实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌结果分析

目的 了解双重实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌的效果.方法 采集从业人员肛拭子样本,用双重实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定.结果 采用双重实时荧光PCR反应体系共检测从业人员39 974人次,荧光PCR检测出沙门菌阳性41份,阳性率1.22‰,培养法检测出31份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.95％.荧光PCR检测出志贺菌10份,阳性率为0.25‰,培养法检测出3份,阳性率为0.08‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.98％.从样品处理到检测结果仅需要时间2h～ld.结论 双重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于从业人员体检的快速诊断和肠道传染病的初筛,为肠道传染病的分子流行病学调查提供新的检测手段.     

多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

目的 建立改良分子信标，多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法，应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因，分别设计一对引物和改良分子信标探针，用同色荧光标记，用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，加入沙门菌检测体系中，建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系，应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl。菌液灵敏度为32～64CFU／ml或1～2CFu／PCR反应体系，无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测，569份沙门菌实时PCR阳性，其中551份沙门菌培养阳性；42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断，伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

沙门菌和志贺菌双重实时荧光定量PCR的应用效果评价

目的研究沙门菌和志贺菌双色实时荧光PCR法的应用价值。方法收集2017年8月到2018年4月深圳市西丽人民医院临床肛拭子样本2700份,运用双色实时荧光PCR法检测沙门菌与志贺菌,统计阳性检出率,并与培养法的检测结果进行对比。结果 2700份样本中,培养法检出沙门菌与志贺菌阳性分别为2株、0株,检出率分别为0.07%、0.00%,双色实时荧光PCR法检出沙门菌与志贺菌阳性分别为6株、3株,检出率分别为0.22%、0.11%,双色实时荧光PCR法检出率高于培养法,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论双色实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌的临床效果显著,具有较高的特异性、敏感度及准确率,值得临床推广与应用。     

一起肠炎沙门菌食物中毒检测分析

目的:应用实时荧光PCR技术对细菌性食物中毒进行快速检测,为食物中毒调查和应急处理提高依据.方法:采集16份相关标本,其中病人肛拭3份、粪便标本1份、呕吐物1份、剩余食物3份、食物加工人员手涂抹液1份和工作台具涂抹液7份,前增菌后,提取核酸,在LightCycler荧光定量PCR仪上利用实时荧光PCR技术进行沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌、大肠杆菌0157、副溶血弧菌病原菌的快速检测和筛查,同时进行细菌分离培养,利用Vrr:EK全自动微生物鉴定仪对可疑菌进行生化反应检测,以及进行血清学试验.结果:11份标本沙门菌实时荧光PCR检测阳性,其他细菌荧光PCR检测阴性;该11份荧光.PCR阳性标本分离的菌株经全自动微生物生化鉴定仪鉴定为沙门菌,99%的概率,血清型都为AF、O9、Hg、Hm,为肠炎沙门菌.结论:本次食物中毒由肠炎沙门菌引起的,应大力整顿熟食市场,加强食品卫生管理和宣传健康教育,避免同类事件再次发生.     

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法，应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法：根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立实时PCR-改良分子信标检测体系，应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93fg/μl，菌液灵敏度为64cfu／ml或2cfu／PCR反应体系，无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌，均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测，42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2h～1d时间。结论：改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于志贺菌食物中毒的快速诊断，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段，对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。     

实时PCR筛查、培养法确认方案在从业人员肠道致病菌检测的研究

目的:了解与培养法相结合的实时PCR方案在食品及公共场所从业人员肠道致病菌检测中的应用价值。方法:19818份从业人员肛拭子标本用荧光PCR检测,同时用经典分离培养方法进行确认。结果:在19818份标本中,荧光PCR检测出沙门菌阳性6份,阳性率为0.30‰,培养法检测出5份,阳性率为0.25‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100%,特异性为99.99%。荧光PCR检测出志贺菌20份,阳性率为1.01‰,培养法检测出5份,阳性率为0.25‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100%,特异性为99.94%。结论:在基层应用此方案可提高从业人员带菌检出率及检测准确性并大大降低工作强度,且为从采样到出报告全过程的实验室间比对提供良好基础。     

