灯盏花素对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及STAT表达的影响

目的 观察灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡和信号转导及转录激活因子(STAT)表达的影响,初步探讨其可能的作用机制.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型.将40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组,灯盏花素1组[25 mg/(kg,d)],灯盏花素2组[50 mg/(kg·d)].缺血30min、再灌注2h后,原位末端标记法测定组织中心肌细胞凋亡率,免疫组化SP法检测心肌组织中STAT蛋白的表达.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),SP染色见STAT1蛋白表达显著增强(P＜0.05或＜0.01),但STAT3蛋白表达显著减少(P＜0.05或＜0.01);与缺血再灌注组相比,灯盏花素1、2组细胞凋亡率明显下降(P＜0.01),STAT1蛋白表达显著减少(P＜0.05或＜0.01),但STAT3蛋白表达显著增强(P＜0.05或＜0.01).结论 灯盏花素能够减轻缺血再灌注造成的心肌损伤,其机制可能与灯盏花素干预STAT蛋白表达,从而减少心肌细胞凋亡有关;STAT途径可能是灯盏花素抑制细胞凋亡的途径之一.     

腺苷对大鼠缺血再灌注心肌IGF-1蛋白的影响

目的 观察腺苷对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白的关系.方法 取Wistar大鼠24只,随机分成3组,随机分为假手术组(iv组)、缺血再灌注模型组(1/R组)、缺血再灌注后腺苷处理组(AD组),每组8只.通过结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD) 30 min和灌注2h造成心肌缺血再灌注损伤.采用TUNEL法观察心肌细胞凋亡;利用免疫组化法检测IGF -1蛋白的表达.结果 I/R组心肌细胞凋亡指数和IGF-1蛋白表达较iv组升高(P＜0.05);与I/R组相比,AD组心肌细胞凋亡指教明显降低,而IGF-1蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论 腺苷可抑制心肌细胞凋亡,明显提高IGF -1蛋白表达水平,对缺血再灌注损伤心肌有保护作用.提示腺苷可减轻心肌缺血再灌注损伤,作用机制与提高IGF-1蛋白表达水平和抗心肌细胞凋亡作用有关.     

银杏叶提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨银杏叶提取物(EGB)对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用结扎左冠状动脉前降支(LAD)30 min,再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注模型,分别以缺口末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞Bcl-2、Bax基因的蛋白表达的变化.结果 缺血再灌注(IR)组心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P<0.01),EGB组心肌细胞凋亡明显受到抑制(P<0.01).IR组和EGB组Bax、Bcl-2、P53基因蛋白表达均明显增加(P<0.01);EGB明显促进Bcl-2基因表达,同时抑制Bax、P53基因表达(P<0.01),Bcl-2和Bax的比值也随之升高.结论 EGB可明显下调Bax和P53基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,从而显著抑制心肌缺血再灌注损伤(MIRI)后心肌细胞凋亡.     

抑制JAK/STAT信号通路对缺血再灌注大鼠心肌的影响

目的探讨抑制JAK/STAT信号通路对缺血再灌注大鼠心肌的影响。方法以穿线法结扎左冠状动脉制备心肌缺血再灌注模型。健康Wistar大鼠24只随机分为4组,假手术组(C)、缺血再灌注组(I/R)、AG490组(I/R+AG490)、RMP组(I/R+RMP),每组6只。以Western印迹法检测大鼠心肌JAK2、STAT1、STAT3的表达。以原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞的凋亡。结果缺血再灌注后p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3的表达明显增加,且p-STAT1的表达较p-STAT3多,凋亡心肌细胞数增多,应用抑制剂AG490后p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3的表达减少,凋亡的心肌细胞数也明显减少,应用雷帕霉素后p-JAK2、p-STAT1的表达无改变,p-STAT3的表达减少,凋亡细胞数较再灌注组略有增多,但无统计学意义。结论 JAK/STAT信号通路参与了心肌缺血再灌注损伤,应用AG490可减轻心肌细胞损伤,减少心肌细胞凋亡。     

腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后HSP70表达及心肌细胞凋亡的影响

目的 通过观察腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后热体克蛋白70(HSP70)表达及凋亡的影响,探讨腺苷后处理对心肌缺血再灌注损伤的保护机制.方法 24只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、腺苷后处理组(AD组),采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法制备大鼠心肌缺血再灌注模型;免疫组化SABC法检测HSP70表达;采用DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡.结果 与假手术组比较,I/R组与AD组HSP70表达水平均升高(P＜0.05),且AD组明显高于I/R组(P＜0.05).心肌细胞凋亡率,I/R组与AD组较假手术组增高(P＜0.05),且AD组明显低于I/R组(P＜0.05).结论 腺苷后处理可增加心肌缺血再灌注损伤大鼠HSP70的表达,减轻心肌细胞凋亡,有效保护心肌缺血再灌注损伤.     

罗格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察罗格列酮对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤及心肌细胞凋亡的影响.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min的方法 ,复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.实验动物随机分为罗格列酮组(3 mg·kg-1·d-1)、模型组(生理盐水2ml/d)和假手术组(生理盐水2ml/d).再灌注后观察血清酶学改变,Evans blue、TTC双重染色检测心肌梗死面积,流式细胞术测定心肌细胞凋亡指数,免疫组化检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达.结果 与模型组比较,罗格列酮显著降低血清酶CK、LDH水平(P＜0.01),缩小心肌梗死面积(P＜0.01),增加Bcl-2、减少Bax表达(P＜0.01),减少心肌细胞凋亡(P＜0.01).结论 罗格列酮对心肌缺血再灌注损伤有保护作用.     

p38丝裂原活化蛋白激酶介导大鼠心肌缺血再灌注损伤信号传导的研究

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法:健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组、单纯缺血组、缺血再灌注组、抑制剂组,每组6只.抑制剂组于术前30 min腹腔注射p38MAPK抑制剂SB 203580(5 mg/kg体重).采用夹闭冠状动脉30 min后再灌注2 h的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型.采用逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38MAPK信使核糖核酸(mRNA)表达,免疫组化法检测p-p38MAPK蛋白表达水平及心肌细胞凋亡率.结果:单纯缺血组与对照组比较,大鼠心肌组织中p-p38MAPK的蛋白含量增加,差异有统计学意义(P<0.01),p38MAPK mRNA的表达及细胞凋亡率也增加,但差异无统计学意义(P>0.05).缺血再灌注组与对照组比较,心肌组织中p38MAPK mRNA及p-p38MAPK蛋白水平和心肌细胞凋亡均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01).与缺血再灌注组比较,抑制剂组大鼠心肌组织p38MAPK mRNA及p-p38MAPK蛋白水平及心肌细胞凋亡均降低,(P<0.05~0.001),差异均有统计学意义.结论:p38MAPK的激活主要发生于再灌注过程;p38MAPK的活化可使缺血再灌注心肌细胞凋亡增加;抑制p38MAPK的活化可以减少缺血再灌注心肌细胞凋亡,减轻缺血再灌注所致的大鼠心肌损伤.     

二氮嗪减轻兔心肌缺血再灌注损伤后的心肌细胞凋亡

目的探讨二氮嗪对兔心脏缺血再灌注损伤过程中心肌细胞凋亡和心肌细胞bcl-2和bax基因表达的影响.方法24只兔随机分成假手术组(P组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血预适应组(IP组)和二氮嗪组(DP组).阻断和松开左冠脉前降支制作缺血再灌注模型,缺血5 min/再灌注5 min连续3次循环诱导预适应.DP组在缺血前缓慢静脉注射二氮嗪3 mg/kg.再灌注结束后测算左室心肌梗死面积,取缺血区心肌行TUNEL法检测心肌凋亡细胞和免疫组化检测bcl-2和bax蛋白的表达.结果DP组和IP组梗死面积明显小于IR组(P＜0.001).凋亡细胞百分数DP组(34±5)%和IP组(32±6)%较IR组(56±8)%显著减少(P＜0.001).和IR组相比,bcl-2表达在IP组和DP组明显升高(P均＜0.01),bax基因表达在IP组和DP组则明显降低(P均＜0.001).结论二氮嗪能通过调节bcl-2和bax的表达来减轻兔心肌缺血再灌注损伤后的心肌细胞凋亡.     

