从调节性T细胞和Th17细胞变化探讨抗敏平喘方治疗哮喘机制

目的从调节性T细胞(Tregs)和Th17细胞亚群平衡方面来探讨抗敏平喘方治疗哮喘的机制。方法将6~8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为5组:对照组、模型组、泼尼松(5.5 mg/kg)组、抗敏平喘方低和高剂量(4.95、9.90 g/kg)组;用卵清蛋白诱导小鼠哮喘模型,每天雾化后ig给药,连续15 d,末次给药后处死小鼠,通过病理切片HE染色观察肺组织的损伤情况,用流式细胞术测定血液中Th17和Tregs细胞亚群的变化比例;ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达水平。结果病理切片HE染色显示抗敏平喘方能够改善哮喘小鼠肺组织损伤,降低淋巴细胞对肺组织的浸润水平;抗敏平喘方能够下调血液中Th17细胞比例和上调Tregs细胞比例,并且存在剂量依赖效应;抗敏平喘方同时能够显著提高血液中IL-4和TGF-β水平并降低TNF-α水平。结论抗敏平喘方能够通过影响Th17细胞和Tregs在血液中的比例以及相关炎症因子的水平而达到治疗哮喘的作用。     

疏肝平喘方通过转化生长因子-β1/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的：阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）/叉头框蛋白P3（Foxp3）以及辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的干预作用,对转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）和TGF-β1水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果：疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β1,与地塞米松比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）,调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当（均P>0.05）;Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当（均P>0.05）。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β1/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。     

慢加亚急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症时Th17/Treg表达变化的实验研究

目的:观察Treg/Th17细胞失衡及相关细胞因子在慢加亚急性肝衰竭肠源性内毒素血症(IETM)时的表达变化,进而探讨Treg/Th17细胞对内毒素介导的炎症反应的调控作用。方法:采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,以腹腔注射D-Gal+LPS液(合D-Gal 400mg/kg,LPS 100μg/kg)急性攻击建立肝衰竭IETM大鼠模型。流式细胞术检测不同时间点大鼠外周血中Th17、Treg细胞频数,ELISA法测定不同时间节点大鼠结肠组织IL-10、TNF-α、IL-17A、IL-23、TGF-β水平。结果:与正常组比较,模型组Treg、Th17细胞频数在各时间节点均升高(P 0. 05),Treg、Th17细胞与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);与正常组比较,模型组结肠组织Treg/Th17型细胞因子IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β、IL-10各时间节点表达均升高(P 0. 05),且各炎症因子与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);正常组大鼠IL-10、TGF-β等抑炎因子水平高于IL-17A、IL-23、TNF-α等促炎因子,模型组Th17比例高于Treg,失衡向Th17方向偏移。结论:肝衰竭IETM发生时Treg/Th17细胞失衡,向Th17方向偏移,相关抑炎、促炎因子均释放增加,加剧IETM程度。     

蒙药平喘灵胶囊防治支气管哮喘过程中的相关因子分析研究

目的:探讨蒙药平喘灵胶囊对哮喘模型小鼠气道炎症及白细胞介素17A (IL-17A)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Smad2/3和Smad7的影响。方法:清洁级雌性BALB/c小鼠60只,随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松片组及平喘灵胶囊1、2、4 g/kg组,采用鸡蛋清白蛋白(OVA)建立实验性哮喘小鼠模型,激发第21 d开始灌胃给予相应药物,模型对照组和正常对照组以生理盐水代替,连续给药8 w。末次给药后24 h内,眼球取血处死,细胞计数器计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞分类数目;HE染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组织化学法(IHC)检测肺组织Smad2/3、Smad7蛋白相对表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF及血清IL-17A、TGF-β1、TNF-α的含量。结果:与正常对照组比较,模型对照组BALF白细胞分类、BALF及血清IL-17A、TNF-α及TGF-β1含量显著升高、哮喘小鼠肺组织smad2/3蛋白表达水平显著下调(P<0.01);小鼠肺组织Smad7蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。与模型对照组比较,蒙药平喘灵胶囊各组BALF白细胞分类、BALF及血清中IL-17A、TNF-α及TGF-β1含量显著降低、哮喘小鼠肺组织Smad2/3蛋白表达水平显著下调,小鼠肺组织Smad7蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论:蒙药平喘灵胶囊对哮喘小鼠气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低BALF及血清IL-17A、TNF-α、TGF-β1含量及下调小鼠肺组织smad2/3蛋白表达水平和上调小鼠肺组织smad7蛋白表达水平有关。     

