松质骨骨基质明胶负载软骨细胞移植修复兔膝关节软骨缺损

目的 应用松质骨骨基质明胶(bone matrix gelatin，BMG)负载兔软骨细胞移植修复同种异体关节软骨缺损。方法 BMG载软骨细胞，体外培养12d后植入同种异体新西兰兔膝关节软骨缺损。对照组植入BMG或不作任何植入。移植前用胰蛋白酶处理关节软骨缺损。术后2、4、8、12、24周行解剖显微镜、组织学、电镜观察和免疫组织化学染色。结果 BMG术后8周降解。实验组术后24周关节软骨缺损以软骨组织修复，与周围软骨及软骨下骨愈合良好。Safranin-O、免疫组织化学染色证实其基质有蛋白多糖和Ⅱ型胶原，电镜观察表明修复组织软骨细胞及基质与正常关节软骨一致。BMG对照组以部分软骨组织修复，空白对照组以纤维组织修复。结论 松质骨BMG可作为软骨组织工程的天然细胞支架，其负载软骨细胞移植能修复同种异体兔关节软骨缺损。     

β-TCP—HA—AC—BMSCs复合体修复兔膝关节骨、软骨缺损的实验研究

目的观察磷酸三钙人工骨（β-TCP）－透明质酸（HA）－脱细胞耳软骨（AC）-骨髓间充质干细胞（BM-SCs）复合体修复兔膝关节骨、软骨缺损的效果。方法获取新西兰大白兔BMSCs,体外诱导成软骨细胞并培养,取异体兔耳软骨并进行脱细胞处理,并与β-TCP—AC结合形成复合物接种软骨细胞。取6月龄新西兰大白兔12只,手术制备膝关节缺损模型,并随机分为A、B两组。A组（8只）缺损区植入β-TCP—AC—BMSCs,并于关节腔内注入HA;B组（4只）缺损空置作为空白对照。结果BMSCs在体外生长稳定,增殖能力强,可被诱导为软骨细胞。第16周,A组缺损区内充填白色半透明新生软骨组织,色泽与正常软骨相似,质韧,表面平整,与正常软骨界限消失,表面细胞平行于关节面,深层细胞排列紊乱,细胞呈团状,基质异染广泛,与周围正常软骨连接良好。B组缺损区未修复,底部为白色纤维组织。结论 β-TCP—HA-AC—BMSCs复合体修复兔膝关节骨、软骨缺损效果良好。     

BCBB／BMP／bFGF复合物在股骨头坏死修复中的成血管作用观察

目的 观察双相陶瓷生物骨（BCBB）／骨形态发生蛋白（BMP）／碱性成纤维细胞生长因子（bFCF）复合物在股骨头坏死（FHN）修复中的成血管作用。方法32只新西兰成年大白兔的64侧股骨头,微波灭活建立股骨头坏死模型,随机分为A、B、C、D组,各16个股骨头。A组为空白对照,B组植入BCBB／BMP,C组植入BCBB／BMP／bFGF,D组植入自体松质骨。术后2、4、8、12周分批处死动物,每组每次处死4只。对股骨头进行大体及解剖观察、X线摄片、组织切片免疫组化血管染色并进行血管计数和血管面积图像分析。结果①股骨头大体及解剖观察：A组8、12周时各有1个股骨头塌陷;B组12周时植骨与宿主骨界限依然存在;C、D组12周时植骨与宿主骨界限不清。②X线摄片：A组12周时股骨头缺损仍然存在,有1个股骨头塌陷;B组12周时植骨与宿主骨界限仍然存在;C组2周时植骨区呈高密度影,与宿主骨界限清晰可见,8周时植骨区密度低于宿主骨,与宿主骨界限模糊;D组12周时植骨区密度与宿主骨相近,与宿主骨界限不清。③血管计数和血管面积：术后各时间点C组血管数和血管面积均大于A、B、D组（P均〈0．05）。结论BCBB／BMP／bFGF复合物具有较强的再血管化能力。     

外源性VEGF复合煅烧骨修复骨缺损

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）复合煅烧骨（TBC）的修复骨缺损作用及临床应用前景。方法 新西兰大白兔36只,建立桡骨干中段10mm骨缺损模型。实验侧植入VEGF—TBC复合物,对照侧单纯植入TBC。术后第1、2、4、6、8和12周行X线、植入材料内部血运重建和新骨生成的定量观察,并测定TBC的降解率。结果 VEGF—TBC复合物修复骨缺损的效果优于单纯的TBC,VEGF可以加速TBC的降解。结论 VEGF—TBC复合物能够满意修复骨缺损,是一种较为理想的骨组织工程材料,具有良好的临床应用前景。     

