NF-κB"诱骗"寡核苷酸对结肠癌SW480细胞IL-8表达的影响

目的 探讨核转录因子κB (NF-κB)"诱骗(decoy)"寡核苷酸(ODNs)对结肠癌SW480细胞IL-8表达的影响.方法 体外培养SW480细胞,LPS(10 μg/L )刺激3 h后,用脂质体lipofectin2000介导NF-κB decoy ODNs转染 6 h,ELISA法检测上清液中IL-8,RT-PCR检测细胞IL-8 mRNA,并设对照组、LPS组、SODN组、lipofectin2000组.结果 转染NF-κB decoy ODNs细胞的 IL-8 mRNA和IL-8的表达高于对照组(P<0.01),但明显低于其他组(P<0.01). 结论 NF-κB decoy ODNs明显抑制SW480细胞IL-8的表达.     

NF-κB decoy寡核苷酸对结肠癌SW480细胞TLR4表达的影响

目的 探讨核转录子κB(NF-κB)decoy寡核苷酸(ODNs)对结肠癌SW480细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响. 方法 体外培养SW480细胞,LPS(10μL)刺激3 h后,用脂质体Lipofectin2000介导NF-κB decoy ODNs转染6 h,RT-PCR法检测细胞的TLR4 mRNA.设对照组、LPS组、SODN组、Lipofectin2000组. 结果 转染NF-κB decoy ODN的SW480细胞的TLR4 mRNA表达明显高于对照组(P<0.01),但明显低于其他组(P均<0.01). 结论 NF-κB decoy ODNs明显抑制SW480细胞TLR4的表达.     

NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药性的逆转作用

目的探讨核转录因子κB（NF-κB）decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/阿霉素（ADM）耐药的逆转作用。方法应用脂质体转染方法将NF-κB decoy寡核苷酸质粒转入SW480及SW480/ADM细胞株并证实基因转入成功,MTT法检测SW480及SW480/ADM对ADM的药物敏感度并观察NF-κB decoy寡核苷酸对耐药的逆转程度。结果构建NF-κB decoy寡核苷酸有效,能降低核内NF-κB表达;核内NF-κB表达可以导致SW480耐药细胞株药物敏感度增高,并与剂量和时间相关。结论 NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药有明显的逆转作用。     

糖尿病患者外周血树突细胞功能活性检查及抑制NF-κB活性的意义

目的 检测糖尿病(DM)患者外周血单个核细胞(PBMNCs)培养树突细胞(DC)的功能表达及其临床意义, 探讨DC成熟过程中核因子 (NF)-κB基因的作用.方法 DM患者及健康成人PBMC体外经GM-CSF和IL-4诱导培养DC,在DC培养中加入NF-κB特异性低脱氧核苷酸(ODN)阻断NF-κB活性,检测细胞表面分子表达以及混合淋巴细胞反应(MLR)检测其功能变化.结果 DM患者外周血培养获成熟DC数量较多,DC表面标志较正常对照表达升高,具有较强的激发MLR的能力,DC成熟高于正常人.但NF-κB ODN可以抑制DC表面标志的表达,阻碍DC发育成熟,降低激发MLR的能力,并不可被脂多糖(LPS) 所逆转.结论 DM患者DC免疫功能高于正常对照DC功能状态,NF-κB是DC发育成熟过程中关键性调控基因.应用NF-κB ODN可抑制DC成熟,诱导生成耐受原性未成熟DC.     

核因子-κB反义寡核苷酸对系膜细胞炎症因子基因表达的影响

目的 :探讨NF κB反义寡核苷酸 (oligodeoxynucleotide ,ODN)对人肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响 ,为利用NF κB反义ODN治疗肾小球炎性病变奠定基础。　 方法 :人工合成p65反义、正义及错配ODN并行全程硫代磷酸化修饰。应用核酸酶保护法观察阳离子脂质体介导的不同浓度的反义ODN(0 0 0 1、0 0 1、0 1、1、1 0μmol/L)对系膜细胞TNF α、IL 1α、IL 1 β、MCP 1、IL 8、TGF β1mRNA表达的影响 ,以正义ODN(1 0 μmol/L)及错配ODN(1 0 μmol/L)作为对照组。　 结果 :正常培养状态下 ,系膜细胞可组成型表达TNF α、IL 1 β、IL 8和TGF β1mRNA ,而不表达IL 1α和MCP 1mRNA。细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)刺激后上述 6种炎症因子表达显著上调。p65反义ODN可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞炎性细胞因子TNF α ,IL α,IL 1 β,MCP 1和IL 8的基因表达 ,而对TGF β1无显著抑制作用 ;p65正义及错配ODN均不能抑制炎性细胞因子的表达。　 结论 :p65反义ODN可明显抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞炎性细胞因子的表达 ,提示NF κB在肾小球疾病进展中起关键性调控作用 ,其反义ODN有可能应用于肾脏病变的实验性治疗之中     

