147Pm照射对人白血病HL-60细胞bc-l2和bax基因表达的研究

目的 研究了¹⁴⁷Pm照射对人白血病HL60细胞bcl-2和bax基因表达作用。方法 运用免疫组织化学技术探讨147Pm对HL-60细胞bcl-2/bax的蛋白表达, 以及RNA分子杂交技术探讨¹⁴⁷Pm对HL-60细胞bcl-2mRNA的转录水平表达。结果 发现对照HL-60细胞中bcl-2蛋白呈高度表达, 为88%;在¹⁴⁷Pm照射下, 可下调至53%.bax在对照细胞中的表达很低;¹⁴⁷Pm作用后, 未见明显改变。而受¹⁴⁷Pm照射后, 可使HL-60细胞中bcl2mRNA表达呈明显下调, 并随受照射时间的延长, 下调作用更加显着。结论 ¹⁴⁷Pm诱发人白血病HL-60细胞的凋亡作用, 与其下调凋亡相关基因bcl-2的表达相关联。     

辐射诱发白血病U937细胞凋亡基因的分离与鉴定

目的：愈来愈多的证据显示Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶在细胞凋亡执行程序中发挥重要功能，辐射可诱发肿瘤细胞凋亡，分离，鉴定辐射诱发肿瘤细胞凋亡中Ｃａｓｐａｓｅ家族成员，是肿瘤细胞凋亡调控机制关键所在，方法：根据已知的Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白保护保守的氨基酸序列，设计简并引物，逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分离，鉴定参与辐射诱发细胞凋亡基因。结果：Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶特异的抑制剂能阻抑制线诱发的     

浓缩铀诱发PC12细胞的凋亡

细胞凋亡是一种正常生理条件下的程序性死亡和外来因素的细胞自杀过程 ,是细胞针对所处环境因素的特定改变所产生的应答 ,与细胞生长一样 ,在机体中承担着重要调节作用[1 ] 。大剂量照射产生细胞坏死 ,但是发生细胞凋亡的剂量远远低于细胞快速死亡所需的剂量。研究辐射诱发细胞凋亡的量效、时相关系以及阐明细胞凋亡和有关的影响因素具有极为重要临床应用意义[2 ] 。随着α辐射体在核燃料和工业、医疗等方面的应用[3] ,由放射性核素所产生的内照射危害已成为一个具有现实意义的重要课题。笔者研究了浓缩铀诱发神经元样细胞凋亡的时相关系。…     

转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

89Sr诱发K562癌细胞凋亡及其相关基因表达研究

目的 探讨^89Sr诱发K562癌细胞凋亡放射毒理效应的分子机理。方法 采用分子病理和定量病理技术研究^89Sr内照射诱导的K562癌细胞凋亡，剂量效应关系和重要相关基因bcl-和bax在其中的表达。结果 K562细胞经^89Sr内照射6和24h，提取DNA，琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的“阶梯状”区带，伴有“拖尾”，而对照组未见“阶梯状”区带，荧光双标记流式细胞仪法定量检测，^89Sr内照射6，9，12，24和48h后，K562细胞凋亡率和坏死率均较对照组有明显升高（P＜0．01），随着^89Sr内照射时间的延长，累积剂量的提高，均无显著变化（P＞0．05），免疫组织化学染色显示，对照组K562细胞中bcl-2和bax蛋白均有表达，bcl-2蛋白表达阳性细胞率82．8％，bax为44.4%,bcl-2/bax比值1.86;^89Sr内照射24h后的K562细胞中，bcl-2蛋白表达阳性细胞率31.4%,bax为38.2%,bcl-2/bax比值0.82，与对照组相比，差异显著（P＜0．05）；RT－PCR显示bcl-2 mRNA在对照组K56细胞中高表达；^89Sr内照射12h后已有明显的下调，24h后则非常显著。结论 ^89Sr内照射K562细胞后，细胞凋亡与细胞坏死并存，且^89Sr诱导K5622细胞的凋亡可能是通过bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低，bcl-2/bax比值下降而调控的。     

