坐骨神经损伤及神经生长因子对背根神经节中TrkA及其mRNA表达的调控

目的 研究周围神经损伤、神经再生及外源性神经生长因子对脊神经背根神经节中TrkA及TrkA mRNA表达的影响。方法 将24只SD大鼠坐骨神经从神经中段切断后，外膜缝合修复神经。实验组动物的胫后肌内每日注射NGF200U，术后3、7、14、28d，采用免疫组织化学及原位杂交方法，检查大鼠坐骨神经损伤、神经再生及外源性NGF靶肌肉注射后脊神经背根神经节中TrkA及TrkA mRNA表达。结果 正常背根神经节中有大量的神经元表达TrkA及TrkA mRNA；坐骨神经损伤后，背根神经节中TrkA的表达下降，术后7d组最低，28d接近正常；NGF靶肌肉注射后，背根神经节中TrkA的表达明显增高。结论 神经损伤后背根神经节中TrkA的表达降低，靶肌肉注射外源性NGF背根神经节中TrkA的表达增加，表明靶肌肉注射可作为NGF的有效给药途径.     

化学去细胞异体神经促神经再生的体外实验研究

[目的]对大鼠化学去细胞异体神经蛋白成分进行电泳分析,观察去细胞异体神经中的蛋白组分;制备去细胞神经薄膜,接种背根神经节,观察其结构对神经生长的影响。[方法]按Sondell法制备大鼠的去细胞异体神经,将制备好的神经进行电泳分析,观察28～30 kDa区域的髓鞘蛋白的去除程度;将制备的神经进行冰冻切片,接种鸡胚背根神经,进行神经纤维荧光染色,观察神经纤维在神经切片上的生长方向。[结果]去细胞异体神经电泳结果显示:28～30 kDa区域髓鞘蛋白完全消失,化学萃取的去细胞神经可以完全去除髓鞘蛋白;背根神经节发出大量的神经纤维沿着去细胞神经基底膜管方向生长。[结论]去细胞异体神经中无残留引起免疫反应的髓鞘蛋白,保留的基底膜管结构对促神经纤维再生具有引导性作用。     

糖尿病大鼠治疗后膀胱和腰骶背根神经节中神经生长因子的表达及超微结构研究

目的通过动物实验研究糖尿病大鼠治疗后膀胱和腰骶背根神经节中神经生长因子（NGF）的表达和超微结构变化及意义。方法参照Schmeichel等方法制备糖尿病大鼠模型,造模成功后4周应用NGF和胰岛素治疗4周,然后应用免疫组织化学方法检测大鼠膀胱和背根神经节中NGF的表达情况,利用透射电镜观察膀胱和腰骶背根神经节的超微结构变化。结果糖尿病大鼠经NGF和胰岛素治疗后膀胱和腰骶背根神经节中NGF的含量明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,并且其形态学明显改善。结论 NGF的异常在糖尿病膀胱病变（DC）的发病中可能具有重要作用,给予外源性NGF可能有助于DC病变减轻和功能改善。     

神经生长因子保护脊髓背根神经节的实验研究

坐骨神经损伤后，在相应节段脊髓神经元可出现变性。为了观察外源性神经生长因子（ＮＧＦ）的保护作用而设计了本实验。方法是切断ＳＤ大鼠单侧坐骨神经，损伤局部给予外源性ＮＧＦ。借助酶组织化学及图像分析检测坐骨神经切断及应用ＮＧＦ后所引起的脊髓内抗氟化物酸性磷酸酶（ＦＲＡＰ）的活性变化，以探讨ＮＧＦ对脊髓背根神经节的保护作用。结果发现：坐骨神经切断可导致脊髓内ＦＲＡＰ含量降低，从而提示坐骨神经损伤可损害背根神经节；应用ＮＧＦ可显著减少这一酶含量的降低，从而首次从体内酶学水平证实ＮＧＦ对脊髓背根神经节有明显的保护作用。     

外源性神经生长因子对背根神经节中TrKA及其mRNA表达的影响

目的探讨靶肌肉注射外源性神经生长因子对背根神经节中TrKA及TrNA表达的作用.方法 大鼠坐骨神经损伤后采用硅管桥接,在靶肌肉内注射外源性NGF200μ/天,术后 3、7、14及28天进行背根神经节中TrKA的免疫组织化学检查,术后7天组进行TrKA mRNA原位杂交检查.对照组采用相同的动物模型,以生理盐水进行靶肌肉注射.结果 应用NGF靶肌肉注射后,背根神经节中TrKA的表达明显增加,与对照组相比具有显著性差异(P<0.01).结论 靶肌肉注射NGF能逆转神经损伤所造成的TrKA表达下调,表明靶肌肉注射可作为NGF的有效给药途径.     

