对大鼠骨质疏松症作用的研究 ,探讨塞隆骨治疗骨质疏松症的可能性。方法 :给大鼠饲喂低钙饲料 ,饮用去离子水 ,并注射地塞米松引起骨质疏松症 ,再灌胃塞隆骨治疗 5周 ,用骨矿物质含量分析仪测定骨密度 ,同时测定羟脯氨酸、骨灰分和骨钙含量 ,并进行骨组织形态学观察。结果 :塞隆骨和虎骨均可明显增加骨质疏松大鼠骨密度 ,尤其对髂骨密度、腰椎密度增加更明显 ,同时也可明显增加骨灰分和骨钙含量 ,另外对骨组织形态学异常也有明显改善作用 ,但对大鼠体重、血清钙和骨羟脯氨酸含量无明显影响。结论 :塞隆骨对骨质疏松模型大鼠的骨质疏松症状 ,具有较好的治疗作用。     

塞隆骨提取物对成骨样细胞增殖及凋亡作用的研究

目的：研究塞隆骨提取物对体外培养成骨样细胞代谢功能的调节作用及对其凋亡的影响。方法：采用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提物、水煎提取液及骨胶提取物,以大鼠成骨样细胞ROS 17/2.8为细胞模型,添加塞隆骨各提取物至大鼠成骨细胞培养体系中,MTT法测定成骨样细胞的增殖情况,以流式细胞术检测成骨样细胞凋亡比例。结果：1×10^-2 g·mL^-1塞隆骨脂和水提物对大鼠成骨样细胞ROS 17/2.8有显著的促进增殖作用(P<0.01)；与空白组相比,各塞隆骨提取物使成骨细胞的亚二倍体峰比例明显减少,琼脂糖凝胶电泳结果表明这些提取物能够降低成骨样细胞的凋亡率,推迟凋亡的发生。结论：塞隆骨通过促进成骨样细胞的增殖,降低成骨样细胞的凋亡率和推迟其凋亡的发生,来发挥健骨的作用。     

塞隆骨提取物对实验性类风湿关节炎的药效学研究

塞隆骨(Myospalax fontanieri),是高原特有动物高原鼢鼠的全骨风干品。是我国建国以来第一个国家级一类动物药材,其性微温、味辛咸,入肝肾经,主要功能为驱风除湿、散寒、舒筋活络、强筋健骨及增强机体抵抗力等。据报道[1,2],塞隆骨具有抗炎镇痛,塞隆风湿酒试验和细胞染色体畸变     

青藏高原地区塞隆骨资源的分子鉴定和地理分布

为了提供塞隆骨药材资源地理分布的准确资料,研究对青藏高原地区的鼢鼠物种进行了分子鉴定。基于线粒体细胞色素B(cytb)基因测序结果,提取单倍型序列,并利用最大似然法(ML)和贝叶斯法(BI)构建系统发育树,以此判定每个个体的物种类型。共对35个种群的503个样品进行了测序,得到了1 140 bp长度的cytb基因全序列,从中检测到150个单倍型。其中有20个单倍型属于甘肃鼢鼠,有4个单倍型属于斯氏鼢鼠构成单系群,其余126个单倍型属于高原鼢鼠。在35个种群中,有28个全部为高原鼢鼠,有5个种群全部为甘肃鼢鼠,另有2个种群分别由高原鼢鼠+甘肃鼢鼠(DT2)、高原鼢鼠+斯氏鼢鼠(ZN3)混合而成。结果表明,青海湖周边地区和黄河贵德段上游附近地区可以作为塞隆骨药材的正宗来源地,而利用cytb基因可以准确鉴定鼢鼠物种,从而精确判定塞隆骨正宗药材资源的地理分布。     