辐射与细胞凋亡及其基因调控

细胞凋亡是一种具有特征性形态和生化改变的细胞死亡过程。这些改变是一系列基因的程序性作用而引起生化联级反应（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｓｃａｄｅ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）的结果。本就辐射及其它因素引起的细胞凋亡有关生物分子和基因做一讨论。     

辐射诱导细胞凋亡的基因调控

ｐ５３和Ｂｃｌ－２家庭在辐射诱导的细胞凋亡中起着中心作用，可调节许多凋７亡基因的转录与表达，从而调控细胞凋亡；ｃ－ｍｙｃ是一个双向的凋控基因，可因细胞生长条件的不同而不同；ＩＣＥ基因家庭蛋白则在调控细胞凋亡过程中使一些有关蛋白底物酶解。这些基因及其它凋亡相关基因并不孤立存在，而是互相联系、互相作用，共同调节细胞的增殖、分化与凋亡。     

As2O3诱导HL—60,K562及NB4细胞的凋亡

目的：研究三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对慢性粒细胞Ｋ５６２（ＣＭＬ）,急性粒细胞白血病细胞株ＨＬ－６０（ＡＭＬ Ｍ２）的作用并与细胞株ＮＢ４（ＡＰＬ Ｍ３）作比较。方法：采用形态学和流式细胞术观察不同浓度Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０,Ｋ５６２及ＮＢ４细胞的作用。结果：Ａｓ２Ｏ３不仅能诱导ＮＢ４的凋亡,;提高其浓度至２．７μＭ和８．１μＭ,也能诱导Ｋ５６２,ＨＬ－６０的凋亡。Ａｓ２Ｏ３不能诱导三种细胞分化。结论：Ａｓ２Ｏ３对细胞诱导的凋亡是非选择性的且不能诱导分化。     

U-74389G对大鼠脑创伤后细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨脂质过氧化反应与脑损伤后细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系。方法在大鼠液压颅脑损伤模型中,观察其运动神经功能;脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征;伤后bcl-2基因表达情况;比较伤前给予U-74389G对上述指标的影响。结果治疗组的颅脑伤大鼠伤后行走功能、平衡功能障碍程度明显低于未治疗组（P<0.01）。治疗组大鼠不同脑区各个时间点凋亡细胞数均显著减少,DNA电泳未见凋亡带谱。Bcl-2免疫反应阳性细胞主要位于伤侧大脑半球皮质、皮层下白质、海马及齿状回的神经细胞。表达Bcl-2蛋白的神经细胞很少见到凋亡或坏死的形态特征。Bcl-2早期改变出现在伤后6h,比细胞凋亡出现早。注射U-74389G能阻止bcl-2蛋白下调。结论U-74389G能阻止大鼠液压脑损伤后bcl-2基因表达下调,抑制脑创伤所致细胞凋亡,具有明显的神经保护作用。     

辐射与细胞凋亡及其基因调控

细胞凋亡是一种具有特征性形态和生化改变的细胞死亡过程。这些改变是一系列基因的程序性作用而引起生化联级反应（ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣａｓｃａｄｅＲｅａｃｔｉｏｎ）的结果。本文就辐射及其它因素引起的细胞凋亡有关生物分子和基因做一讨论。     

过钒酸钠对照射后NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响

目的　为了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用 ,深化对造血细胞辐射损伤分子机理的认识。方法　应用MTT法观察了酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠对照射和未照射细胞增殖的影响。结果　过钒酸钠对细胞增殖的影响因培养基中G CSF浓度的不同而表现出相异的作用 :当G CSF浓度偏低时 ,一定浓度的过钒酸钠的加入可促进细胞增殖 ,而当G CSF浓度过高时 ,过钒酸钠的加入则抑制细胞生长 ;与未照射细胞相比 ,过钒酸钠对 3Gy照射细胞的促增殖作用明显加强 ,生长抑制作用相对减弱。结论　酪氨酸磷酸酶可能参与了细胞增殖的不同调控过程 ,而照射可能加强了细胞酪氨酸磷酸酶的增殖抑制作用。     

