T 细胞型急性淋巴细胞白血病患者HOX11L2 基因的表达及其临床意义

目的　研究T 细胞型急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）患者HOX11L2 基因的表达及其临床意义。方法　采用回顾性分析方法对50 例患者性别、年龄、白细胞数量、FAB 分类（L1,L2 and L3）、分子生物学特点以及生存时间进行分析,观察HOX11L2 基因表达与临床特点及预后关系。结果　50 例T 细胞型急性淋巴细胞白血病患者中,表达HOX11L2 基因患者为12 例（24%）,其中男性7 例（58.3%）,女性5 例（41.7%）,HOX11L2基因表达者在男女性别之间的比较,差异无统计学意义（χ2=0.119,P=0.730）。表达HOX11L2 基因患者年龄在5~10岁间居多,表达率为58.3%,与其它年龄组之间的比较,差异有统计学意义（χ2=11.577,P=0.018）。HOX11L2 基因表达患者中白细胞计数≤ 50×109/L 的患者10 例（83.3%）,白细胞计数>50×109/L 的患者2 例（16.7%）,两组比较差异有统计学意义（χ2=5.469,P=0.019）。FAB 分类中,有75% 的HOX11L2 基因表达患者为L1 型,与L2 和L3 组相比较,差异有统计学意义（χ2=8.766,P=0.008）。其中34 例获得随访资料的患者,HOX11L2 基因表达组比非表达组生存时间短（中位生存时间分别为8.0 个月和11.0 个月）,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。结论　研究结果表明HOX11L2 基因主要表达于T-ALL 患者,且以L1 型儿童T-ALL 为主,HOX11L2 基因表达者预后不良,生存时间短。临床上通过HOX11L2 基因检测结果与常规细胞形态学、遗传学、荧光原位杂交等技术检测结果相结合,将对急性淋巴细胞白血病的鉴别诊断、分型、预后及微小残留病检测等具有十分重要的意义。     

实时定量聚合酶链反应检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排

我们利用SYBR Green Ⅰ荧光染料，应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测了15例B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，以探讨克隆性IgH基因重排在B-NHL诊断和鉴别诊断上的价值。     

miR-16 在 T 淋巴母细胞淋巴瘤 / 急性淋巴母细胞白血病中表达简

本研究探讨miR-16在T淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴母细胞白血病（T-LBL/ALL）中的表达及其与预后的关系.应用免疫组织化学法对宜共市人民医院血液科有详细随访资料的38例T-LBL/ALL石蜡标本进行CD3、cCD3、CD10、CD20、CD34、CD43、CD99、TdT、PAX-5、BCL-2和Ki67免疫组织化学标记检测,采用real-time RT-PCR方法检测miR-16的表达水平,以15例淋巴结反应性增生作为对照.结果表明：38例T-LBL/ALL中TdT阳性率最高（94.7％）,CD34阳性最低（22.1％）,PAX-5及CD20为阴性.在39.5％病例中Ki67大于80％.与淋巴结反应性增生相比较,miR-16在T-LBL/ALL中表达上调,其表达量是淋巴结反性增生的4.87倍（P＜0.05）.T-LBL中miR-16高表达组总体生存率下降（P＜0.05）.BCL-2蛋白表达阳性组预后优于阴性组预后（P＜0.05）.miR-16表达与BCL-2蛋白存在相关性（r=0.51,P＜0.05）.结论：在T-LBL/ALL中miR-16的高表达组总体生存率明显高于低表达组,提示miR-16可能与预后有相关性,而BCL-2蛋白表达阳性组预后好于阴性组,可能也是一种影响预后的因素.     

二代测序技术在儿童T淋巴母细胞淋巴瘤全外显子测序中的应用

目的建立从石蜡包埋的儿童T淋巴母细胞淋巴瘤（T-LBL）病理组织中提取基因组DNA,采用二代测序技术行全外显子测序检测的方法并分析其可行性。方法从10例儿童T-LBL石蜡包埋组织中提取基因组DNA,PCR反应扩增后采用二代测序技术行全外显子测序检测并确定致病位点,所获得的致病突变采用Sanger测序法测序确认,比较两种方法的一致性。结果10例石蜡包埋T-LBL组织标本中均成功提取到基因组DNA,采用二代测序技术开展全外显子测序测序均检测到致病突变;二代测序检测结果经Sanger测序法验证,证实致病突变确实存在,且与Sanger测序结果一致。结论基于二代测序技术的全外显子测序测序可用于检测石蜡包埋的儿童T-LBL病理标本的致病突变。     