BMP/VEGF/PLGA复合物促进兔骨折愈合的实验研究

目的 观察骨形态发生蛋白(BMP)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)复合物BMP/VEGF/PLGA促进骨折愈合的作用.方法 于兔桡骨中段造成3 mm骨质缺损作为骨折愈合模型,造模后随机分为4组:BMP/PLGA治疗组、VEGF/PLGA治疗组、BMP/VEGF/PLGA治疗组以及空白对照组,每组12只.治疗组分别于骨缺损处植入不同的复合物,对照组不放置任何植入物.分别于术后2、4、6、8 w每组随机取3只大鼠,取桡骨标本作为观察对象,通过X线检查及组织学检查评价不同复合物治疗对骨折愈合的作用.结果 X线片显示,术后对照组在各个时间点的骨痂填充率均低于各治疗组,各时间点评分均低于治疗组(均P<0.05).组织学观察显示,术后各组骨折均有不同程度的愈合,但BMP/VEGF/PLGA治疗组显示出更好的血管化程度和更快的骨折愈合速度.结论 BMP/VEGF/PLGA复合物能够促进骨折局部的血管化和骨形成,加速骨折愈合的速度.     

体外冲击波联合仙桃草治疗骨不连对骨痂中BMP-2和VEGF mRNA表达的影响

目的探讨体外冲击波联合中草药仙桃草疗法对兔桡骨骨不连骨痂中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法制作120只新西兰大白兔兔桡骨骨不连模型,按随机数字表方法分为A、B、C、D四组,A组为冲击波联合仙桃草治疗组,B组为仙桃草治疗组,C组为冲击波治疗组,D组为对照组。体外冲击波治疗方法:在骨不连两断端部位冲击,冲击量为800次/min,焦点能量0.5 mj/mm2,频率为70~80次/min。于治疗后不同时相点(48 h、1、2、4、6、12周)取材,比较各组标本BMP-2和VEGF的免疫组化表达,并作统计分析。结果 (1)各时相点骨痂中BMP-2的表达:48 h各组相比差异无统计学意义。1、2、4、6、12周各组不同时相点比较,A、C组与D组比较差异有统计学意义(P0.05),B组与D组比较差异无统计学意义(P0.05),且A组与B、C组比较差异同样有统计学意义(P0.05)。(2)各时相点骨痂中VEGF的表达:A、B、C组与D组比较差异均有统计学意义(P0.05),且A组与B、C组比较差异也有统计学意义(P0.05)。结论体外冲击波联合仙桃草疗法可以同时上调BMP-2、VEGF表达,从而刺激成骨,共同促进骨不连愈合。     

BMSCs-BMP2-煅烧牛骨复合物的制作及其在兔尺骨骨缺损修复中的应用

目的制作兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)-骨形态蛋白2(BMP2)-煅烧牛骨复合物,并观察其在兔尺骨骨缺损修复中的应用。方法将兔BMSCs分离、培养及成骨诱导后,接种于BMP2-煅烧牛骨复合物,扫描电镜下观察复合情况。将54只新西兰大白兔随机分为观察组、对照组、空白组各18只,于无菌条件下造成右侧尺骨中段10mm长缺损。观察组植入BMSCs-BMP2-煅烧牛骨复合物,对照组植入BMP2-煅烧牛骨复合物,空白组不植入任何材料,术后均不做任何内外固定。各组术后4、8、12周每组随机处死6只,分别行骨缺损处的放射学和组织学检查。结果成骨诱导后的BMSCs均匀分布在煅烧骨表面及孔洞内,与煅烧骨表面贴附紧密,细胞呈圆形,表面光滑,胞体较大,直径15μm。随着术后时间的延长,观察组和对照组Lane-Sandhu放射学评分、组织学评分均逐渐升高,P均<0.05;空白组无变化,P均>0.05。术后4、8、12周,观察组和对照组Lane-Sandhu放射学评分、组织学评分均高于空白组,观察组升高更明显,P均<0.05。结论 BMSCs能够较好地与BMP2-煅烧牛骨复合物进行体外复合培养,BMSCs-BMP2-煅烧牛骨复合物植入有助于兔尺骨骨缺损的修复。     

