es respectively. Conclusion : According to

为了研究中国人Ｗｉｌｓｏｎ病基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第９、１４外显子突变特征。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术初步研究了１４１便Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＡＴＰ７Ｂ基因第９及１４外显子的分子结构改变。结果：通过用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对患者和正常人的ＤＮＡ的电泳带迁移作对比分析，发现在患者中第９和１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常者分别为６例（２．１％，６／２８２）和４２例（１４．９％，４２／２８２）。结论：依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，这一初步结果提示该组病人中ＡＴＰ７日基因的第１４外显子可能存在着较高的突变率。     

DNA测序产的Wilson‘s病ATP7B基因第14外显子一种新型移码突变

目的：了解中国人肝豆状核变性患者基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第１４外显子（ｅｘｏｎ１４）的突变情况,为该病的基因诊断和治疗提供依据。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡＴＰ７Ｂ基因的第１４外显子片段,通过ＤＮＡ单链构象多态（ＳＳＣＰ）筛选,以ＰＣＲ产物（ＰＣＲ－ＤＮＡ）循环测序双鉴定。结果;在８５例肝豆状核变性患者和３９例正常人的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均呈现两种泳动常型（Ⅰ,Ⅱ型）,我们分别对两组中各种带型的     

Wilson病家系ATP7B基因第18外显子突变及多态

目的：检测中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因的第１８外显子（ｅｘｏｎ１８）突变及多态。方法：应用多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，分析１６个ＷＤ家系５４例个体和１８例正常人ＡＴＰ７Ｂ基因ｅｘｏｎ１８分子结构改变。结果：在ＷＤ家系中发现有３种单链构象，其中１种为正常构象，１种为突变，另１种可能为正常ＤＮＡ多态；１７例ＷＤ患者及其３７例一级亲属中分别检出突变者１０例和１１例，突变率分别为２９．４％和１４．９％。其中一级亲属检出的突变者中有３例经血清铜氧化酶及眼科Ｋ－Ｆ环检查证实为ＷＤ症状前患者。结论：ｅｘｏｎ１８是中国人ＷＤ基因突变热点之一，大多数ＷＤ患者为复合杂合子；应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术分析ｅｘ－ｏｎ１８是一种有效的ＷＤ基因筛选方法，也可为无家族史的ＷＤ可疑者提供诊疗依据     

肺小细胞癌p53基因分析mdm—2基因蛋白表达的关系

目的：探讨肺小细胞癌（ＳＣＬＣ）的ｐ５３基因改变的ｍｄｍ－２基因的蛋白表达的关系。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法和聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析的方法,对１４例ＳＣＬＣ的石蜡切片组织进行研究。结果：免疫组化染色ｐ５３蛋白阳９例,阳性率为６４．３％（９／１４）;ｍｄｍ－２蛋白阳性４例,阳性率为２８．６％（４／１４）。ｐ５３基因海５、６、７、８外显子,突变率分别为２１．４（３／１４     

PCR直接测序在Wilson病基因第8外显子检出一个突变热点

目的寻找中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因突变热点。方法应用ＰＣＲ直接测序法对３０例Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＷＤ基因第８外显子进行了突变筛查。结果在１４例患者中发现同一种错义突变Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ，其中４例为这一突变的纯合，其余为杂合，突变率为３０％。结论ＷＤ基因第８外显子７７８位密码子（ＣＧＧ→ＣＴＧ）系中国人的突变热点之一。     

中国人WD基因第14和18号外显子的错义突变

目的了解中国人肝豆状核变性（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）基因第１４和１８号外显子的突变情况,与国外报道的这两个外显子的高突变频率进行比较。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合ＤＮＡ测序技术,对４４例无亲缘关系的ＷＤ患者及６０例正常对照进行突变检测。结果一例患者在１４号外显子发生了Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ（３１２１Ｇ→Ｃ）纯合错义突变,另一例患者在１８号外显子发生了Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ（３８０９Ａ→Ｇ）杂合错义突变。结论Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ为未报道过的新型错义突变,Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ突变与国外报道一致。但均未呈热区分布。     

Wilson's病8号外显子突变研究

目的对中国人ＷＤ基因８号外显子进行突变分析。方法对中国人Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）４５例患者以及２０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因８号外显子进行ＳＳＣＰ分析,对有异常者进行测序,根据突变点序列设计合适的内切酶对所有患者进行酶切分析。结果正常组未见异常。患者组发现ｅｘ－ｏｎ８有泳动异常,序列分析证实Ｇ２２７３Ｔ置换,即Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变。用限制性内切酶ＭｓｐⅠ对４５例患者以及２０例正常对照进行该位点酶切分析,表明正常组未见异常,患者组有２例突变纯合子,占患者总数４．４％,１１例杂合子,占１２．２％。外显子８的Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变率占ＷＤ突变基因的１６．６７％。检测了２个突变家系。结论８号外显子突变可能是中国人ＷＤ发病的较重要原因。     

