薯蓣皂苷元体外抗肿瘤作用的研究

[目的]研究薯蓣皂苷元(diosgenin，Dio)的体外抑瘤谱，并初步探讨其抗肿瘤的作用机制。[方法]MTT法测定Dio对肿瘤细胞的生长抑制情况；采用光镜和电镜观察药物对MGC-803细胞形态的影响；流式细胞技术检测Dio对MGC-803细胞的抑制作用和细胞周期的影响。[结果]Dio对MGC-803等10种肿瘤细胞有选择性的生长抑制作用，30mg／L的Dio处理后的MGC-803细胞变圆，体积变小，有多于70％的细胞脱壁，透射电镜下可见细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、核染色质浓集、边聚，核碎裂；流式细胞检测表明Dio导致DNA片断化，但对细胞周期影响不明显，S期细胞略有增加，G2／M期细胞略有减少。[结论]Dio选择性地抑制肿瘤细胞的生长，引起MGC-803细胞形态改变和DNA片断化，可能通过诱导该细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

重楼皂苷Ⅰ作用于人卵巢癌细胞株体外生物学效应研究

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(Polyphyllin I,P-I)对人卵巢癌细胞株SKOV3的体外生物学效应。方法 以不同浓度的P-I对SKOV3细胞作用不同时间后,分别应用CCK-8比色法和流式细胞术检测细胞体外增殖和周期改变,并用Hoechst 33258荧光染色法和AnnexinV-PI双染法检测细胞凋亡变化。结果 在一定浓度范围,P-I抑制SKOV3细胞体外生长增殖呈明显的量-效关系,与对照组比较差异具有明显统计学意义(P＜0.01);P-I在SKOV3细胞分裂周期的G₀/G₁期具有高度作用敏感性;P-I明显诱导SKOV3细胞发生凋亡。结论 P-I可能是通过干扰人卵巢癌细胞株DNA合成,抑制其生长增殖,并诱导凋亡,从而起到抗卵巢癌的作用。     

夜香树花甾体皂苷抑制K562细胞增殖及对PI3K／AKt信号通路的调控

目的探讨夜香树花甾体皂苷（SSFCN）抑制K562细胞增殖及作用机制。方法夜香树花用有机溶剂提取、分离并鉴定SSFCN,体外培养K562细胞,采用MTT比色法测定抑制率;流式细胞仪分析细胞周期、琼脂糖凝胶电泳检测DNA图谱的变化,Western blot法检测用SSFCN处理的K562细胞AKt磷酸化水平的变化。结果SSFCN能显著抑制人白血病细胞K562的生长,作用后细胞生长有明显凋亡特征性改变,凋亡率呈时间和剂量依赖性。60mg／L的SSF—CN作用K562细胞24h后,流式细胞仪检测出现亚G,峰及DNA电泳呈梯形条带。Western blot结果表明,SSFCN处理K562细胞72h后,K562细胞P—AKt磷酸化水平明显下调。结论SSFCN具有抑制K562细胞增殖和促进凋亡的作用,SSFCN通过抑制K562细胞PI3K／AKt信号通路,从而抑制K562细胞增殖。     

VM26及10-HCPT对人肝癌细胞株的体外联合杀伤作用

目的：研究VM26及10－HCPT等化疗药物对有肝癌细胞的体外联合杀伤作用。方法：采用MTT比色分析法测定不同组合的化疗药物对人肝癌细胞株SMMC－7721的抑制率。结果：以VM26加10－HCPT对人肝癌细胞株的抑制率最高，呈明显的协同作用，且抑制率随药物浓度的增加而增加。结论：VM26加10－HCPT对人肝癌细胞株具有明显的抑制作用，可作为临床用药的参考。     

人源化抗肝癌scFv融合RC—RNase在大肠埃希菌中的表达及对人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤作用

目的：在大肠埃希茼中可溶性表达新型重组人源化抗肝癌单链抗体融合RC-RNase(scFv-RC-RNase)，观察其对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用。方法：将原核表达质粒Tih-scF-RC-RNase以大肠埃希茼E．codiBL21(DE3)为宿主菌，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达．工程菌经超声碎菌、离心后，上清液用Ni-NTA Agarose亲合层析法进行纯化。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测纯化蛋白对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤作用。结果：IPTG诱导5h后，SDS-PAGE显示抗肝癌scFv-RC-RNase在大肠埃希茵E.coliBL21(DE3)中主要以可溶性的形式表达，表达量占茵体总蛋白量的lO．5％。MTT法提示，纯化后的表达产物对体外培养的人肝癌细胞SMMC一7721具有一定的杀伤作用，其半数致死量(LDs50)为0．007g／L。结论：抗肝癌scFv-RC-RNase融合蛋白有望成为一种具有一定临床应用潜力的抗肝癌导向治疗药物。     