辐射诱导骨髓细胞凋亡及相关基因表达研究

目的 研究辐射诱导骨髓细胞凋亡、bcl-2和p53基因表达及意义。方法 γ射线全身照射小鼠,采用原位末端标记、原位杂交和图像分析等技术,骨髓细胞凋亡及bcl-2和p53表达。结果 照射后6h骨髓细胞凋亡;bcl-2于细胞凋亡时减少,而于其后修复早期增加;p53于造血细胞凋亡及之后修复均增多,mtp53仅其修复时阳性。结论 辐射可导致骨髓细胞凋亡,且呈剂量相关性;bcl-2与p53基因均参与其凋亡和修复过程。     

pEgr-ssEndostatin重组质粒瘤内辐射诱导表达及其抗肿瘤作用

目的 观察pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其在瘤内辐射诱导表达。方法 肿瘤局部注射脂质体包裹的pEgr-ssEndostatin重组质粒后42h，接受20Gyx射线照射，观察放疗后不同时间肿瘤大小，检测放疗后第2天瘤内Endostatin转录水平。结果 pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗荷瘤小鼠能够增强放疗疗效；单纯接种pEgr-ssEndostatin质粒组和接种pEgr-ssEndostatin质粒 20Gy照射组小鼠的肿瘤组织内有Endostatin mRNA表达，且pEgr-ssEndostatin质粒照射组的EndostatinmRNA水平高于单纯pEgr-ssEndostatin质粒组。结论 pEgr-Endostatin基因-放射治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗，肿瘤局部转染重组质粒后照射瘤内Endostatin表达增强。     

信号因子对辐射诱导胸腺淋巴细胞凋亡的影响

目的　观察信号因子皮质酮 (CS)、cAMP、cGMP、Ca2 和蛋白激酶C(PKC)对体外 4GyX射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的影响。方法　应用荧光发光分光光度仪检测胸腺淋巴细胞DNA裂解率。结果　 2～ 8Gy照射后 4～ 8h ,胸腺淋巴细胞DNA裂解率均明显高于对照组 (P <0 0 1)。与对照组比较 ,加入 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 0 5～ 0 4 μg mlCa2 结合载体离子霉素(Iono)和 0 0 5～ 0 4ng mlPKC激活剂豆蔻酰佛波醇乙酯 (PMA)均明显增加淋巴细胞DNA裂解率 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而加入 5 0ng mlcGMP与对照组比较 ,无明显作用。对 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 2和 0 4 μg mlIono及 0 2和 0 4ng mlPMA分别加 4Gy照射 ,其DNA裂解率均明显高于单纯 4Gy照射组 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而 5 0ng mlcGMP加 4Gy照射与单纯 4Gy照射组比较无明显差异。结论　在一定剂量范围内 ,信号因子CS、cAMP、Ca2 和PKC对大剂量X射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡具有促进作用     

Lovastatin对HL-60细胞凋亡及超微结构的影响

目的：探讨洛伐他汀(Lovastatin，LDV)对HL-60细胞凋亡的影响并观察细胞超微结构变化。方法：以4、8、16μmol／L LOV处理HL-60细胞1～3d后，经DNA梯形带检测、DNA片段化百分率检测以及透射电镜等技术方法，观察细胞凋亡效应的发生。结果：LOV处理HL-60细胞后，有凋亡特征性的DNA梯形带出现；DNA片段化百分率增高；透射电镜下，HL-60细胞呈现凋亡性变。结论：LOV能诱导HL-60细胞凋亡并使细胞超微结构发生凋亡性变。     

