DC-CIK与CIK体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨树突状细胞（Dc）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养后对白血病细胞株K562、淋巴瘤细胞株Raji、肺癌细胞株A549、胃癌细胞株BOG-803的杀伤作用。方法采集健康志愿者外周血50mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,分别用不同的细胞因子诱导,培养D0细胞与CIK细胞。然后将成熟的DC和CIK细胞混合培养,用流式细胞仪检测两组细胞中。D3＋CD56＋、CD3＋CD8＋T细胞的比例;用MTT法检测其对K562、P-ajj、A549、BCG-803细胞株的杀伤活性。结果DC-CIK组较CIK组具有较高的CD3＋CD56＋、CD3＋CD8＋T细胞比例（p〈0．05）;DC—GIK、GIK对K562、Pajj、A549、BCG-803细胞株均具有较强的杀伤作用,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增加;DC—CIK的杀伤活性较CIK明显增高（P〈0．05）。结论DC—CIK共培养体外可增强对肿瘤细胞的杀伤作用,为肿瘤的临床治疗提供了理论和实验依据。     

DC-CIK细胞与顺铂对乳腺癌细胞杀伤作用的研究

目的：研究DC-CIK细胞和不同浓度顺铂对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法将DC细胞和CIK细胞共同培养得到的DC-CIK细胞与顺铂分别作用于MCF-7细胞,共同培养12h、24 h和48 h,MTT法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,对比DC-CIK细胞和顺铂对MCF-7细胞的增殖抑制效果。结果与DC-CIK细胞共培养12 h、24 h与48 h,MCF-7细胞均出现一定的凋亡,增殖受到明显的抑制;与5×106个DC-CIK细胞共培养12h与40 ng/mL顺铂对其作用12 h的抑制效果相同,共培养24 h与50 ng/mL顺铂对其作用24 h的效果相同,共培养48 h与60 ng/mL顺铂对其作用24 h的效果相同。结论该研究为DC-CIK法治疗乳腺癌作出了实验室基础性研究,为临床DC-CIK细胞抑制乳腺癌细胞提供了理论依据。     

CIK、DC-CIK细胞杀伤胃癌MKN-28细胞的作用比较

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后对胃癌MKN-28细胞株的杀伤作用。方法取正常人外周血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,共培养成DC-CIK细胞,以MTS法测定不同组CIK细胞对MKN-28杀伤活性。结果与单纯CIK细胞相比较,DC-CIK组细胞增殖速率明显提高(P<0.05);具有更强的杀伤胃癌MKN-28细胞株的活性(P<0.05),效靶比为20.0∶1时,DC-CIK组对MKN-28的杀伤活性为(38.02±2.06)%,>CIK组的(29.78±1.84)%,差异有统计学意义。结论 DC-CIK细胞是一种增殖活性和细胞毒作用均高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。     

DC-CIK细胞免疫治疗应用

目的:研究DC-CIK在肿瘤中的应用,为DC-CIK的制备及临床细胞治疗技术探索便捷、高效和经济可行的方案。结果:树突状细胞(dendritic cells,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells,CIK)联合过继性免疫治疗因其具有高效的杀瘤活性,被认为是目前最有前途的肿瘤免疫治疗手段之一。DC与CIK共培养,构成了一个体外活化免疫体系,回输后能够有效地抵抗癌细胞对免疫细胞的抑制作用,发挥更持久的杀瘤活性,是主动特异性免疫治疗和过继免疫治疗相结合的典范。然而作为一个新的治疗手段,DC-CIK过继免疫治疗的方案和标准尚待进一步规范和统一。不良反应、应用时机、给药途径和方法等问题亦需要深入探讨。结论:DC-CIK已应用于多种恶性肿瘤的细胞免疫治疗中,众多研究表明在应用DC-CIK细胞免疫治疗后明显的延长了患者生存期、提高生存质量、并减少了肿瘤的复发和转移。随着DC-CIK过继性免疫治疗技术的不断改进和完善,DC-CIK必将成为新一代过继细胞免疫治疗的最佳方法之一。     