南京市一起斯坦利沙门氏菌食物中毒的病原学检测及溯源分析

目的 对食物中毒事件中所采集样本进行食源性致病菌的分离鉴定,快速查明食物中毒原因并进行同源性分析。方法 应用实时荧光PCＲ技术对一起食物中毒10份可疑食品、2份餐具涂抹样和5份患者粪便进行检测,同时进行病原菌培养分离鉴定,分离菌株采用CLSI 推荐的改良K-B纸片法进行抗生素敏感试验,应用PFGE分型技术进行同源性分析。结果 1份可疑食物和3份患者粪便经实时荧光PCR检测为沙门菌阳性,同时分离到4株斯坦利沙门氏菌,4株沙门氏菌的药敏试验结果一致,PFGE 带型完全一致。结论 本次食物中毒是由斯坦利沙门氏菌污染引起。实时荧光PCR技术能够快速准确地对食物中毒做出病原学诊断,PFGE基因分型技术可对病原菌进行溯源分析,对研究病原菌流行病学规律具有重要意义。     

荧光定量PCR快速检测沙门菌方法的建立及应用

目的:建立沙门菌实时荧光PCR的快速检测方法,探讨其可行性和应用价值。方法:根据沙门菌的特异性DNA作为靶序列,以沙门菌菌株提取核酸DNA作为模板进行荧光检测。结果:本研究在7种相关菌株的检测中,除沙门菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性;在纯菌条件下,定量检测低限为30 cfu/ml;同一样品检测3次Ct值的变异系数均小于5%;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论:该方法的建立,不仅为食源性沙门菌污染及食物中毒的快速检测提供依据,而且还可直接用于临床粪便标本的检测。     

实时荧光PCR技术在预防性健康检查沙门菌与志贺菌检测中的应用

目的将实时荧光PCR技术应用于食品及公共场所从业人员肛拭标本的沙门菌与志贺菌检测,评价其作为快速检测方法的适用性。方法采集肠道门诊粪便与肛拭标本分别利用实时荧光PCR法与传统培养法进行平行对照实验,验证实时荧光PCR法的灵敏度与特异度;然后将此法与列联表结合应用于从业人员肛拭标本的检测。结果 515份肠道门诊标本的检测结果表明,实时荧光PCR法阳性率高于培养法(P0.05),沙门菌与志贺菌的灵敏度均为100.00%,特异度分别为98.98%、97.02%。检测2013年采集的从业人员肛拭标本21 590份,检出沙门菌18株,阳性率为0.83‰;未检出志贺菌。实时荧光PCR法检出率高于2014年同期传统培养法检出率。结论实时荧光PCR技术有助于提升预防性健康检查中沙门菌与志贺菌的检出率,而且特异度强、灵敏度高,兼具时效性与客观性,适合基层实验室对从业人员进行沙门菌与志贺菌的快速筛查。     

核酸检测技术在细菌性食源疾病检测中的应用探讨

[目的]初步探讨常规PCR、荧光PCR、PCR产物测序及脉冲场凝胶电泳(PFGE)等核酸检测技术在常见细菌性食源疾病病原菌检测中的应用。[方法]用常规PCR、荧光PCR直接检测经选择性增菌培养的沙门菌和志贺菌,测定PCR扩增产物序列以确定病原菌种类,用限制性内切酶XbaI和SpeI对分离菌株进行PFGE分析。[结果]常规PCR、荧光PCR方法在两份腹泻病人样本中均检出沙门菌,结果与培养法一致。二者未在皮蛋中检出沙门菌,而培养法在市售皮蛋中检出沙门菌。检测时间分别为PCR16h、荧光PCR14h、PCR产物直接测序19h,较培养法缩短4d。来源不同的3株分离菌XbaI和SpeI酶切图谱完全一致(相似度为100%)。[结论]应用常规PCR、荧光PCR可准确、及时检出腹泻病人样本中的沙门菌和志贺菌,有望用于食物中毒的快速检测。但在检测食品和环境样本时需适当延长增菌培养时间。在从农田到餐桌的食品供应链中,PFGE可对疾病暴发进行早期识别并协助对病原菌及其传播途径的溯源,有助于食物中毒的预防。     