小鼠脏器核转录因子NF-κB活性观察

目的　为了研究核转录因子 (NF κB)在老化小鼠各脏器中的表达及其活性的改变 ,以期探讨其在老化及多器官功能不全发生过程中的作用。方法　用免疫组化法检测NF κB在小鼠各脏器中的表达情况 ,同时用凝胶阻滞分析法观察NF κB的活性。结果　在老化小鼠的各脏器中 ,NF κB的表达量及活性均有不同程度的增加 ,尤以肺脏的改变最为显著。结论　NF κB可能是老化及肺启动的老年多器官功能不全过程中的一个非常关键的转录因子。     

脂肪细胞AMPK活性对NF-κB及炎症因子的影响

目的 探讨肥胖启动炎症的分子机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,取诱导分化第8天的脂肪细胞,分为空白对照组、激动剂组和抑制剂组.空白对照组将高糖DMEM培养基作用于诱导分化的脂肪细胞;激动剂组将含0.5 mmol/L 5氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)的高糖DMEM培养基作用于脂肪细胞1h;抑制剂组将含10 μmol/L Compound C的高糖DMEM培养基作用于脂肪细胞1h,收集蛋白及培养液于-80℃保存.Western blot法检测磷酸化AMPK(p-AMPK)及p-NF-κB表达.酶联免疫吸附试验法测定IL-6与TNF-α水平.结果 与空白对照组比较,激动剂组p-AMPK蛋白表达明显升高,p-NF-κB蛋白表达明显降低;而抑制剂组p-AMPK蛋白表达明显降低,p-NF-κB蛋白表达明显升高,P均＜0.05.与空白对照组比较,激动剂组TNF-α与IL-6表达均明显降低,而抑制剂组TNF-α与IL-6表达均明显升高,P均＜0.05.结论 AMPK可抑制NF-κB信号及炎症因子的分泌,肥胖导致炎症可能与肥胖时AMPK活性降低引发NF-κB信号活化增强有关.     

外源性神经生长因子对雪旺细胞中NF-κB mRNA 表达的影响

目的：观察外源性神经生长因子（NGF）对雪旺细胞（SCs）中核转录因子κB（NF-κB）mRNA表达的影响。方法体外培养SCs，用S-100免疫组化染色鉴定细胞纯度。取第4代优质细胞，随机分为实验组（ NGF）、阻断组（NGF＋anti-NGFR）、对照组（PBS），提取各组总mRNA，分别用紫外分光光度计、1．5％琼脂糖凝胶电泳观察结果，通过实时荧光定量PCR检测NF-κB mRNA的表达。结果体外培养的SCs与倒置显微镜下观察到的活体细胞形态一致，S-100免疫组化染色显示，SCs纯度达到91％。紫外分光光度计观察A260/A280为1．8～2．2，1．5％琼脂糖凝胶电泳可见28、18 s两条清晰条带，证实提取的mRNA质量良好。实时荧光定量PCR检测发现，与对照组、阻断组相比，实验组NF-κB mRNA的表达显著增高（P均＜0．01）。结论外源性NGF可以上调SCs中NF-κB mRNA的表达。     

NF-κB和糖尿病β细胞凋亡

核因子κB(NF-κB)通过促进细胞因子、活性氧簇和Fas相关基因的表达介导的β细胞凋亡,可以诱发1型糖尿病。阻断依赖NF-κB的信号通路,对抗β细胞凋亡,能为糖尿病(特别是1型糖尿病)的防治提供新的手段。     

核转录因子-κB圈套寡核苷酸对环格列酮诱导肺癌细胞分化作用的影响

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸在环格列酮对肺癌细胞A549增殖抑制和分化调控过程中的影响。方法 运用基因转染技术将NF-κB圈套寡核苷酸转入人肺癌细胞A549中,凝胶阻滞分析实验(EMSA)检测转染前后NF-κB活性的变化,免疫印迹观察转染前后多药耐药蛋白(mdrl)的变化。进而以。100μmol/L环格列酮处理转染和未转染的细胞1-4d,生长曲线观察A549细胞生长,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫印迹观察处理前后细胞周期素D1的变化。结果 (1)EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降,mdrl蛋白表达水平降低。(2)环格列酮能抑制A549细胞增殖。(3)转染NF-κB圈套寡核苷酸增强环格列酮对A549细胞增殖的抑制作用,更多的细胞被阻滞于G1／G0期,细胞中细胞周期素D1的水平更低。结论NF-κB圈套寡核苷酸能增加肺癌细胞A549对环格列酮的敏感性,即NF-κB圈套寡核苷酸能协同环格列酮抑制肺癌细胞A549的恶性增殖及诱导其分化。     