灯盏花素对缺血再灌注大鼠心肌JAK及STAT基因表达的影响

目的研究灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用与双面神激酶-信号转导及转录激活因子(JAK-STAT)信号转导途径的关系。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组,模型组及灯盏花素Ⅰ组和灯盏花素Ⅱ组。灯盏花素组分别给予高、低剂量(25、50 mg·kg-1·d-1)灯盏花素腹腔注射,连续7 d,末次于冠脉结扎前1 h腹腔注射给药。假手术组和模型组腹腔注射等量生理盐水,采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30 min、再灌注2 h后,采用免疫组化法测定JAK2蛋白的表达;RT-PCR法检测STAT1及STAT3 mRNA的表达。结果与假手术组相比,模型组心肌细胞JAK2蛋白表达和STAT1 mRNA表达显著增加(P<0.01),STAT3 mRNA表达显著减少(P<0.01);与模型组相比,灯盏花素组JAK2的蛋白表达和STAT1 mRNA的表达减少(P<0.05),STAT3 mRNA表达显著增加(P<0.01)。结论灯盏花素减轻缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡,其作用可能与激活JAK-STAT信号通路有关,即通过降低JAK2蛋白表达和STAT1 mRNA的表达,增加STAT3 mRNA的表达有关。     

转染Livin对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的观察转染Livin对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注过程中Livin、Caspase-3表达以及心肌细胞凋亡和心肌梗死范围的影响。方法健康SD大鼠80只,应用小剂量多次链脲佐菌素(STZ)注射法建立2型糖尿病大鼠模型,随机选取60只大鼠分为假手术组、缺血再灌注(IR)组、空载体组和Livin组。假手术组不结扎冠状动脉;Livin组开胸心肌内注射表达Livin的逆转录病毒载体,24h后行IR;空载体组开胸注射空载体,24h后行IR。荧光定量PCR测定Caspase-3 mRNA,Livin mRNA表达,用TTC染色法测定梗死范围,TUNEL法测定凋亡心肌细胞。结果①荧光定量PCR检测到糖尿病大鼠心肌细胞有Livin表达,空载体组及IR组Livin表达均不增加;转染Livin后大鼠心肌内Livin表达明显增加(P0.01)。②IR组Caspase-3表达明显增加,显著高于假手术组(P0.01);与IR组相比,Livin组Caspase-3 mRNA表达水平显著降低(P0.01)。③Livin组心肌梗死范围较IR组显著减少(P0.05)。④TUNEL法检测显示糖尿病大鼠IR过程中可见心肌细胞凋亡的发生,IR组较对照组显著增加(P0.05);注射Livin后则细胞凋亡的发生明显减少,与IR组比较差异显著(P0.05)。结论心肌Livin过表达可以抑制糖尿病大鼠心肌Caspase-3表达,抑制IR过程中心肌细胞凋亡的发生,缩小心肌梗死范围。     

丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的 探讨丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)细胞凋亡及相关蛋白的影响.方法 雄性SD大鼠42只,随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组).IR组、P组均建立大鼠原位肺缺血再灌注模型(缺血1 h,再灌3 h),P组于缺血前30 min静脉输注丙泊酚5 mg·kg-1·h-1.实验结束后立即取左肺标本,用免疫组化法检测Bcl-2与Bax蛋白表达情况,原位细胞凋亡检测(TUNEL)法检测肺上皮细胞凋亡指数(AI),同时光镜下观察肺组织的病理学变化.结果 与S组相比,IR组凋亡指数增加,肺组织中Bcl-2、Bax表达均增强,Bcl-2/Bax比值明显降低 (P＜0.05);与IR组相比,P组Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达减少和细胞凋亡指数降低(P＜0.05),光镜下肺组织病理学变化明显轻于IR组.结论 丙泊酚对大鼠LIRI具有保护作用,其机制可能与调控Bcl-2/Bax蛋白表达从而减轻肺细胞凋亡有关.     

