体外试验诱导白血病细胞p15INK4B基因重新表达

目的：探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2ˊ-脱氧胞嘧啶（CdR）与组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丁酸钠（SB）联合诱导白血病细胞p15^INK4B基因重新表达的可能性。方法：采用急性髓系白血病细胞系KG1a和2例原代培养白血病细胞为研究对象;限制性内切酶联合PCR技术检测p15^INK4B基因启动子区甲基化状态;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测p15^INK4BmRNA的表达;Western免疫印迹法检测p15^INK4B蛋白的表达。结果：受检细胞p15^INK4B基因启动子区呈高甲基化状态,mRNA及蛋白表达完全或部分缺失;CdR和SB可单独诱导p15^INK4BmRNA及蛋白表达,且有剂量依赖性;低浓度CdR(0.5μmol/L)联合SB(0.5mmol/L)显著诱导p15^INK4B表达,其作用高于单用高浓度CdR（1μmol/L）或高浓度SB(1mmol/L)。结论：CdR和SB可诱导甲基化失活的白血病细胞p15^INK4B基因重新表达,二者有明显的协同作用。     

p16基因甲基化与早期肺癌

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤，也是近年来发病率最高的恶性肿瘤，并且已经成为人类疾病死亡的重要原因之一。据估计，2000年在欧洲大约有375000人患肺癌，因此而死亡347000人，其中男性280000人，女性67000人。我国是吸烟和人口大国，虽无统计数据但可以推测发病率和死亡率应该更高。依细胞类型不同，肺癌患的5年生存率亦     

胰腺癌组织中p16基因启动子区5''CpG岛甲基化及其表达研究

在胰腺癌多步骤、多阶段发生过程中有多种肿瘤相关基因参与。p16基因是其中一个重要的抑癌基因，参与细胞周期的调控，控制细胞的生长和分化。大量研究表明，多种肿瘤细胞中p16基因通过突变、缺失、高甲基化等方式失活，造成p16蛋白功能丧失，从而导致肿瘤细胞恶性生长。免疫组化研究发现，胰腺癌组织中p16蛋白失表达的比例很高，而关于胰腺原发瘤中p16基因甲基化改变及其临床病理意义的研究报道少见，本研究旨在探讨胰腺癌组织中p16基因启动子区5’CpG岛甲基化情况及其与P16蛋白表达的关系和临床意义，研究其在胰腺癌发生中的可能机制。     

原发胃癌中p16基因及其甲基化状态、表达异常的研究

目的：检测胃癌组织中p16基因及启动了甲基化状态和p16蛋白表达情况。方法：选择p16基因及启动子区域,用PCR－SSCP、MSP（甲基化特异的PCR）法、测序和免疫组化等方法对100例胃癌患者的癌组织和癌旁组织进行检测。结果：71％的病例p16表达阴性,54％的病例具有p16基因启动子区的高甲基化,50％的病例同时有p16表达阴性和p16基因启动子区的高甲基化,无突变和纯合缺失检出。结论：提示p16基因启动子区域高甲基化是胃癌中p16基因失活的主要原因。     

胃癌患者p16基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的 探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌发生、发展中的作用.方法 应用特异性甲基化PCR(MSP)检测58例胃癌及癌旁组织和30例正常胃黏膜组织中p16基因启动子CpG岛的甲基化状态,分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果26例(44.8％)胃癌组织、5例(8.6％)癌旁组织也检测出甲基化的存在,30例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化的存在(P ＜0.05);p16基因甲基化与胃癌淋巴结转密切相关(P＜0.05).结论 p16基因启动子CpG岛甲基化可促进胃癌的发生、发展;此基因的异常甲基化可作为胃癌早期诊断的敏感指标.     

幽门螺杆菌感染的胃黏膜病变p16基因甲基化变化

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)感染是胃癌发生的环境因素之一 ,已被国际癌症研究中心列为第一类致癌因子。但其致癌机制未明 ,更缺乏直接的分子生物学证据 ,为此 ,我们探讨了Ｈｐ感染的胃黏膜病变中抑癌基因 ｐ16甲基化变化。材料与方法一、材料1.标本 :183例患者中 ,5 7例胃癌 (ＧＣ)为本院手术标本(均为非贲门部胃癌 ) ,并经病理证实 ,12 6例为胃镜活检标本 ,作胃黏膜组织学检查 ,其中慢性浅表性胃炎 (ＣＳＧ) 30例 ,慢性萎缩性胃炎 (ＣＡＧ) 2 8例 ,肠化 (ＩＭ ) 32例 ,不典型增生(ＤＹＳ) 36例。Ｈｐ感染由快速尿素酶法和组织学Ｇｉｅｍｓａ染色确…     