神经生长因子（NGF）促进挤压伤坐骨神经再生

作者就神经生长因子（ＮＧＦ）对挤压伤坐骨神经再生和作用进行了研究．３０只大鼠分为６组，每组各５只，双侧１０条坐骨神经．其中３组为对照组，３组为ＮＧＦ治疗组，观察期分别为１２、２８和５６天．结果显示ＮＧＦ治疗可使神经肌肉动作电位出现提早，运动神经传导速度加快，再生有髓神经纤维直径增粗及早期再生有髓神经纤维数量增加，表明ＮＧＦ可促进挤压伤坐骨神经再生．     

新型多肽神经组织工程支架与背根神经节细胞联合培养的研究

目的 观察自组装含IKVAV多肽凝胶材料与神经组织的生物相容性.方法 肽溶于NaOH溶液中,调整pH至8.5,浓度为0.01g/ml,加DMEM/F12在盖玻片上触发多肽自组装为凝胶,透射电镜检测.取新生SD大鼠背根神经节及其游离细胞分为实验组与对照组,实验组中DRG及其游离细胞与凝胶材料联合培养.倒置相差显微镜观察DRG生长情况,免疫荧光染色结合镜下细胞计数检测凝胶材料的细胞毒性和黏附性.结果 透射电镜显示:自组装凝胶为编织状纳米纤维.实验组中DRG轴突生长情况优于对照组.培养1、3d后,两组中活细胞比例差异无统计学意义.培养3、12h后,实验组中神经细胞黏附数显著高于对照组.结论 含IKVAV多肽凝胶材料能促进DRG生长和神经细胞黏附,对细胞毒副作用小,可作为优良的神经组织工程支架材料.     

端侧神经吻合后GAP-43和Tau蛋白在背根神经节和受神经内的变化

神经端侧吻合后 ,供神经干能够经侧枝发芽再生轴突[1] 。吻合初期 ,供、受神经的第 2颈椎 (Ｃ2 )背根节内生长相关蛋白 43(ＧＡＰ 43)含量发生改变 ,反映了ＧＡＰ 43在供、受神经有不同的表达变化规律[2 ] 。而轴突再生与细胞骨架系统的形成密不可分 ,生长锥的延伸必须有微管形成 ,才能算作成功的神经再生。Ｔａｕ蛋白是一种重要的微管相关蛋白 ,影响着微管的形成 ,而ＧＡＰ 43是富含在生长锥中的神经生长相关蛋白。我们利用Ｔａｕ和ＧＡＰ 43抗体进行免疫组织化学染色 ,观察Ｔａｕ在神经节和神经纤维中的变化规律及其与ＧＡＰ 43表达的关…     

