奶粉中坂崎肠杆菌检测方法研究

目的：寻找一种快速简便的奶粉中坂崎肠杆菌的检测方法。方法：通过对不同增菌液及分离平板的试验比较，选择对坂崎肠杆菌的检测适宜的预增菌液及分离平板。结果：通过参考菌株的添加试验，灭菌蒸馏水和缓冲蛋白胨水作为检测的预增菌液，增菌效果差异没有显著性，将34株肠杆菌科细菌的参考菌株分别划线接种于显色培养基琼脂（Xα—GlcA）、山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）、四甲基伞形酮培养基（NA＋α—MUG）和结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA），选择性分离效果最好的是XαGlcA。结论：推荐使用无菌蒸馏水作为检测的预增菌液，Xα—GlcA或VRBGA为分离平板，API 20E生化试剂盒或VITEK进行生化鉴定。     

食品中沙门菌检验方法的优化与应用

目的选择最适合食品中沙门菌生长的增菌培养基和分离培养基，促进沙门菌生长，提高沙门菌的检出率。方法在市场上购买一批生的禽、畜类肉制品，分别通过均质器混匀，各分成两份，分别用常规培养基和本实验培养基同时增菌培养，应用改良分子信标荧光PCR检测试剂盒和mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪对两种增菌液进行初筛，对结果阳性者划线分离，阳性菌株经VITEK2 COMPACT生化鉴定仪鉴定。结果样品经本实验增菌液增菌后，分离平板上的可疑菌落明显增多，检出沙门菌的几率也有很大提高。结论改用本实验培养基后，能有效提高沙门菌的检出率。     

瓶装饮用水嗜水气单胞菌检验方法研究

目的：建立一种适合检验瓶装饮用水嗜水气单胞菌的方法。方法：采用各种增菌程序、分离平板和初筛鉴定培养基对86份瓶装水样品进行检测。结果：含10mg /L氨苄青霉素的肉浸液肉汤与碱性蛋白胨水的增菌效果无统计学差异；嗜水气单胞菌在含30mg／L氨苄青霉素的血琼脂或RS琼脂上均生长良好，但是以血琼脂作为选择培养基可以减少后续生化鉴定工作量；营养琼脂、麦康凯琼脂和改良麦康凯琼脂上的竞争菌较多。添加氨苄青霉素的肉汤和血琼脂组合较优，应用该法对86件瓶装水进行检测，2件试样阳性(2．33％)。结论：直接添加浓缩增菌液的方法可以免除繁琐的抽滤过程。使用添加氨苄青霉素的增菌液和血琼脂，经过生化初筛，配合应用全自动微生物生化鉴定仪，检验过程可以在48～88h内完成，尤其适合在目标菌数量较少且其可能受到加工伤害的瓶装饮用水检验。     

EIEC污染饮用水所致腹泻暴发的病原学研究

目的：从污染饮用水和患者大便中分离鉴定侵袭性大肠埃希菌（EIEC）。方法：取水样400ml加入10倍浓缩肠道菌增菌液100ml，患者大便1g加入10mlGN增菌液。经增菌、分离培养、纯培养、生化试验、血清学试验、患者双份血清抗体效价测定等一系列微生物学鉴定。确定所致腹泻的病原菌以及对抗菌药物的敏感性。结果：经黑马Bat—IST分析系统鉴定和血清学试验。从水源水Ⅰ、水源水Ⅱ、饮用水和4例患者大便中分离鉴定出7株相同的EIEC028ac：K73血清型。药敏试验表明，7株菌对哌拉西林、头孢哌酮、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星，氯霉素敏感。结论：该次腹泻暴发的病原菌是EIEC028ac：K73血清型污染饮用水所致。做水样增菌提高增菌液浓度5倍，增加水样量，可提高阳性检出率。7株EIEC生化反应乳糖阴性、赖氨酸脱羧酶阴性、不利用丙二酸盐，无动力，葡萄糖发酵不产气，应与志贺菌相区别。     

新型的LMX肉汤对单增李斯特菌的检测效果评价

目的评价一种新型的快速单增李斯特菌(LMX)肉汤对单增李斯特菌的增菌效果。方法对目标菌株的灵敏度、生长率、选择性及生化反应等几个方面进行测试,根据测试结果来判断新型培养基的增菌效果。结果新型培养基与国标推荐方法中使用的培养基的增菌效果相当。结论此液体培养基可以作为单增李斯特菌的快速检测用增菌液。     