塞隆骨提取物对体外大鼠成骨样细胞ROS17/2.8的影响

目的研究塞隆骨提取物对体外培养大鼠成骨样细胞ROS17/2.8代谢功能的调节作用,从而在细胞水平上阐述塞隆骨防治骨质疏松的作用机制及药效成分的筛选。方法采用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提液及水煎提取液,用MTT法测定塞隆骨脂、醇、水提液及水煎液对成骨样细胞的增殖作用;测定碱性磷酸酶(ALP)活性,观察上述提取液对细胞分化的影响。结果10mg/mL塞隆骨脂提液和水提液对大鼠成骨样细胞ROS17/2.8有显著的增殖作用(P<0.01);ALP检测结果显示,10mg/mL脂提液能极显著增强成骨样细胞内ALP活性(P<0.01),1.0、0.1mg/mL能提高ALP活性(P<0.05);10mg/mL水提液能使ALP活性升高(P<0.05)。结论塞隆骨脂和水提取液中分别存在有较高活性的促成骨样细胞增殖、分化的物质,可作为虎骨的替代中药。     

同仁再造丸抗脑缺血效应机制研究

目的:观察同仁再造丸抗脑缺血的效应机制,为临床合理应用提供基础研究数据。方法:采用小鼠断头急性脑缺血实验和小鼠双侧颈总动脉结扎法,观察再造丸对小鼠急性脑缺血的影响。采用大鼠线栓法、大脑中动脉阻塞(MCAO)脑缺血模型,观察再造丸对大鼠大脑梗死面积、神经功能评分以及MAD、SOD和NO的影响。采用"胶原蛋白-Adr"诱发小鼠体内血栓形成模型观察再造丸对偏瘫形成率和死亡率的影响;采用急性血瘀模型大鼠观察对血液流变学及血小板聚集率的影响,评价药物的活血化瘀作用。结果:再造丸高、中、低剂量组均可增加小鼠断头后急性脑缺血的呼吸次数与呼吸持续时间;再造丸高、中剂量组可延长双侧颈总动脉结扎法小鼠急性脑缺血的存活时间。再造丸可显著减小MCAO大鼠梗死面积;降低缺血后4 h、24 h模型大鼠神经功能行为学评分;各给药组均可显著降低模型大鼠血清MDA含量;再造丸高剂量组可提高MCAO模型大鼠血清SOD活力;再造丸低剂量组可显著升高大鼠血清NO水平。再造丸可减少尾静脉注射"胶原蛋白-Adr"形成体内血栓所致小鼠5 min内的死亡率,提高15 min内的偏瘫恢复率。再造丸可降低血瘀模型大鼠全血血流变切变率,降低ADP诱导的血小板聚集率。结论:再造丸对脑缺血有保护作用,保护机制可能与抗氧化及改善血液流变学相关。     

塞隆骨镇痛作用和对脑内单胺类神经递质的影响

目的 :通过塞隆骨和虎骨镇痛作用对比研究 ,比较二者镇痛效果的差异 ,探讨在镇痛方面塞隆骨替代虎骨使用的可能性。方法 :采用小鼠醋酸扭体实验、电击尾致痛实验 ,另外测定了大鼠脑内单胺类神经递质含量。结果 :塞隆骨和虎骨不论对小鼠醋酸扭体还是电击尾致痛 ,均表现出良好的镇痛作用 ,但塞隆骨和虎骨对大鼠脑内单胺类神经递质含量无明显影响。结论 :塞隆骨和虎骨在镇痛方面有类似的药效和作用强度 ,而其镇痛作用机制可能不是通过中枢产生作用的。     

消栓再造丸的药理作用

实验结果表明,连续口服消栓再造丸可使高血脂模型动物的血清总脂、血清总胆固醇、血清甘油三酯含量明显降低;对家兔实验性动脉粥样硬化形成及体外血栓形成均有明显的抑制作用。     