子宫颈癌组织中HPV16癌基因及p53基因的检测

利用ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７基因特异性引物，ＰＣＲ技术及抗癌基因ｐ５３外显子７特异性引物，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对３５例进展期子宫颈癌组织进行研究，发现：（１）３５例标本中ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７ＤＮＡ的总检出率为７１．４２％（２５例），其中同时检出Ｅ６、Ｅ７为３１．４２％（１１例），另外８．５７％及３１．４２％（３例及１１例）仅分别检出Ｅ６、Ｅ７序列。（２）全组未见１例有ｐ５３基因外显子７的点突变及等位基因缺失。该结果说明ＨＰＶ１６与本地区妇女子宫颈癌发生有密切关系，并且癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７亚基因的分布是不均一的，ｐ５３基因外显子７的改变并不常见。在实验中我们还建立了使用生物素标记的ｄＵＴＰ进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的技术。     

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白（ＰｒＰ）基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增人ＰｒＰ基因外显子Ⅰ及其上游序列，序列鉴定后插入ＣＡＴ报道质粒ｐＢＬ－ＣＡＴ６，分别转染ＨｅＬａ、ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞系，检测ＣＡＴ表达值；提取三种细胞蛋白，以条带移动实验检测细胞转录激活因子ＳＰ１含量。结果 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列为ＧＣ富含，带有多个ＳＰ１可能性综合位点，但无明显ＴＡＴＡ盒；瞬时转染结果显示这段序列可诱导２～３倍的ＣＡＴ表达增强；定量移动条带实验证明ＨｅＬａ细胞中含有较高浓度的ＳＰ１，而ＣＯＳ７和Ｓｈ－ｓｙ５ｙ细胞中ＳＰＩ含量极低。结论 人ＰｒＰ基因外显子Ｉ及其上游序列具有启动子样功能，为弱的非ＴＡＴＡ盒启动子；不同组织来源的细胞中ＳＰ１含量不同，在神经细胞系Ｓｈ－ｓｙ５ｙ中人ＰｒＰ基因外显子Ｉ     

用PCR—SSCP分析检测睾丸女性化综合征患者雄激素受体基…

为进一步探讨睾丸女性化（Ｔｆｍ）综合征患者发病的分子机理，并主研究雄激素受体（ＡＲ）结构与功能关系提供资料，应用银染聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法对４例Ｔｆｍ患者的基因８个外显子中的７个（Ｂ－Ｈ）分别进行了研究。结果表明，所有患者ＡＲ基因的上述外显子经ＰＣＲ扩增后均出现与外显子相应长度一致的条带，表明没有明显的缺失或插入突变。２例患者外显子Ｇ片段在行ＳＳＣＰ分析时分别有     

30例结直肠癌p53基因突变的初步研究

为了解结直肠癌ｐ５３基因突变的情况，应用聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术对３０例人结直肠癌中ｐ５３基因第５、６、７、８外显子进行检测，发现１６例（５３．３３％）存在ｐ５３基因突变，其中第７外显于７例，第５外显子４例，第６外显子３例，第８外显子２例。结果表明：（１）结直肠癌中普遍存在ｐ５３基因突变；（２）ｐ５３基因突变与结直肠癌的发生和发展有关；（３）ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一种敏感、可靠且简便、快速和经济的方法，尤其适用于临床实验室进行大规模的样本筛选。     

套式PCR和原位杂交技术检测肝病患者单个核细胞？…

目的 了解慢性乙型肝炎（中度）和原发性肝癌（ＨＢｓＡｇ阳性）患者ＰＢＭＣ内ＴＴＶ ＤＮＡ存在情况。方法 采用套式ＰＣＲ以及原位杂交技术检测外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）内ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 套式ＰＣＲＳＷＩＭ２６例慢性乙型肝炎（中度）患者ＰＢＭＣ内ＴＴＶ ＤＮＡ阳性７例。阳性率２６．９％,非常显著高于健康对照（Ｘ＾１２＝１４．３,Ｐ〈０．００１）;２１例原发性肝癌（ＨＢｓＡｇ阳性）虱ＰＢＭＣ内ＴＴ     

用PCR-SSCP分析检测睾丸女性化综合征患者雄激素受体基因突变

为进一步探讨睾丸女性化（Ｔｆｍ）综合征患者发病的分子机理，并为研究雄激素受体（ＡＲ）结构与功能关系提供资料，应用银染聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法对４例Ｔｆｍ患者的ＡＲ基因８个外显子中的７个（Ｂ～Ｈ）分别进行了研究。结果表明，所有患者ＡＲ基因的上述外显子经ＰＣＲ扩增后均出现与外显子相应长度一致的条带，表明没有明显的缺失或插入突变。２例患者外显子Ｇ片段在行ＳＳＣＰ分析时分别有泳动变位，经ＤＮＡ双链循环测序证实两外显子各有一点突变（Ｖａｌ８６６Ｍｅｔ，Ｔ２９１９→Δ），这些突变均位于ＡＲ的雄激素结合区内。其中的缺失突变为国际上尚未报道过的新突变。研究表明，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析是检测ＡＲ基因突变的快速、简便、可靠的方法。     