人源化抗肝癌scFv融合RC-RNase在大肠埃希菌中的表达及对人肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤作用

目的 :在大肠埃希菌中可溶性表达新型重组人源化抗肝癌单链抗体融合RC RNase(scFv RC RNase) ,观察其对体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1的杀伤作用。方法 :将原核表达质粒Tih scFv RC RNase以大肠埃希菌E coliBL2 1(DE3 )为宿主菌 ,用异丙基硫代 -β -D -半乳糖苷 (IPTG )诱导表达。工程菌经超声碎菌、离心后 ,上清液用Ni NTAAgarose亲合层析法进行纯化。四甲基噻唑蓝 (MTT)法检测纯化蛋白对体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1的体外杀伤作用。结果 :IPTG诱导 5h后 ,SDS PAGE显示抗肝癌scFv RC RNase在大肠埃希菌E coliBL2 1(DE3 )中主要以可溶性的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白量的 10 5 %。MTT法提示 ,纯化后的表达产物对体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1具有一定的杀伤作用 ,其半数致死量 (LD50 )为 0 0 0 7g/L。结论 :抗肝癌scFv RC RNase融合蛋白有望成为一种具有一定临床应用潜力的抗肝癌导向治疗药物。     

薯蕷皂苷元体外抗肿瘤作用的研究

[目的]研究薯蓣皂苷元(diosgenin,Dio)的体外抑瘤谱,并初步探讨其抗肿瘤的作用机制.[方法]MTT法测定Dio对肿瘤细胞的生长抑制情况;采用光镜和电镜观察药物对MGC-803细胞形态的影响;流式细胞技术检测Dio对MGC-803细胞的抑制作用和细胞周期的影响.[结果]Dio对MGC-803等10种肿瘤细胞有选择性的生长抑制作用,30mg/L的Dio处理后的MGC803细胞变圆,体积变小,有多于70%的细胞脱壁,透射电镜下可见细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、核染色质浓集、边聚,核碎裂:流式细胞检测表明Dio导致DNA片断化,但对细胞周期影响不明显,S期细胞略有增加,C2/M期细胞略有减少.[结论]Dio选择性地抑制肿瘤细胞的生长,引起MGC-803细胞形态改变和DNA片断化,可能通过诱导该细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

奥沙利铂和人参皂苷Rg3不同联合方式对人肝癌细胞株SMMC-7721作用的影响

目的 通过体外实验观察奥沙利铂和人参皂苷Rg3不同联合方式对人肝癌细胞株SMMC-7721作用的影响,并初步探讨其机制。方法 采用MTT法观察奥沙利铂、人参皂苷Rg3单药以及两药同时和序贯应用对SMMC-7721细胞增殖的作用;应用流式细胞术分析单药和两药不同序贯方式对细胞周期分布及凋亡的影响;Western blotting检测单药和两药不同序贯方式作用后SMMC-7721细胞cyclin D1蛋白的表达情况。结果 奥沙利铂、人参皂苷Rg3单药、两药同时及序贯给药对SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用。同时用药组的增殖抑制作用优于人参皂苷Rg3先用组（P＜0.05）,但与奥沙利铂先用组比较未见明显差异（P＞0.05）;奥沙利铂先用组的效果优于人参皂苷Rg3先用组（P＜0.05）。流式细胞术分析显示,奥沙利铂主要将细胞阻滞在S期、G₂／M期,人参皂苷Rg3主要将细胞阻滞在G₀／G₁期,同时用药组和奥沙利铂先用组的凋亡率相似（P＞0.05）,阻滞细胞于G₂／M期,且凋亡率均较先用人参皂苷Rg3组高（P＜0.05）。Western blotting显示,两药序贯及同时应用组cyclin D1蛋白表达明显低于单药组,奥沙利铂先用组与同时用药组相似,均低于人参皂苷Rg3先用组。结论 奥沙利铂、人参皂苷Rg3序贯及同时应用较单药更能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,先用奥沙利铂后序贯人参皂苷Rg3与两药同时应用的协同增效作用相似,均优于先用人参皂苷Rg3后序贯奥沙利铂,其机制可能与奥沙利铂先用组和同时用药组将细胞阻滞在S期、G₂／M期,增加促凋亡作用,同时下调cyclin D1蛋白的表达水平有关。     