藏药70味珍珠丸对大鼠缺血性脑梗塞的研究

使用手术暴露大鼠的大脑中动脉 ,局部用三氯化铁损伤血管的方法 ,造成大鼠大脑中动脉血栓模型 ,以观察血栓形成后不同时间 70味珍珠丸对局部脑缺血引起的行为障碍和脑梗塞面积的影响。结果显示 :70味珍珠丸 0 .5g/kg和 1g/kg组 ,均有明显减轻缺血性脑梗塞引起的行为障碍 ;减少梗塞面积 ;使缺血性脑组织病理变化减轻 ,对脑缺血有保护作用。与模型组及阿斯匹林组比较 ,均有显著性差异 (P<0 .0 1) 。     

丹参口服液抗心肌缺血活性的作用

目的: 探讨丹参口服液的抗心肌缺血活性作用。 方法: 取SD大鼠70只,随机分为7组,每组10只,即正常组,模型组,阿司匹林组(50 mg ·kg^-1),复方丹参滴丸组(135 mg ·kg^-1),丹参片组(300 mg ·kg^-1),丹参口服液高、低剂量组(5,2.5 g ·kg^-1),ig给予相应剂量药物7 d,末次给药1 h后,其中正常组股静脉注射生理盐水5 mL ·kg^-1,其余各组注射10%高分子右旋糖苷(5 mL ·kg^-1)造成血瘀大鼠模型;另取SD大鼠70只,随机分为7组,每组10只,即正常组,模型组,单硝酸异山梨酯(4 mg ·kg^-1),复方丹参滴丸组(135 mg ·kg^-1),丹参片组(300 mg ·kg^-1),丹参口服液高、低剂量组(生药5,2.5 g ·kg^-1),ig给予相应剂量药物,末次给药1 h后正常组舌下静脉推注生理盐水,其余各组舌下静脉快速推注垂体后叶素0.5 U ·kg^-1(1 U ·mL^-1)造成心肌缺血大鼠模型,采用血液黏度计测定血瘀模型大鼠全血比黏度、血浆比黏度;记录心肌缺血模型大鼠不同时间点Ⅱ导联心电图(ECG)观察T波变化,并测定血浆磷酸肌酸激酶(CK),丙二醛(MDA)及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD),钙离子(Ca²⁺)和MDA。 结果: 与正常组比较,模型组大鼠全血黏度和血浆黏度明显升高(P<0.01),模型组心肌缺血大鼠不同时间点T波明显升高(P<0.05,P<0.01),心律明显升高,大鼠血浆MDA及CK水平明显升高(P<0.01),心肌组织MDA及Ca²⁺含量明显升高(P<0.01),心肌组织SOD水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,丹参口服液高、低剂量组均可明显降低血瘀大鼠全血黏度和血浆黏度(P<0.05,P<0.01),可明显降低心肌缺血大鼠的T波和心率(P<0.01),明显降低血浆MDA及CK水平(P<0.05,P<0.01);明显降低大鼠心肌组织MDA及Ca²⁺含量(P<0.05,P<0.01),显著升高SOD水平(P<0.05)。 结论: 丹参口服液对血瘀模型大鼠和心肌缺血模型大鼠具有活血化瘀及保护的作用。     

安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血模型的影响

目的:探讨安宫牛黄丸对脑缺血模型的保护作用及血流变的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组(生理盐水12 mL.kg-1ig)、安宫牛黄丸组(0.25 g.kg-1安宫牛黄丸溶解液ig)、西药组(20%甘露醇10 mL.kg-1、速尿1.5 mg.kg-1、胞磷胆碱钠注射液20 mg.kg-1尾静脉注射)、中西药组(西药组+安宫牛黄丸组),采用线栓法制备大脑中动脉梗死(MACO)大鼠模型,连续给药4 d后断头取脑,在脑缺血后第1,2,3天进行卒中指数评分,光镜下观察各组脑缺血4 d后缺血脑组织病理形态学变化,检测血液流变学指标的变化。结果:脑缺血4 d后全血黏度(ηb)、血浆黏度(ηp)、血小板聚集率(PAgT)、红细胞聚集指数(EAI)、红细胞刚性指数(IR)明显升高,红细胞变形指数(DI)明显降低,安宫牛黄丸组、西药组、中西药组均可不同程度地降低脑卒中指数,降低脑缺血大鼠的ηb,ηp,PAgT,EAI,IR并增加DI,以中西药组作用最为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:安宫牛黄丸对脑缺血损伤具有脑保护作用,这可能与其降低血液黏度作用有关。     