宣肺平喘方对哮喘大鼠肺、肠组织病理形态变化及Th1/Th2影响的研究

目的:观察宣肺平喘方对哮喘大鼠肺、肠组织病理形态及Th1/Th2平衡的影响,为中医"肺与大肠相表里"理论提供支持。方法:将40只SD大鼠,随机均分为正常组、模型组、地塞米松组、宣肺平喘方组。通过腹腔注射OVA与氢氧化铝致敏、OVA雾化吸入激发制备哮喘大鼠模型。给药2周,采用HE染色观察大鼠肺、肠病理变化,Elisa法检测Th1、Th2相关细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-2含量。结果:正常组肺肠组织均未见炎性病理改变;模型组肺部可见典型支气管哮喘病理表现,肠组织可见炎细胞浸润,肌层增厚;宣肺平喘方组病理变化明显减轻,与地塞米松组相近。模型组大鼠血Th1相关因子IFN-γ、IL-2含量明显下降,而宣肺平喘方组表达上升;模型组大鼠血Th2相关因子IL-4、IL-5含量明显上升;而宣肺平喘方组表达下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:宣肺平喘方能减轻哮喘大鼠肺、肠组织病理损伤,为中医"肺与大肠相表里"理论提供实验基础;并通过改变Th1、Th2相关细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-2含量调节Th1/Th2平衡,纠正免疫功能紊乱。     

消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg免疫平衡的影响

目的:探讨消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg细胞免疫平衡的影响。方法:将75只C57BL/6小鼠随机分为消水方(33.5 g·kg~(-1))组、顺铂(6 mg·kg~(-1))组、消水方(27 g·kg~(-1))+顺铂(6 mg·kg~(-1))组、模型组、空白组。除空白组小鼠胸腔内注射磷酸盐缓冲液(PBS)外,其余各组小鼠均采用Lewis肺癌细胞胸腔注射建立模型,连续给药10 d后各组取10只小鼠处死,采用流式细胞技术检测外周血中Th17,Treg细胞数量;流式微球阵列法(CBA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-17A(IL-17A),白细胞介素-21(IL-21),白细胞介素-23(IL-23)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脾组织维甲酸相关孤核受体γt(RORγt),叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA及蛋白表达。结果:各组小鼠外周血Th17,Treg细胞数量均高于空白组(P0.05,P0.01)。其中消水方+顺铂组、消水方组较模型组能明显增加Th17细胞数量(P0.05),降低Treg细胞数量(P0.01)。消水方+顺铂组IL-6,IL-17A,IL-21含量分别较其余各组均显著升高(P0.01);消水方+顺铂组较消水方组、模型组IL-23含量升高(P0.05),TGF-β1含量降低(P0.05)。与顺铂组、模型组比较,消水方+顺铂组、消水方组可上调脾组织中RORγt mRNA表达(P0.01),下调Foxp3 mRNA表达(P0.05)。与模型组比较,消水方+顺铂组可上调脾组织RORγt蛋白表达(P0.05),下调Foxp3蛋白表达(P0.01)。结论:消水方联合顺铂可能通过上调Th17细胞水平,下调Treg细胞水平,从而纠正Th17/Treg免疫失衡,发挥抑制MPE作用。     

三拗汤对咳嗽变异性哮喘小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响

目的 研究三拗汤对咳嗽变异性哮喘小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法 小鼠通过腹腔注射卵蛋白、氢氧化铝致敏，并吸入卵蛋白激发法建立咳嗽变异性哮喘模型，随机分为空白组，模型组，孟鲁司特钠组，三拗汤低、中、高剂量组，HE、F4/80荧光染色观察肺及支气管组织病理变化、巨噬细胞聚集情况，流式细胞术分析脾脏组织Th17、Treg细胞比例，RT-qPCR检测肺组织TGF-β、IL-6、IL-23、IL-10、IL-17A、IL-17F、IL-4、IL-13 mRNA表达。结果 与模型组比较，三拗汤各剂量组小鼠气管、支气管及血管周围炎性细胞浸润量减少，杯状细胞化减轻，上皮下纤维化和平滑肌体积增加现象缓解，F4/80荧光强度减弱；肺组织TGF-β、IL-17A、IL-17F、IL-4、IL-6、IL-13 mRNA表达降低(P<0.05);脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg比值降低(P<0.05)。结论 三拗汤可改善咳嗽变异性哮喘小鼠气管及肺组织炎性病理变化及气道痉挛状态，其机制与调节Th17/Treg免疫平衡及相关细胞因子有关。     