椎弓根内固定联合伤椎植骨治疗胸腰椎爆裂骨折疗效观察

目的探讨经椎弓根内固定联合伤椎椎弓根植骨治疗胸腰椎椎体骨折的疗效。方法将144例胸腰段脊柱骨折患者随机分为A、B、C组。三组均行后路复位短阶段椎弓根内固定,A组伤椎椎体内植入自体骨,B组植入同种异体骨。结果术后12个月A、B组患者伤椎椎体相对高度分别明显高于C组（P均〈0．01）。术后6个月A、C组VAS评分明显低于B组（P均〈0．01）。术后12个月时C组VAS评分明显高于A、B两组（P均〈0．05）。结论椎弓根内固定联合伤椎植入自体骨或同种异体骨治疗胸腰椎椎体爆裂骨折疗效较好。     

柞蚕丝素蛋白-羟基磷灰石-BMSCs组织工程化骨修复老龄动物骨缺损

目的 探讨柞蚕丝素蛋白-羟基磷灰石-骨髓间充质干细胞(TSF-HA-BMSCs)构成的组织工程骨对兔桡骨缺损的修复作用.方法 将TSF-HA与成骨诱导后兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行复合,构建新的组织工程骨.取36只12月龄老龄日本大耳白兔于左侧桡骨中段造15mm长的骨缺损区.实验分为3组(A、B、C组各12只).A组:TSF-HA+ BMSCs,B组:HA+ BMSCs,C组:无支架组.分别在术后8和12w摄取X线片,观察骨缺损区的修复及骨塑性情况,骨缺损区组织标本采取HE染色进行组织学观察,比较8和12 w各组的骨修复情况.结果 成功培养出了BMSCs,且细胞在材料表面生长状态良好.骨缺损修复术后8、12wX线检测显示,A组骨缺损的修复效果最好,B组次之,C组几乎没有修复作用,各组间差异有统计学意义(P＜0.05);HE染色表明,8w时与B组或C组相比,A组新骨生成最多,骨修复最快,差异有统计学意义(P＜0.05);12 w后取桡骨观察证实:实验组支架大部分被吸收,骨折处密度增高,骨质发白,实验对照组可见部分支架未被吸收,但骨折愈合良好;空白组骨缺损处被结缔组织填充覆盖.结论 TSF-HA组织程化骨具有很好的骨缺损修复能力,有望成为新骨缺损修复的替代材料.     

体外冲击波联合中草药仙桃草治疗兔桡骨骨折骨不连的实验研究

目的探讨体外冲击波联合中草药仙桃草治疗兔桡骨骨折骨不连的作用机制。方法选用标准实验新西兰大白兔64只,无菌条件下截骨制作兔桡骨骨不连模型,随机分为A、B、C、D四组,每组16只。A组为体外冲击波联合接骨仙桃草治疗组,B组为单纯接骨仙桃草治疗组,C组为单纯体外冲击波治疗组,D组为空白对照组,于治疗前后观察和比较各组骨痂生成量,并作统计学分析。结果观察结果表明,骨痂生成量组间比较在治疗后各时间点差异均有统计学意义(P0.01),冲击波治疗后在2、4、6、8周段A组骨不连区骨痂生成量多于C组,差异有统计学意义(P0.01);A组骨痂生成量多于D组,两组比较差异有统计学意义(P0.01);B组骨痂生成量与D组比较在各时间段差异无统计学意义(P0.05)。结论中草药仙桃草可以在体外冲击波治疗骨不连后的早期就能起到促进骨折愈合的作用,为非手术治疗骨不连提供了一种良好的协同方法。     

大段同种异体皮质骨移植后VEGF表达的实验研究

目的 观察大段同种异体皮质骨移植后的血管内皮生长因子(VEGF、)表达情况,探讨VEGF在异体皮质骨“爬行替代”过程中表达的意义。方法 新西兰大白兔60只,30只用于制备深冻异体骨。30只手术移植异体骨,术后第2、4、6、8、12周双侧尺桡骨干X线摄片,记录移植骨周围和近、远侧结合部骨痂生长情况。1、2、4、6、8、12周取材,观察异体骨移植后VEGF免疫组化染色结果。结果 ①移植后早期(1～2周),X线观察无骨痂形成,VEGF阳性表达只出现在移植骨周围软组织内;②移植后中期(4～6周),X线观察出现外骨痂和环状骨痂。移植骨外骨痂和结合部骨痂的VEGF阳性表达到最高峰,移植骨内部VEGF开始表达;③移植后晚期(8～12周),X线观察结合部的间隙完全消失,形成新的髓腔。成熟的外骨痂和结合部骨痂VEGF阳性表达减少,移植骨内部VEGF阳性表达的细胞大量出现。结论 VEGF参与了大段同种异体皮质骨的“爬行替代”过程,与异体皮质骨的血运重建密切相关。异体骨不同部位“再血管化”的时机是不同的。     