C21甾体苷类化合物的抗肿瘤作用和临床应用进展

现代药理研究表明,可从多种药用植物中提取的C21甾体苷类化合物在抗肿瘤、免疫调节、化疗药物增效减毒等方面具有重要的生物活性。C21甾体苷类化合物主要存在于萝藦科中,尤其是在通关藤,黑鳗藤,白首乌等多种植物中研究较多。C21甾体苷类化合物在抗肿瘤方面研究较多,其制剂已广泛用于临床,尤其是联合其他化疗药物抗肿瘤方面应用较广,而在调节免疫和化疗药物增效方面的研究正处于起步阶段。文章对近年来的C21甾体类化合物及其制剂的药理作用和临床应用进行概述,为其进一步研究、开发和临床合理用药提供参考。     

人参皂苷抗结直肠癌作用机制的研究进展

人参皂苷作为人参的主要活性成分,具有诱导肿瘤细胞调亡、抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期停滞、抑制肿瘤血管生成、免疫调节、化疗增效、抗炎以及调节肠道菌群等作用。现如今,人参皂苷对结直肠癌的作用已成为研究的热点。文章就人参皂苷抗结直肠癌的作用机制进行综述。     

吉非替尼对肺癌A549细胞系的放射增敏作用

目的:研究分子靶向药物吉非替尼(Gefitinib,Iressa)在体外对人肺腺癌A549细胞系的放射增敏作用。方法:MTT法检测Iressa单药或与放射线联合对A549细胞的抑制率;将细胞分为4组:对照组、Iressa组、照射组、Iressa 照射组,15μg/ml的Iressa处理72h后予照射,进行单细胞集落形成率试验、流式细胞术分析照射后0、24、48h各组细胞周期和凋亡率变化。结果:MTT结果显示,A549细胞的抑制率与Iressa浓度成正相关,Iressa处理48hIC50为49.88μg/ml。当Iressa浓度为5、10、15、20、30、40μg/ml时,能增强放射线对A549细胞的抑制率。各组单细胞集落形成率分别是对照组(11.97±2.82)%、Iressa组(7.43±0.58)%、照射组(1.55±0.5)%、Iressa 照射组(0.57±0.15)%,提示Iressa本身可抑制A549细胞增殖,与放射线联合能增强放射线抑制A549细胞的效果。流式细胞术分析显示15μg/ml的Iressa处理72小时,A549细胞周期中的G0~G1期比例明显升高,从(67.51±2.56)%上升到(73.63±1.62)%;G2~M期比例从(8.39±0.61)%下降到(7.02±1.1)%;S期比例从(24.1±2.65)%下降到(19.36±1.63)%;凋亡率从(0.99±0.56)%上升到(1.95±0.7)%。照射后24hIressa 照射组凋亡率升高明显,为(4.34±1.13)%,对照组(0.33±0.46)%,Iressa组(0.89±0.37)%,照射组(0.98±0.23)%。结论:Iressa在体外对A549细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,使细胞周期G0~G1期比例升高,S期和G2~M期比例下降,凋亡率升高。Iressa与放射线联合可以明显提高A549细胞的凋亡率。本试验显示Iressa具有放射增敏作用,为临床开展放射线联合Iressa治疗非小细胞肺癌的研究提供了实验依据。     

太白楤木皂苷的抗氧化作用研究

目的： 探讨太白楤木皂苷的抗氧化作用,为进一步利用其防治疾病提供基础数据。方法：采用体外化学法检测太白楤木皂苷的总抗氧化能力。在细胞实验中,采用氧化剂叔丁基过氧化氢 (tert-butyl hydroperoxide,tBHP)诱导细胞氧化损伤。设立相应对照组和药物保护组,给予太白楤木皂苷 (5 μg/mL)预处理保护,收集样品,流式细胞仪荧光法检测细胞活性氧 (reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot方法检测抗氧化转录因子核呼吸因子2 (nuclear respiratory factor 2,Nrf2)及其下游的血红素加氧酶1 (heme oxygenase-1,HO-1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶 (γ-glutamate-cysteine ligase,GCL)的表达水平。结果：太白楤木皂苷体外实验检测总抗氧化能力表现出明显的剂量-效应关系。在细胞实验中,tBHP可以显著提高细胞ROS水平,引起细胞的氧化损伤,太白楤木皂苷预处理可以显著降低tBHP诱导的细胞ROS水平。同时发现太白楤木皂苷可以显著拮抗tBHP引起Nrf2及其下游的HO-1、GCL 的催化亚基 (GCLC)和调节亚基 (GCLM)表达水平的升高。结论：太白楤木皂苷在化学反应体系及细胞水平,均显现出了抗氧化作用,具有抗氧化防治疾病的应用前景。     