调节性T细胞对DC-CIK细胞增殖和抗肿瘤活性的影响

目的研究调节性T细胞对外周血来源的DC-CIK细胞增殖及杀伤活性的影响。方法无菌分离外周血单个核细胞,体外诱导分化为DC-CIK细胞。实验分2组:DC-CIK组为常规单个核细胞诱导分化的DC-CIK;DCCIK-Tregdel组为培养前利用免疫磁珠分选去除CD4+CD25+T细胞的外周血单个核细胞诱导分化的DC-CIK。细胞扩增倍数法检测2组细胞的增殖能力;MTT法检测肿瘤细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测免疫表型;ELISA法检测细胞因子分泌水平。结果培养14 d的DC-CIK-Tregdel组细胞的扩增倍数高于DC-CIK组,并且CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞高于DC-CIK组(P<0.05);在5∶1、10∶1、20∶1效靶比范围内,培养14 d的DCCIK-Tregdel组细胞对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤率明显高于DC-CIK组(P<0.05),并且这种杀伤作用随着效靶比的增高而增强;DC-CIK-Tregdel组培养上清液TGF-β水平低于DC-CIK组,而IFN-γ分泌水平明显高于DC-CIK组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+T细胞对DC-CIK抗肿瘤效应细胞具有免疫抑制作用,去除CD4+CD25+T细胞能增加DC-CIK细胞增殖能力和抗肿瘤活性,为DC-CIK-Tregdel细胞有效治疗肿瘤提供了实验依据。     

CIK及DC-CIK细胞在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

细胞因子激活的杀伤(CIK)细胞及树突细胞诱导的细胞因子激活的杀伤(DC-CIK)细胞均是新型的异质性免疫效应细胞群,其主要的效应细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子,兼有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和自然杀伤细胞的非主要组织相容性复合体限制性杀瘤优点。其与传统治疗方法相结合,可以使患者获得更好的临床受益率、更高的生存率和更长的生存期,显著提高患者的生活质量;应用DC-CIK比单独CIK具有更大的优势,可以提高靶向性和增强杀伤能力。CIK及DC-CIK的免疫细胞治疗为非小细胞肺癌的治疗提供了新的途径。     

CIK与树突细胞联合对肾癌细胞的杀伤研究

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）和树突状细胞（Dc）共同培养后CIK细胞的增殖活性、表型变化及对肾癌细胞株769一P的杀伤作用。方法采集健康人的外周血单个核细胞（PBMC）,置37℃、5％C02培养箱2h,收集非粘附细胞诱导分化成CIK,粘附细胞诱导为DC,在培养7d后DC与CIK按1：40的比例混合培养,分别在3d、6d收集细胞同时以单纯CIK细胞为对照,运用LDH释放法检测对769一P细胞的杀伤活性。结果Dc—CIK共同培养后增殖速度明显快于单纯的CIK细胞,培养第10天时单纯CIK的CD3CD8、CD;cD未双阳性率分别为（50．4±1．8）％、（20．1±5．2）％,共培养3dDC—CIK的CD;CD8＋、CD36＋未的阳性率分别为（67．2±5．2）％、（37．9±4．1）％,6dDC-CIK的CD3＋CD8、CD3CD56的阳性率分别为（75．2±3．1）％、（48．3±2．9）％,表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。在1：5—1：40靶效比范围内DC—CIK对肾癌细胞的杀伤活性高于单纯CIK细胞,且随效靶比增强杀伤活性增强（P〈0．05）。结论DC—CIK的增殖活性和细胞毒活性均高于单纯CIK细胞。     

化疗联合CIK／DC细胞治疗中晚期结肠癌的临床疗效观察

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）和树突状细胞（DC）联合化疗治疗结肠癌患者的临床疗效。方法63例中晚期结肠癌患者随机分为2组：研究组（化疗联合过继免疫治疗组）32例,对照组（单纯化疗组）31例,观察2组患者临床疗效、生活质量、免疫指标的变化。结果研究组化疗联合CIK／DC细胞治疗后,总有效率（CR＋PR）为65．62％。对照组单纯化疗后,总有效率为41．94％。2组之间总有效率的差异有统计学意义（χ2=4．58,P〈0．05）。研究组第1、2年生存率为96．4％、87．3％,对照组第1、2年生存率为91．3％、82．7％,差异无统计学意义（P〉0．05）。研究组治疗后生活质量及免疫功能明显高于对照组（P〈0．05）。结论化疗联合过继免疫治疗中晚期结肠癌近期疗效好,可明显提高患者的生活质量和免疫功能。     