辛伐他汀对NF-κB-DNA结合活性和表达的影响

目的观察辛伐他汀对兔动脉粥样硬化（AS）斑块中核因子-κB（NF-κB）-DNA结合活性及其表达的影响,进一步探讨辛伐他汀抗AS的作用机制。方法将36只雄性新西兰大耳白兔随机分为正常对照组（NC）、高脂对照组（HC）和辛伐他汀组（HC+S）。实验中动态观察血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的变化;实验结束时,用电泳移动迁移技术（EMSA）检测3组兔主动脉组织中NF-κB-DNA结合活性;用免疫组化技术观察各组血管组织中NF-κB的表达;显微镜下测定各组主动脉内膜厚度与斑块面积。结果用药后4、8、12周时,（HC+S）组的TC、TG、LDL-C水平显著低于HC组（P<0.05）,但高于NC组（P<0.05）;（HC+S）组的NF-κB-DNA结合活性及其表达强于NC组（P<0.05）,但弱于HC组（P<0.05）;（HC+S）组的AS斑块面积及血管内膜厚度均大于NC组（P<0.05）,但小于HC组（P<0.05）。结论辛伐他汀可以抑制NF-κB-DNA结合活性及其表达,减轻AS的形成。     

黄芪注射液对急性胰腺炎大鼠NF-κB活性、NF-κB及TNF-α mRNA表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对实验性急性胰腺炎大鼠NF-κB活性、NF-κB mRNA及TNF-α mRNA的影响.方法:♂ SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组和黄芪小剂量治疗组[0.10 mL/(100g·d)1、中剂量治疗组[0.15 mL/(100 g·d)]、大剂量治疗组[0.20 mL/(100 g·d)].用5%牛磺胆酸钠胰管内注入[0.10 mL/(100 g·d)]诱导大鼠急性胰腺炎模型,黄芪注射液各组造模前30 min给予黄芪注射液尾静脉注射,造模6 h后处死大鼠取胰腺组织标本.光镜观察胰腺组织的病理变化,并对胰腺组织标本进行病理评分:免疫组织化学法测定胰腺细胞NF-κB活性.RT-PCR法检测胰腺组织中NF-κB mRNA和TNF-α mRNA表达.结果:与假手术组比较,模型组胰腺组织病理评分、NF-κB活性及TNF-α mRNA表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,治疗各组病理评分、NF-κB活性及TNF-α mRNA表达显著下降(P<0.05或0.01).NF-κB活性及TNF-αmRNA表达呈正相关关系(r=0.542,P<0.05),各组NF-κB mRNA的表达均为阳性,差异无显著性(P>0.05).结论:活化的NF-κB可通过上调TNF-α mRNA的表达参与急性胰腺炎的发生、发展,黄芪注射液能显著降低实验性急性胰腺炎大鼠的NF-κB活性、TNF-α mRNA表达,从而减轻急性胰腺炎损害程度.     

核转录因子NF-κB对血管损伤和新生内膜形成的影响

目的:探讨核转录因子NF-κB对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜的作用。方法:原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB水平。制作大鼠血管球囊损伤模型,检测血管新生内膜形成及单核细胞化学趋化因子(MCP-1)、NF-κBp65和细胞外信号调节激酶(ERK2)的表达。结果:增殖的平滑肌细胞PCNA和NF-κBp65蛋白水平表达增加。NF-κBp65反义和诱骗寡核苷酸抑制PCNA表达。大鼠血管球囊损伤后第7天,正义组、诱骗对照组、模型组的内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值达到高峰。反义组、诱骗组和反义诱骗组显著降低内膜与中膜比值(P<0.05)。球囊损伤后3d、5d、7d,MCP-1mRNA和蛋白质水平持续而明显的表达增强,14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义诱骗组在各时间点均能减少MCP-1mRNA和蛋白质表达。Western Blot检测显示血管球囊损伤后7d,NF-κBp65、ERK2的蛋白合成达到高峰。反义组、诱骗组、反义诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论:增殖的平滑肌细胞NF-κBp65基因表达增加。NF-κB调控PCNA、MCP-1、ERK2的基因表达和蛋白质水平。局部转染NF-κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制血管新生内膜的形成。     

核因子-κB活化机制及其对粥样斑块细胞的作用

核因子－κB是调节细胞基因转录的关键因子之一,它参与了许多与炎症反应有关的基因的表达调控。动脉粥样是硬化是一种炎症性疾病,核因子－κB存在于参与病变发展的多种细胞内,与病变的发生和发展有关,本文就核因子－κB的概况及在动脉粥样硬化病变发生和发展中的作用做一综述。     