参附注射液对缺血/再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的:通过观察参附注射液对缺血/再灌注损伤时,心肌细胞超微结构及心肌细胞凋亡参数的影响,探讨参附注射液拮抗心肌缺血/再灌注损伤的作用机制。方法:建立心肌缺血/再灌注损伤模型,结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)30min,再灌注10min。将46只大鼠随机分为5组,(Ⅰ)假手术组;(Ⅱ)对照组心肌缺血30min+生理盐水;(Ⅲ)对照组心肌缺血30min/再灌注10min+生理盐水;(Ⅳ)给药组心肌缺血30min+参附注射液;(Ⅴ)给药组心肌缺血30min/再灌注10min+参附注射液。以上各组分别采集相同部位的心室肌组织;应用透射电镜观察心肌细胞超微结构,通过CIMAS多功能真彩色病理图像分析CIMAS系统对心肌细胞线粒体进行体视学分析。原位标记TUNEL法凋亡的心肌细胞,免疫组化方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达,病理图像分析系统进行凋亡心肌细胞、Bcl-2及Bax蛋白的表达分析。结果:与假手术组比较,给药组(Ⅳ、Ⅴ)心肌细胞的Bcl-2蛋白表达显著增多(P0.05),Bax蛋白表达略增加(P0.05)和显著降低(P0.05),心肌细胞凋亡明显减少(P0.05);心肌细胞组织结构损害明显减轻;对照组与假手术组比较线粒体有显著变化(P0.01),给药组(Ⅳ、Ⅴ)与假手术组比较线粒体变化程度差异无统计学意义(P0.05)。结论:参附注射液能明显抑制心肌缺血/再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达和保护线粒体相关。     

肉桂酸预处理通过激活Akt信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨肉桂酸预处理对大鼠心肌细胞Akt信号通路及心肌缺血再灌注损伤的影响。方法30只雄性SD大鼠,随机分为三组,每组各10只,分别为假手术组(只开胸不结扎前降支)、缺血再灌注组、药物预处理组。采用了结扎SD大鼠心脏冠状动脉前降支的方法建立在体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,利用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,利用蛋白印迹(Western blot)技术探究肉桂酸预处理对Akt信号通路的影响。结果肉桂酸药物预处理组与缺血再灌注组比较,心肌细胞凋亡指数明显减少(P0.05);肉桂酸预处理能促进p-Akt蛋白(磷酸化Akt)的表达,增加BCL-2表达,对非磷酸化Akt无明显影响。结论肉桂酸预处理能减少SD大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型的心肌细胞凋亡,其机制可能通过促使Akt磷酸化,从而增加BCL-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡来发挥保护作用。     

缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12的影响

目的探讨心肌缺血再灌注损伤大鼠使用缺血后处理对内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP)78及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12表达的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(心肌缺血再灌注损伤组)、C组(心肌缺血后处理组),每组10只,分别进行假手术、心肌缺血再灌注损伤及心肌缺血后处理操作,分析3组大鼠心肌的缺血面积及梗死面积百分比,对比心肌内质网应激相关蛋白GRP78及caspase-12的表达,并对3组大鼠的神经行为进行评估。结果 A组大鼠心肌组织无缺血及梗死病灶,C组大鼠心肌组织的缺血面积及梗死面积百分比均显著低于B组,差异有统计学意义(P0.05);A组相应部位心肌组织GRP78及caspase-12蛋白表达均显著低于B组及C组,C组caspase-12蛋白表达显著低于B组,而GRP78蛋白表达高于B组,差异均有统计学意义(均P0.05);神经行为学评估结果显示3组各项神经运动功能量化数值之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠心肌缺血再灌注损伤使用缺血后处理能够抑制心肌细胞的凋亡,同时能够增加内质网的应激反应,其与心肌细胞凋亡减少及心肌梗死面积减少相关。     

灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡及NF-kB通路信号分子α7nAChR、p65、IkB-α的影响

目的观察灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡及NF-kB通路信号分子α7nAChR、p65、IkB-α的影响。方法 40只SD大鼠随机均分为假手术组、缺血再灌注组、灯盏花素低剂量组(25 mg/kg·d)和灯盏花素高剂量组(50 mg/kg·d),每组各10只。4组均制备缺血再灌注模型,其中灯盏花素治疗组术前连续1周腹腔注射灯盏花素;假手术组以及缺血再灌注组分别注射等量的生理盐水。随后处死,取出心脏检测心肌组织梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞的凋亡指数;蛋白印记法检测α7nAChR、p65、IkB-α蛋白的表达。结果缺血再灌注组较假手术组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数以及IkB-α蛋白显著增加(P0.01),p65和α7nAChR蛋白显著减少(P0.05);灯盏花素高低剂量组较缺血再灌注组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数以及IkB-α蛋白显著降低(P0.01),p65和α7nAChR蛋白显著增加(P0.05),并呈现剂量依赖性。结论灯盏花素预处理能有效减少大鼠心肌缺血再灌注损伤以及心肌细胞凋亡,其机制可能为上调α7nAChR,从而通过NF-kB通路抑制心肌细胞的凋亡,发挥心肌保护作用。     

心肌细胞内Livin蛋白过表达对大鼠心肌缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的:观察大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中心肌细胞内黑色素瘤凋亡蛋白抑制剂(Livin)蛋白表达变化及Livin蛋白过表达对心肌细胞凋亡的影响。方法:健康SD大鼠80只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、注射表达Livin蛋白的逆转录病毒载体组(Livin组)和空载体组,其中Livin组和空载体组分别向开胸心肌内注射表达Livin的逆转录病毒载体或空载体,24h后行缺血再灌注过程,以实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定心肌组织内Livin和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)信使核糖核酸(mRNA)的表达,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达,以原位缺口末端标记(TUNEL)法测定凋亡心肌细胞。结果:①实时荧光定量RT-PCR扩增结果LivinmRNA相对表达水平:与假手术组比较Livin组显著增高(P0.01);与缺血再灌注组比较Livin组升高(P0.01)。Caspaes-3mRNA相对表达水平:与假手术组相比缺血再灌注组、Livin组、空载体组均增高(P0.01);与缺血再灌注组比较Livin组降低,差异有统计学意义(P0.01)。②免疫组化显示:与假手术组比较缺血再灌注组、Livin组、空载体组缺血再灌注过程中Caspase-3的表达明显增加(P0.05);与缺血再灌注组比较Livin组表达减少(P0.05),差异均有统计学意义。③TUNEL法检测:与缺血再灌注组比较假手术组、Livin组凋亡细胞数明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:心肌Livin蛋白过表达可以抑制缺血再灌注心肌Caspase-3表达,抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生。     

瑞舒伐他汀激活JAK—STAT信号传导通路抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的：探讨瑞舒伐他汀（RSV）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关信号传导通路机制。方法：采用结扎冠状动脉法制备大鼠心肌缺血再灌注模型。80只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I／R）、RSV组、RSV＋JAK激酶抑制剂（AG490）组。尾静脉内注射RSV和AG490。TuNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学观察凋亡相关因子Bax及Bcl-2表达,westernblot检测JAK2、磷酸化JAK2（P—JAK2）及STAT3蛋白表达。结果：在缺血再灌注前给予外周血管内RSV治疗后,心肌组织凋亡水平（AI）及Bax表达水平显著低于I／R组,Bcl-2、P-JAK2及STAT3水平显著高于I／R组;而同时给予RSV及AG490预处理后,心肌AI及Bax表达水平较RSV组回升,Bcl-2、P—JAK2及STAT3水平较RSV组降低。结论：在缺血再灌注前,从外周血管给予RSV,可显著降低缺血再灌注所诱导的心肌细胞凋亡,其保护机制可能与JAK—STAT信号传导通路有关。     