脱细胞骨基质复合富血小板血浆修复颅骨缺损的实验研究

目的研究脱细胞骨基质（ABM）复合富血小板血浆（PRP）修复兔颅骨缺损的可行性及机制。方法雄性新西兰大白兔24只,体质量1．5～2．0kg。在兔颅骨两侧分别建立1cm×0．5cm的全层骨缺损区,去除该区骨膜。随机选择一侧作实验侧,植入复合PRP的ABM;另一侧为对照侧,仅植入ABM。术后第2、4、8、12周分别处死兔6只并取材,观察两侧颅骨缺损修复愈合情况。结果所有实验动物均未发生明显炎症和排异反应。随着时间的延长。两侧颅骨缺损区都有不同程度的成骨,新生骨量呈增加趋势。术后第12周,实验侧ABM颗粒已完全降解,骨髓腔改建完成,缺损区基本达到骨性愈合;对照侧仍有较大的ABM颗粒未降解,缺损中央部位仍有未愈合区域,有骨髓腔形成。结论ABM是良好的骨移植替代材料,PRP具有促进成骨作用,能加速骨缺损的修复。     

同种异体松质骨植骨治疗兔骨外露型桡骨缺损效果评价

临床治疗开放性骨折骨缺损的传统方法是行彻底清创和抗炎治疗，待伤口闭合后再以带血管的骨及皮瓣行Ⅱ期修复骨缺损。缺点为时间较长，技术要求高且失败率高。近期，我们进行了同种异体松质骨植骨治疗兔骨外露型桡骨缺损的实验研究，旨在为临床治疗骨缺损提供依据。     

启事

临床治疗开放性骨折骨缺损的传统方法是行彻底清创和抗炎治疗，待伤口闭合后再以带血管的骨及皮瓣行Ⅱ期修复骨缺损。缺点为时间较长，技术要求高且失败率高。近期，我们进行了同种异体松质骨植骨治疗兔骨外露型桡骨缺损的实验研究，旨在为临床治疗骨缺损提供依据。     

骨碎补总黄酮预处理转CNTF成肌细胞修复兔桡骨缺损的效果

目的探讨微囊化骨碎补总黄酮(AFDR)预处理转CNTF成肌细胞修复兔桡骨缺损的效果。方法取前期研究中的低浓度AFDR含药血清联合成骨诱导剂预处理转CNTF成肌细胞进行成骨诱导分化,微囊化处理待移植。24只新西兰大白兔行桡骨缺损造模,根据处置条件随机均分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(n=6),Ⅰ组为AFDR预处理转CNTF成肌细胞微囊与负载BMP的HA凝胶组,Ⅱ组为转CNTF基因成肌细胞微囊与负载BMP的HA凝胶组,Ⅲ组为仅负载BMP的HA凝胶组,Ⅳ组为仅注入HA凝胶组,植入后8、12 w取标本大体观察,12 w后组织学染色观察骨缺损愈合情况。结果微囊化细胞存活率良好,不影响药物和转基因细胞的活性;移植后各组实验动物存活良好,未发现全身及骨缺损局部明显的免疫排斥反应。标本大体观察及病理组织HE染色显示Ⅰ、Ⅱ组均能够很好地修复兔桡骨缺损,可见新生骨及大量骨痂形成,而Ⅲ组和Ⅳ组修复后较差。结论中药预处理转染CNTF基因成肌细胞和BMP的复合移植物有较强的骨愈合能力,可为桡骨缺损修复提供更多的材料学基础。     

不同材质异体骨移植治疗创伤性骨缺损临床分析

采用同种异体骨移植治疗创伤性骨缺损38例.所有患者随访10个月以上,37例骨性愈合,其中大段异体骨复合自体骨移植15例骨折愈合,感染性骨缺损感染复发1例,骨折不愈合;局限性骨缺损松质骨颗粒复合自体骨髓移植22例骨折全部愈合.认为同种异体骨为一种良好骨植入材料,长段异体骨复合自体骨后可用于创伤造成的大段骨缺损,异体松质骨颗粒复合自体红骨髓移植可用于修复陈旧性骨折和局限性骨缺损.     