毛冬青总黄酮对大鼠血瘀合并脑缺血模型的影响

目的:探讨毛冬青总黄酮对大鼠血瘀合并脑缺血模型的影响。方法:采用大鼠连续注射地塞米松复制血瘀模型。毛冬青总黄酮混悬液(0.12,0.06,0.03 g·kg-1,20 mL·kg-1)连续灌服10 d,于第11天给药后1 h,夹闭大鼠双侧颈总动脉30 min造脑缺血模型。取血测全血黏度。断头取脑,一半脑置于10%福尔马林溶液中固定,用于HE染色;另一半脑用生理盐水制备脑匀浆,用于测定乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)、三磷酸腺苷酶(ATP)酶水平以及丙二醛(MDA)含量。结果:血瘀合并脑缺血模型复制成功。与血瘀加脑缺血组相比,高、中剂量毛冬青总黄酮能显著降低模型大鼠全血黏度,高切为(7.25±1.78),(7.52±1.06)mPa.s,中切(8.75±2.02),(9.26±1.35)mPa.s,低切(17.06±3.77),(18.36±2.29)mPa.s,低剂量毛冬青总黄酮能显著降低全血黏度高切值(7.92±2.32)mPa.s,中剂量毛冬青总黄酮能显著降低模型大鼠脑匀浆中LD含量(3.51±0.69)mmol·g-1,显著提高LDH水平(1 822.2±128.0)U.mg-1,明显降低MDA含量(2.66±0.42)mmol·mg-1;高、中剂量毛冬青总黄酮能显著提高脑匀浆中Na+-K+-ATPase,Mg2+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATP活力(8.23±0.63),(8.53±0.52),(7.15±0.20),(7.98±0.24),(8.17±0.33),(8.54±0.29)μmol·mg-1·h-1,中剂量毛冬青总黄酮能显著提高Ca2+-ATPase活力(8.84±1.00)μmol·mg-1·h-1,小剂量毛冬青总黄酮能显著提高Na+-K+-ATPase活力(7.94±0.16)μmol·mg-1·h-1,各剂量组毛冬青总黄酮均可显著改善脑组织病理改变。结论:毛冬青总黄酮可显著改善大鼠血瘀合并脑缺血模型的脑缺血损伤。     

脑脉舒康胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型能量代谢的影响

目的:探讨脑脉舒康胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型能量代谢的影响.方法:采用注射地塞米松复制血瘀模型,模型大鼠灌服脑脉舒康胶囊0.9,0.6,0.3 g·kg-1连续10d,于第11天给药后1h,结扎大鼠两侧颈总动脉30 min,制造脑缺血模型;取大鼠脑组织匀浆,检测脑匀浆液Na+K+-ATPase,Mg2+ -ATPase,Ca2+-ATPase活力、乳酸(LD)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力.结果:脑脉舒康胶囊3个剂量组均可以提高模型大鼠脑组织ATP活力(P＜0.01或P＜0.05),高剂量和中剂量组可以降低LD含量(P＜0.01),中剂量和低剂量组可以提高LDH活力(P＜0.01).结论:脑脉舒康胶囊对大鼠血瘀合并脑缺血模型能量代谢有改善作用,减少乳酸堆积,可以减轻组织结构及功能损伤.     