45例人前列腺癌雄激素受体基因B~H外显子的突变研究

目的和方法：为探讨雄激素受体（ＡＲ）与前列腺癌（ＰＣ）发生发展及内分泌治疗不敏感的关系，我们首先建立了用ＰＣ的穿刺和石蜡切片组织检测ＡＲ基因突变的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（双链构象多态性）－双链ＤＮＡ循环测序法。并用上述方法检测了４５例国人前列腺癌组织ＡＲ基因Ｂ￣Ｈ我显子的突变。结果：在６例２的癌组织中证实有７个ＳＳＣ溘 变位片段（其中一患者有两个外显子异常）。这６例 ４例为低分化腺癌，其中２例已有远处转     

T细胞受体Vβ基因在识别HSV—2过程中的表达水平和特点

本课题主要研究Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）识别抗原后Ｖβ基因发生重排，ｍＲＮＡ表达水平改变。用紫外线处理的单纯疱疹病毒－２型（ＨＳＶ－２）、ＨＳＶ－２及ＰＨＡ分别感染或刺激正常人的ＰＢＬｓ，培养４～６天后，提取ｍＲＮＡ，并采用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交发现识别ＨＳＶ－２的ＴＣＲＶβ２、６、７、８基因在体外选择性扩增。在采用ＨＳＶ－２攻击皮肤病患者发作期、缓解期以及再发作期的ＰＢＬｓ时，发现ＴＣＲＶβ基因表达随着病程变化而改变，尤其Ｖβ７亚家族表达水平显著高于其它亚家族基因，这显示了ＴＣＲＶβ基因的变化是恒定特异性的。     

Rb1基因位点P123M1．8多态性的建立及其在Wilson病中的连锁关系

视网膜母细胞瘤易感基因（Ｒｂ１）基因位点位于１３ｑ１４～２１，与Ｗｉｌｓｏｎ病基因位点相距４．４分摩（ｃｅｎｔｉｍｏｒｇａｎｓ，ｃＭ）．中国人Ｒｂ１基因５′端第１个内含子中Ｐ１２３Ｍ１，８标记的等位片段与白种人相同，但杂合率有差异。中国人Ｐ１２３Ｍ１．８／ＢａｍＨⅠ的多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．５２，并与Ｗｉｌｓｏｎ病基因位点呈紧密连锁关系（θ＝０．０５，Ｚ＝３．８４６）。应用Ｐ１２３Ｍ１．８标记对９个Ｗｉｌｓｏｎ病家系进行连锁分析，证实该标记可用于Ｗｉｌｓｏｎ病的症状前诊断及杂合子检出。     

甲基丙烯酸环氧丙酯诱导的转化成纤维细胞中P^53基因改变

本研究选用人胚肺成纤维细胞的体外转化实验，建立起细胞转化模型。结果表明甲基丙烯酸环氧丙酯可诱导其表型改变，从转化集落分离的细胞经ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测出Ｐ＾５３蛋白增高，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析揭示抑癌基因Ｐ＾５３等７外显子发生突变，从ＰＣＲ双链直接测离的结果发现第７外显子的２４７位ＡＡＣ突变为ＡＧＣ，即由Ａｓｎ变为Ｓｅｒ。因此，Ｐ＾５３基因的改变可能是甲基丙烯酸环氧丙酯诱导人胚成纤维细胞转化的机制     

用非同位素PCR—SSCP方法检测石蜡包埋乳腺癌P53基因点突变

应用－非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测常规石蜡包埋乳腺癌组织中Ｐ５３基因点突变，结果显示６０例乳腺癌中，１４例有异常电泳带，表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中４例位于第５－６外显子，３例位于第７外显子，７例位于第８外显子，免疫组化法检测突变型Ｐ５３蛋白的表达，１３例为阳性，其中１１例ＳＳＣＰ检测到异常电泳带，另２例突变可能发生在所检测的基因片段以外，而５例ＳＳＣＰ分析发现基因突变者，免     

软骨发育不全FGFR3基因突变的研究

目的了解中国人软骨发育不全患者成纤维细胞生长因子受体３（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ３，ＦＧＦＲ３）基因变异情况。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切方法，分析辽宁地区７例软骨发育不全（ａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ，ＡＣＨ）患者外周血ＤＮＡ标本中ＦＧＦＲ３基因第１０外显子区域。结果７例患者均检测到相同的Ｇ３８０Ｒ点突变。结论表明Ｇ３８０Ｒ为中国人ＡＣＨ患者常见突变。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切的方法检测ＦＧＦＲ３基因突变是产前诊断和早期诊断ＡＣＨ患者的简便、快速、可靠的手段     

云南苯丙氨酸羟化酶基因点突及外显子5内新突变Y166X（C→G）？…

研究云南苯丙氨酸羟化酶酶基因点突变分布概况，以提高该地区苯丙酮尿症的基因诊断率。方法应用ＰＣＲ－ＡＳＯ探针斑点杂交，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＡＳＰＣＲ和ＤＮＡ直接测序等技术，对１３／１４名云南籍ＰＫＵ患儿的苯丙氨酸羟化酶基因外显子４、５、６、７、１０、１１和１２进行了鉴定分析。