南充市散装即食食品中食源性致病菌监测

目的 了解南充市即食食品中食源性致病菌污染状况,为预防和控制食源性疾病提供科学依据.方法 随机抽取具代表性的4类食品,依据国标方法,对584件样品进行沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、志贺菌5种食源性致病菌分离鉴定.结果 584件食品中检出50株致病菌,总检出率为8.56％ (50/584).5种食源性致病菌中,金黄色葡萄球菌检出率最高(6.68％),其次为单核细胞增生李斯特菌(1.03％)和沙门菌(0.86％),未检出大肠埃希菌O157和志贺菌.结论 南充市散装即食食品中存在食源性致病菌污染,应加强食品卫生监督管理,防止食源性疾病发生.     

荧光定量PCR技术检测肠道志贺菌的临床应用

目的:比较荧光定量PCR技术和传统培养方法检测肠道志贺菌的效果。方法:利用中山大学达安基因股份有限公司研制开发的志贺菌核酸检测试剂盒,检测我院诊治的腹泻病人332份大便中的志贺菌核酸,并以传统的沙门志贺菌(SS)培养基进行细菌培养的结果作为对比。结果:332份腹泻病人大便标本,用培养方法检测,志贺菌阳性59例;用志贺菌核酸试剂盒检测有107例阳性。荧光定量PCR检测方法与培养方法对比,敏感度为100.00%,特异性为82.43%。结论:荧光定量PCR技术敏感度高、特异性强、适合于临床大标本量的检测。     

核酸检测及相关技术在食源性致病菌快速检测中的研究

传统的细菌分离、培养与鉴定由于需时较长,难以适应食源性疾病预防控制的需要。近年来,伴随着核酸检测技术的迅猛发展,各种能够快速检测食源性致病菌的方法相继诞生。本文就聚合酶链式反应及其衍生技术、核酸恒温扩增技术、寡核苷酸微阵列技术、免疫磁性细胞分离技术及DNA生物传感器技术在沙门菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠埃希菌等食源性致病菌快速检测中的应用研究进行综述。     

2011年株洲市食源性致病菌监测分析

目的了解株洲市售食品中食源性致病菌污染状况及分布。方法在全国食源性疾病监测网控制体系下,2011年1～9月采集了株洲市5个监测点内的九大类食品共计159份,对这些样品进行了菌落总数、大肠菌群、霉菌、沙门菌、大肠杆菌O157:H7、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺菌、阪崎菌9种食源性致病菌的监测分析。结果 159份食品样中,分离出目的菌21株,其中金黄色葡萄球菌11株,蜡样芽胞杆菌8株,沙门菌1株,单核细胞增生李斯特菌1株,总检出率13.20%。结论通过对株洲市售食品中食源性致病菌主动监测,掌握食源性致病菌的污染及流行情况,及时发现食品安全隐患,确保有效预防食源性疾病的发生     

多重荧光PCR结合HANDS系统快速检测4种食源性致病菌

目的建立快速、准确检测食品中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的多重荧光PCR方法。方法将多重荧光PCR技术与HANDS系统结合,采用同源加尾的方式,构建四重荧光PCR体系,分析该体系的特异性,并进行模拟实验,该方法与国家标准检测方法进行方法比对实验。结果该系统检测出了4种目标致病菌。初始菌浓度分别为5、9、10、2、50、3cfu/ml的沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和兰氏A群、C群、G群链球菌增菌液,在增菌18h后都被体系检出。该方法与国家标准方法对样品的检测结果一致。结论首次结合HANDS系统构建了同时检测4种致病菌的多重荧光PCR方法,该方法特异性强、灵敏度高,是检测沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的快速、准确方法。     