从石蜡包埋的淋巴瘤组织提取DNA并定量检测EB病毒

目的 定量检测石蜡包埋的淋巴瘤组织中EB病毒（EBV）的表达,方法 对TES水浴DNA提取法进行了改良,从石蜡包埋的淋巴瘤组织中提取高质量的基因组DNA,以实时荧光定量PCR方法检测淋巴瘤组织EBV。结果在60例标本中平均提取DNA量为3．97ng（10／μm厚切片2片）,86．7％（52／60）标本DNA的纯度（260nm／280nm）≥1．6,其中50％（30／60）淋巴瘤组织EBV呈阳性表达（10^0～10^6拷贝／ngDNA）。结论 采用改良TES水浴法能获取石蜡包埋组织中高质量基因组DNA,使用该新的实验技术可有效地利用现有的标本资源进行与疾病相关科学的研究。     

HOX11~+急性T淋巴细胞白血病RUNX2基因启动子区域CpG岛甲基化及其表达的研究

本研究检测RUNX2基因在HOX11+急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株和T-ALL患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子区CpG岛甲基化的关系。以3株急性T淋巴细胞白血病细胞株sil-ALL、DND41和RPMI及38例T-ALL患者、29例治疗后完全缓解T-ALL患者骨髓和8例正常人骨髓为样本,采用RT-PCR检测RUNX2 mRNA表达水平,采用重硫酸盐测序法、甲基化DNA免疫沉淀技术和启动子寡核苷酸微阵列芯片分析基因启动子区CpG岛甲基化状态和基因功能。结果表明,高表达HOX11的T-ALL患者样本中会出现RUNX2基因启动子区域的甲基化。RUNX2基因启动子区域在HOX11+T-ALL的甲基化比率为78.9%,明显高于HOX11-ALL(36.8%),两组差异有统计学意义(P<0.01)。RUNX2在HOX11+的细胞株中的表达明显低于HOX11-的细胞株,RUNX2在HOX11+的T-ALL患者中的表达水平(0.581±0.257)明显低于HOX11-的T-ALL患者(0.835±0.317),并且RUNX2 mRNA的相对表达程度与HOX11 mRNA的相对表达程度成负相关(rs=-0.378,P<0.01)。RUNX2基因在T-ALL中的表达水平与其甲基化呈负相关(rs=-0.419,P<0.01)。结论:HOX11能负调控RUNX2的表达,RUNX2基因启动子甲基化是导致其在T-ALL中表达下调或基因沉默的原因,这种HOX11对RUNX2基因的抑制作用有可能就是临床上HOX11高表达T-ALL患者具有更好的无事件生存率和更长的总生存率的原因。RUNX2基因的表达和甲基化水平对判断T-ALL患者的疗效有一定意义,并有望成为一个诊断T-ALL的分子标志。     

肺癌组织中FHIT和TPX2基因的表达及临床意义的研究

目的探讨FHIT和TPX2基因在肺癌中的表达与临床病理因素的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）法,检测FHIT和TPX2基因在肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达。结果FHIT基因的表达水平在肺癌组织中的水平比正常肺组织低,差异有统计学意义（P〈0．05）,失表达率达74．2％。TPX2基因的表达水平在肺癌组织中的水平比正常肺组织高,差异有统计学意义（P〈0．05）,高表达率达64．5％。FHIT的表达异常与吸烟存在相关（P〈0．05）,TPX2的表达异常与临床病理因素均无关,两者之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论FHIT基因的失表达和TPX2基因的过表达在肺癌的发生发展中起重要作用,吸烟可能导致FHIT基因表达下降诱发肺癌。     

石蜡包埋组织中结核菌DNA与抗酸菌L型检测意义的探讨

３５例病理及临床证实结核和１０例正常胎儿石蜡包埋组织在进行了ＩＫ染色和ＰＣＲ检测发现：结核组３５例，ＩＫ染色：抗酸菌Ｌ型２８例（８０．８％），抗酸菌杆菌型２例，总阳性检出率为８５．７％（３０／３５）；ＰＣＲ检测；ＴＢ－ＤＮＡ阳性２９例（８５．７％）。两种方法的阳性检出率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。１０例正常胎儿对照两法检测均无１例阳性，提示：两法对石蜡包埋组织中的抗酸菌Ｌ型及杆菌型检测，都具有较     