Alamar Blue法用于体外培养细胞活性检测的方法研究

目的在比较A lam ar B lue法与MTT法的基础上探讨A lam ar B lue法用于测定细胞体外增殖及细胞毒实验的可行性。方法采用A lam ar B lue法及MTT法分别测定人肝癌细胞株SMMC-7721的体外增殖以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、顺铂、羟基喜树碱对该细胞株体外增殖的影响。结果使用A lam ar B lue法,接种人肝癌SMMC-7721细胞数在3.12×102~2×104/孔范围内时,细胞数与A lam ar B lue还原率呈线性相关(r=0.9989),高、中、低三种细胞浓度组内差异分别为1.41%、3.88%、4.87%。使用MTT法接种人肝癌SMMC-7721细胞数在3.12×102~2×104/孔范围内时,细胞数与OD490~620值呈线性相关(r=0.9981),高、中、低三种细胞浓度组内差异分别为1.44%、4.07%、8.27%。结论A lam ar B lue法是一种简便、敏感、安全、经济的方法,可用于体外测定细胞增殖及化疗或免疫制剂的细胞毒作用。     

miR－338对人肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的：观察过表达miR－338对人肝癌细胞SMMC－7721增殖及迁移能力的影响。方法：化学合成miR－338寡聚核苷酸,并行测序确认。利用pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR 质粒构建miR－338真核表达载体。pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒载体瞬时转染SMMC－7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR－338的mRNA表达水平。高表达miR－338后,CCK－8法和划痕实验分别检测SMMC－7721细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果：设计的miR－338序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100％。pcD-NA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒瞬转后人肝癌SMMC－7721细胞 miR －338的表达量与对照组相比显著增加（P＜0．05）。miR－338过表达SMMC－7721细胞的增殖能力与各对照组相比均有显著下降（P＜0．05）;miR－338过表达细胞迁移速度降低。结论：上调的miR－338可抑制人肝癌SMMC－7721细胞的增殖及迁移能力。     

Visualization of oxidative processes at the cellular level during neutrophil-mediated cytotoxicity against a human hepatoma cell line, HCC-M.

Human neutrophil-mediated oxidative processes against a human hepatoma cell line, HCC-M, was visualized at the cellular level by using a silicon-intensified target camera and subsequently processing with a computer-assisted digital-imaging processor. Neutrophils were activated by a streptococcal preparation, OK-432. A hydroperoxide-sensitive tracer, dichlorofluorescein diacetate, was loaded in HCC-M and temporal and spatial changes of lipid peroxides in this cell after addition of stimulated neutrophils were analyzed. The luminol-dependent chemiluminescence activity of neutrophils was significantly enhanced and continued for at least 2 hr by stimulation with OK-432, and its activity was shown to be accumulated at the site where a neutrophil attached with HCC-M. The intensity of dichlorofluorescein fluorescence in HCC-M rapidly increased after adding stimulated neutrophils, and their reaction was significantly attenuated by superoxide dismutase. The number of non-viable cells was increased as the dichlorofluorescein fluorescence increase. It is suggested that oxidative stress may play an important role in neutrophil-mediated tumor-cell damage.     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞的作用

目的　观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株的作用。方法　用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人肝癌细胞株共同温育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,检测细胞DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果　端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1 期前出现亚二倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论　端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒合成 ,从而抑制肝癌细胞的增殖     

Soybean saponin inhibits tumor cell metastasis by modulating expressions of MMP-2, MMP-9 and TIMP- 2