HPV-16E7负载DC激活CIK细胞增强宫颈癌细胞杀伤效应的研究

目的观察人乳头瘤病毒（HPV）-16E7特异性高表达的树突状细胞（DC）对细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞激活及宫颈癌细胞杀伤效应的影响。方法采用流式细胞术检测HPV-16E7载体转染DC后其细胞表型,流式细胞术检测HPV-16E7负载DC与CIK细胞共培养后CIK细胞的细胞表型。ELISA法检测HPV-16E7负载DC-CIK细胞、阴性对照负载DC-CIK细胞、DC-CIK细胞、单纯CIK细胞中CIK细胞分泌的IL-12、IFN-γ、TNF-α等细胞因子的表达水平,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测CIK细胞对宫颈癌Hela细胞的杀伤活性。结果HPV-16E7负载可促使DC成熟,细胞表面标志物CD83、CD86及HLA-DR的表达上调,CD14表达下调。经过HPV-16E7负载DC共培养的CIK细胞,CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例均上调,细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-α的水平亦均上调,CIK细胞表现出更强的宫颈癌Hela细胞杀伤活性。结论HPV-16E7负载DC不仅能激活CIK细胞,还可增强CIK细胞的宫颈癌细胞杀伤效应。这为宫颈癌的细胞免疫治疗提供新思路。     

OK-432激活抗原负载的树突细胞对CIK细胞的作用

目的：探讨OK-432对人类外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外培养的影响，及由此产生的DC对CIK细胞抗瘤效果的影响。方法：从PBMC中分离mCD14^ 的DC前体细胞，经粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)的作用．得到不成熟DC，再予以负载肿瘤抗原及经促成熟因子(MPF)OK-432或LPS的刺激后得到成熟DC。同时将PBMC在细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)。通过对DC表面标志物的分析、经DC作用的CIK增殖活性、抗瘤效果的检测．研究了不同MPF对DC成熟和功能的影响。结果：OK-432可促进体外培养的DC高表达CDla、CD80、CD83、HLA—DR,其作用强于LPS；经OK-432作用的负载抗原的DC可促进CIK增殖、加强CIK的抗瘤效率。结论：OK-432可促进体外培养的DC成熟．并借此增强CIK的抗瘤作用。     

DCs和CIK细胞的研究进展

近几年,随着肿瘤的过继免疫治疗的新近发展,DCs和CIK细胞治疗恶性肿瘤逐渐成为国内外关注的焦点。自上世纪80年代发现这种细胞起,人们对于DCs、CIK细胞生物学特征的认识一直在不断的更新,目前以DCs和CIK细胞为主的治疗恶性肿瘤的技术已经在国内临床开展,并有望成为肿瘤综合治疗研究的新方向。     

自体CIK细胞对晚期结肠癌患者免疫功能的影响

目的探讨细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对晚期结肠癌患者免疫功能的影响。方法检测37例晚期结肠癌患者(治疗组)治疗前后和40例非肿瘤患者(对照组)CIK免疫表型及T淋巴细胞rDNA转录活性的变化,并进行比较。结果治疗前患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD19、自然杀伤细胞和T淋巴细胞rDNA转录活性均低于对照组(P<0.05);治疗后以上免疫表型和T淋巴细胞rDNA转录活性高于治疗前(P<0.05);三组间CD8+比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论晚期结肠癌患者免疫功能低下,CIK细胞能改善和提高患者免疫功能,具有良好的应用前景。     

DC-CIK对卵巢癌细胞杀伤作用及临床治疗安全性评价

目的 树突状细胞(dendritic cells,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)经体外共培养后,探讨其增殖能力和对卵巢癌细胞的杀伤能力,并对其治疗卵巢肿瘤的安全性进行评价.方法 提取健康志愿者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),通过不同细胞因子组合,分别诱导培养DC和CIK细胞,并共培养,用苔盼蓝染色计算活细胞扩增倍数,流式细胞术检测细胞表型,乳酸脱氢酶法(LDH)检测细胞毒性,酶联免疫剂吸附法(ELISA)检测细胞分泌因子水平.在卵巢癌患者签署知情同意书后,提取卵巢癌患者PBMC,诱导DC、CIK,并共培养,将质检合格的DC、CIK细胞通过腹腔注射的方式回输入患者体内,根据美国国立癌症研究所发布的《常见不良反应标准》,对不良反应进行判定,评价DC-CIK细胞治疗的近期安全性.结果 DC和CIK细胞共培养后,CIK增殖速度明显快于CIK单独培养,DC和CIK成熟分型明显增加,对肿瘤的杀伤能力比CIK单独培养时更强,且随着效靶细胞比的增加,杀伤肿瘤能力逐渐增强;DC-CIK回输早期,患者并未出现明显副反应.结论 DC-CIK共培养后,细胞增殖能力、成熟分型及协同抗瘤作用均增强;此外,DC-CIK相对安全可行.     