胃癌组织中p16基因的甲基化

运用甲基化特异性PCR(MSP)技术,对30例胃癌组织中p16基因的甲基化状况进行检测.发现胃癌组织中p16基因甲基化率为40.0%(12/30),而正常胃组织中未检测到该基因的甲基化;p16基因甲基化与患者年龄和性别无相关性,但与肿瘤的浸润和转移有关(P＜0.05).认为p16基因甲基化是胃癌组织中常见的分子生物学事件,可能参与了胃癌的发生、发展过程.     

河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究

基因丢失导致ｐ１６ＩＮＫ４ａ和（或）ｐ１５ＩＮＫ４ｂ对ＣＤＫ激酶的抑制作用丧失,从而导致细胞增生调节失控［１－３］,目前在多种肿瘤中已发现存在ｐ１５ＩＮＫ４ｂ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ的失活现象［４－６］．作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实,肿瘤...     

幽门螺杆菌感染、p16基因甲基化与胃癌的相关性研究

幽门螺杆菌（ Hp）感染与胃癌的发生有密切的关系, Hp已被国际癌症研究中心列为第一致癌因子 [1]。动物实验已证实, Hp慢性感染易引起胃粘膜组织向恶性转化 [2],但其致癌机制未明,更缺乏直接的分子生物学证据,本文通过研究 Hp感染与胃癌及胃粘膜炎性病变中抑癌基因 p165'CpG岛甲基化状态的相关性,以进一步探讨 Hp感染与胃癌发生的相关性及可能的机制。 　　一、材料与方法： (1)标本： 57例胃癌组织为本院 1998年 1月－ 1999年 9月手术标本（均为非贲门部胃癌）,并经病理确诊。男 30例,女 27例,年龄 24～ 67岁,平均 48.6岁,手…     

p16基因甲基化在人二倍体成纤维细胞衰老中的作用

目的 研究DNA甲基化与衰老细胞中细胞周期负调控因子p16^MTS1/INK4a高表达的关系。方法 应用甲基化敏感的DNA限制性内切酶与PCR相结合的方法,分析特定位点的甲基化状态。结果 人胚肺二倍体成纤维细胞衰老过程中p16基因表达增高,中年细胞与衰老细胞中p16基因的表达水平分别约为年轻细胞的3倍和10倍。p16基因外显子Ⅰ限制性内切酶SmaⅠ位点的甲基化水平则表现出随增龄而降低的趋势,在年轻细胞、中年细胞中分别约为64％和41％,虽然在衰老细胞中仅为24％,但仍保持一定的水平。结论 p16基因外显子Ⅰ的SmaⅠ位点的甲基化水平改变可能与其在衰老过程中的高表达有一定的关联,其重要性值得进一步研究。     

p16基因表达与胃癌组织类型的关系

目的：探讨ｐ１６基因的表达与人胃癌组织类型的关系。方法：选取２４例病理确诊的胃癌组织及相应正常胃粘膜组织,用蛋白质免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）技术检测ｐ１６基因在两种组织中的表达。结果：２４例胃癌组织中,６例无ｐ１６基因表达的癌组织为低分化腺癌或印戒细胞癌;２例ｐ１６基因表达可疑;分化较高的５例ｐ１６基因表达增多;其们１１例ｐ１６基因的表达同相应正常组织无区别。结论：ｐ１６基因在胃癌组织中     

胃癌形成过程中p16IN4a、Runx3和O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因甲基化及其表达研究