神经生长因子和雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质促进周围…

在桥接大鼠坐骨神经２０ｍｍ缺损的肌     

同轴共纺复合神经生长因子导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察同轴共纺复合神经生长因子(NGF)导管对大鼠坐骨神经缺损修复的促进作用.方法 以复合NGF的牛血清白蛋白为芯层、乳酸.己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层,采用同轴共纺技术制备具有"壳-芯"结构的可降解纳米纤维复合神经导管.取SD大鼠72只,随机分为四组:自体神经移植组(A组),单纯[P(LLA-CL)]导管组(B组),单纯导管内一次性汴射NGF组(C组)和复合NGF导管组(D组),每组18只.制作大鼠坐骨神经10 mm缺损模型,四组大鼠分别采用白体神经移植、单纯[P(LLA-CL)]导管、单纯导管内一次性注射NGF、复合NGF导管桥接修复缺损.于术后第1、2、3个月行大体观察、坐骨神经功能指数、小腿三头肌湿重恢复率测量、电生理检测和组织学检查. 结果术后复合NGF导管逐渐开始吸水膨胀并降解,3个月时,虽然管壁已经出现裂隙,但依然保持良好的外形,没有对再生神经形成卡压.术后1个月,再生神经均已通过缺损,连接两断端,但较细小;随着时间的延长,再生神经逐渐增粗.各组间比较发现,D组再生神经取得了和A组相似的效果,明显优于B组和C组(P<0.05).尽管D组与A组之间比较.差异无统计学意义(P>0.05),甚至D组的有髓神经纤维计数还稍高于A组,但其髓鞘的厚度和直径不如A组,并且坐骨神经功能指数和腓肠肌湿重恢复率也比A纽稍差. 结论同轴共纺复合NGF神经导管具有良好的组织相容性、生物活性和机械强度,能够有效地促进神经再生,效果接近自体神经移植.     

睫状神经营养因子神经生长因子对周围神经再生的作用

目的：研究睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＣＮＴＦ）和神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）对周围神经再生的作用。方法：硅管套接大鼠坐骨神经，将ＣＮＴＦ、ＮＧＦ、生理盐水（ｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＮＳ）分别加入硅管中，并于术后每日皮下注射一定剂量。术后４周，应用ＨＲＰ逆行追踪技术显示再生轴突通过修复部位的胞体。结果：与ＮＳ组、ＮＧＦ组相比，ＣＮＴＦ组脊髓标记胞体显著增加，其它组间比较，差异不显著。结论：外源性ＣＮＴＦ能明显促进周围神经运动轴突再生，但促进感觉轴突再生的作用不明显。外源性ＮＧＦ促进周围神经运动和感觉轴突的再生均不明显     

模拟膈神经脉冲电刺激促进周围神经再生的研究

目的　研究膈神经生物电脉冲 (BIPN)对周围神经再生的促进作用。方法　新西兰家兔 18只平均分为 3组 ,切断双侧坐骨神经后端端缝合予以电刺激。A组以BIPN刺激与无刺激对照 ;B组以BIPN刺激与方波脉冲刺激对照 ;C组以方波脉冲刺激与无刺激对照。刺激 4周后行足底溃疡直径、神经电生理、胫前肌肌湿重、组织学和电镜超微结构检测。结果　A、B组BIPN侧足底溃疡直径分别为 (16.3 3± 17.17)mm和 (2 2 .3 3± 7.5 0 )mm ,均优于对照侧 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;复合肌肉诱发电位 (CMAP)潜伏期分别为 (1.98± 0 .2 0 )ms和 (1.92± 0 .16)ms ,均优于对照侧 (P <0 .0 5 ) ;A组CMAP波幅为 (0 .18± 0 .0 7)mV ,优于对照侧 (P <0 .0 5 ) ;远端有髓纤维通过率分别为 (62 .44± 6.68) %和 (5 4.48± 5 .0 5 ) % ,均优于对照侧 (P <0 .0 1) ;胫前肌肌湿重分别为(1.67± 0 .2 4)g和 (1.71± 0 .2 5 )g ,均优于对照侧 (P <0 .0 1) ;超微结构观察示BIPN侧再生髓鞘成熟度优于方波脉冲侧 ,更优于无刺激侧。结论　膈神经电脉冲能较明显地促进周围神经再生。     