应用流式细胞术分析CIK细胞胞内Th1/Th2细胞因子

目的：建立细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)体外扩增的方法,并从单细胞水平分析CIK细胞的胞内Th1／Th2类因子产生的情况,进一步明确CIK细胞的免疫学特性及其参与的免疫效应机制。方法：取健康人外周血单个核细胞(PBMC),按一定的时间顺序分别加入IFN-γ、IL-2和CD3单抗,体外扩增CIK细胞,再应用流式细胞术,经刺激、阻断、固定、穿透和标记等过程测定CIK细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果：外周血单个核细胞加细胞因子培养两周后CD3^ CD56^ 增加,培养至第21天、28天未见明显下降;诱导后CD3^ CD8^ 细胞量与CD3^ CD4^ 量相比明显增多;单细胞胞内细胞因子测定显示扩增后的CIK细胞Th1／Th2因子状态明显向Th1偏移。结论：采用多种因子组合刺激外周血单个核细胞,可大量诱导出CD3^ CD56^ 双阳性细胞,具高度增殖性,是一类新型的免疫过继疗法细胞;其偏移的Th1／Th2因子状态可作为解释其极强的细胞毒作用的理论依据。     

CIK细胞治疗妇科肿瘤的临床研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗妇科肿瘤的近期临床疗效、免疫学活性及副反应.方法共收录2007年7月至2010年3月22例妇科肿瘤患者进行CIK细胞治疗,其中卵巢癌11例,子宫癌11例.经标准治疗方案治疗的患者,取外周血分离单个核细胞（PBMC）,体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性.所有患者均接受一定剂量的CIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应.结果当效靶比为16：1、8：1时,CIK细胞体外细胞毒活性杀伤率分别（82.33±9.35）%和（61.59±13.59）%.卵巢癌11例,近期疗效评价中,部分缓解4例,近期有效率为66.67%,疾病控制率为66.67%.子宫癌11例,近期疗效评价中,部分缓解6例,近期有效率为100%,无肿瘤进展时间为4～26个月,中位无肿瘤进展时间为13个月.与CIK细胞回输前相比,患者CD3＋、CD4＋、CD8＋均有明显的升高（P〈0.05）,这表示可以诱导患者产生特异性的免疫反应.22例患者在输注CIK过程中未出现不良反应.结论 CIK细胞对妇科肿瘤有较好的临床疗效.     

转染肿瘤细胞总RNA的树突状细胞联合CIK细胞抗小鼠肝癌作用的实验研究

目的探讨转染小鼠肝癌H22细胞总RNA的树突状细胞(DC)疫苗体外抗小鼠肝癌的免疫作用。方法提取小鼠四肢长骨骨髓,在rmGM-CSF和rmIL-4体外刺激下增殖分化为DC。制备小鼠脾淋巴细胞,在体外经rmIFN-γ、anti-CD3、rmIL-2和rmIL-1b诱导成为细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK细胞)。制备肝癌H22细胞总RNA,体外转染DC,流式细胞仪检测转染前后的DC表面分子的表达情况。将转染H22细胞总RNA的DC和CIK细胞混合培养制备成为效应细胞,LDH释放法测定效应细胞对小鼠H22细胞、S180细胞的杀伤活性。结果经H22细胞总RNA转染后的DC,其MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子及CD83、CD86表达率明显增高,CD14表达率降低(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其对S180细胞的杀伤率(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其他各组效应细胞对H22细胞的杀伤率(P<0.05)。结论转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞具有高效而特异性的体外抗小鼠肝癌免疫作用。     