TNF-α诱导脑胶质瘤细胞凋亡过程中NF-κB、IκB活性的研究

目的探讨核转录因子-κB（NF-κB）及其抑制因子（ⅠκB）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人脑胶质瘤细胞株U251细胞凋亡过程中生物活性的变化。方法应用流式细胞仪检测TNF-α对U-251细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。用免疫组化方法检测肿瘤细胞p65的表达，用Western blot检测IκB蛋白的变化。结果TNF-α可诱导U251细胞凋亡，激活细胞中p65并诱导ⅠκB降解；抗氧化剂二硫碳吡咯烷醇（PDTC）可抑制TNF-α诱导的ⅠκB的降解及NF—κB的激活，增强TNF-α诱导U251细胞的凋亡。结论TNF-α在诱导U251细胞凋亡的过程中可激活NF—κB。抑制NF—κB活性。可增强TNF-α诱导细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷对HL-60细胞活性及NF-κB表达的影响及意义

收集1．0、2．5、5．0mmol／L三氧化二砷（ATO）体外作用48h后的急性髓系白血病细胞株（HL-60细胞），MTT法分析细胞活性，RT-PCR法检测NF-κB基因表达水平。结果HL-60细胞均有明显凋亡；1．0μmol／LATONF-κB表达上调，2．5μmol／LATO作用后NF-κB基因表达明显降低，5．0μmol／LATO作用后细胞数减少，未作NF-κB检测。认为ATO可促进HL-60细胞凋亡；NF-κB活性高表达对HL-60细胞凋亡起一定作用；临床应用ATO时应注意用量，保证有效药物浓度。     

中药复方861抑制肝星状细胞NF-κB活性的体外研究

目的 研究中药方861对肝星状细胞NF－κB活性的影响。方法 将5mg/ml的复方861加入体外培养的大鼠肝星状细胞系作用48h,NF－κB活性的检测采用凝胶电泳移动抑制法,细胞培养液中细胞因子的检测采用ELISA法,细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测。复方861作用命名体外培养的肝星状细胞NF－κB结合活性比未加药的空白对照组显著减弱,细胞培养液中的IL－6和sICAM水平减低（P＜0.05）,星状细胞凋亡增加（P＜0.01）。结论 复方861显著抑制体外培养的肝星状细胞NF－κB活性可能为治疗肝纤维化中的重要机理之一。     

NF-κB活化与星形细胞肿瘤凋亡的关系

目的 探讨核因子κB(NF-κB)在星形细胞肿瘤组织中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法 应用免疫组化方法检测 85例星形细胞肿瘤组织及10例正常大脑组织中的NF-κB p65,并用Tunel法检测凋亡肿瘤细胞,分析NF-κB p65的表达与患者生存时间的关系.结果 星形细胞肿瘤中NF-κB p65蛋白阳性表达率为60.0%,对照组中NF-κB p65无表达.NF-κB p65在低级别与高级别星形细胞肿瘤的表达相比,P＜0.05.随着肿瘤恶性程度的增加,肿瘤细胞凋亡指数(AI)增高,NF-κB p65与AI呈正相关关系(r=0.437,P＜0.01).随访资料完整的45例中NF κB p65阴性者3 a生存率为72.2%,明显高于阳性者的33.3% (P＜0.05).结论 NF-κB是与星形细胞肿瘤相关的癌蛋白,NF-κB参与星形细胞肿瘤的凋亡.     

内毒素急性肺损伤TLR4-LPS信号传导对NF-κB活性的影响

目的本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用。方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组。静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度。结果肺损伤评分:ALI组TLR4拮抗剂干预组对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍。ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达。结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤。     

TNF-α诱导脑胶质瘤细胞凋亡过程中NF-κB、IκB活性的研究

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)及其抑制因子(IκB)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脑胶质瘤细胞株U 251细胞凋亡过程中生物活性的变化。方法应用流式细胞仪检测TNF-α对U-251细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。用免疫组化方法检测肿瘤细胞p65的表达,用W estern b lot检测IκB蛋白的变化。结果TNF-α可诱导U 251细胞凋亡,激活细胞中p65并诱导IκB降解;抗氧化剂二硫碳吡咯烷醇(PDTC)可抑制TNF-α诱导的IκB的降解及NF-κB的激活,增强TNF-α诱导U 251细胞的凋亡。结论TNF-α在诱导U 251细胞凋亡的过程中可激活NF-κB。抑制NF-κB活性,可增强TNF-α诱导细胞凋亡的作用。