霍乱弧菌在2种不同增菌液中增菌效果的研究

[目的]了解霍乱弧菌在不同的增菌液中增菌效果。[方法]配制“模拟水产品棉拭子标本”，在不同增菌液中增菌后进行胶体金试条检测及参照《霍乱防治手册》中的方法进行分离鉴定。[结果]在庆大琼脂上挑取典型菌落进行血清凝集，经增菌液2增菌的霍乱弧菌凝集菌株数均高于经增菌液1增菌的凝集菌株数；在胶体金试纸条试验中，霍乱弧菌在增菌液2中增菌6h开始出现阳性，增菌12h后均出现阳性；在增菌液1中增菌8h开始出现阳性，增菌12h部分未出现阳性。[结论]在增菌液2增菌后划线庆大琼脂较容易分离出霍乱弧菌；在胶体金试纸条试验中增菌液2增菌效果较好。这可能与增菌液2含有促进霍乱弧菌生长的物质及抑制杂菌生长的物质，以及胶体金试纸条不仅能检测活菌，还能检测死菌等有关。可以选择增菌12～14h进行胶体金试纸条试验。     

食品中β-溶血性链球菌检验技术的研究

〔目的〕通过对食品中β-溶血性链球菌检验技术的研究,选择操作性强、证实方法简便准确、检测周期较短的检验技术,为今后修订国家标准,向国际标准化靠拢提供有利依据。〔方法〕利用胰蛋白胨大豆肉汤TSB增菌液、哥伦比亚CNA血琼脂平板厌氧培养、API20STREP生化鉴定试剂盒及常规生化鉴定检测食品中的β-溶血性链球菌。〔结果〕试验结果显示,本方法适用于β-溶血性链球菌的培养、分离与鉴定。胰蛋白胨大豆肉汤TSB增菌液、哥伦比亚CNA血琼脂平板的增菌、分离效果优于GB/T4789.11-2003中的葡萄糖肉浸液肉汤和普通血琼脂。〔结论〕API 20 STREP快速鉴定系统更是为简化操作程序,缩短检测周期提供有效方法。     

人—猪链球菌感染性综合征的病原分离与鉴定

目的：分离和鉴定猪链球菌,为诊断和治疗提供科学依据。方法：用3种增菌液和7种培养基对病人血液,脑脊液培养和病死猪的内脏培养,并对分离到的病原体进行染色形态观察,API Strep20生化及其它生化试验,血清凝集试验,结果：从4例病人血液,1例脑脊液和7例病死猪中分离到12株病原菌,经鉴定9株编码为0641453,2株为0640453,1株为1641453,12株菌均与猪链球菌2型血清凝集,结论：12株细菌均为猪链球菌2型。     

不同培养基在鉴定致病性弧菌中的作用分析

目的探讨不同的增菌液及分离培养基在鉴定副溶血性弧菌及其他致病性弧菌中的作用。方法采用新旧两版(2003和2008年)国家标准中涉及到的增菌液和分离培养基对单一弧菌和混合弧菌进行检验。结果新版国标中3%氯化钠碱性蛋白胨水增菌效果较以往氯化钠结晶紫增菌液显著,新增科玛嘉弧菌显色培养基在鉴别不同类型的弧菌中作用明显。结果新的国家标准中对增菌液的选择进行调整,并新增了选择性培养基的种类,对于快速、准确地检出副溶血性弧菌及相应的弧菌起到了很好的作用。能够提高弧菌的检出率。     

改良TT增菌液对沙门菌属和志贺菌属的分离效果研究

目的探讨改良硫代硫酸钠碳酸钙(TT)增菌液对肠道感染菌种沙门菌属和志贺菌属的分离效果。方法收集2015年3月-2016年9月288例因急性腹泻住院患者的粪便作为研究样本,对照组和观察组各144例,采用常规接种法接种于麦康凯琼脂培养基(MAC)和沙门氏菌-志贺氏菌琼脂培养基(SS),另外加种改良TT增菌液进行增菌培养,同时使用改良TT增菌液、革兰阴性(GN)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液分别对外购的沙门菌属和志贺菌属进行培养,比较不同增菌液对肠道感染菌种沙门菌属和志贺菌属的分离效果。结果对照组采用直接接种培养基的方法检测出沙门菌属15株,志贺菌属4株,检出率分别为10.42%和2.78%;观察组采用改良TT增菌液培养后接种方法检测出沙门菌属43株,志贺菌属12株,检出率分别为29.86%和8.33%;观察组沙门菌属与志贺菌属的检出率明显高于对照组(P<0.05);改良TT增菌液对沙门菌属的增菌效力与SC增菌液相当,其中对鼠伤寒沙门菌属增菌效果最高达到10-8,优于SC增菌液10-7,改良TT增菌液对志贺菌属的增菌效力与GN增菌液相似,两种志贺菌属的最大增菌效果均达到10-7。结论改良TT增菌液对沙门菌属和志贺菌属的增菌效果与SC、GN增菌液相当,不仅可以有效促进沙门菌属和志贺菌属的增殖,提高病原菌分离效果,还能简化工作流程,提高实验室工作效率。     