重组腺病毒介导反义c-myc诱导HL-60细胞粒系分化的作用

目的：研究重组反义c-myc腺病毒（Ad-AS-c-myc）诱导人急性早幼粒HL-60细胞系粒系分化及作用分子机制。方法：采用重组腺病毒Lac-Z（Ad-LacZ）及Ad-As-c-myc联合硫酸鱼精蛋白转染HL-60细胞，X-gal染色判断转染效率。采用形态学、RT-PCR、流式细胞仪、四唑氮蓝（NBT）还原试验、非特异酯酶染色等方法进行研究。结果：Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞C-myc基因在转录水平的表达。被转染HL-60细胞在形态上趋向成熟粒细胞，Ad-AS-c-myc使HL-60细胞周期G0／G1阻滞，过氧化物酶、非特异性酯酶活性增强。结论：Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有诱导粒系分化作用。其生物学作用与HL-60细胞c-myc的表达受抑、HL-60细胞出现一些成熟粒细胞的生理功能有关。     

X射线全身照射诱导小鼠派伊氏板细胞凋亡及其机理的研究

目的 研究不同剂量X射线全身照射后小鼠派伊氏板细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化规律。初步阐明凋亡调控的部分分子机理。方法 应用光、电镜技术观察小鼠派伊氏板细胞凋亡的形态改变,并用流式细胞术检测小鼠派伊氏板细胞Bcl-xL及Fas-L蛋白表达的变化。结果 2GyX射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡增加,且Bcl-xL蛋白表达下降,Fas-L蛋白表达升高;75mGyX射线全身照射后,派伊氏板细胞凋亡减少,且Bcl-xL蛋白表达升高,Fas-L蛋白表达下降。结论 凋亡相关基因Bcl-xL、Fas-L在电离辐射诱导的派伊氏板细胞凋亡方面起重要的调控作用。     

BrdU法研究放射性核素内照射诱发HPRT基因突变

目的：研究放射性核素内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的剂量效应关系。方法：大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物，5－溴脱氧尿嘧啶（BrdU）法检测不同累积剂量和不同剂量率内照射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因突变，并拟合剂量效应关系。结果：随着累积剂量和剂量率的增加，HPRT基因突变频率不断上升，其剂量效应关系符合线性模型，结论：BrdU法是一种快速，简便，较敏感的检测辐射诱发HPRT基因突变的方法，HPRT基因突变可以作为辐射生物剂量计。     

粉防己碱增加人乳腺癌细胞对X射线敏感性及其机理研究

目的 研究粉防己碱(Tet)与X射线对人乳腺癌细胞的作用和机理。方法 采用克隆形成分析法，流式细胞术，Western Blotting以及分裂指数法进行实验。结果 在p53突变型MCF-7/ADR细胞中，Tet显著增加X射线的杀伤作用，其增敏比为1．5l；在X射线照射后，细胞明显阻滞于G2期，Tet可以降低这种阻滞。而在p53野生型MCF-7细胞中，Tet增加X射线的杀伤作用不明显，增敏比为1．10；在X射线照射后，细胞阻滞于G1期，部分阻滞于G2期，加入Tet，对于这种阻滞作用降低也不明显。进一步研究显示，MCF-7/ADR细胞在受到X射线照射后，其Cyclin Bl与Cdc2蛋白表达水平明显降低；Tet可以逆转X射线对Cyclin Bl与Cdc2蛋白的表达的抑制作用。分裂指数结果显示Tet可以促使阻滞于G2期的MCF-7/ADR细胞进入M期。结论 Tet是一种G2期阻滞清除剂，能显著增加X射线对人乳腺癌细胞的杀伤作用，这种作用在p53突变型细胞中更明显。     

非克隆cDNA文库与RACE技术克隆小剂量辐射诱导新基因RIG1

目的：在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1EST片段的基础上,简便、有效地获得其全长cDNA,进行下一步的基因功能研究。方法：结合应用非克隆cDNA文库技术及7增强RACE技术,设计了巢式RACE PCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交,再次磁性分离的纯化流程,结果：成功地克隆到RIG1EST片段3′端约1kb的序列,该序列3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子。进一步的分析明确了RIG1EST的正、负链及其蛋白编码方法。为RIG1 5′端的克隆提供了大量可靠的信息,目前RIG1 5′端的克隆已得到很好的进展。结论：所得结果与我们的设计完全一致,说明这一技术路线是简单可行的,为下一步研究RIG1基因在细胞辐射应激反应中的功能及被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础。