模拟膈神经生物电刺激促进周围神经再生的实验研究

目的　研究膈神经生物电脉冲 (bioelectricalimpulseofphrenicnerve ,BIPN)在周围神经再生过程中的作用。方法　取家兔 18只 ,共 3 6根坐骨神经 ,平均分为 3组。A组为模拟膈神经生物电脉冲(BIPN)组。B组为连续方波脉冲刺激组。C组为不作任何刺激对照组。术后 4周 ,取材检测。神经标本比较神经纤维计数、截面积及远端有髓纤维通过率。取胫前肌标本检测肌纤维截面积。结果　A、B、C 3组的神经缝合口远端有髓神经纤维计数分别为 12 3 6.9 2 0 2、10 82 .5 2 14 .6和 840 .6 174.4根。A、B 2组比较 ,差异有统计学意义 (t值 3 .3 2 3、P值 <0 .0 1)。A、B、C 3组的神经纤维通过率分别为 5 8.5 7.0 1、5 3 .2 10 .4和 3 5 .2 7.3 %。A、B 2组比较 ,差异有统计学意义 (t值 2 .2 2 1、P值 <0 .0 5 )。A、B、C 3组的神经纤维截面积分别为 12 7.4 7.2、119.1 5 .2和 118.8 5 .5 μm2 。A、B 2组比较 ,差异有统计学意义 (t值 4.3 98、P值 <0 .0 1)。A、B、C 3组的肌纤维截面积分别为 70 4.8 10 8.5、62 3 .3 189.1和 5 80 .5 10 8.3μm2 。A、B 2组比较 ,差异有统计学意义 (t值 2 .3 0 8、P值 <0 .0 5 )。结论　模拟膈神经电脉冲能有效促进周围神经损伤后的神经纤维再生。     

联合使用ATP和NGF对周围神经再生作用的实验研究

目的 研究三磷酸腺苷(adenosine tri-phosphate，ATP)和神经生长因子(nerve growth factor，NGF)联合使用时对受损周围神经再生的作用并比较两者作用的强弱。方法 将64只SD大鼠左侧坐骨神经切断后直接作端端缝合，缝合段置于硅胶管室内。根据室内注入药物的不同，分为生理盐水(NS)、ATP、NGF、和ATP加NGF4组，每组16只大鼠。术后4周和8周(每组均为8只)取标本，作形态学，肌湿重，运动神经传导速度(MNCV)、复合运动动作电位(CMAP)波幅，及组织学的检测。结果 ATP加NGF组的神经纤维数目、大小、髓鞘厚度和MNCV、CMAP及肌湿重均优于其它3个组。NGF组的各项指标比ATP组好。结论联合使用ATP和NGF时受损周围神经的再生作用明显增强。NGF的作用强于ATP。     

纳米银-胶原蛋白组织工程周围神经支架的构建及其理化性能的检测

目的 探讨纳米银-胶原蛋白组织工程周围神经支架的构建及其理化性能和生物相容性.方法 采用不同浓度纳米银溶液构建含不同浓度纳米银(1、2、3、4、5、6 mg/L)的胶原蛋白组织工程支架,对照组仅加入不含纳米银的等量纯水.分别以扫描电镜观察其横截面和纵截面孔径结构,测定微拉伸强度.采用5只SD仔鼠进行纳米银-胶原蛋白支架细胞毒性实验,8只雄性成年SD大鼠进行支架体内降解实验,12只雄性成年SD大鼠行纳米银体内蓄积毒性测试.逐步按照空间结构以及在模拟体内环境下的多种理化特性筛选最佳纳米银含量的纳米银-胶原蛋白材料,构建周围神经支架.结果 纳米银含量为l、2 mg/L的纳米银-胶原蛋白支架内部孔径结构高度仿生,其中2 mg/L纳米银含量组的支架抗拉伸强度达到0.22 MPa,优于其他测试组.采用含2 mg/L纳米银支架材料制作薄膜行雪旺细胞培养证实该支架材料无神经细胞毒性.体内降解实验显示该组织工程支架从植入体内开始缓慢发生降解,4个月后可以完全降解.纳米银体内蓄积毒性测试显示在支架植入体内直至完全降解过程中,脑、脊髓、肝和肾脏银元素含量均低于l ng/mL,不存在蓄积毒性.结论 使用含2mg/L纳米银的胶原蛋白周围神经组织工程支架不仅在内部空间结构上可高度仿生周围神经,且具有较好的抗拉伸强度、在体内可完全降解、无细胞毒性和银蓄积毒性等优点.     

Nerve growth factor enhances peripheral nerve regeneration in non-human primates.