当归芍药散精简方对脑缺血再灌注损伤的改善作用

目的:研究当归芍药散精简方(FBD)对脑缺血再灌注的改善作用及机制.方法:①用复制大脑中动脉闭塞(MCAO)模型研究FBD对脑缺血再灌注大鼠行为学评分、梗死面积、脑含水量、脑组织中生化指标(丙二醛、Na -K -ATP酶、Ca2 -ATP酶、一氧化氮)及脑组织学的影响;②用小鼠脑缺血再灌注模型研究FBD对血脑屏障通透性的影响.结果:①FBD能够改善中动脉闭塞所致局灶性脑缺血大鼠的神经功能,明显缩小梗塞面积,减轻脑水肿,提高脑组织内Na -K -ATP酶、Ca2 -ATP酶的活力,降低MDA和NO含量(P＜0.05～0.01)并能改善脑组织学损伤;②FBD能够明显改善脑缺血再灌注小鼠血脑屏障通透性(P＜0.05).结论:FBD对脑缺血再灌注损伤有一定的改善作用.     

通心络超微粉对脑缺血大鼠微血管的影响

目的 观察通心络超微粉对脑缺血大鼠微血管及血流灌注量的影响.方法 将48只健康SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通心络大剂量组[1.6g/(kg·d)]、通心络中剂量组[0.8g/(kg·d)]、通心络小剂量组[0.4g/(kg·d)]、尼莫地平组[10mg/(kg·d)],每组8只.采用开颅结扎法阻断大鼠一侧大脑中动脉制备局灶性脑缺血大鼠模型,假手术组大鼠只挑开脑膜,不结扎血管.各用药组均在动物苏醒后灌胃,假手术组和模型组给予等体积生理盐水.给药14天后,利用激光扫描共聚焦显微镜观察各组大鼠脑组织微血管形态、直径及血流灌注量.结果 与模型组比较,各用药组大鼠大脑皮层微血管均呈现迂曲不规则形状,其中通心络大剂量组血管明显呈迂曲、不规则,微血管分支数目增多,血管之间靠拢形成连接.模型组缺血侧40％微血管直径在5～6μm之间;通心络大剂量组缺血侧41％微血管直径在2～3μm之间;通心络中剂量组缺血侧40％微血管直径在3～4μm之间;通心络小剂量组缺血侧40％微血管直径在4～5μm之间.与模型组比较,通心络大、中剂量组、尼莫地平组显著促进缺血侧脑组织皮层区微血管血流灌注量增加(P＜0.01).结论 通心络超微粉可促进脑缺血大鼠脑缺血区微血管新生,增加缺血脑组织血流灌注量.     

左归丸、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞成脂诱导的影响

目的:研究左归丸、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)成脂诱导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:将90只SD雌性大鼠,随机选取10只作为正常组,其余80只再随机选取10只经双侧腰背部切口切除卵巢周围少量脂肪组织作为假手术组,其余70只以相同切口切除双侧卵巢作为模型组,分别以正常组,假手术组,模型组,左归丸组(18.9 g·kg~(-1)),右归丸组(20.52 g·kg~(-1)),共同药组(15.12 g·kg~(-1)),滋阴药组(12.96 g·kg~(-1)),补阳药组(8.1 g·kg~(-1))和戊酸雌二醇片组(0.36 mg·kg~(-1))共9组,对BMSCs进行干预,流式细胞仪鉴定BMSCs,用油红O检测脂滴的形成;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ),脂蛋白脂肪酶(lipoprotein,LPL),脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)mRNA的表达;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组BMSCs明显向脂肪细胞分化,PPARγ,LPL,FABP4 mRNA表达及C/EBPβ蛋白的表达明显升高(P0.05);与模型组比较,左归丸、右归丸及其拆方均可抑制BMSCs向脂肪细胞分化,其中右归丸组可明显下调PPARγ,LPL,FABP4 mRNA,降低C/EBPβ的蛋白的表达(P0.05)。结论:左归丸、右归丸及其拆方均能抑制BMSCs的成脂分化,且右归丸抑制成脂分化的作用优于左归丸,以及补阳药及二者的共同药组。