神经型一氧化氮合酶在小鼠心肌缺血预处理中的作用

目的 应用神经型一氧化氮合酶(nNOS)基因敲除小鼠和nNOS抑制剂,探讨nNOS对心肌缺血预处理后心肌细胞凋亡的影响.方法 实验分为野生型缺血再灌注组(WT IR)、野生型缺血预处理组(WT IP)、野生型缺血预处理L-VNIO处理组(WT IP+ L-VNIO)、基因敲除鼠缺血再灌注组(KO IR)和基因敲除鼠缺血预处理组(KO IP).采用冠状动脉左前降支结扎法建立小鼠缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注组缺血30 min再灌注3h,缺血预处理组分别经缺血5 min再灌注5 min连续三个循环后,再缺血30 min再灌注3h,观察TUNEL染色和Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性变化,并用Western Blot法观察Bax、Bcl-2和Fas蛋白的表达情况.结果 与WT IR组相比,WT IP组小鼠TUNEL阳性细胞数目减少,Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性降低,Bax和Fas蛋白表达显著降低,Bcl-2表达显著增加(P＜0.05).而在KO IP组,与KO IR组相比,TUNEL阳性细胞数目和Caspase活性显著增加,Bax和Fas表达显著增高,Bcl-2表达显著降低(P＜0.05).结论 nNOS在心肌缺血预处理时发挥抑制心肌细胞凋亡的作用.     

葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞的影响

目的观察葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、葛根素后处理组,每组8只。制备大鼠心肌缺血再灌注模型,假手术组只穿线,不结扎左冠状动脉;缺血再灌注组缺血45 min,后再灌注120 min;葛根素后处理组,结扎左冠状动脉45 min,后再灌注120 min。再灌注前3 min和再灌注后2min内静脉注入葛根素1.25 mg/kg。应用免疫组化SP法观察Bcl-2和Bax蛋白表达率,采用TUNEL法观察各组心肌细胞的凋亡率,并在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果与心肌缺血再灌注组相比,假手术组和葛根素后处理组心肌凋亡细胞数较低(P0.05),Bax表达较低(P0.05),Bcl-2表达较高(P0.05)。结论葛根素后处理可以影响心肌细胞Bcl-2、Bax的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用。     

β结合素与大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制

目的：研究大鼠心肌缺血、缺血再灌注、无创性缺血预处理以及氯化锂干预后心肌细胞β结合素的阳性表达率及细胞凋亡指数的变化,以探讨β结合素与心肌缺血、缺血再灌注的关系以及可能机制。方法将入选的60只大鼠随机分为假手术对照组（C ）、缺血组（I ）、缺血再灌注组（IR ）、氯化锂药物预处理组（PPC ）。以TUNEL方法评估各组大鼠心肌细胞凋亡情况,以免疫组化方法测定各组大鼠心肌细胞中β结合素的表达,并计算各组大鼠的心肌细胞凋亡指数及β结合素。结果与C组比较,I、IR、PPC四组凋亡指数均升高（ P＜0.05）,各组心肌细胞凋亡指数比较的结果为：IR组＞I组＞PPC组＞C组（各组两两比较均 P＜0.05）;各组心肌细胞β-cat阳性表达率比较的结果为：PPC组＞C组＞I组＞IR组。β-cat阳性表达率与凋亡指数呈负相关,R＝-0.90。结论β-cat阳性表达率与凋亡指数呈负相关,提示β-cat可以减少心肌缺血、缺血再灌注引起的细胞凋亡。