脱钙小牛骨与兔骨髓基质干细胞移植诱导兔脊柱融合的作用研究

目的探讨脱钙小牛骨(异种骨)与兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨作用。方法将36只兔随机分为3组各12只,分别进行兔椎体间融合。A组植入自体髂骨;B组单纯植入脱钙小牛骨(异种骨);C组预先取BM-SCs培养,植入脱钙小牛骨(异种骨)+BMSCs复合物。于术后4、8、16周行X线检查,观察骨缺损修复及骨塑形情况,骨痂标本行HE染色组织学观察,参照Lane-Sandhu X线评分标准及组织学评分标准,对各组椎间融合程度进行评分。结果术后16周,X线检查显示3组椎间骨痂连续,均获得椎间融合基本完成,放射学检查结果无统计学差异。术后4、8、16周时,A、C组与B组相比,各时间点上Lane-Sandhu组织学评分均有统计学差异(P均<0.05)。结论脱钙小牛骨本身缺乏成骨和骨诱导作用,单独进行椎体间融合作用有限。     

VEGF通路对体外冲击波联合仙桃草治疗骨不连骨痂中成骨细胞增殖作用的影响

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通路对体外冲击波联合仙桃草治疗兔桡骨骨不连骨痂中成骨细胞增殖作用的影响。方法制作100只兔桡骨骨不连模型,造模成功后随机分为四组:A组为体外冲击波联合仙桃草治疗组,B组为单纯仙桃草治疗组,C组为单纯体外冲击波治疗组,D组为完全对照组。于治疗后不同时相点(第1、2、4、8、12周)分别取材,H-E染色观察成骨细胞计数,免疫组织化学观察VEGF表达情况。结果体外冲击波联合仙桃草治疗组能够加速成骨细胞增殖并上调VEGF表达,与其他三组比较差异有统计学意义(P0.01)。其中,成骨细胞增殖与VEGF表达的变化曲线大致相同,于第2周后明显增多,第8周到达峰值,第12周时较前稍降低,但数量仍较多。结论体外冲击波联合仙桃草治疗骨不连效果安全可靠,其机制可能是通过对骨痂中VEGF细胞因子的影响,促进成骨细胞的增殖,来达到治疗骨不连的目的。     

体外冲击波联合高压氧治疗兔桡骨骨折骨不连的实验研究

目的探讨体外冲击波联合高压氧治疗兔桡骨骨折骨不连的效果及作用原理。方法选用新西兰雄性健康标准实验大白兔48只(月龄及体重相当),无菌条件下制作兔双侧桡骨骨不连模型,采用随机数字表法随机分成四组,每组12只。其中A组为体外冲击波联合高压氧治疗组;B组为单纯高压氧治疗组;C组为单纯体外冲击波治疗组;D组为对照组,不做任何处理。分别在治疗前及治疗后第2、4、8、12周摄X线片并处死部分实验动物取活组织进行大体观察、骨折间隙变化、骨痂钙含量测定、光镜检查骨痂成骨细胞计数,最后进行统计学分析。结果 X线观察,A组与B、C、D组骨不连间隙4、8、12周差异有统计学意义(P0.05)。A、C两组骨痂钙元素含量2、4、8、12周差异有统计学意义(P0.05),骨痂成骨细胞计数2、4、8周差异具有统计学意义(P0.05)。结论体外冲击波联合高压氧对骨不连的治疗效果优于单纯体外冲击波治疗,单纯高压氧治疗对骨不连无明显帮助,高压氧可作为体外冲击波治疗骨不连的一种良好的协同方法。     

血管化复合组织工程骨的构建及在实验性下颌骨缺损修复中的应用

目的构建血管化组织工程骨,并探讨其在实验性下颌骨缺损修复中的效果。方法将12只实验用犬随机分为四组各3只,分别对其双侧下颌骨体部造成30mm×15mm椭圆形缺损,用自身对照法进行对比研究,右侧骨缺损为实验侧,左侧为空白对照侧。A组实验侧植人自体骨髓基质干细胞（BMSc）、富血小板血浆（PRP）、人重组骨形成蛋白2（rhBMP-2）与聚乳酸（PLA）;B组植入BMSc、rhBMP-2与PLA;C组植入BMSc、PRP、PLA;D组植入PLA。术后4、8、12周时分别观察各组缺损处组织形态及X线影像学表现,测量横断面切片血管面积百分比及图像光学密度值,评价成骨效果。结果各组右侧缺损均有新生骨及血管形成,X线检查示有高密度骨痂影,数量A组〉C组〉B组〉D组,且呈时间依赖性;空白对照侧缺损区均未见新骨形成,缺损为纤维组织充填,均无阻射影像。各时间点A、C组横断面切片血管面积百分比均大于B、D组,A、B、C组骨光学密度均明显大于D组,P均〈0．05。结论本研究构建的血管化复合组织工程骨具有快速成骨及促进新生骨血管化的效能,且无异物排斥反应及毒副作用;取自自体的BMSCs及PRP来源丰富,采集、制备方便,具有良好的应用前景。