目的 研究胃癌形成过程中p16INK4a、Runx3和O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子区的高甲基化状态,同时检测MGMT的蛋白表达情况.探讨抑癌基因启动子区高甲基化与胃癌发生的关系.方法 选择经透明帽法进行首次黏膜病变切除者43例,其中异型增生27例,早期胃癌16例.选择胃镜活检证实为慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生者14例.另取20例正常胃黏膜活检组织作为对照.采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测每例组织中p16INK4a、Runx3和MGMT基因启动子区的甲基化状态,对所有甲基化p16INK4a产物进行测序,免疫组化检测MGMT蛋白表达情况.结果 肠上皮化生、异型增生和早期胃癌中p16INK4a基因甲基化率依次为14.3%(2/14)、22.2%(6/27)和37.5%(6/16);Runx3基因甲基化率依次为14.3%(2/14)、48.1%(13/27)和50.0%(8/16);MGMT基因甲基化率依次为7.1%(1/14)、48.1%(13/27)和50.0%(8/16).20名正常对照均未检出基因甲基化,与异型增生和早期胃癌相比差异有统计学意义(P＜0.05).Runx3和MGMT两种基因在异型增生和早期胃癌中的甲基化率显著高于肠上皮化生组(P＜0.05).各组病变中三种基因甲基化联合分析发现,异型增生和早期胃癌中甲基化的基因种类高于肠上皮化生组.差异有统计学意义(P＜0.01).基因甲基化与息者年龄、性别、幽门螺杆菌感染以及病变部位无相关性,但p16INK4a和MGMT基因甲基化与血清癌胚抗原水平升高显著相关(P值分别为0.003和0.039).MGMT基因启动子区高甲基化与其蛋白失表达密切相关(χ2=12.821,P=0.001).结论 抑癌基因启动子区高甲基化是基因失活的主要机制,可能是胃癌发生的早期分子事件.p16INK4a、Runx3和MGMT基因启动子区高甲基化在胃癌形成过程中起着重要的作用.     

与HIV-1感染相关的甘露糖结合蛋白基因多态性分析

目的：分析中国汉族和维吾尔族人群中甘露糖结合蛋白（MBP）基因的等位基因多态性特点，初步探讨MBP基因多态性与艾滋病病毒1型（HIV－1）感染之间的相关性。方法：从856例个体（汉族606例、维吾尔族250例）的外周血中提取基因组脱氧核糖核酸（DNA），应用聚合酶链反应－限制性内切酶片段长度多态性（PCR－RFLP）分析检测MBP基因外显子1区域第52、54、57密码子部位的3个等位基因多态性，并随机抽样经DNA直接测序进行验证。结果：在健康人群中，MBP－54等位基因突变频率汉族为0．189，维吾尔族为0．121。该等位基因多态性分布在这两个民族中均符合Hardy-Weinberg平衡，两个民族在健康人群中的基因型分布和突变基因频率差异均有显著的统计学意义（x^2=5.53,P=0.022)。汉族的HIV－1感染组、高危对照组和相应的健康人群之间，MBP－54等位基因的突变频率差异无显著的统计学意义。维吾尔族高危对照组与健康人群相比，MBP－54基因的突变频率差异亦无显著的统计学意义。维吾尔族HIV－1感染组与高危对照组以及与相应的健康人群相比，MBP－54基因的突变频率的差异均有显著的统计学意义。在所检测的人群中，均未发现MBP基因的第52、57密码子部位有基因突变。结论：在汉族和维吾尔族人群中MBP－54等位基因突变频率以及基因多态性存在差异；维吾尔族人群中MBP基因第54密码子突变可能与HIV－1的易感性相关，确切机理尚待进一步研究。     

HBV X蛋白对抑癌基因p16的表达和启动子甲基化的影响

目的探讨HBV X蛋白(HBx)对抑癌基因p16的表达、p16启动子甲基化的影响,从表观遗传学的角度探讨HBx参与HBV相关性HCC发生发展的相关机制。方法以人肝母细胞瘤细胞Hep G2、表达绿色荧光蛋白(GFP)的Hep G2/GFP、稳定表达HBx蛋白的Hep G2/GFP-HBx细胞为实验系统;采用Western Blot法检测Hep G2、Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白的表达水平。以DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-DC)处理Hep G2/GFP-HBx细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测Hep G2、Hep G2/GFP细胞及药物处理和未处理的Hep G2/GFP-HBx细胞中抑癌基因p16启动子区域的甲基化情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析。结果 Western Blot分析示Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白相对灰度值(23.68±3.93)显著低于Hep G2(91.23±6.87)、Hep G2/GFP(94.55±8.40)细胞,差异均有统计学意义(P值分别为0.0007、0.0014),Hep G2/GFP与Hep G2细胞中p16蛋白相对灰度值差异无统计学意义(P0.05);MSP法检测示Hep G2/GFP-HBx细胞中存在p16基因启动子区域部分Cp G位点甲基化,Hep G2、Hep G2/GFP细胞中未检出其甲基化,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC处理的Hep G2/GFP-HBx细胞却能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态。结论在肝癌细胞系中,HBx通过诱导抑癌基因p16启动子甲基化而下调其表达,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态,这种可逆性修饰可为HBV相关性HCC的治疗、预防提供新思路。     