Fibronectin mat implants impregnated with NGF have been successfully used in rat nerve regeneration model. The aim of this study was to assess their action in a primate model. Mats were implanted into a 5 mm gap in a peripheral nerve in Macaca fascicularis monkeys, either alone (Fn) or in the presence of nerve growth factor (Fn + NGF). Four months postoperatively, the regenerated nerve was analysed by light microscopy, and target skin reinnervation was assessed by quantification of cutaneous nerve terminals immunostained with protein gene product (PGP) antibodies. The diameter of the regenerated nerve was similar in Fn + NGF grafts and nerve autografts, but significantly larger for plain Fn grafts with evidence of more connective tissue surrounding the axons. Myelinated fibres counts showed similarities in normal control nerve, nerve autograft and Fn + NGF graft groups. However, in nerve grafted with plain Fn mats the regenerating fibres were lower in number and showed a wider variability in diameter and myelination, resulting in a significantly smaller G-ratio (axonal diameter/myelinated fibre diameter). The amount of cutaneous reinnervation was lowest in Fn graft group, while comparable amounts of skin reinnervation were observed in the Fn + NGF and autograft groups. These results suggest that Fn-mats are a suitable conduit to promote peripheral nerve regeneration also in primate, and supplying NGF locally at the lesion site can further enhance nerve regrowth.     

Nerve conduit filled with GDNF gene-modified Schwann cells enhances regeneration of the peripheral nerve

A recombinant retrovirus vector containing the glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) gene was constructed and transfected into Schwann cells (SCs) to investigate the possibility of GDNF transfection and functional expression of transfected SCs, including GDNF secretion and its mRNA expression. We found that transfection of the GDNF gene into SCs led to significantly enhanced expression of GDNF mRNA. The rate of GDNF secretion by GDNF-SCs was also increased. Functionally, more surviving motoneurons were seen when they were cocultured in GDNF-SC-conditioned medium than when they were in normal SC-conditioned medium. When bridging a rat sciatic nerve defect with a conduit filled with GDNF-transfected SCs, nerve regeneration was better than that of the control. In conclusion, transfection of SCs with the GDNF gene could enhance SC function. Application of genetically modified SCs could be a better way to promote nerve regeneration.     

纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究

目的　探讨纤维蛋白胶 (FG)作为神经生长因子 (NGF)载体对周围神经再生的促进作用。方法　将Wistar大鼠 96只随机分为 4组 ,即对照组、FG组、NGF组、FG +NGF组 ,每组 2 4只 ,以大鼠左侧坐骨神经为修复神经模型进行实验。术后 2、4、8周进行组织学检查 ,术后 8周进行电生理检查、肌湿重检测、图像分析和透射电镜观察。结果　FG +NGF组的神经传导速度、肌张力、肌湿重、有髓纤维截面积恢复率分别为 ( 84.10± 2 .33) %、( 83 .88± 2 .96 ) %、( 6 2 .5 4± 5 .94) %、( 71.0 1± 3 .6 2 ) % ,吻合口有髓纤维通过率为 ( 6 5 .5 1± 4.5 4) % ,高于对照组、FG组 ( P <0 .0 1) ,高于NGF组 (P <0 .0 5 ) ,FG +NGF组大鼠坐骨神经再生优于单纯NGF组。结论　纤维蛋白胶可作为NGF的载体 ,用纤维蛋白胶载NGF修复周围神经损伤 ,有促进周围神经再生的作用。     

Changes of nerve growth factor (NGF) content in injured peripheral nerve during regeneration: local synthesis of NGF by Schwann cells]

NGF content in rat sciatic nerve was investigated using an enzyme immunoassay. Following nerve transection, NGF level increased at the distal side to transection. These NGF increases consisted of an initial rapid increase which might be due to retrograde axonal transport from peripheral organs, and also a secondly slow increase which appeared to be a result of local synthesis. Local synthesis of NGF in the nerve was confirmed by the findings that NGF content increased in the free segment between the two transection sites, and also in the cultured nerve segments where axonal transport could be neglected. Schwann cells and fibroblasts cultured from the sciatic nerve were found to secrete NGF suggesting the local synthesis of NGF by these cells in vivo. NGF accumulated by axonal transport and locally synthesized by non-neuronal cells in the distal side to transection, that is, the regenerating portion, might play an important role in nerve regeneration.