DC疫苗联合CIK细胞治疗非小细胞肺癌疗效观察

目的探讨自体肿瘤抗原负载的树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在非小细胞肺癌治疗中的临床疗效.方法采集70例非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞,加入细胞因子定向诱导成CIK及DC,培养的第5天用自体肿瘤抗原（Ag）负载DC,第8天将DC与CIK细胞共培养,14d后将联合培养的细胞（Ag-DC-CIK）分次回输给患者.治疗4周后,流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应;以35例单纯的CIK细胞治疗作为对照.结果（1）培养的第14天,Ag-DC-CIK细胞的增殖达（20.6±2.16）倍,对照组仅为（12.2±2.65）倍（P〈0.05）;CD3＋CD8＋细胞及CD3＋CD56＋细胞的表达也明显高于对照组（P〈0.05）;（2）70例接受治疗的患者中CD3、CD4、CD8T细胞的百分比均较治疗前有不同程度的提高,Ag-DC-CIK组57.14%（20例）的患者CD4/CD8比例调节至正常,与对照组（42.85%,15例）相比差异有统计学意义（P〈0.05）;（3）Ag-DC-CIK治疗后51.42%（18例）的患者Thl/Th2细胞因子比例恢复正常,而对照组恢复正常者仅占37.14%（13例）（P〈0.05）;（4）Ag-DC-CIK治疗组中Ⅱ、Ⅲ期患者的有效率分别为39.30%和28.60%,与对照组的相应期别（Ⅱ期26.90%,Ⅲ期22.20%）相比差异有统计学意义（P〈0.05）;（5）治疗后的副反应包括寒颤、发热及兴奋失眠,无1例出现毛细血管渗漏综合征及实质脏器的损害.结论肿瘤抗原负载的DC细胞可增强CIK细胞在非小细胞肺癌治疗中的临床疗效,有推广运用的价值.     

紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶方案联合自体CIK细胞输注治疗Ⅳ期胃癌的疗效与安全性研究

目的探讨紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶方案联合自体细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)输注治疗Ⅳ期胃癌的临床疗效及安全性。方法回顾性分析我科2008年5月—2010年3月经组织学或细胞学证实的Ⅳ期胃癌患者34例,化疗方案:确认患者白细胞数≥8×109/L时进行自体CIK细胞采血,送入实验室进行CIK培养,第1天。紫杉醇135 mg/m2,第2天。氟尿嘧啶500 mg/m2,1次/d,化疗泵持续静脉滴注,第3～7天,奥沙利铂100 mg/m2静脉滴注,维持3 h,第3天。CIK实验室培养成熟后回输,第14天。21 d为1个周期,2个周期后评价疗效。结果本组34例患者总有效率为70.5%(24/34),其中完全缓解率为2.9%(1/34),部分缓解率为67.6%(23/34),稳定率为23.6%(8/34),疾病进展率为5.9%(2/34)。中位疾病进展时间为8.3个月,中位总生存时间为11.2个月。主要毒性反应为外周血细胞下降、脱发及外周神经毒性。结论应用紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶方案联合自体CIK细胞输注治疗Ⅳ期胃癌,疗效显著,毒性反应较轻,治疗顺应性好,且提高了患者的生存质量,值得进一步推广。     

索拉菲尼联合细胞因子活化的杀伤细胞对肝癌的杀伤效应研究

目的 探讨索拉菲尼联合细胞因子活化的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)对肝癌细胞的体外杀伤效应.方法 取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-1、IL-2和抗CD_3单抗诱导CIK细胞成熟,流式细胞仪检测培养第1、7、14天的CIK细胞表型.Cell Counting Kit-8试剂盒(CCK-8)检测索拉菲尼、CIK细胞及两者联合对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应,并用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测肝癌细胞的凋亡率.结果 CIK细胞经多种细胞因子诱导培养后,CD_3+CD_(56)~+细胞比例明显上升,14d时CD_3~+CD_(56)~+ 细胞比例达(46.83±2.53)%,与第1天比差异有显著性(P<0.01),细胞量扩增了近1 000倍.索拉菲尼和CIK细胞在适当浓度及效靶比联合应用时表现出杀伤活性增强(P<0.01).索拉菲尼联合CIK细胞诱导的肝癌细胞BEL-7402凋亡率达(70.56±2.58)%,明显高于索拉菲尼组(45.38±1.76)%和CIK组(52.18±8.63)%(P<0.05).结论 索拉菲尼与细胞因子活化杀伤细胞疗法联合应用能明显增强对肝癌细胞的体外杀伤效应.