肝癌细胞p53、p16及细胞周期蛋白D1表达的时间生物学对比

目的对比肝癌细胞中p53、p16和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达强度的时段特征.方法按年周期3个时段采集肝癌组织标本,每1个时段20例,均为肝细胞型肝癌及Edmondson-Steinet分级控制在Ⅱ～Ⅲ级内,用免疫组织化学S-P法进行p53、p16和Cyclin D1蛋白表达实验,表达强度按等级数据用秩和检验方法进行时段对比.结果p16表达出现时段差异有显著性(H=10.334,P＜0.05),即4～7月份为表达高峰期.结论肝细胞癌变及其生长的基因调控的时间生物学机制,p16可能起到重要作用.     

Mutational and methylation analysis of the cyclin-dependent kinase 4 inhibitor (p16INK4A) gene in chronic lymphocytic leukemia

OBJECTIVES: Chronic lymphocytic leukemia (CLL) comprises a heterogeneous group of at least two types of disease entities characterized by distinctive clinical, immunophenotypical and genetic features. The molecular mechanisms underlying the pathogenesis and the histological transformation of CLL are not well known. The INK4A/p16, a cyclin dependent kinase inhibitor has been considered as a tumor suppressor gene. Inactivation of this gene by homozygous deletions, mutations and hypermethylation occurs in a variety of human neoplasms. The aim of the present study was to determine the frequency of p16 gene deletions and mutations as well as the methylation status of the same gene in CLL patients. METHODS: We examined 34 samples from CLL patients by Southern Blotting, Single-Strand Conformation Polymorphism (SSCP), DNA sequencing and Methylation-Specific PCR. RESULTS: Southern Blot analysis revealed non-rearranged bands in 33/34 cases. Homozygous deletions were not observed in any case. In 1/34 case a rearranged band was detected with EcoRI enzyme. The PCR-SSCP analysis of exons 1 and 3 revealed normal pattern of migration in all cases examined. The analysis of exon 2 revealed abnormal migration pattern in 2/34 cases (5.8%). Sequencing of these cases revealed the presence of the ALA148THR polymorphism. Methylation analysis of p16 gene promoter revealed hypermethylation of CpG islands in 6/34 cases (17.6%). CONCLUSION: These results indicate that genetic alterations of p16 gene are rare events in patients with CLL. The clarification of the role of p16 gene promoter methylation in the pathogenesis and evolution of CLL needs further investigation.     

初诊和复发急性髓性白血病p15、p16基因甲基化研究

目的探讨急性髓性白血病(AL)p15、p16、p18、p19基因失活的发生率及与疾病发生、发展、预后的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)方法扩增46例患者的p15、p16、p18、p19基因外显子1和外显子2。再用限制性内切酶一PCR方法检测基因甲基化。结果46例患者中。急性淋巴细胞白血病(ALL)19例．11例p15基因失活,10例p16基因失活;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)27例．9例p15基因失活,18例P16基因失活;均以甲基化失活为主。所有病例均无p18、p19基因失活。结论在AL发生、发展过程中。p15、p16基因失活主要是由于P15、p16基因甲基化所致。     

p16、hMLH1基因甲基化与结肠癌的相关性研究

目的检测正常黏膜、结肠腺瘤、结肠癌中p16、hMLH1基因CpG岛甲基化状态,评价其在结肠癌发生中的作用及临床意义。方法收集四川省人民医院2008年10月～12月结肠组织标本60例,其中结肠癌20例、腺瘤20例、正常组织标本20例。采用特异性甲基化PCR（MSP）方法检测p16、hMLH1基因的CpG岛甲基化状态。结果 MSP方法检测发现p16启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与腺瘤组、正常组比较有显著性差异（P=0.020、0.020）,而腺瘤组与正常组比较无显著性差异（P〉0.05）。hMLH1启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与正常组比较有显著性差异（P=0.047）,结肠癌组与腺瘤组、腺瘤组与正常组比较无显著性差异（P〉0.05）。p16、hMLH1基因CpG岛甲基化与Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度具有相关性（P〈0.05）,与肿瘤部位、性别无相关性（P〉0.05）。结论 p16、hMLH1启动子区CpG岛甲基化是促进结肠癌发生的重要基因事件,且可能与结肠癌Duke分期相关。