不同方法分离牦牛粪便中沙门菌的比较

目的比较不同培养条件对牦牛粪便中沙门菌的增菌效果,获得分离效率高的牦牛粪便分离培养方法。方法使用沙门菌标准菌株制备含不同菌浓度的牦牛粪便模拟标本,分别使用SBG和RVS 2种增菌液,在37℃和42℃条件下进行增菌培养,然后分别接种于XLD和沙门显色培养基,观察目标菌生长情况,统计分析沙门菌在不同培养条件下的分离效果。同时使用上述方法对40份牦牛粪便进行沙门菌的分离鉴定。结果当样本中的目标菌浓度低时,RVS的增菌效果优于SBG;对牦牛粪便标本而言,当样本中的目标菌浓度≥103时,目标菌的分离不受温度和增菌液的影响;当温度为42℃,增菌液为RVS时对目标菌的分离不受浓度的影响。结论温度为42℃,增菌液为RVS适合牦牛粪便中沙门菌的分离。     

食品中单增李斯特菌国家标准检验方法实验室验证及结果分析

目的：实验室验证食品中李斯特菌新国家标准检验方法可操作性及可行性。方法：按照国家CDC“食品卫生微生物学检验李斯特菌检验标准”验证方案进行。结果：用不同浓度的沙门菌菌悬液人工染菌二类食品各40份,用增菌液两步增菌,两种分离培养基分离,对比检出率及分离效果。检出率62.5%,最低检出限为0.5 cfu/25 g-13 cfu/25 g。结论：该方法使用了选择性强、特异性高的分离培养基及快速筛选方法,如Vitek GNI、API10300、显色培养基等,克服了传统李斯特菌检测方法检测周期较长、所需试剂繁多、菌落生长慢等缺点,使李斯特菌的检测更加快速、简便、特异、敏感。该方法使李斯特菌检测具有更好的适用性和可操作性。     

二级处理出水中沙门菌的改良多管发酵最大可能数定量检测方法

目的建立二级处理出水中沙门菌的改良多管发酵最大可能数(most probable number,MPN)定量检测方法。方法以某污水处理厂二沉池出水为水样,比较了滤膜法和改进的MPN法对沙门菌定量计数的结果。以滤膜法比较了木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂(XLD)培养基、Hekton Enteric Agar(HE)培养基、亚硫酸铋琼脂(BS)培养基对水样中沙门菌的选择分离效果。采用改进的MPN法并以PCR法作为最后的鉴定手段,考察了四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、氯化镁孔雀绿(MM)增菌液在37、42℃培养24、48h的选择性增菌效果。结果滤膜法中三种选择性培养基都无法对沙门菌进行准确计数。采用改进的MPN法,选用MM增菌液在42℃培养24h后的选择性增菌效果最好。结论改进的MPN法不仅具有良好的准确性和灵敏度,而且显著缩短检测时间,提高检测效率,适用于城市污水二级处理出水中沙门菌的监测。     

一起肠炎沙门菌引起的食物中毒报告

一九九九年六月二十六日八道镇八道村五屯因牛肉污染发生一起肠炎沙门菌引起的食物中毒。现报告如下：１病原学检查１．１采样增菌分离培养 无菌操作采样煮熟的牛肉和患病带菌者粪便分别接种到ＳＣ增菌液中３７℃培养２４ｈ增菌液分别接种到ＳＳ琼脂，中国蓝、ＥＭＢ平板３７℃２４ｈ培养，挑取可疑菌落涂片染色为革兰阴性杆菌，再接种到双糖铁培养基中纯培养做血清学鉴定和生化反应。１．２血清学分型鉴定 双糖铁培养基上纯培养菌做血清学分型鉴定，用Ａ一Ｆ多价０因子血清凝集，生理盐水对照不凝集，０１０９因子血清凝集，Ｈ抗原ｇ、ｍ因…     