The antimetastatic properties of soybean saponin were investigated by evaluating matrix metalloproteinase (MMP-2 and MMP-9) production in HT-1080 cells. The mRNA expression levels of MMP-2 and MMP-9 were determined by RT-PCR analysis. The levels of secreted MMP-2, MMP-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2) were determined by gelatin zymography and/or ELISA. The invasion of a Matrigel-coated membrane by human fibrosarcoma HT-1080 and HT-29 colon cancer cells was quantitatively assessed by counting the migrated cells. The treatment of HT-1080 cells with soybean saponin inhibited the mRNA expression of and reduced the amounts of secreted MMP-2 and MMP-9, whereas it increased the amount of secreted TIMP-2 dose-dependently. Soybean saponin significantly inhibited the invasion of HT-1080 cells through a Matrigel-coated membrane. The antimetastatic properties by soybean saponin were further confirmed by in vivo mice experiment via the tail vein injection of CT-26 colon cancer cells after feeding the mice the dietary soybean saponin. The incidence of metastatic tumor colonization of lungs of mice moderately decreased 2 weeks after the tail vein injection of CT-26 cells. Our current data support the notion that soybean saponin inhibits tumor cell metastasis by suppressing MMP-2 and MMP-9 productions, and stimulating TIMP-2 secretion, thereby suggesting that soybean saponin has a chemopreventive property against cancer metastasis.     

Killing effects of different physical factors on extracorporeal HepG2 human hepatoma cells

Objective: To determine the killing effects on extracorporeal HepG2 cells under different temperatures, pressures of permeability and lengths of treatment time. Method: According to different temperatures, pressures of permeability and lengths of treating time, extracorporeal HepG2 cells of human hepatoma cell-line were grouped to 80 groups. Cell index (CI) as the measurement of killing effect were calculated by monotetrazolium (MTT) methods, i.e., CI =1- (the OD value in treated group - the OD value in blank control group) / (mean of untreated control group – mean of blank control group). According to the factorial design, data were fed into SPSS 10.0 and analyzed by three-way ANOVA (analysis of variance). Result: Temperature, pressure of permeability and length of treating time all had effects on the CI (cell index) level. Length of treating time was the most influential factor of the three. Additionally, any two of them all had statistically significant interactive effects on the CI level. When treated for 5-30 min, destilled water at 46℃ stably generated the highest CI. Conclusion: The “46℃-destilled water-60 min” was considered as the optimal combination of conditions which lead to highest CI. We suggest exerting celiac lavage for 15 min with stilled water at 40℃-43℃ in surgical practice as a hyperthermia treatment to achieve ideal killing effects on free cancer cells, which is feasible, practical, and clinically effective.     

The MTT cell viability assay for cytotoxicity testing in multidrug-resistant human leukemic cells

The MTT cell viability assay is widely used in determining drug sensitivity profiles for patients with hematological malignancies and in primary screening of potential chemotherapeutic drugs. Because the multidrug resistance (MDR) phenotype is associated with these malignancies, and since many vital dyes are effluxed from MDR expressing cells, we have investigated whether the MDR phenotype interferes with the MTT assay. In CCRF-CEM and K562 human leukemic cell lines and drug-resistant sub-lines developed from them, comparison of the MTT assay with other cell viability assays showed significant variation in ₅₀ concentrations, although the resistance relative to the sensitive parent cell was correlated. Inclusion of verapamil, an inhibitor of drug efflux activity, had no effect an the MTT assay.     

硫酸化甲壳质对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和周期的影响

目的　探讨硫酸化甲壳质对鼻咽癌CNE - 2Z细胞增殖和周期的影响。方法　MTT法检测增值抑制率和IC50 ,流式细胞术分析细胞周期。结果　不同浓度的硫酸化甲壳质分别处理细胞 2 4h、4 8h、72h时 ,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加 ,其IC50 分别为 (0 5 2 9± 0 0 39)、(0 0 4 8± 0 0 2 7)、(0 389± 0 0 2 7)mg/ml,各IC50 间的差异有非常显著性意义 (P <0 0 1)。 0 2mg/ml,0 4mg/ml,0 6mg/ml硫酸化甲壳质分别处理细胞 12h、2 4h、4 8h时 ,G0 /G1期细胞明显下降 ,G2 /M期细胞明显升高 ,随时间的延长变化更明显 (P <0 0 1)。结论　硫酸化甲壳质对CNE - 2Z细胞具有增殖抑制作用 ,并呈剂量和时间依赖性 ;阻滞细胞于G2 /M期 ,也呈时间依赖性 ;一定剂量的硫酸化甲壳质可能通过阻滞CNE - 2Z于G2 /M期而抑制其增殖。