改良的石蜡包埋组织中提取高质量基因组DNA

从石蜡包埋组织中提取基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）进行基因检测，在临床常用于疾病的回顾性调查和研究。目前国内外从石蜡包埋组织中提取基因组DNA，多采用经二甲苯脱蜡，该方法可以获得所需要的DNA，但整个抽提过程过长、所得的DNA量很较少，并且易出现DNA链的降解（小片段的DNA），同时在提取过程中所使用的有机溶剂二甲苯试剂易造成环境的污染和对操作者身体的伤害。为了改进从石蜡包埋组织中提取基因组DNA的方法。     

石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排的检测

目的：探讨克隆性免疫球蛋白重链第三互补决定簇区（IgHCD43）基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B－NHL）诊断方面的价值。方法：采用半巢式PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及银染技术,检测38例B－NHL、4例T－NHL及10例慢性扁桃腺炎,经福尔马林固定、石蜡包埋病理组织的克隆性IgHCDR3重排。结果：29例B－NHL及1例免疫组化未能明确细胞来源的NHL克隆性IgHCDR3重排阳性;4例T－NHL及10例慢性扁桃腺炎克隆性IgHCDR3重排阴性。结论：克隆性IgHCDR3重排可作为B－NHL与反应性增生鉴别的特生标志,大部分情况下可作为系分化标志。     

中期因子在急性白血病中的表达及其意义

目的 检测中期因子(Midkine,MK)基因在白血病患者中的表达,初步探讨其与白血病的关系.方法 应用实时定量逆转录PCR(RQ-RT-PCR)方法,对181例急性白血病(AL)患者、31名正常人骨髓标本进行了中期因子转录本的检测.结果 中期因子在初治和复发AL患者、AL完全缓解(CR)患者及正常人骨髓细胞均有表达.初治和复发AL患者中期因子表达明显高于正常人及CR患者(P＜0.01及P＜0.05).而正常人与CR患者相比差异无统计学意义.中期因子的表达在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)各亚型(包括pro-B-ALL,common-B-ALL,pre-B-ALL)及各年龄段均有显著升高(P＜0.01),且与T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、急性杂合性白血病及急性髓系白血病(AML)各FAB亚型问差异均有统计学意义(P值均＜0.01);与正常人相比,M2型患者中期因子表达明显升高(P＜0.01),与AML其他FAB亚型相比差异亦有统计学意义(P值均＜0.05);M3患者中期因子表达也较正常人明显升高(P＜0.05),但与除B-ALL和AML-M2外的其他白血病亚型间差异无统计学意义.CD34+患者较CD34-患者中期因子表达显著升高(P＜0.01),AML1-ETO融合基因阳性的M2患者较阴性的M2患者中期冈子表达显著升高(P＜0.05).结论 B-ALL、AML-M2和AML-M3型白血病患者中均存在中期因子基因不同程度的表达升高,为白血病诊断及其发病机制的研究提供了新的方向.     

SOX11基因在套细胞淋巴瘤患者中的表达及其临床意义

目的 探讨套细胞淋巴瘤(MCL)及其他B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者中SOX11 mRNA的表达情况及其在MCL中的预后意义.方法 采用实时定量RT-PCR方法 检测80例B-NHL患者(其中MCL 20例)肿瘤细胞SOX11 mRNA的表达水平,以GAPDH为内参照物,所得数据进行对数转化,组间分析采用Mann-Whitney非参数检验.结果 80例B-NHL患者SOX11 mRNA的中位表达水平为2.90(0.75～4.63),MCL患者的SOX11 mRNA水平明显高于其他B-NHL患者(P=0.014);白细胞增高、12号染色体三体、MYC基因扩增和近期疗效＜部分缓解(PR)的MCL患者SOX11 mRNA表达水平明显低于其他MCL患者(P值分别为0.042、0.013、0.028和0.009),但其与套细胞淋巴瘤国际预后指数(MIPI)分层、LDH、共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM)异常和P53缺失无显著相关性(P值分别为0.333、0.790、0.865和0.116).中位随访25个月,SOX11 mRNA高表达患者的无进展生存、总生存均优于低表达患者(P值分别为0.002和0.043).结论 SOX11 mRNA在MCL患者中高表达,且与部分预后因素相关;SOX11 mRNA高表达可能为MCL患者预后良好的指标.     