补肾活血方对复发性流产孕鼠Th17/Treg平衡及妊娠结局的影响

目的 观察补肾活血方对复发性流产(RSA)孕鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡及相关细胞因子水平和妊娠结局的影响。方法 将雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠按照2∶1比例交配建立RSA模型,成功后将RSA小鼠随机分为模型组、地屈孕酮组和补肾活血方低、中、高剂量组,每组10只;另将雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/C小鼠按照2∶1交配,取正常妊娠的10只雌性小鼠作为正常妊娠组。妊娠第1天,正常妊娠组和模型组孕鼠给予生理盐水灌胃,地屈孕酮组孕鼠给予6.18 mg/kg地屈孕酮灌胃,补肾活血方低、中、高剂量组孕鼠分别给予7.83 g/kg、15.67 g/kg、31.34 g/kg补肾活血方灌胃,均每天1次,连续14 d。疗程结束,取各组孕鼠外周血,检测血清中白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,计算IL-17/TGF-β比值;处死孕鼠,计算胚胎吸收率;流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中Th17细胞比例、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值。结果 与模型组比较,地屈孕酮组及补肾活血方各组孕鼠血清IL-17水平及IL-17/TGF-...     

黄连素对阿尔兹海默症大鼠Th17、Treg亚群比例及脑组织炎性细胞因子的影响

目的探究黄连素对阿尔兹海默症大鼠外周血辅助性T细胞(T helper cell,Th) 17、调节性T细胞(regulatory T-cell,Treg)亚群比例,以及脑组织炎性细胞因子水平的影响。方法大鼠分为假手术组、模型组、黄连素组,除假手术组外,其余各组采用腹腔注射D-半乳糖联合Aβ25-35海马注射的方法建立阿尔兹海默症大鼠模型,药物干预4周后,留取标本,流式细胞技术检测两组大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例,实时荧光定量PCR检测两组大鼠海马组织炎性细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-17、IL-22、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-βmRNA转录水平。结果 (1)与假手术组相比,模型组Th17、Treg细胞比例升高(P0.05),与模型组相比,黄连素组大鼠外周Th17细胞比例降低(P0.05);(2)与假手术组相比,模型组大鼠海马组织促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-22、TNF-α转录水平均显著升高(P0.01),抑炎性细胞因子TGF-β转录水平显著降低(P0.01);与模型组相比,IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α转录水平均降低(P0.05),TGF-β转录水平升高(P0.05)。结论黄连素能降低阿尔兹海默症大鼠外周血Th17亚群比例,减轻脑组织内炎性反应。     

红景天对支气管哮喘小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子的影响

目的:观察红景天对支气管哮喘小鼠Th17/Treg T细胞及其细胞因子白介素IL-17、IL-23、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达影响,探讨其可能作用机制。方法:选择8周龄健康雌性BALB/C小鼠,随机分为3组:对照组、支气管哮喘模型组、红景天组,每组10只;支气管哮喘模型采用卵清蛋白致敏方法构建,小鼠支气管灌洗液细胞(BALF)计数,ELISA法测定肺组织中IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1水平,流式细胞术测定外周血CD_4~+IL-17~+与FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+的比例,HE染色观察肺组织病理形态学变化。结果:与对照组比较,模型组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及肺匀浆IL-17、IL-23、CD_4~+IL-17~+占CD_4~+比例明显升高(P<0.05),肺匀浆IL-10、TGF-β1及FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+比例明显降低(P<0.05),肺组织炎症反应增加;与模型组比较,红景天组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及IL-17、IL-23、CD_4~+IL-17~+占CD_4~+比例明显降低(P<0.05),IL-10、TGF-β1及FOXp_3~+CD_4~+CD_(25)~+占CD_4~+比例明显升高(P<0.05),肺组织炎症反应减轻。结论:红景天可有效抑制哮喘小鼠气道炎症反应,其作用可能与调控哮喘小鼠Th17/Treg T细胞及其细胞因子IL-17、IL-23、IL-10、TGF-β1表达有关。