黑龙江省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染监测

目的为掌握黑龙江省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况，构建食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染数据库。方法在黑龙江省选取6个具有代表性城市建立监测哨点，定期对6类食品进行采样，检验采用增菌液（LB1、LB2）增菌后，用科玛嘉显色培养基分离，再做相应的生化及API Listeria快速反应板鉴定。结果检测6类760份食品样品，检出单核细胞增生李斯特氏菌（L．m）43株，检出率为5．66％。结论黑龙江省食品均不同程度受到L．m的污染，尤以生畜禽肉、非定型包装熟肉污染严重，淡水产品次之，生食蔬菜少见。     

食品中沙门菌国家标准检验方法实验室验证及结果分析

目的 实验室验证食品中沙门菌国家标准检验方法的可操作性及可行性.方法 按照国家疾病预防控制中心《食品卫生微生物学检验沙门菌检验》标准验证方案进行.用不同浓度的沙门菌菌悬液人工染菌2类食品共40份,同时用两种增菌液增菌,4种分离培养基分离,对比检出率及分离效果.结果 检出率34.4%,最低检出线为10～2.3 cfu/25 g.结论 该方法使用选择性强、特异性高的分离培养基及快速筛选方法,克服了传统沙门茵检测方法的检测周期较长、所需试剂繁多等缺点.该方法使沙门菌检测具有更好的适用性和可操作性.     

艾伯特埃希菌多重PCR检测方法的建立

目的 建立一种快速检测艾伯特埃希菌的多重PCR检测方法。方法 根据lysP和EA0134基因建立多重PCR反应体系,并对引物浓度、反应时间及温度等反应条件进行优化,同时评价其灵敏性和特异性。运用该方法对实验室分离的63株艾伯特埃希菌菌株及增菌液和非艾伯特增菌液进行了检测。 结果 两对引物均能特异性扩增相应的基因,其灵敏性均为25 CFU/反应(500 CFU/ml)且非常特异。对本实验分离的艾伯特埃希菌增菌液和非艾伯特埃希菌增菌液的检测结果与之前传统方法的一致。结论 本研究建立的多重PCR方法可用于艾伯特埃希菌的初步筛查和分离株的鉴定,为艾伯特埃希菌的快速鉴定和鉴别提供了一种新的检测方法。     

食品中单增李斯特菌国标定量方法实验室验证结果与分析

目的对食品中单增李斯特菌国标定量方法进行实验室验证。方法将单增李斯特菌标准菌株活化,经一系列稀释后染菌样品。再用单增李斯特菌国标定量方法讨论稿中平板计数和MPN法检测样品中单增李斯特菌浓度。使用3种分离培养基鉴定,对比检测效果,确定检出限。结果平板计数法的检出限为100CFU／250ml和10CFU／250ml。MPN计数法的检出限为10CFU／250ml和1CFU／250ml。平板计数法中科玛嘉单增李斯特菌显色培养基检出限低于PALCAM分离培养基,而MPN计数法中,3种分离培养基鉴定结果一致。结论平板计数法和MPN计数法均适合于食品中单增李斯特菌定量检测,MPN计数法灵敏度更高。平板计数法中科玛嘉单增李斯特菌显色培养基普遍优于PALCAM分离培养基,3种培养基都适合MPN计数法,鉴定符合率高。科玛嘉和ALOA上生长典型菌落较PALCAM容易判别。     

两种检测方法在沙门菌初筛中的应用比较

[目的] 比较常规检测方法和新方法在沙门菌初筛中的阳性检出率。[方法] 将健康体检人员的肛拭样品用SF增菌液增菌后转种WS平板、用SBG增菌液增菌后转种CHROMagar^®沙门菌显色平板,之后各挑取相应可疑菌落进行生化反应和血清凝集试验进行鉴定。[结果] 6676件体检肛拭标本用两种方法分离后,SBG-CAS分离和SF-WS分离阳性检出率分别是1.03%和0.24%,用SBG-CAS分离的方法优于SF-WS分离的方法。[结论] 用SBG增菌液增菌后转种CHROMagar^®沙门菌显色平板的方法,其阳性检出率明显高于SF增菌液增菌后转种WS平板,并且在平板上的菌落特征明显,极易辨认,方法也较易掌握。     

2001～2003年姜堰市服务行业人员所携沙门菌分型及药敏试验结果

目的 :了解姜堰市服务行业从业人员携带的沙门菌分型及药敏情况。方法 :采用肛拭子采样、SC增菌液增菌、WS琼脂培养及生化血清学鉴定 ,最后用纸片琼脂扩散法进行抗菌药物敏感试验。结果 :2 0 0 1～ 2 0 0 3年共体检 15 346人次 ,分离到 134株沙门菌 ,鉴定为 2 4个血清型 ,药敏试验显示绝大多数菌株对常用药物均敏感。