GATA-2在白血病患者中的表达及其意义

目的 探讨白血病患者GATA－2基因的表达及其临床意义。方法 应用RT－PCR对各类白血病患者GATA－2的表达进行检测,慢性粒细胞白血病（CML）和急性早幼粒细胞白血病（APL）同时检测bcr/abl和PML／RARα的表达。结果 初治／复发的急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）GATA－2的阳性率分别为93％和70％,慢性粒细胞白血病慢性期（CML－CP）为83％。正常人骨髓和外周血未检测到GATA－2。缓解期AML患者GATA－2的表达与初治／复发AML相比,差异无显著性;移植治疗后患者GATA－2的表达率显著下降;移植治疗后的CML患者在bcr/abl转阴后仍可检出GATA－2,而移植治疗后APL患者PML／RARα和GATA－2都为阴性。结论 GATA－2基因转录产物在正常人骨髓和外周血中低表达,在各类白血病中高表达。缓解期骨髓中仍有GATA－2的高表达,移植治疗后GATA－2表达显著下降。GATA－2高表达反映了患者体内残存的白血病干细胞,自体或异基因骨髓移植可以更好地清除白血病干细胞。     

pig7基因在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的检测pig7基因在急性白血病（AL）细胞中的表达水平及其临床意义，在基因甲基化调控方面探讨pig7基因表达异常的可能机制。方法应用实时定量逆转录PCR（RT—PCR）方法对138例AL患者、21名正常人骨髓标本以及6个白血病细胞株进行了pig7转录本的检测，并在全反式维甲酸（ATRA）作用下观察NB4细胞分化效应及pig7基因表达情况。进行限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的pig7转录剪接体。通过甲基化特异性PCR（MSP）检测白血病细胞pIg7基因启动子区域是否存在过度甲基化。结果AL进展期（包括初治、复发／难治）患者骨髓细胞pig7 mRNA相对表达水平与正常骨髓细胞相比明显降低（RQ中位数分别为0．62和18．30，P〈0．01），其中急性髓系白血病（AML）与急性淋巴细胞白血病（ALL）差异无统计学意义，而初治组与复发／难治组比较pig7 mRNA水平差异有统计学意义，前者明显高于后者（RQ中位数分别为1．43和0．16，P〈0．05）。pig7低表达患者完全缓解率也较低（P〈0．05）。NB4细胞经ATRA诱导分化后pig7表达水平由1．61±0．72增至44．75±3．93（P〈0．01）。酶切结果提示白血病细胞中仅存在SIMPLE剪接体。在K562、HL-60及Nalm-6细胞pig7启动子区域存在过度甲基化，而U937、NB4和kasumi-1细胞中该区域非甲基化状态占优势。结论pig7基因在AL的表达下调为白血病发病机制的探讨和疗效预测提供了新的思路。     

半巢式聚合酶链反应方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排

目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）bcl-2／IgH基因重排，并通过测定产物的序列，以了解所建方法的可靠性、方法运用专业引物设计软件设计bcl-2／IgH基因重排半巢式PCR引物，对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR（touch down PCR）扩增，检测bcl-2／IgH基因重排，并对其产物进行克隆和序列分析。结果 通过一步法检测到bcl-2／IgH基因重排8例，其中DLBCL6例，新鲜扁桃体组织2例；进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性，新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示：一步法检测到的8例中有3例为假阳性，而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2／IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191，LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。结论常用的检测bcl-2／IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性，其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合，进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增，提高诊断的准确性。     

肝细胞生长因子mRNA实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在淋巴瘤诊断中的价值

目的 构建肝细胞生长因子(HGF)mRNA定量标准,建立实时荧光定量(FQ)-PCR检测体系,探讨其检测淋巴瘤的应用价值.方法 提取总RNA,行逆转录(RT)-PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准.设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度,建立HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系,并定量检测47例淋巴瘤患者[霍奇金病(HD)11例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)36例;治疗后,获缓解34例,未缓解13例]和19例非肿瘤患者的淋巴组织标本中HGFmRNA表达.同时,用受试者工作特征(ROC)曲线法,评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度.结果 本研究构建的HGF mRNA定量标准和实时FQ-PCR检测体系的标准曲线斜率为-3.513,相关系数为0.999,扩增效率达92.6%;批内、日内和日间变异系数分别为2.1%、4.0%和6.8%;灵敏性达2拷贝/μ1.HGF mRNA在淋巴瘤组的表达(6.425 4-2.172)显著高于非肿瘤对照组(0.317±0.192,t=15.883,P＜0.001),缓解组的表达(6.157±1.712)显著低于未缓解组(7.591±1.184,t=2.768,P＜0.05),但在HD组和NHL组的表达差异无统计学意义(P＜0.05).ROC曲线提示,当临床诊断临界值为3.316时,HGF mRNA对淋巴瘤诊断的敏感度和特异度分别为93.6%和100%.结论 本研究成功构建了HGF mRNA的定量标准和实时FQ-PCR检测体系,并可用于淋巴瘤的HGF mRNA定量检测.     