Real-Time PCR探针法检测食物中毒中沙门菌方法建立及应用

目的:建立食物中毒中沙门菌Real-Time PCR检测方法并将其应用。方法:选取沙门菌侵袭蛋白A基因(in-vA)进行引物和探针设计,并对反应条件不断优化,进行灵敏度和特异度测试,建立检测沙门菌的Real-Time PCR方法。结果:DNA灵敏度检测沙门菌达到56 fg/PCR体系,菌液灵敏度检测沙门菌达到9 CFU/ml,特异度100%。用建立的方法对四起食物中毒、2000份健康从业人员体检肛拭样品、80份食品监测样品进行了检测,共检出沙门菌15株。结论:该方法具有高灵敏性和高特异性的特点,可以应用在沙门菌引起的食物中毒的快速检测中。     

克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在食品安全风险监测中的应用

摘要:目的 探讨克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在婴幼儿奶粉食品安全监测中的应用效果。方法 制备克罗诺杆菌染菌量为1.5×10.0～10.6 CFU/25g奶粉的样品,在增菌 48 h内每隔4 h各取 1 ml 提取 DNA, 进行TaqMan-MGB探针实时荧光PCR,并在婴幼儿奶粉食品安全风险监测中应用,同步进行细菌分离、TaqMan探针实时荧光PCR（美国FDA推荐）,比较3种方法的敏感性和符合率。结果 3种方法可检测到1.5 CFU/25 g奶粉染菌量样本所需增菌培养的时间不一样,TaqMan-MGB探针实时荧光PCR需18 h,美国FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR需24 h,分离培养则需要36 h。TaqMan-MGB探针实时荧光PCR从293份样本的前增菌液中检出15份阳性,从77个可疑菌落中检出23个阳性菌落,鉴定结果与另2种方法一致。结论 克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏,可用于婴幼儿奶粉筛查和辅助鉴定,提高食品安全风险监测的速度和灵敏度。     

2012年南平市食源性致病菌监测结果分析

目的 为全面掌握和分析南平市食品中主要污染物及有害因素的污染水平和趋势,确定危害因素分布情况及可能的来源,评价食品生产经营各环节的污染控制水平及食品安全标准的执行情况和效力,为开展食品安全风险评估、制定食品安全标准和采取有针对性的控制措施提供科学依据.方法 采用《2012年食源性致病菌监测工作手册》的方法对样品进行沙门氏菌、大肠埃希氏菌0157∶H7、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、阪崎肠杆菌和蜡样芽孢杆菌等7种食源性致病菌检测.结果 对熟肉制品、焙烤食品、熟制米面制品、果蔬类、耍幼儿食品和调味酱等186份食品样品的病原菌进行检测,发现致病菌污染49份,占总检测份数的26.34％,检出总阳性菌株56株,致病菌总检出率为30.11％.结论 南平市食源性致病菌污染情况不容乐观,应对食品加工生产和销售的各个环节加强监管.     

2011年雅安市食源性病原菌监测结果分析

目的了解雅安市食品污染中引起食源性疾病的重要致病菌,提高雅安地区食源性疾病检测、预警和控制能力。方法按照中国疾病预防控制中心营养与食品安全所《2011年食源性致病菌监测工作手册》,检测9大类食品。结果抽检9大类食品各20件,共计180件。熟肉制品、速冻熟制米面制品、即食非发酵性豆制品、婴幼儿配方粉和婴幼儿谷基辅助食品、糕点及饼干、凉拌菜、鲜榨果蔬汁及米粉、凉皮、米线、盒饭,8类食品中都检出大肠菌群,检出率分别为25%、20%、60%、10%、30%、50%、40%和20%;速冻熟制米面制品、糕点及饼干中霉菌检出率均为100%;鲜榨果蔬汁中金黄色葡萄球菌的检出率为5%;速冻熟制米面制品中单核细胞增生李斯特菌的检出率为5%;未检出沙门菌、大肠埃希菌O157、志贺菌、阪崎肠杆菌、蜡样芽孢杆菌。结论雅安市即食性非发酵豆制品、凉拌菜、鲜榨果蔬汁、速冻熟制米面、饼干及糕点类散装或自制的食品和直接食用的食品卫生质量较差。应加强对这类食品的监督监管,以保障食品的食用安全。