非霍奇金淋巴瘤患者免疫球蛋白及T细胞受体基因重排研究

目的 研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓或外周血免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因单克隆重排特点及其临床意义.方法 以BIOMED-2引物系统及多重PCR方法对139例NHL患者骨髓或外周血标本进行Ig及TCR基因重排检测.结果 在B系NHL(B-NHL)中,82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中有70例(85.4％)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH、IgK、IgL单克隆重排阳性率分别为46.3％(38例)、62.2％(51例)和1.2％(1例).其他类型的B-NHL患者有39.4％(33例中有13例)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为33.3％(11例)和39.4％(13例),未检测到IgL基因单克隆重排.T系NHL(T-NHL)患者中有50.0％(24例中有12例)检出TCR基因单克隆重排,其中TCRB和TCRG单克隆重排阳性率分别为8.3％(2例)和45.8％(11例),TCRB和TCRG双重基因重排阳性率为4.2％(1例),未检测到TCRD单克隆重排.11例早期(Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ期)与46例晚期(Ⅲ、Ⅳ期)患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为36.4％和45.6％;10例惰性患者和47例侵袭性患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为40.0％和44.7％,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).除外CLL的57例NHL患者骨髓涂片检测骨髓侵犯阳性率为12.3％,明显低于骨髓基因重排检测阳性率(43.9％),两者差异有统计学意义(P＜0.05).敏感性试验表明多重PCR检测恶性克隆的敏感性为3.12％～6.25％.结论 NHL的临床分期和恶性程度不同,其Ig/TCR基因单克隆重排阳性率有差异,但未能证实其相关性.联合应用BIOMED-2多重引物可提高PCR检测骨髓和(或)外周血Ig/TCR基因单克隆重排的敏感性.多重PCR对NHL患者骨髓侵犯检测的敏感性优于骨髓涂片检查,有助于早期发现骨髓侵犯及预防复发.     

B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl—2／JH融合基因的检测及临床意义

目的：研究Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）ｂｃｌ－２／ＪＨ重排发生情况及其临床意义。方法：采用ＤＮＡ多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增２３例Ｂ－ＮＨＬ患者新鲜肿瘤组织、骨髓和外周血标本中ｂｃｌ－２重排的主要和次要断裂点（ＭＢＲ、ｍｃｒ）。结果：易位断裂点分别在１０例新鲜肿瘤组织（其中７例滤泡型中有５例，占７１．４％；１６例弥漫型中有５例，占３１．３％）、８例骨髓和７例外周血标本中被测到，绝大部分断裂点发生在ＭＢＲ，仅１例位于ｍｃｒ。同时还发现１８例骨髓形态学检查正常的患者中，有４例ＰＣＲ阳性，其中包括２例临床Ⅰ、Ⅱ期患者，提示其骨髓已有肿瘤细胞存在。从治疗后观察得知，治疗前骨髓ＰＣＲ阴性患者比阳性患者更易达到缓解。结论：ｂｃｌ－２／ＪＨ融合基因的检测对淋巴瘤的诊断与分期、治疗方案的选择、疗效观察及微量残留病的监测均有重要意义。     

抑癌基因PTEN mRNA在白血病细胞中的表达及意义

目的了解白血病细胞中PTEN基因的表达情况及其与临床的关系。方法采用RT-PCR法检测5个白血病细胞系,31例慢性粒细胞白血病(CML),87例初诊急性白血病(AL)[包括59例急性髓系白血病(AML),26例急性淋巴细胞白血病(ALL),2例急性混合细胞白血病],21例完全缓解期急性白血病(AL-CR)患者骨髓标本中PTEN mRNA表达情况,并分析了与临床指标的相关性。结果PTEN基因在K562细胞中有表达,而在Kasum i-1、HL-60、U937、Nalm-1细胞中均无表达。CML组阳性率(61.29%)与正常对照组(78.57%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),AL组和AL-CR组阳性率(分别为18.29%和42.86%)均低于正常水平(P<0.01和P<0.05),AL组阳性率又低于AL-CR组(P<0.05)。PTEN基因的阴性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)、染色体异常呈显著的正相关。结论AL患者存在PTEN基因的表达缺失,PTEN基因在AL的发病中可能起一定作用。     

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞微小RNA-202的表达及意义

目的 建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞(PBMC)中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法 采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析;结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次;及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值(Ct)计算标准差和变异系数(CV),以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2％,批间CV为3.2％,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844(0.162 ～3.966),健康对照组表达量为0.014(0.007～0.221),MM组中miR-202表达明显高于健康对照组(U=48.000,P＜0.01).结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标.